全 文 ：丹参注射液在妊娠肝内胆汁瘀积症中的治疗机制研究
杜雪寒t o蒋 犁t 3 o蒋小青u
kt q东南大学 临床医学院 o江苏 南京 outsss| ~
u q东南大学 附属中大医院 o江苏 南京 outsss|l
≈摘要  目的 }探讨丹参注射液在治疗妊娠肝内胆汁瘀积症中的机制 ∀方法 }采集妊娠肝内胆汁瘀积症患者
血清 o与脐静脉内皮细胞共培养模拟其宫内环境 o不同含量kt ou ow o{ ª#ptl的丹参注射液进行干预 o××法检测内
皮细胞的活力 o∞Œ≥„法和免疫细胞化学法分别检测内皮细胞分泌血管内皮生长因子的变化 ∀结果 }与空白组相
比 o丹参注射液治疗组能使脐静脉内皮细胞活力增强 o脐静脉内皮细胞自分泌可溶性和膜结合性血管内皮生长因
子k∂∞Šƒl蛋白增加 o并呈现剂量依赖性 ~以 { ª#pt的作用最佳 ∀结论 }丹参注射液对妊娠肝内胆汁瘀积症患者血
清刺激后的脐静脉内皮细胞具有保护作用 o其保护作用可能与增强血管内皮生长因子的分泌有关 ∀
≈关键词  妊娠肝内胆汁瘀积症 ~脐静脉 ~血管内皮细胞 ~血管内皮生长因子 ~丹参注射液
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussyltt2s|ut2sv
≈收稿日期  ussx2su2uu
≈通讯作者  3 蒋犁 oר¯ }ksuxl{vuzuxuu o∞2°¤¬¯}­¬¤±ª¯¬z ƒ ¶²«∏q
¦²°
妊娠肝内胆汁瘀积症 k Œ≤°l是一种多发生于妊
娠晚期的妊娠特异性疾病 o该病可引起严重的胎儿
宫内窘迫 !胎儿生长受限 !死胎 !死产 o对母婴的危害
很大 ∀目前对 Œ≤°的药物治疗作用有限 o且在改善
围生儿预后方面疗效欠佳 ∀具有活血化瘀作用的中
药丹参 o广泛的应用于心 !脑血管等疾病上 ∀中医学
认为/气血相关0 !/行气通脉0 !/补气活血0 !/脉者血
之府也0 o因此具有行气活血作用的丹参可能具有促
血管生成作用 ∀血管内皮生长因子k∂∞Šƒl是一种
内皮细胞的特异性有丝分裂原 o具有血管发生 !增加
血管通透性 !调节内皮细胞的完整性及改变细胞外
基质等功能 ∀本实验以 Œ≤°患者血清与脐静脉内皮
细胞共培养模拟 Œ≤°的胎儿宫内环境 o并以不同含
量的丹参注射液进行干预 o探讨丹参对内皮细胞有
无保护作用及可能机制 o为丹参应用于临床改善围
生儿预后提供理论依据 ∀
1 资料与方法
1 q1 研究对象 收集 ussv年 { ∗ tu月在东南大学
附属中大医院和南京市妇幼保健院妇产科住院的
Œ≤°患者 y例 o无菌抽取孕妇肘前静脉血 ∀选择剖
宫产的足月妊娠脐带 ts例 ∀纳入标准 }Œ≤°诊断标
准遵照5中华妇产科学6≈t  o并排除合并妊娠高血压
综合征 o糖尿病 !肾病 !原发性高血压 !贫血及其他内
科合并症 o否认有吸烟 !激素治疗史 ∀剖宫产指征 }
均未临产 o系因骨盆 !胎位 !珍贵儿及社会因素等而
行择期剖宫产者 ∀
1 q2 方法 参照 ¤©©¨ 法行脐静脉内皮细胞原代培
养≈u  o经倒置相差显微镜 !Š¬¨°¶¤染色和人类第 ¬因
子抗原鉴定为血管内皮细胞 ∀当细胞融合 ys h ∗
{s h时 o加入 us h Œ≤°患者的血清和不同含量的丹
参注射液刺激 uw «k丹参的终含量分别为 s ot ou ow o
{ ª#ptl o××法检测脐静脉内皮细胞的活力 ~按照
∞Œ≥„试剂盒操作步骤检测培养上清液中分泌型可
溶性 ∂∞Šƒ的变化 ~≥2°免疫细胞化学法检测膜结合
‘׊ ∂∞Šƒ的变化 ∀
1 q3 试剂和仪器 • °Œ  §¨¬∏° tyws培养基 }ŠŒ…2
