全 文 ：中革焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第11期2007年11月·1681·
增加和作用时间的延长，细胞凋亡比例逐渐增加，同
时还可使各期细胞的比例下降，最终诱发各期细胞
发生凋亡，结果完全与显微镜下观察、凋亡小体及
DNA梯形条带的形成相一致。
综上所述。本实验在肯定吉九里香碱能抑制
K562细胞增殖的同时，用多种方法证实吉九里香
碱作用后的K552细胞有典型的凋亡发生，说明吉
九里香碱通过诱导K562细胞凋亡来发挥其抑制
K562细胞增殖的作用，这一研究结果为进一步研
究吉九里香碱抑制其他肿瘤细胞的增殖提供了一定
的实验依据。
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黄连解毒汤对尼莫地平在大鼠脑内处置动力学的影响
张冬梅“2，何振伟2，李
(1．中国药科大学药物代谢重点实验室，扛苏南京210009}
杨1，列晓东”
2．南通市第一人民医院药剂科，江苏南通226001)
摘要：目的在整体和离体水平上研究黄连解毒汤对尼莫地平脑处置动力学的影响。方法测定大鼠单独给予
尼奠地平以及尼莫地平与黄连解毒汤台用的血浆、脑组织中的尼莫地平经时过程．并在离体水平上采用原代培养
的大鼠脑微血管内皮细胞(rBMEC)模型考察ig黄连解毒汤后的大鼠血靖、黄连解毒汤中的指标成分黄芩昔和小
檗碱对尼莫地平在血脑屏障上转运的影响。结果整体宴验中，合用黄连解毒汤组，尼莫地平在血浆和脑组织中的
c一和AUC均显著高于单独给予尼莫地平组I离体实验中，ig黄连解毒汤后的大鼠血清、黄芩苷(5pgtmL)、小檗
藏(>10ng／mL)促进rBMEC对尼莫地平的摄取，小檗碱(10ng／mL)对尼莫地平的摄取最有影响。结论在舍
用黄连解毒汤时，尼莫地平在大鼠血浆和脑组织中的药动学行为均发生改变，合用组尼莫地平在大鼠脑组织中分
布增加，可能部分源于黄连解毒汤中黄芩苷的作用。
美键词：黄连解毒汤；尼莫地平}藏芩苷{脑微血管内皮细胞(rBMEC)
中田分类号：R286．62 文献标识码：A 文章编号：0258—2670(2007)11—1681—04
DynamiceffectofHuanglianJ eduTangonNimodipinedispositioninratbrain
ZHANGDong—meil”，HEZhen—wei2，LIYan91，L1UXiao—don91
(1。KeyLaboratoryotD ugMembolism，ChinaPharmaceuticalUniversity，Nanjing210009，China}
2．DepartmentofPharmacy，FirstPeople’sHo pitalofNantong，Nantong226001’China)
Abstract：ObjectiveToevaluatethdynamiceffectofHuanglianJ eduTang(HLJDT)on
Nimodipinedispositionnratbrain．MetbodsInvivo．Nimodipineinplasmaandbraintissuewas
measuredinratstreatedwithNimodipinealoorNimodipineco—administeredwithHLJDT．Invitro，
primaryculturedbrainmicrovesselndotheEalcel s(rBMEC)modelwasusedtostudytheffectofserum
obtainedfromHLJDT—treatedrats，baiealinandberberineonthetransportofNimodipineacrossblood-
brainbarrier．ResultsInviVO，C二。andAUCofNimodipineweremuchhigherthanthoseinNimodipine
alonegroupwhenconcomitantlyigadminsteredHLJDTandtheconcentrationofN modipineinhraine
收糟日期．2007—03-05
基金项目：国家。863”资助项目(2003AA22347A)l国家中医药管理局赘助项目(02--032P32)
作者简介：张年梅(1982--)，女，江苏南通人，药师，硕士，研究方向为中西药相互作用。
Tel：(0513)8512904iE—mailIshanshumm@tom．coY／l
*通讯作者刘晓东TelI(025)83271006E—mail；xdliu@cpu．edu．Cll
万方数据
