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Determination of linarin and luteolin in Flos Chrysanthemi Indici by HPLC

HPLC测定野菊花中蒙花苷与木犀草素的含量



全 文 :Στυδιεσ ον χηροµ ατογραπηιχ φινγερπριντσ οφ Ρ ηιζοµ α ετ Ρ αδιξ Νοτοπτερψγιι
≥„…Œ• Š∏¯±¤µtou o ≤˜Œ≠¤2­∏±t o Š˜’ ‹∏¬t o • „‘Š • ¬¨t o Š˜’ ⁄ 2¨¤±t
(t. ΣχηοολοφΠηαρµ αχευτιχαλΣχιενχεσ, Πεκινγ Υνιϖερσιτψ, Βειϕινγ tsss{v, Χηινα;
u. Ξινγϕιανγ Ινστιτυτε οφ Χηινεσε ΜατεριαλΜεδιχαλανδ Ετηιχαλ, Υρυµ θι {vsssu, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¶¨·¤¥¯¬¶«·«¨ ¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦©¬±ª¨ µ³µ¬±·¶©²µ·«¨ ¬§¨ ±·¬©¬¦¤·¬²± ¤±§ ∏´¤¯¬·¼ √¨¤¯∏¤·¬²± ²©• «¬½²°¤ ·¨
• ¤§¬¬‘²·²³·¨µ¼ª¬¬q Μετηοδ : ≥ ³¨¤µ¤·¬²± º¤¶³¨ µ©²µ° §¨²± °«¨ ±²° ±¨ ¬¨∏±¤≤t{ kul kwqy °° ≅ uxs °°o x Λ°l ¦²¯∏°±o º¬·«°²2
¥¬¯¨ ³«¤¶¨ ¦²±¶¬¶·¬±ª²©¤¦¨·²±¬·µ¬¯¨ k„l ¤±§º¤·¨µ¦²±·¤¬±¬±ªs1vh ¤¦¨·¬¦¤¦¬§k…l º¬·«ªµ¤§¬¨±·¨ ∏¯·¬²± ¤··«¨ ©¯²º µ¤·¨ ²©t °#
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©¤¦·²µ¼ ©¬±ª¨ µ³µ¬±·º¤¶²¥·¤¬± §¨ ¥¼ ‹°≤ ° ·¨«²§o ¤±§ ∏´¤¯¬·¤·¬√¨ ¤±¤¯¼¶¬¶²©¶²°¨ ²©·«¨ ³¨ ¤®¶º µ¨¨ ¦¤µµ¬¨§ ²± ¥¼ ‹°≤ r ≥ ¤³2
³µ²¤¦«q Χονχλυσιον: ׫¨ ¶¨·¤¥¯¬¶«¨ §° ·¨«²§¬¶¶¬°³¯¨¤±§µ¤³¬§·²¬§¨ ±·¬·¼ ¤±§§¬©©¨µ¨±·¬¤·¨¶¤°³¯ ¶¨²©‘«¬½²°¤ ·¨• ¤§¬¬‘²·²³·¨µ¼ª¬¬
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[ Κεψ ωορδσ] • «¬½²°¤ ·¨• ¤§¬¬‘²·²³·¨µ¼ª¬¬~ ‹°≤ 2˜∂ 2 ≥~ ©¬±ª¨ µ³µ¬±· ≈责任编辑 张宁宁  
≈收稿日期   ussx2sz2ut
≈基金项目   国家中医药管理局中医药科学技术研究专项项
目 ksw2sx°twl
≈通讯作者   3 李发美 oר¯}ksuwluv|{yu{|oƒ¤¬}ksuwluv|{y2
u{|o∞2°¤¬¯}©¤° ¬¨¯¬ƒ tyvq¦²°
‹°≤测定野菊花中蒙花苷与木犀草素的含量
崔兰冲 o李小芩 o韩 莹 o李发美 3
k沈阳药科大学 药学院 o辽宁 沈阳 ttsstyl
≈摘要   目的 }建立野菊花中蒙花苷与木犀草素的含量测定方法 ∀方法 }运用高效液相色谱法测定 o色谱柱为
׫¨ µ°² ‹¼³¨ µ¶¬¯…⁄≥ ≤t{ kw1y °° ≅ uxs °°ox Λ°lo流动相为甲醇 2四氢呋喃 2水 kxsΒwΒwylo流速 s1y °# °¬±pt ~检
测波长 vxs ±°∀结果 }蒙花苷与木犀草素分别在 s1stx u ∗ s1txu °ª# °pt和 s1sst { ∗ s1st{ °ª# °pt线性关系
良好 oρ分别为 s1||| {os1||| w∀平均回收率分别为 |{1|h o|z1uh o• ≥⁄均小于 v1sh ∀结论 }本法方便 o准确 o可
