全 文 ：ＣｈｉｎｅｓｅＰｅｏｐｌｅ＇ｓＡｒｍｅｄＰｏｌｉｃｅＦｏｒｃｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０５０７，Ｃｈｉｎａ；
２．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｏｆＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＦｉｒｓｔＭｉｌｉｔａｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０５１５，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｒｅｇｕｌａｒｉｔｙｏｆｒｅｃｉｐｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｂｙｏｂｓｅｒｖｉｎｇｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｅｃｔｓｏｎｔｈｅｇｅｎｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ
５ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，ＩＬ４ａｎｄｔｈｅｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅＣ４ｉｎａｓｔｈｍａｔｉｃｍｉｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅｍｉｃｅｗｅｒｅｃｈａｌｅｎｇｅｄｗｉｔｈＯＶＡａｎｄ
ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄｉｇｗｉｔｈｔｈｅＨｅｒｂａＥｐｈｅｄｒａｅｄｅｃｏｃｔｉｏｎ（ＨＥＤ），ｓｅｐａｒａｔｅｄｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ（２５００ｍｇ·ｋｇ－１，ｃａｌｃｕｌａｔｅｄｂｙＨｅｒｂａＥｐｈｅｄ
ｒａｅ）ａｎｄｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ（２ｍｇ·ｋｇ－１）ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｏｎｃｅｄａｉｌｙｆｏｒｓｅｖｅｎｄａｙｓ．ＴｈｅｒｅａｌｔｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲｍｅｔｈｏｄｗａｓ
ｅｍｐｌｏｙｅｄｔｏｍｅａｓｕｒｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆＦＬＡＰｍＲＮＡａｎｄＩＬ４ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｉｎｌｕｎｇａｎｄｔｈｅＥＬＩＳＡｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅ
ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＬＴＣ４ｉｎｔｈｅｗａｓｈｉｎｇｓｏｌｕｔｉｏｎｏｆｐｕｌｍｏｎａｒｙａｌｖｅｏｌｕｓａｎｄｂｒｏｎｃｈｉ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｉｎｔｈｅｌｕｎｇｏｆａｓｔｈｍａｍｉｃｅ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆ
ＦＬＡＰａｎｄＩＬ４ａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＬＴＣ４ｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙａｕｇｍｅｎｔｅｄｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．ＴｈｅＨＥＤａｎｄｔｈｅｓｅｐａｒａｔｅｄ
ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓｃｏｕｌｄｓｕｐｐｒｅｓｓｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＦＬＡＰａｎｄＩＬ４ａｎｄＬＴＣ４ｒｅｌｅａｓｅｔｏａｇｒｅａｔｅｘｔｅｎｔｉｎｍｉｃｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅＨＥＤｈａｄ
ｔｈｅｒｅｍａｒｋａｂｌｅｅｆｅｃｔｓｏｆａｎｔｉａｎａｐｈｙｌａｘｉｓａｓｔｈｍａａｎｄｔｈｅｏｒｉｇｉｎａｌｆｏｒｍｕｌａＨＥＤｗｏｒｋｅｄｂｅｓｔ．Ｔｈｅｓｅｒｅｓｕｌｔｓｃｏｎｆｉｒｍｅｄｔｈｅｒａｔｉｏｎａｌｉｔｙａｎｄ
ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃｌｅｖｅｌｏｆＨＥＤ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＨｅｒｂａＥｐｈｅｄｒａｅｄｅｃｏｃｔｉｏｎ；ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅＣ４；５ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ
［责任编辑 古云侠］
黄连解毒汤有效成分对缺氧／复氧时
脑微血管内皮细胞的保护作用
袁拯忠１，朱陵群２，庞 鹤２，单泽松１，王硕仁２，高永红２，牛福玲２
（１．温州医学院 附属第一医院，浙江 温州 ３２５０００；
２．北京中医药大学 东直门医院 中医内科学教育部重点实验室，北京 １００７００）
［摘要］ 目的：研究栀子苷、黄芩苷和小檗碱对大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用。方法：建立离体大鼠脑微
血管内皮细胞缺氧／复氧损伤模型，用１０２４，０５１２，０２５６，０１２８，００６４，００３２，００１６，０００８μｍｏｌ·ｍＬ－１栀子苷，
０２２４，０１１２，００５６，００２８，００１４，０００７，０００３μｍｏｌ·ｍＬ－１黄芩苷和 ０１９２，００９６，００４８，００２４，００１２，０００６，
０００３μｍｏｌ·ｍＬ－１小檗碱分别作用于正常组和模型组细胞。细胞活性用 ＭＴＴ比色法检测。结果：０１２８，００６４，
００３２μｍｏｌ·ｍＬ－１栀子苷，００２８，００１４，０００７μｍｏｌ·ｍＬ－１黄芩苷和００２４，００１２，０００６μｍｏｌ·ｍＬ－１小檗碱能够
比较理想的保护缺氧４ｈ复氧１２ｈ损伤的大鼠脑微血管内皮细胞。结论：适当浓度的栀子苷、黄芩苷和小檗碱等
黄连解毒汤主要成分可以保护脑微血管内皮细胞。
［关键词］ 黄连解毒汤；脑微血管内皮细胞；缺氧／复氧；栀子苷；黄芩苷；小檗碱
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００７）０３０２４９０４
［收稿日期］ ２００６０１２０
［基金项目］ 国家人事部留学回国人员科技活动基金（２００２
年）；教育部科学技术研究重点项目（０３０３０）
［通讯作者］ 王硕仁，Ｔｅｌ：（０１０）８４０１３１９６，Ｅｍａｉｌ：ｄｏｃｔｏｒｗａ
ｎｇ＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ
黄连解毒汤是清热解毒的代表方剂。临床研究
表明对急性脑梗死的患者，用加味黄连解毒汤能显
著提高疗效［１］。近年国内外对黄连解毒汤及其有
效成分用于脑血管病的基础研究与临床报道较
多［２］，提示本方治疗缺血性脑血管病有良好前景。
血脑屏障的破坏是缺血性脑血管疾病研究的重点，
而微血管内皮细胞是血脑屏障的主要结构基础。作
者用培养的大鼠脑微血管内皮细胞，以氧糖剥夺再
复氧复糖复制体外缺血再灌注损伤模型，用梯度浓
度的栀子苷、黄芩苷和小檗碱等黄连解毒汤中的有
效成分对细胞损伤模型进行干预，确定３种单体的