·1682· 中革喃ChiⅡ雕Tradit岫nalandHerbalD1ugs第38卷第1I撕2007年11月
tissuealsoincreasedinHLJDT—treatedrata．／nvitro，theserumofHLJDT-treatedatsincreasdthe
uptakeofNimodipineinrBMEC．SOdidbaicalin(5／19／mL)andberberine(>10g／mL)．Butberberine
(10ng／mL)showedn effectontheuptakeofNimodipine．ConclusionThexperimentalfindings
indicatethatHLJDTpretreatmentmighal erthepharmacokinetiebehav orofNimodipinebothinplasma
andbraintissue．Thechangeofpharmacokinetiebehav orofNimodipineinbraintissuemightpartlyresult
fromtheffectofbaiealininHLJDT．
Keywords：HuanglianJieduTang(HLJDT)#Nimodipine；baiealin)brainmicrovesselndothelial
cells“BMEC)
尼奠地平(Nimodipine)是钙通道阻断药中对
脑血管作用最强的药物，目前主要用于蛛网膜下腔
出血、缺血性脑血管病以及老年痴呆等中枢性疾病。
黄连解毒汤为经典清热解毒方剂。始载于《外台秘
要》崔氏方，全方由黄连、黄芩、黄柏，栀子组成。药理
学研究证实，本方作用广泛，具良好的抗菌消炎等功
效。近年，该方其他方面的药理作用，尤其是中枢系
统的作用，受到广泛关注。研究表明，黄连解毒汤对
小鼠短暂脑缺血所致认知和记忆障碍。对脑缺血所
致的神经元死亡及其他脑损伤有保护作用，该方已
被用于一些与脑卒中有关的临床症状并显示出良好
的治疗效果o“]。
考虑到尼莫地平和黄连解毒汤对于缺血性脑血
管病均具有良好治疗效果，二者有可能被联合使用。
近年来，关于化学药和中草药在联合使用时，发生相
互作用，导致治疗失败或是不良反应增加的报道不
断增多“]。因此，有必要研究黄连解毒汤和尼莫地乎
联合使用时是否会发生相互作用，从而给临床合理
用药提供理论指导。本研究侧重于二者在药动学环
节的相互作用。测定大鼠单独给予尼莫地平以及尼
莫地平与黄连解毒汤合用后的血浆、脑组织中的尼
莫地平经时过程，并在离体水平采用原代培养的大
鼠脑微血管内皮细胞(rBMEC)模型考察ig黄连解
毒汤后的大鼠血清、黄连解毒汤中的指标成分黄芩苷
和小檗碱对尼莫地平在血脑屏障上转运的影响。
l材料与方法
1．1药品与试剂：黄连、黄芩、黄柏、栀子购自南京
药业股份有限公司药材公司，经中国药科大学生药
学院陈立娜博士鉴定，黄连为毛茛科植物黄连
CoptwchinensisFraneh．的干燥根茎f黄芩为唇形
科植物黄芩Scutellariab icalensisGeorgi的干燥
根；黄柏为芸香科植物黄檗Phellodendron
amurenseRupr．除去栓皮的干燥树皮；栀子为茜草
科植物栀子GardeniajasminoidesElli 的干燥成熟
果实。尼莫地平(批号040801)和非洛地平(批号
040301)购自山东新华制药厂，黄芩苷和小檗碱对
照品购自中国药品生物制品检定所。甲醇为色谱纯，
其他试剂为市售分析纯。
1．2黄连解毒汤提取物粉末的制备：黄连、黄芩、黄
柏、栀子按古方比例(3·2。2，3)组方，加10倍量
水浸泡1h，加热煮沸，文火煎煮1h，趁热滤过；再
按同法煎煮两次，合并3次滤液，真空干燥得粉末
(提取物含生药3．75g／g)。经检测，提取物含黄芩
苷和汉黄芩苷分别为442、108mg／g。含小檗碱为
560mg／g。
1．3实验动物：清洁级SD大鼠60只，雄性，体重
(230士20)g，上海西普尔一必凯实验动物中心提供，
合格证号：SCXK(沪)Z003--0002。SD大鼠乳鼠
(7～10d)由中国药科大学实验动物中心提供。
1．4整体水平上药动学研究：60只太鼠随机分成
两组，禁食不禁水12h后，实验组在ig黄连解毒汤
(4．38g／kg)8h后iv尼奠地平(2mg／kg)，对照组
在ig溶媒0．5％CMC—Na8h后iv尼莫地平(2
mg／kg)。在给予尼莫地平5、10、20、40、60、90rain
后于乙醚麻醉状态下股动脉放血于肝素化处理的采
血管中，处死大鼠，立即断头，取出大脑皮层组织。每
个时间点5只大鼠。血浆样品和脑组织样品均置
一20℃冰箱保存待分析。
1．5 rBMEC的分离与培养：根据本实验室建立的