以用于野菊花药材的质量控制 ∀
≈关键词   野菊花 ~蒙花苷 ~木犀草素 ~含量测定 ~高效液相色谱法
≈中图分类号   • u{wqt ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukusszlst2ssvv2sv
野菊花为菊科植物野菊 Χηρψσαντηεµ υµ ινδιχυµ
q的干燥头状花序 o味苦辛 o性微寒 o归肝 o心经 o清
热解毒 o用于疔疮痈肿 o目赤肿痛 o头痛眩晕 ≈t  ∀蒙
花苷与木犀草素是 u种重要黄酮类成分 o其中蒙花
苷对金黄色葡萄球菌和乙型溶血链球菌具有一定的
抑制作用 ≈u  o是野菊花的特征成分之一 ~木犀草素
也具有明确抗菌作用 ≈v  ∀目前 o只有对野菊花药材
或其制剂中的绿原酸或蒙花苷进行含量测定工作的
报道 ≈wox  ∀由于总黄酮是野菊花的主要有效成分 o
且蒙花苷与木犀草素在野菊花中的含量均较高 o因
此建立同时测定 u种黄酮类成分的高效液相色谱测
定方法 o对野菊花药材或制剂的质量标准研究具有
很重要的意义 ∀本实验在确定了测定方法后 o对采
集到的 ts批野菊花药材中的蒙花苷与木犀草素进
行了含量测定 ∀
1 仪器与试药
≥‹Œ „⁄˜高效液相色谱仪 k≤ p ts„×输液
泵 o ≥°⁄ p ts„紫外检测器 o ∞¤¶¼ vsss色谱工作
站 l∀实验用甲醇 ! 乙腈 ! 四氢呋喃均为色谱纯 o
#vv#
第 vu卷第 t期
ussz年 t月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ t
¤±∏¤µ¼o ussz
水为重蒸水 ~蒙花苷 k批号 tttxu{2ussvsvl 与木
犀草素 k批号 tttxus2ussustl 对照品购于中国药
品生物制品检定所 ~野菊花药材经本院生药教研室
孙启时教授鉴定为 Χ1 ινδιχυµ的干燥头状花序 ∀
2 方法与结果
2q1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱采用
׫¨ µ°²‹¼³¨ µ¶¬¯…⁄≥ ≤t{ kw1y °° ≅ uxs °°ox Λ°l~
流动相为甲醇 2四氢呋喃 2水 kxsΒwΒwyl~流速 s1y
°# °¬±pt ~检测波长 vxs ±°~进样量 us ˏ~柱温
为室温 ∀在此色谱条件下 ou峰理论塔板数均不小
于 z ssso分离度均大于 tqxo峰形较好 ∀对照品与
样品的色谱图见图 t∀
图 t 对照品 k„l与样品 k…l色谱图
tq蒙花苷 ~ uq木犀草素
2q2 对照品溶液制备 精密称取蒙花苷对照品
k按纯度 |w1{h折算 l{1s °ª置 xs °量瓶中 o加甲
醇溶解并稀释至刻度 o作为蒙花苷储备液 ~精密称取
木犀草素对照品 |1s °ª置 xs °量瓶中 o加甲醇溶
解并稀释至刻度 o作为木犀草素储备液 ∀
2q3 供试品溶液制备 精密称取野菊花药材粉末
各 t ªkν €vlo分别加入 ty °zsh乙醇 o水浴 k|s
ε l回流提取 v次 o每次 t «o合并提取液 o用提取溶
剂定容至 tss °o即得 ∀
2q4 线性关系考察 精密量取蒙花苷储备液和稀
释 ts倍后的木犀草素溶液各 touowoyo{ °置 ts
°量瓶中 o用流动相定容 o将定容后的溶液与储备
液进样 o测定 o由峰面积 kΨl和对照品溶液浓度 kΞl
绘制标准曲线 o得回归方程 Ψ € t1{|t ≅ tsz Ξ p
t1xsx ≅ tsw oρ € s1||| {和 Ψ € w1uvy ≅ tsz Ξ p
t1||{ ≅ tsw o ρ € s1||| w∀结果表明蒙花苷在
s1stx u ∗ s1txu °ª# °pt线性关系良好 o木犀草素
在 s1sst { ∗ s1st{ °ª# °pt线性关系良好 ∀
2q5 精密度试验 取蒙花苷 !木犀草素混合对照品
溶液 o重复进样 x次 o记录峰面积 o • ≥⁄均为
s1zsh ∀
2q6 稳定性试验 取供试品溶液 o室温放置 uw «o
分别在 souowo{otuouw «测定 o记录峰面积 o其 • ≥⁄
分别为 u1wh ou1yh o表明样品溶液 uw «内稳定 ∀