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第３２卷第３期
２００７年２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ ３
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００７
保护浓度。
１ 材料
１．１ 动物 体重６０～７０ｇ的雄性ＳＤ大鼠，北京维
通利华公司提供，许可证号ＳＣＸＫ（京）２００２０００３。
１．２ 试剂和仪器 ＤＭＥＭ培养基（美国 Ｇｉｂｃｏ公
司）。胎牛血清（北京元亨圣马生物技术研究所，批
号０４０３１６）。明胶、ＭＴＴ、胶原酶Ⅰ、牛血清白蛋白、
乙二胺四乙酸、二甲基亚砜（Ｓｉｇｍａ公司）。Ⅷ因子
相关抗原抗体（北京中杉金桥有限公司）。Ｃｌｉｎｉｃｂｉｏ
１２８Ｃ全自动酶标仪。ＭＴ－２型 ＯＬＹＭＰＵＳ倒置显
微镜。日本电子公司 ＳＥＭ－６０００Ｆ型扫描电镜。
ＮＡＰＣＯ５４１０型二氧化碳培养箱。ＪＪＴ－１３００型超净
工作台。ＬＤ４－２型低速离心机。
１．３ 药物 栀子苷（批号１１０７４９２００３０９）、黄芩苷
（批号 １１０７１５２００２１２）、小檗碱 （批号 １１０７１３
２００２０８）均由中国药品生物制品检定所提供。无水
乙醇（国产分析纯）。小檗碱溶解于无水乙醇，黄芩
苷、栀子苷溶解于 ＤＭＥＭ培养基，然后３种单体在
缺氧给药时用 Ｋｒｅｂｓ溶液稀释到实验需要的浓度，
而在复氧给药时用 ＤＭＥＭ培养基稀释到实验需要
的浓度。乙醇浓度控制在１％以内。
２ 方法
２．１ 脑微血管内皮细胞的培养和鉴定 参照文献
［３］大鼠脑微血管内皮细胞的培养与鉴定，４只
６０～７０ｇ大鼠，乙醚麻醉后消毒断头取脑，置于含Ｄ
Ｈａｎｋｓ的培养皿中，去除软脑膜和血管。取大脑皮
质用剪刀剪碎后，以玻璃匀浆器进行匀浆。将匀浆
液过１００目筛网，收集滤液。过２００目筛网，收集筛
网上的微血管组织。将上述含有微血管组织的培养
液吸入离心管中，１５００ｒ·ｍｉｎ－１室温离心，１５ｍｉｎ。
弃上清，向沉淀液中加入０２％胶原酶Ⅰ ＋０１％牛
血清白蛋白（ＢＳＡ）５ｍＬ消化２０ｍｉｎ，其间观察微血
管段的消化情况。再用上述条件离心，弃上清，细胞
沉淀液用培养基洗２次，加入含内皮细胞生长因子
（ＥＣＧｓ）和３０％胎牛血清的完全培养液６ｍＬ重悬，
接种在预先以２％明胶包被的培养瓶中进行原代培
养，４８ｈ后第１次换液。在原代培养过程中，将微血
管内皮细胞团以外的细胞用机械划除法去除而纯化
细胞。待细胞基本汇合后，以０１％胰酶 ＋０１％乙
二胺四乙酸（ＥＤＴＡ）消化２０ｍｉｎ，传代培养２周，以
４～５代细胞用于实验。倒置显微镜下观察：传代培
养后观察细胞呈长梭形，汇合状态呈单层“铺路石”
状。Ⅷ因子抗体间接免疫荧光鉴定阳性。扫描电镜
观察到细胞表面有短粗而丰富的微绒毛，表明提取
的是脑微血管内皮细胞。
２．２ 复制体外缺氧／复氧损伤模型 以体外缺氧／
复氧损伤模拟缺血再灌注性脑损伤。大鼠脑微血管
内皮细胞按１×１０５个／ｍＬ种植于９６孔板中，每孔
１００μＬ，第２天进行造模。以文献［４］方法稍加改
进。模拟缺血以 ＰＢＳ洗细胞２遍，换无糖的 Ｋｒｅｂｓ
溶液（ｍｍｏｌ·Ｌ－１，ＮａＣｌ１１９，ＫＣｌ４７，ＫＨ２ＰＯ４１２，
ＮａＨＣＯ３２５，ＣａＣｌ２２５，ＭｇＣｌ２１），置于自制的３７℃
密闭缺氧罐中，持续通入９５％Ｎ２＋５％ＣＯ２，流量保
持在０５Ｌ·ｍｉｎ－１。再复氧时将细胞换无血清的
ＤＭＥＭ培养液置正常培养箱中（空气 ＋５％ＣＯ２）。
缺氧时间为４ｈ，再复氧时间为１２ｈ。缺氧／复氧损
伤后，倒置显微镜下可见大量微血管内皮细胞变圆
脱落，漂浮在培养基中，贴壁细胞变形、皱缩呈团簇
状，界限不清，细胞间隙增宽，某些融合部分断裂，较
正常细胞有明显的改变。
２．３ 分组及给药 正常组，模型组，１０２４，０５１２，
０２５６，０１２８，００６４，００３２，００１６，０００８μｍｏｌ·
ｍＬ－１栀子苷组，０２２４，０１１２，００５６，００２８，００１４，
０００７，０００３μｍｏｌ· ｍＬ－１黄芩苷组和 ０１９２，