≤’…•公司产品 ~胎牛血清ktss °r瓶l }杭州四季
青生产 ~·型胶原酶 }‹i≠ ¥¬²¦«¨ °¬¦¤¯ ¦²µ³²µ¤·¬²± 公
司产品 ~丹参注射液 }四川升和制药有限公司生产 o
批号 svswsv ~××粉剂 o购自 ≥¬ª°¤公司 ~∞Œ≥„试剂
盒购自晶美生物工程北京有限公司 ~≥°超敏试剂盒
及 ⁄„…显色试剂盒购自福州迈新生物技术开发公
司 ~Š……ty型 ≤’u培养箱 o’≠ °˜≥ ≤Žu型倒置显微
镜 o≥°∞≤ו „  „÷uxs型酶联免疫检测仪 ∀
1 q4 统计方法 数据均以 cξ ? σ表示 ∀采用 ≥°≥≥
tt qx统计软件 o组间多个样本均数间比较采用方差
分析 o两两之间用 θ检验 o两样本均数比较用成组 τ
检验 ∀
#tu|#
第 vt卷第 tt期
ussy年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt oŒ¶¶∏¨ tt
∏±¨ oussy
2 结果
2 q1 对脐静脉内皮细胞k‹˜∂∞≤¶l活力的影响 用
酶联免疫检测仪在 w|s ±° 波长处测定其吸光度
kΑl o可间接反映活细胞数量及线粒体功能 ∀在一
定细胞数范围内 o×× 结晶物形成的量与活细胞数
和细胞的功能状态呈正相关 ∀在 us h Œ≤°患者血清
干预的同时 o分别加入含 s ot ou ow o{ ª#pt丹参注射
液共同培养 uw «后 o相应组别的 Α见表 t ∀与 Œ≤°
患者血清组相比 o随着丹参含量的增加 o其 Α逐渐
增加 ∀
表 t 丹参注射液干预后 ‹˜∂∞≤¶的活力
表达kcξ ? σ, ν € tul
组别 剂量r ª#pt Α
正常对照 p s qyts w ? s qsuu utl
Œ≤° p s qu{u x ? s qsuy z
丹参 t s qvts z ? s qsux u
u s qwsu y ? s qsuw utl
w s qxsx u ? s qsuv |tl
{ s qx|t w ? s qsux xtl
注 }与 Œ≤°组比tl Π s qsx k表 u同l
2 q2 对脐静脉内皮细胞分泌性 ∂∞Šƒ 蛋白的影响
us hŒ≤°患者血清和不同含量的丹参注射液共刺
激 ‹˜∂∞≤¶uw «后 o∞Œ≥„ 法检测培养上清液中
∂∞Šƒ蛋白量的变化 o结果见表 u ∀
表 u 丹参注射液干预 uw «后 ‹˜∂∞≤¶分泌的
∂ ∞Šƒ量kcξ ? σ, ν € tul
组别 剂量rª#pt ∂∞Šƒr³ª#°pt
正常对照 p ts| qtys ? w qx||tl
Œ≤° p zv qtyz ? w q|ux
丹参 t z{ qsuw ? w qvx|
u {{ qvwt ? w qttztl
w |z q{yy ? w qsuytl
{ tsy qwzx ? w qv{wtl
2 q3 脐静脉内皮细胞膜结合性 ∂∞Šƒ 蛋白的变化
采用免疫细胞化学的方法定位膜结合性 ∂∞Šƒ蛋
白的表达 o细胞浆和胞膜被染成棕黄色的为阳性细
胞 o细胞核被苏木素复染成蓝色 o胞浆 !胞核对比鲜
明 ∀以 °…≥代替一抗 o细胞核呈蓝色 o但胞浆和胞
膜无着色 o即为阴性细胞 ∀根据胞浆染色深浅分为
淡棕黄色 !棕黄色和深棕黄色 ∀阴性k无着色l以
/ p 0表示 o弱阳性k淡棕黄色l以/ n 0表示 o阳性k棕
黄色l以/ 6 0表示 o强阳性k大量深棕黄色l以/ 7 0表
示 ∀每张片子在高倍视野下记数 uss个细胞中各种
染色级别的细胞个数 o每组 y例标本的各级细胞数
相加 o共记数 t uss个细胞 o各组的各级细胞数目见