rBMEC分离与培养模型[53进行本部分研究。于超净
台内，将7～】od的SD大鼠乳鼠脑组织取出，去除
蛋白质，保留灰质，通过酶消化和离心的方法获得
rBMEC。
1．6 rBMEC对尼莫地平的摄取实验：将rBMEC
接种于24孔塑料培养板中，待细胞长至相互融合
成单层膜时，可进行摄取实验。将成膜细胞用37℃
空白Hanks’液(O．137mol／LNaCl、5．37mmol／L
KCI、1．26mmol／LCaClz、0．81mmol／LMgSO．·
7HzO、0．37mmol／LNazHPO‘·H20、O．44mmol／
LKH2PO‘、4．17mmol／LNaHC03、2．92mmol／L
n葡萄糖)浸泡30min后，吸去Hanks’液，以除去
细胞表面杂质。每孔中加入含尼奠地平(10rag／L)
万方数据
中革嚆Chln啾TraditionalandHerlmlDrugs第38卷第11期2007年11月
的Hanks’液或尼莫地平(10mg／L)和黄芩苷(2、
5pg／mL)、小檗碱(10、100、1000ng／mL)的
Hanks’液1mL，37℃孵育90rain(本实验室已
有的研究表明，尼奠地平的摄取在90rain达到稳
态o]，故选择90rain为摄取实验的终止时间)。吸去
药液。用4℃空白Hanks’液反复清洗细胞3遍。
每孔加入0．3mL4℃超纯水反复冻融3遍以破碎
细胞。取出0．15mL细胞碎片混悬液用以测定细胞
中尼莫地平质量浓度，取0．03mL细胞碎片混悬液
以考马斯亮蓝法测定细胞蛋白量，摄取量以单位蛋
白内的尼莫地乎质量浓度表示，以单用尼莫地平处
理细胞的摄取量为100％，计算相对摄取量。
大鼠ig黄连解毒汤(4．38g／kg)8h后取血
清，以3倍量的丙酮沉淀蛋白后，挥干丙酮，以和血
清等体积的Hanks’液复溶，加入尼莫地平，使其质
量浓度为10mg／L，同上进行摄取实验。大鼠fg溶
媒0．5％CMC--Na8h后的血清，同法操作，设为
对照组。
1．7 尼莫地平的测定方法：根据文献采用HPLC
法。叮测定血浆样品、脑组织样品氇B胞样品中的尼莫
地平质量浓度。色谱条件：色谱柱为VP—ODS柱
(4．6mm×150mill，5pm，Shimadzu)；流动相为甲
醇一水(70t 30)；检测波长为254nm。
0 30 60 90
血浆样品和脑组织样品处理：血浆或脑组织匀
浆1mL。加入2mol／LNaOH0．2mL碱化，加入
内标非洛地平(10ttg／mL)，振荡混匀，加入乙醚一环
已烷(1}1)5mL，涡旋3rain，3500r／min离心5
rain，取上层3mL于干净玻璃管中，56℃水浴中
N2挥干，以流动相0．12mL复溶，15000r／rain离
心10min，取上层20止进样分析。
细胞样品处理：0．15mL细胞悬液加入0．15
mL甲醇，涡旋10rain，两次离心(15000r／rain，10
min)，取上层20“L进样分析。
1．8统计处理：数据以z±s表示，组闻数据以t检
验进行统计。药动学参数以BAPP软件(中国药科
大学杨劲提供)计算。
2结果与讨论
2．1单独iv给药及ig黄连解毒汤(4．38g／kg)8
h后iv给药尼莫地平的体内血药浓度、脑组织中药
物浓度经时过程：本实验室在早期的工作中，研究了
尼莫地平在大鼠rBMEC上的转运特性01及黄连解
毒汤在大鼠体内的药动学口。]。本课题的研究是前二
者的延续，因此本实验中所用的尼莫地平与黄连解
毒汤的给药质量浓度以及选择8h的给药时间间
隔，均是参考本实验室已有的研究成果。
由图1可看出，实验组在10、20、60min的血药
与对照组比较c‘P
图1黄莲解毒汤对尼莫地平血药浓度(-)，脑组织中水平(b)妊时过程的影响(；士，，^一5)
Fig．1EffectofHLJDTonNlmodlplneconc ntrationinplasma(a)orlevelinb aintissue(b)G+s，4=5)
浓度，在5、10、20、60rain脑组织中药物质量浓度显2．2大鼠ig黄连解毒汤后的血清对rBMEC摄取
著高于对照组。与对照组相比，实验组血浆AUC。 尼莫地乎的影响：由于中药的组成成分复杂，每一成
脑组织AuC，。均显著增加。对照组脑组织AUC，。的分在体内的过程不尽相同等原因，中药在体内的有
比值为0．93，而实验组比值为0．98，有轻微增加趋效成分往往异于生药材中的成分，所以很多以药材
势。两组药动学参数见表1。实验结果显示台用黄连 提取物进行的体外实验结果与体内实验结果不一
解毒汤后，尼莫地平向脑组织的分布增加，为此进一 致，为此本研究采用血清药理学的方法，以含药血清
步在离体水平上考察了黄连解毒汤是否确能增加尼 代替药材提取物，以尽可能模拟体内情形。