００９６，００４８，００２４，００１２，０００６，０００３μｍｏｌ·
ｍＬ－１小檗碱组及１％乙醇组。给药组在缺氧和复氧
前加入梯度浓度的栀子苷、黄芩苷和小檗碱。对照
组换用无血清 ＤＭＥＭ培养基在正常培养箱中培养
１６ｈ。
２．４ 细胞生存活性的 ＭＴＴ检测 在缺氧４ｈ再复
氧１２ｈ后吸弃上清，换无血清的 ＤＭＥＭ培养基１００
μＬ，每孔加入５ｍｇ·ｍＬ－１的ＭＴＴ溶液各１５μＬ，置
正常培养箱中孵育４ｈ后，吸弃上清，每孔加入二甲
基亚砜（ＤＭＳＯ）１００μＬ，振荡器轻轻混匀后，酶标仪
４９２ｎｍ测Ａ值。
２．５ 统计学处理 数据以 珋ｘ±ｓ表示，ＳＰＳＳ１００进
行数据统计和方差分析。
３ 结果
３．１ 缺氧／复氧对脑微血管内皮细胞的损伤情况
表１显示，缺氧／复氧模型组与用 ＤＭＥＭ培养基培
养相同时间组有差异（Ｐ＜００１）。表明氧糖剥夺４
ｈ并复氧复糖１２ｈ会对细胞造成比较严重的损伤。
３．２ 对正常培养状态下脑微血管内皮细胞活性的影
响 表２显示：１０２４，０５１２，０２５６，００６４μｍｏｌ·ｍＬ－１
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Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ ３
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００７
表１ 缺氧／复氧对脑微血管内皮细胞损伤
的ＭＴＴ检测结果（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
分组 Ａ
模型 ０１２３±００３３
ＤＭＥＭ ０１４７±００１６１）
注：与模型组比１）Ｐ＜００１
表２ 不同浓度的药物对正常培养状态下
脑微血管内皮细胞活性的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝７）
分组 剂量／μｍｏｌ·ｍＬ－１ Ａ
正常 － ０１３２±００１４
栀子苷 １０２４ ０１５７±００１３２）
０５１２ ０１５６±０００９２）
０２５６ ０１５６±００１７２）
０１２８ ０１４２±００１５
００６４ ０１４８±００２１１）
００３２ ０１４６±００１９
００１６ ０１４０±０００７
０００８ ０１４６±０００８
黄芩苷 ０２２４ ００６７±０００４２）
０１１２ ００８８±００１３２）
００５６ ０１３２±０００８
００２８ ０１４７±０００５１）
００１４ ０１５４±００１２１）
０００７ ０１３５±０００９
０００３ ０１３１±０００７
小檗碱 ０１９２ ０１００±０００８２）
００９６ ０１３１±００１３
００４８ ０１９８±００１１２）
００２４ ０１９８±００１１２）
００１２ ０１９３±００１６２）
０００６ ０１９８±００１４２）
０００３ ０１８１±００１５２）
１％乙醇 － ０１２８±００１６
注：与正常组比１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１
栀子苷组，００２８，００１４μｍｏｌ·ｍＬ－１黄芩苷组，
００４８，００２４，００１２，０００６，０００３μｍｏｌ·ｍＬ－１小檗
碱组的Ａ值显著高于正常组（Ｐ＜００５），提示这些
浓度的药物均能促进脑微血管内皮细胞增殖；
０１２８，００３２，００１６，０００８μｍｏｌ·ｍＬ－１栀子苷组，
００５６，０００７，０００３μｍｏｌ·ｍＬ－１黄芩苷组，００９６
μｍｏｌ·ｍＬ－１小檗碱组，１％乙醇组的 Ａ值与正常组
相比无显著性差异，表明这些浓度的药物对脑微血
管内皮细胞活性没有明显影响；０２２４，０１１２μｍｏｌ
·ｍＬ－１黄芩苷组，０１９２μｍｏｌ·ｍＬ－１小檗碱组的 Ａ
值显著低于正常组（Ｐ＜００５），说明这些浓度的药
物明显抑制脑微血管内皮细胞的活性。
３．３ 对缺氧／复氧时脑微血管内皮细胞活性的影响
表 ３显示：０２５６，０１２８，００６４，００３２μｍｏｌ·
ｍＬ－１栀子苷组，００２８，００１４，０００７μｍｏｌ·ｍＬ－１黄
芩苷组，００４８，００２４，００１２，０００６，０００３μｍｏｌ·