表 v ∀
除丹参 t ª#pt组与 Œ≤°组间秩和检验无统计
学差异外 o丹参其他含量组与 Œ≤°组比较均有统计
学差异 oΠ s qsx o丹参各含量组间两两比较均有统
计学差异 ∀
表 v 不同组间免疫细胞化学示细胞染色等级的比较
组别
阳性细胞数r个
p n 6 7
正常孕妇血清 yx tw{ wuw xyv
Œ≤°血清 u{| wuw vw| tv{
t ª#pt丹参 uxy wwu vys twu
u ª#pt丹参 t{v vsu wx{ uxz
w ª#pt丹参 ttu uu| w{v vzy
{ ª#pt丹参 z| txv wyw xsw
3 讨论
研究者认为 oŒ≤°围生儿预后不良是因为胎盘
血管发育和功能异常导致胎儿的氧供不足 ∀ ∂∞Šƒ
是一种重要的血管生成因子 o通过促进有丝分裂引
起内皮细胞的增殖≈v  o并能诱导其迁移≈w 从而具有
血管生发功能 o还具有增加血管通透性的作用 ∀研
究发现 Œ≤°患者血清和胎盘中 ∂∞Šƒ 明显降低 o胎
盘血管密度降低 o且 ∂∞Šƒ 水平与胎盘血管密度呈
正相关≈x oy  ∀本实验用 Œ≤°患者血清与 ‹˜∂∞≤¶共
培养 o发现内皮细胞活力下降 o∂∞Šƒ 分泌减少 ∀
∂∞Šƒ减少造成胎盘毛细血管密度减少和血管通透
性下降 o绒毛间隙狭窄 o导致胎儿窘迫及胎死宫内 ∀
因此通过增加 ∂∞Šƒ 的分泌和表达 o可使胎盘血管
生发和通透性增加 o改善胎盘血流灌注 o近而改善
Œ≤°围生儿预后 ∀
中医理论认为 oŒ≤°属湿热内蕴 o营卫不和 o气
滞血行不畅≈z  o因此具有行气活血作用的丹参可能
通过促血管生成而对 Œ≤°治疗有效 ∀大量研究表明
丹参对血管内皮细胞具有保护作用≈{ o|  o能够减少
细胞的氧化损伤 !抑制细胞的凋亡 ∀本实验以 Œ≤°
患者血清和正常 ‹˜∂∞≤¶共培养 o模拟 Œ≤°胎儿的
宫内环境 o并用不同含量的丹参注射液进行干预 ∀
结果表明 o丹参干预后内皮细胞 Α增加 o并具有一
定的浓度依赖性 ∀表明丹参能抑制或减轻 Œ≤°患者
血清对 ‹˜∂∞≤¶的损伤 o对其具有保护作用 ∀在一
定含量的范围内 o此种保护作用随着含量的增加而
增加 ∀丹参对内皮细胞的保护作用是否与 ∂∞Šƒ有
关 ‚徐杰≈ts 研究发现 o丹参多酚酸盐能使单核细胞
∂∞Šƒ°• ‘„分泌升高 o并能促进内皮细胞的迁移 ∀
#uu|#
第 vt卷第 tt期
ussy年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt oŒ¶¶∏¨ tt
∏±¨ oussy
本实验通过 ∞Œ≥„法和免疫细胞化学法 o证实了丹
参注射液能使受损伤的脐静脉内皮细胞分泌和表达
∂∞Šƒ蛋白增加 ∀丹参能使可溶性的 ∂∞Šƒ 蛋白分
泌增高k使用 ∞Œ≥„法检测培养液中的 ∂∞Šƒl o具有
一定的浓度依赖性 ∀免疫细胞化学证实了丹参还可
使膜结合性的 ∂∞Šƒ 蛋白表达增高 o表现为胞膜或
胞浆内围绕胞核的棕黄色染色 o呈阳性或强阳性 ∀
丹参促使 ∂∞Šƒ蛋白表达和分泌增加与对血管内皮
细胞的保护作用相一致 ∀由此推论丹参可能通过促
使 ‹˜∂∞≤¶自分泌 ∂∞Šƒ这一内皮细胞的有丝分裂
原 o促进内皮细胞的分裂 !增殖 o加速细胞的生长 o进
而间接的保护了内皮细胞 ~内皮细胞增殖的加速以
及功能的维持又促进了 ∂∞Šƒ的表达和分泌 ∀因此
丹参可能通过增强内皮细胞的 ∂∞Šƒ 表达 o促使血
管生发和增强血管的通透性 o胎盘部位血流灌注增
加 o促进了母胎之间血 !氧交换 o改善了围生儿因血