奠地平向脑内的转运。 大鼠ig黄连解毒汤(4．38g／kg)8h后的血清
^，砷旨一＼}*}簧球哩}爵寡担恤
唧
啪
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枷
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。
一，．1Ⅲ．呈＼斟鞋蛳峰}却F『辞哩岳鼎目
万方数据
·1684· 中革露ChineseTraditionalandHerbalnm弘第鲳卷第11期2007年11．El
对rBMEC摄取尼莫地平的影响结果见图z，对照组
中尼莫地平的绝对摄取量为(5．81士0．09)ng／pg，
而合用黄连解毒汤组尼莫地平的摄取量显著提高
(P
验的结果相一致。
寰1 黄连解毒汤对尼奠地平主要药动学参敲的影响(Ⅳ一5)
Table1 EffectofHLJDToBpharmacoldnetic
parametersofNtmodJIpine(^=5)
参数 单位 对用组 实验组
■浆AUC。0 ng·mL叫·mm17232 23678
■组织AUC。。 ng·g一1·rain1615522260
脑组织AUC’。／血浆AUc”mL·g一1 m93 0·98
^策11／2 mie 15．91 19．19
囊组织l恤 rain 14．04 16．92
血浆co ≈·mL一1 596．44 828．93
脯组织c岫t ng·g一1 68644 876．03
3加
芒250
■200
鬃150
智100
罂50
0
对照组 黄连解毒汤组
与对照组比较t一尸<01
一，
摄取尼羹地平的髟晌G：i：s，^一5)
Fig．2Eff∞tofⅧⅢ0fratstreatedwith峰4．38g／h
HLJDTonuptakingNJmodlplnebyrBMEC
(-士，，_=5)
为了进一步考察血清中的哪种或者哪几种成分
促进了尼奠地平的摄取，本研究考察了不同质量浓
度的黄芩苷、小檗碱对尼奠地平摄取的影响。之所以
选择这两个成分，是因为黄芩苷、小檗碱分别是黄连
解毒汤中药材黄芩、黄连的指标成分，而且很多研究
证实，二者亦是方中的有效成分。
2．3 黄芩苷和小檗碱对rBMEC摄取尼莫地平的影
响：合用黄芩苷2、5Pg／mL时，尼莫地平的摄取量分
别为单用时摄取量E(5．69+1．53)ng／pg]的123％
和197％；合用小檗碱10、100、10ng／mL时，尼
莫地平的摄取量分别为单用时摄取量[(5．72±
m64)ng／pg]的109％、151％、202％。结果见图3。
提示黄芩苷(2，5pg／mL)、小集碱(>10ng／mL)
对尼莫地平的摄取有促进作用，而小檗碱10ng／
mL对尼莫地平的摄取无显著影响。本实验室以前
的研究表明，ig黄连解毒汤(4．38g／kg)后，黄芩苷
芒
■
辟
囊
智
罂
o‘对照) 2 5
黄苓苷P“ug·mL一1)
0 10 100 l000
小蘩碱PⅨnB·ⅢL。1)
与对照组比较l’P<机05¨F<0．01
‘P<0．05‘。P<0．Ol甜controlgr up
田3黄苓苷“)爰小窠碱(b)对rBMEC摄取
尼奠地平的影响。士$，^=5)
Fig．3EffectofImlealln“)andberberlne(h)Oil
uptakingNimodipinebyrBMECo士』·^=S)
在体内的c一为5pg／mL口1，小檗碱的c一为6ng／
mLc”(<10ng／mL)，所以可推测黄连解毒汤在整
体实验中表现出的促进尼莫地平向脑组织分布的作
用可能部分源于黄芩苷的作用。
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黄连解毒汤对尼莫地平在大鼠脑内处置动力学的影响
作者： 张冬梅， 何振伟， 李杨， 刘晓东， ZHANG Dong-mei， HE Zhen-wei， LI Yang， LIU
Xiao-dong
作者单位： 张冬梅,ZHANG Dong-mei(中国药科大学,药物代谢重点实验室,江苏,南京,210009;南通市第
一人民医院,药剂科,江苏,南通,226001)， 何振伟,HE Zhen-wei(南通市第一人民医院,药剂
科,江苏,南通,226001)， 李杨,刘晓东,LI Yang,LIU Xiao-dong(中国药科大学,药物代谢重
点实验室,江苏,南京,210009)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(11)
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200711031.aspx