2q7 重复性试验 精密称取 x份同一批药材 k沈
阳 l粉末 t ªo同 2q3项下方法制备供试品溶液 o进样
分析 o计算蒙花苷与木犀草素的含量 o其含量的
• ≥⁄分别为 t1yh ot1{h ∀
2q8 回收率试验 精密称取同一批已知含量的药材
k沈阳 l粉末 s1x ªo置 tss °圆底烧瓶中 k分别已按
相当于药材含量的 {sh otssh otush量加入蒙花苷
与木犀草素对照品溶液 o减压回收溶剂 lo同 2q3项下
方法制备供试品溶液 o进样分析 o由测得量与加入量
计算回收率 o结果见表 to表明方法回收率良好 ∀
表 t 蒙花苷与木犀草素回收率 kν € yl
成分
称样量

样品中量
r°ª
加入量
r°ª
测得量
r°ª
回收率
rh
平均值
rh
• ≥⁄
rh
蒙花苷 s1xsx u u1z{ u1t{ w1|| tst1w |{1| u1|
s1xs{ t u1z| x1sv tsu1{
s1xtt u u1{t u1zv x1wz |z1w
s1xsw v u1zz x1w{ ||1v
s1xs{ x u1{s v1u{ x1|t |w1{
s1xs| w u1{s y1ss |z1y
木犀草素 s1xsx u s1vyw s1u{{ s1ywt |y1t |z1u u1x
s1xs{ t s1vyy s1yxy tss1{
s1xtt u s1vy{ s1vys s1zsu |u1{
s1xsw v s1vyv s1zst |w1s
s1xs{ x s1vyy s1wvu s1z{s |y1s
s1xs| w s1vyz s1z{| |z1y
2q9 样品测定 对采集到的 ts批野菊花药材按供
试品溶液制备项下方法制备样品溶液 o用水稀释 t
倍后进样 us ˏo外标法计算含量 o结果见表 u∀
表 u 不同来源野菊花中蒙花苷与木犀草素的含量 kν € vl
编号 购买地 蒙花苷 rh 木犀草素 rh
t 内蒙古 s1yw s1szv
u 张家口 u1z s1svz
v 齐齐哈尔 s1xs s1s|u
w 青海 t1w s1sz|
x 哈尔滨 t1{ s1sxv
y 安徽 s1w| s1szv
z 沈阳 s1xx s1szu
{ 甘肃 s1yz s1sxx
| 山西 u1y s1sws
ts 四川 u1z s1sws
#wv#
第 vu卷第 t期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ t
¤±∏¤µ¼o ussz
3 讨论
3q1 指标成分的选取 实验同时也检测了野菊花
药材中的其他 u种黄酮类化合物槲皮素和刺槐素 o
但两者含量都较小 o而蒙花苷与木犀草素含量均较
高 o且是有效成分 o选为含量测定的指标成分 ∀
3q2 提取条件的确定 实验中比较了超声和回流 u
种常用方便的提取方法 o回流提取法明显好于超声法 ~
对水 !wxh乙醇 !zsh乙醇 !|xh乙醇作为提取溶剂进行
考察 ozsh乙醇好于其他提取溶剂 ~比较了提取 u次与
提取 v次的差别 o提取 v次要好于提取 u次 ∀
3q3 检测波长的选取 蒙花苷与木犀草素最大吸
收波长分别为 vvs ±°和 vxs ±°o且 vxs ±°波长处
两物质吸收都很强 o为提高检测灵敏度 o选取木犀草
素的最大吸收波长 vxs ±°为检测波长 ∀
3q4 不同批药材因产地 !采收时间 !贮存时间长短
等因素不同 o含量差异较大 o须建立统一的药材质量
标准 ∀本实验建立了野菊花药材中蒙花苷与木犀草
素的含量测定方法 o为野菊花药材的质量控制规范
法 !标准化提供了依据 ∀
≈参考文献  
≈t  中国药典 ≈≥ q一部 qussx}ut|q
≈u  李秀兰 o孙光洁 q密蒙花 r结香有效成分的抑菌作用 ≈ q西北
药学杂志 ot||yottkwl}tyxq
≈v  姚新生 q天然药物化学 ≈   qv版 q北京 }人民卫生出版社 o
ussu}tzvq
≈w  袁学勤 o迟建波 o胥 云 q‹°≤测定野菊花中绿原酸的含量
≈ q中成药 oussxouzkwl}w|vq
≈x  谭晓杰 o贾 英 o陈晓辉 o等 q‹ °≤法测定野菊花药材中蒙花
苷的含量 ≈ q沈阳药科大学学报 ousswoutkyl}wvwq