供不足而引起的缺氧窘迫 !发育迟缓 o从而改善了围
生儿预后 ∀
≈参考文献 
≈t  曹泽毅 q中华妇产科学 q上册 q北京 }人民卫生出版社 ot||| q
xss q
≈u  ¤©©¨ ∞ „ q ≤∏¯·∏µ¨ ²©«∏°¤± ±¨§²·«¨ ¬¯¤¯ ¦¨¯¯¶§¨µ¬√¨ §©µ²° ∏±¥¬¯¬¦¤¯
√ ¬¨±¶o¤§¨±·¤¦¤·¬²± °²µ³«²¯²ª¬¦¤±§¬°°∏±²¯²ª¬¦¦µ¬·¨µ¬¤q Χλιν Ιν2
ϖεστ ot|zv oxu }uzwx q
≈v  ¨ ∂ o ¦¯¤∏ª«¯¬± o…µ¤¦¨ • „ o ετ αλ. ∂¤¶¦∏¯¤µ ±¨§²·«¨ ¬¯¤¯ ªµ²º·«
©¤¦·²µ¬±§∏¦¨§³µ²¯¬©¨µ¤·¬²± ²©²√¬±¨ ∏°¥¬¯¬¦¤¯ √ ¬¨± ±¨§²·«¨ ¬¯¤¯ ¦¨¯¯¶q
Σοχ ΓψνεχολΙνϖεστ ot||{ oxktl }tx{„ q
≈w  ≤«¨ ±  ‹ o • ¤±ª ÷ ≤ oŽ¤±  o ετ αλ. ∞©©¨¦·²©©ª©2t ¤±§©ª©2u ²±
∂∞Šƒ ¥¬±§¬±ª·² «∏°¤± ∏°¥¬¯¬¦¤¯ √ ¬¨± ±¨§²·«¨ ¬¯¤¯ ¦¨¯¯¶q Χελλ Βιολ
Ιντ ousst ouxkvl }uxz q
≈x  夏松云 o陈竹钦 o李 力 1 妊娠肝内胆汁淤积症患者高水平胆
汁酸对血管内皮细胞生长因子的作用 q中华妇产科杂志 o
ussu ovzkttl }yy| q
≈y  陈 忠 o许建娟 o陆以农 q妊娠肝内胆汁淤积症患者胎盘组织
中血管内皮生长因子的表达 q海南医学 oussv otwk|l }|t q
≈z  刘淑余 q胆郁合剂治疗妊娠肝内胆汁淤积症 q上海中医药杂
志 ot||s ovtkzl }| q
≈{  冯愉态 o陈再智 q丹参治疗心血管疾病作用研究进展 q医学信
息 ousst otwkttl }zz{ q
≈|  刘振国 o乌云塔那 q丹参注射液的药效学研究进展 1 中国民族
民间医药杂志 oussu oxw }y q
≈ts  徐 杰 o范维琥 q丹参多酚酸盐对人血管内皮细胞迁移的影
响 q中西医结合学报 oussv otkvl }utt q
Στυδψ ον τηεραπευτιχ µεχηανισµσ οφ ∆ανσηεν ινϕεχτιον ιν
ιντραηεπατιχ χηολεστασισ οφ πρεγνανχψ
⁄˜ ÷∏¨2«¤±t oŒ„‘Š ¬t z oŒ„‘Š ÷¬¤²2 ¬´±ªu
(t1 Τηε Χλινιχαλ Μεδιχαλ Σχηοολ οφ Σουτηεαστ Υνιϖερσιτψ, Νανϕινγ utsss| , Χηινα ;
u1 ∆επαρτµεντ οφ Οβστετριχσ & Γψνεχολογψ, Ζηονγδα Ηοσπιταλ, Νανϕινγ utsss| , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ ¶·∏§¼ ·«¨ ·«¨µ¤³¨ ∏·¬¦ ° ¦¨«¤±¬¶°¶²© ⁄¤±¶«¨ ± ¬±­¨¦·¬²± ¬± ¬±·µ¤«¨ ³¤·¬¦¦«²¯ ¶¨·¤¶¬¶²© ³µ¨ª±¤±¦¼ kŒ≤°l q
Μετηοδ : ׫¨ ¬¨³¨µ¬° ±¨·¤¯ ¶¨µ∏° º¤¶¦²¯¯¨ ¦·¨§©µ²° y ³¤·¬¨±·¶º¬·«Œ≤° ¥¨©²µ¨ ·«¨µ¤³¼ º«¨ ±¬± «²¶³¬·¤¯ q∞±§²·«¨ ¬¯¤¯ ¦¨¯¯¶º µ¨¨ ¬¶²¯¤·¨§©µ²°