表３ 不同浓度的药物对缺氧／复氧时脑微血管内
皮细胞活性的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝７）
分组 剂量／μｍｏｌ·ｍＬ－１ Ａ
模型 － ０１３２±００１０
栀子苷 １０２４ ０１１５±００１６１）
０５１２ ０１３６±００１４
０２５６ ０１６０±００２１１）
０１２８ ０１６３±００２５２）
００６４ ０１７４±００２２２）
００３２ ０１７２±００３５２）
００１６ ０１３５±００１１
０００８ ０１２４±００１４
黄芩苷 ０２２４ ００８６±００１４２）
０１１２ ０１０５±００２９１）
００５６ ０１４６±０００４
００２８ ０１６４±００２１２）
００１４ ０１５６±００２３１）
０００７ ０１５１±０００７１）
０００３ ０１３９±０００９
小檗碱 ０１９２ ００３８±０００２２）
００９６ ００４８±０００８２）
００４８ ０１５７±００２６１）
００２４ ０１５８±００２１１）
００１２ ０１５８±００２１１）
０００６ ０１６１±００２０１）
０００３ ０１５２±００１５１）
注：与模型组比１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１
ｍＬ－１小檗碱组的Ａ值均高于模型组，均有显著性差
异（Ｐ＜００５），提示这些浓度的药物能够明显保护
缺氧／复氧损伤的脑微血管内皮细胞；０５１２，００１６，
０００８μｍｏｌ·ｍＬ－１栀子苷组，００５６，０００３μｍｏｌ·
ｍＬ－１黄芩苷组的 Ａ值与模型组相比均无显著性差
异，提示这些浓度的药物并不能保护损伤的脑微血
管内皮细胞；１０２４μｍｏｌ·ｍＬ－１栀子苷组，０２２４，
０１１２μｍｏｌ·ｍＬ－１黄芩苷组，０１９２，００９６μｍｏｌ·
ｍＬ－１小檗碱组的Ａ值均低于模型组，均有显著性差
异（Ｐ＜００５），提示这些浓度的药物能进一步加剧
缺氧／复氧时微血管内皮细胞的损伤。因为 ０２５６
μｍｏｌ·ｍＬ－１栀子苷和００４８，０００３μｍｏｌ·ｍＬ－１小
檗碱的保护作用分别略低于各自其他３个保护浓
度，因此作者确定０１２８，００６４，００３２μｍｏｌ·ｍＬ－１
栀子苷，００２８，００１４，０００７μｍｏｌ·ｍＬ－１黄芩苷和
００２４，００１２，０００６μｍｏｌ·ｍＬ－１小檗碱是较为理想
的保护浓度。
４ 讨论
黄连解毒汤源于《外台秘要》，由黄连、黄芩、黄
柏和栀子组成，为清热解毒代表方。小檗碱是黄连
和黄柏的主要有效成分之一。黄芩苷是从黄芩中提
取出来的黄酮类有效成分。栀子苷是栀子化学成分
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中一种重要的环烯醚萜类化合物。实验表明，黄连
解毒汤具有一定的抗小鼠脑缺血缺氧的作用［５］，对
家兔脑缺血缺氧有明显的保护作用［６］。
目前离体实验大多采用动物和人的大血管内皮
细胞作为研究对象，但是内皮细胞具有异质性，不同
种属甚至同一种属不同器官间均存在差别［７］，所以
作者采用脑微血管内皮细胞为研究对象，以尽可能
减少研究结果的差异。研究离体培养脑微血管内皮
细胞，不仅细胞能够保持活体内观察到的许多特征，
而且能消除在体和离体血管中难以控制的神经、体
液影响，有利于研究血管内皮细胞形态、通透性功能
以及药物对内皮细胞在不同层次的调节作用。
本研究结果显示，用Ｋｒｅｂｓ液氧糖剥夺４ｈ再用
无血清ＤＭＥＭ培养基复氧复糖１２ｈ模型模拟缺血
再灌注过程，可以损伤脑微血管内皮细胞，从而成功
的建立缺氧／复氧的细胞损伤模型。在此基础上，作
者用ＭＴＴ法明确观察适当浓度的栀子苷，黄芩苷和
小檗碱对正常培养状态下的微血管内皮细胞的活性
没有显著抑制作用，而且在细胞受到缺氧／复氧损伤
时可以起到良好的保护作用。根据此研究结果，作
者将对黄连解毒汤的有效成分的保护作用作深入研
究，以求为进一步探讨清热解毒方药对脑微血管内
皮细胞的保护机制奠定基础。
［参考文献］
［１］ 青发基．加味黄连解毒汤治疗急性脑梗死４８例临床观察［Ｊ］．
安徽中医临床杂志，２００１，１３（５）：３２９．