∆ ετερµ ινατιον οφ λιναριν ανδ λυτεολιν ιν ΦλοσΧηρψσαντηεµ ι Ινδιχι βψ ΗΠΛΧ
≤˜Œ¤±2¦«²±ªo Œ÷¬¤²2´ ¬±o ‹„‘≠¬±ªo Œƒ¤2° ¬¨
(ΣχηοολοφΠηαρµ αχψ, Σηενψανγ Πηαρµ αχευτιχαλΥνιϖερσιτψ, Σηενψανγ ttssty, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ §¨ √¨¯²³¤± ‹°≤ ° ·¨«²§©²µ·«¨ §¨ ·¨µ°¬±¤·¬²± ²© ¬¯±¤µ¬± ¤±§ ∏¯·¨²¯¬± ¬± ƒ ²¯¶≤«µ¼¶¤±·«¨ °¬Œ±§¬¦¬q
Μετηοδ : „±½¯¼¶¨¶º µ¨¨ ¦¤µµ¬¨§²∏·²± ׫¨ µ°²‹¼³¨ µ¶¬¯…⁄≥ ≤t{ kwqy °° ≅ uxs °°o x Λ°l ¦²¯∏°± º¬·«≤‹v ’‹ 2׋ ƒ2‹u ’ kxsΒwΒ
wyl ¤¶·«¨ °²¥¬¯¨ ³«¤¶¨q ׫¨ ©¯²º µ¤·¨ º¤¶s1y °# °¬±pt ¤±§·«¨ ˜∂ §¨ ·¨¦·¬²± º¤√¨¯ ±¨ª·«º¤¶¶¨·¤·vxs ±°q Ρ εσυλτ: ¬± ¤¨µ¬·¬¨¶
²© ¬¯±¤µ¬± ¤±§ ∏¯·¨²¯¬± º µ¨¨ ª²²§ ¬± ·«¨ µ¤±ª¨ ¶²©s1stx u2 s1txu °ª# °pt kρ € s1||| {l ¤±§ s1sst {2 s1st{ °ª# °pt
kρ€ s1||| wlo µ¨¶³¨ ¦·¬√¨¯¼q ׫¨ ¤√ µ¨¤ª¨ µ¨¦²√ µ¨¬¨¶²© ¬¯±¤µ¬± ¤±§ ∏¯·¨²¯¬± º µ¨¨ |{1|h ¤±§|z1uh º¬·«• ≥⁄ ¯¨ ¶¶·«¤± v1sh q Χον2
χλυσιον: ׫¨ ° ·¨«²§¦¤± ¥¨ ∏¶¨§·²¦²±·µ²¯ ·«¨ ∏´¤¯¬·¼ ²©ƒ ²¯¶≤«µ¼¶¤±·«¨ °¬Œ±§¬¦¬q
[ Κεψ ωορδσ] ƒ ²¯¶≤«µ¼¶¤±·«¨ °¬Œ±§¬¦¬~ ¬¯±¤µ¬±~ ∏¯·¨²¯¬±~ ¤¶¶¤¼~ ‹°≤ ≈责任编辑 张宁宁  
ussz年全国中药学术研讨会暨第八届全国中药鉴定学术研讨会征文通知
中华中医药学会中药鉴定分会和中国中西医结合学会中药专业委员会定于 ussz年 {月在湖南长沙市召开 / ussz年全国
中药学术研讨会暨第八届全国中药鉴定学术研讨会 0 ∀
征文内容包括 }t1有关中药鉴定学的研究进展及评述 ∀ u1中药鉴定新方法 !新技术 !新思路 !新观点 ∀ v1中药品种考证
及相关内容 ∀ w1中药质量标准研究 !品质评价新思路与方法 ∀ x1中药资源可持续利用的关键技术研究 ∀ x1中药药效机理及
配伍规律研究 ∀ yq中药安全性评价 !药代动力学研究 ∀ z1中药药性理论及本草文献学研究 ∀ {1分子生物学技术 !信息技术 !
生物工程技术在中药现代化研究中的应用等 ∀ |15中药鉴定学 6等中药教学方法 !教学手段 !教学改革等方面的论文 ∀
论文要求 ~所投稿件为尚未公开发表的新论文 o并在首页右上角注明中药鉴定研讨会稿件字样 ∀稿件用 • ²µ§文档 „w版
面 ox号宋体字 o另附 wss字以内的摘要 k最好有英文摘要 l及关键词 ∀论文征集截止日期 ussz年 x月 t日 ∀
联系人 }湖南中医药大学药学院中药鉴定教研室 }刘塔斯 !潘清平 !肖冰梅 ∀
联系地址 }湖南省长沙市韶山中路 ttv号 o邮政编码 }wtsssz∀
联系电话 }szvt2{wx{uvwk’l~tvsvyz|wwusotv|zw{t{svy∀传真 }szvt2{wx{uuz∀
∞2°¤¬¯}ª¤¯ |¨{{{ƒ tyv1¦²°~ ¬¯∏·¤¶¬ƒ tuy1¦²°∀
#xv#
第 vu卷第 t期
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∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ t
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