«∏°¤± ∏°¥¬¯¬¦¤¯ √ ¬¨±¶¦«²¶¨± ¤°²±ª·«¨ ts ±²µ°¤¯ ³µ¨ª±¤±¦¼ ¤¦¦²µ§¬±ª·²¤©©¨χ¶° ·¨«²§q≥¨ µ∏° ²©us h ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ²©Œ≤° ¤±§§¬©©¨µ¨±·
¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ²© ⁄¤±¶«¨ ±¬±­¨¦·¬²± º µ¨¨ ¦²¦∏¯·∏µ¨§º¬·««∏°¤± √¤¶¦∏¯¤µ ±¨§²·«¨ ¬¯¤¯ ¦¨¯¯¶k‹˜∂∞≤¶l ©²µuw «²∏µ¶q ×× ° ·¨«²§º¤¶¤³³¯¬¨§·²
° ¤¨¶∏µ¬±ª·«¨ √¬·¤¯¬·¼ ²© ‹˜∂∞≤¶q׫¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± √¤¯∏¨ ²©√¤¶¦∏¯¤µ ±¨§²·«¨ ¬¯¤¯ ªµ²º·«©¤¦·²µk∂∞Šƒl ²©§¬©©¨µ¨±·ªµ²∏³¶º¤¶§¨·¨¦·¨§¥¼¬°2
°∏±²¦¼·²¦«¨ °¬¶·µ¼ ¤±§ ±¨½¼° 2¨¯¬±®¨ §¬°°∏±²¶²µ¥¨ ±·¤¶¶¤¼ k∞Œ≥„l µ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ q Ρεσυλτ : ≤²°³¤µ¨§º¬·«Œ≤° ªµ²∏³o·«¨ √¤¯∏¨ ²© ×× ¤±§
∂∞Šƒ ¬±·«¨ ⁄¤±¶«¨ ±¬±­¨¦·¬²±·«¨µ¤³¨ ∏·¬¦ªµ²∏³¶º µ¨¨ ¬±¦µ¨¤¶¨§º¬·«·«¨ ¬±¦µ¨¤¶¨ ²©¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ¤±§°²µ¨²√ µ¨o{ ª#pt ²©⁄¤±¶«¨ ±¬±­¨¦2
·¬²± º¤¶·«¨ ²³·¬¦¤¯ ¦²±¦¨±·µ¤·¬²±q…¼¬°°∏±²¦¼·²¦«¨ °¬¶·µ¼o·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²© ∂∞Šƒ ¬± ‹˜∂∞≤¶¬±·«¨ ⁄¤±¶«¨ ±¬±­¨¦·¬²±·«¨µ¤³¨ ∏·¬¦ªµ²∏³¶
º¤¶¤¯¶² ±¨«¤±¦¨§º¬·«·«¨ ¬±¦µ¨¤¶¨ ²©¦²±¦¨±·µ¤·¬²±qΧονχλυσιον : ⁄¤±¶«¨ ±¬±­¨¦·¬²±¦¤± ³µ²·¨¦·‹˜∂∞≤¶¤ª¤¬±¶··«¨ ¬±­∏µ¼ ²©Œ≤° ¶¨µ∏° ¤±§
³µ²°²·¨·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²© ∂∞Šƒ q⁄¤±¶«¨ ±¬±­¨¦·¬²±¬°³µ²√ ¶¨‹˜∂∞≤¶¥¼¬±¦µ¨¤¶¬±ª·«¨ √¤¯∏¨ ²© ∂∞Šƒ q
[ Κεψ ωορδσ] ¬±·µ¤«¨ ³¤·¬¦¦«²¯ ¶¨·¤¶¬¶²©³µ¨ª±¤±¦¼~∏°¥¬¯¬¦¤¯ √ ¬¨±~√¤¶¦∏¯¤µ ±¨§²·«¨ ¬¯¤¯ ¦¨¯¯ ~√¤¶¦∏¯¤µ ±¨§²·«¨ ¬¯¤¯ ªµ²º·«©¤¦·²µ~⁄¤±2
¶«¨ ±¬±­¨¦·¬²±
≈责任编辑 古云侠 
#vu|#
第 vt卷第 tt期
ussy年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt oŒ¶¶∏¨ tt
∏±¨ oussy