［２］ 吴 彦，孙建宁，石任兵．黄连解毒汤有效部位对一氧化氮诱
导大鼠皮层神经元损伤的保护作用［Ｊ］．中国药科大学学报，
２００５，３６（１）：５９．
［３］ ＦｒａｎｋｅＨ，ＧａｌａＨ，ＢｅｕｃｋｍａｎｎＣＴ．Ｐｒｉｍａｒｙｃｕｌｔｕｒｅｓｏｆｂｒａｉｎ
ｍｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ：ａｖａｌｉｄａｎｄｆｌｅｘｉｂｌｅｍｏｄｅｌｔｏｓｔｕｄｙ
ｄｒｕｇｔｒａｎｓｐｏｒｔｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｂｌｏｏｄｂｒａｉｎｂａｒｉｅｒｉｎｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｂｒａｉｎ
ＲｅｓＢｒａｉｎＲｅｓＰｒｏｔｏｃ，２０００，５（３）：２４８．
［４］ ＺｈａｎｇＷＤ，ＳｍｉｔｈＣａｔｈｅｒｉｎｅ，ＳｈａｐｉｒｏＡｎｔｈｏｎｙ，ｅｔａｌ．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｂｉｏａｃｔｉｖｅｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓｉｎｈｕｍａｎｃｅｒｅｂｒｏｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ
ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓａｎｄａｓｔｒｏｃｙｔｅｓｓｕｂｊｅｃｔｅｄｔｏｓｉｍｕｌａｔｅｄｉｓｃｈｅｍｉａｉｎ
ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．ＪＮｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９９，１０１（２）：１４８．
［５］ 徐静华，于庆海，蔡 爽，等．黄连解毒汤对小鼠急性脑缺血、
缺氧的影响［Ｊ］．沈阳药科大学学报，２００３，２０（２）：１３２．
［６］ 付晓春，王敏伟，彭 亮．黄连解毒胶囊防治脑缺血的药效学
［Ｊ］．沈阳药科大学学报，２００３，２０（１）：４１．
［７］ 娄晋宁．微血管内皮细胞的培养及其在医学研究中的应用
［Ｊ］．微循环学杂志，２００４，１４（３）：５．
ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅａｃｔｉｏｎｏｆｅｆｅｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆＨｕａｎｇｌｉａｎＪｉｅｄｕｄｅｃｏｃｔｉｏｎｏｎ
ｈｙｐｏｘｉａａｎｄｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎｉｎｊｕｒｙｉｎｃｕｌｔｕｒｅｄｒａｔｃｅｒｅｂｒａｌ
ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ
ＹＵＡＮＺｈｅｎｇｚｈｏｎｇ１，ＺＨＵＬｉｎｇｑｕｎ２，ＰＡＮＧＨｅ２，ＳＨＡＮＺｅｓｏｎｇ１，ＷＡＮＧＳｈｕｏｒｅｎ２，ＧＡＯＹｏｎｇｈｏｎｇ２，ＮＩＵＦｕｌｉｎｇ２
（１．ＦｉｒｓｔＡｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＷｅｎｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｅｇｅ，Ｗｅｎｚｈｏｕ３２５０００，Ｃｈｉｎａ；
２．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＩｎｔｅｒｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅｏｆＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，ＤｏｎｇｚｈｉｍｅｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，
ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｅｃｔｏｆｇｅｎｉｐｏｓｉｄｅ，ｂａｉｃａｌｉｎａｎｄｂｅｒｂｅｒｉｎｅｆｏｒｔｈｅｒａｔｃｅｒｅｂｒａｌｍｉｃｒｏｖａｓｃｕ
ｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅｍｏｄｅｌｏｆｈｙｐｏｘｉａａｎｄｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎｉｎｊｕｒｙｉｎｒａｔｃｅｒｅｂｒａｌｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓｉｎｖｉｔｒｏｗａｓ
ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｂｏｔｈｎｏｒｍａｌａｎｄｍｏｄｅｌｃｅｌｓｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｇｅｎｉｐｏｓｉｄｅ（１０２４，０５１２，０２５６，０１２８，００６４，００３２，００１６，０００８
μｍｏｌ·ｍＬ－１），ｂａｉｃａｌｉｎ（０２２４，０１１２，００５６，００２８，００１４，０００７，０００３μｍｏｌ·ｍＬ－１）ａｎｄｂｅｒｂｅｒｉｎｅ（０１９２，００９６，
００４８，００２４，００１２，０００６，０００３μｍｏｌ·ｍＬ－１）．Ｃｅｌａｃｔｉｖｉｔｙｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄｂｙｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ（ＭＴＴ）ｔｅｓｔ．Ｒｅ
ｓｕｌｔ：Ａｆｔｅｒｈｙｐｏｘｉａ／ｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉａｃｕｌｔｕｒｅｓｆｏｒ４ｈｏｕｒａｎｄｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎｆｏｒ１２ｈｏｕｒ，ｇｅｎｉｐｏｓｉｄｅ（０１２８，００６４，００３２μｍｏｌ·
ｍＬ－１），ｂａｉｃａｌｉｎ（００２８，００１４，０００７μｍｏｌ·ｍＬ－１）ａｎｄｂｅｒｂｅｒｉｎｅ（００２４，００１２，０００６μｍｏｌ·ｍＬ－１）ｃｏｕｌｄｐｒｏｔｅｃｔｔｈｅｉｎｊｕ
ｒｉｅｄｃｅｒｅｂｒａｌｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｇｅｎｉｐｏｓｉｄｅ，ｂａｉｃａｌｉｎａｎｄｂｅｒｂｅｒｉｎｅ，ｗｈｉｃｈａｒｅ
ｅｆｅｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆＨｕａｎｇｌｉａｎＪｉｅｄｕｄｅｃｏｃｔｉｏｎ，ｃｏｕｌｄｐｒｏｔｅｃｔｔｈｅｉｎｊｕｒｉｅｄｃｅｒｅｂｒａｌｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＨｕａｎｇｌｉａｎＪｉｅｄｕｄｅｃｏｃｔｉｏｎ；ｃｅｒｅｂｒａｌｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌ；ｈｙｐｏｘｉａ／ｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎ；ｇｅｎｉｐｏｓｉｄｅ；ｂａｉｃａ
ｌｉｎ；ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ
［责任编辑 古云侠］
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第３２卷第３期
２００７年２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ ３
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００７