全 文 ：Ｇ１３）ｆｒｏｍＦｒｕｃｔｕｓＬｉｇｕｓｔｒｉＬｕｃｉｄｉ．ａｎｄｄｅｔｅｒｍｉｎａｅｎｕｅｚｈｅｎｏｓｉｄｅａｎｄＧ１３ｉｎｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍｄｉｆｅｒｅｎｔａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎｔｉｍｅｓａｎｄｄｉｆｅｒｅｎｔ
ｐｌａｃｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅｓａｍｐｌｅｗａｓｓｅｐａｒａｔｅｄｏｎａＹＭＧＣ１８（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，１０μｍ）ｃｏｌｕｍｎ．Ｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｗａｓａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ
ｗａｔｅｒ，ｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎ（ＣＨ３ＣＮ：０ｍｉｎ，２０％；１５ｍｉｎ，２５％）ｗｉｔｈｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｏｆ１ｍＬ·ｍｉｎ
－１，ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ２４０
ｎｍ，ａｎｄｔｈｅｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓｓｅｔａｔ２５℃．Ｒｅｓｕｌｔ：ＩｎＨＰＬＣａｎａｌｙｓｉｓ，ｔｈｅｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅｓｏｆｎｕｅｚｈｅｎｏｓｉｄｅａｎｄＧ１３ｗｅｒｅ０３４１
３４１μｇａｎｄ０３３１３３１μｇ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；ｔｈｅｉｒａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓｗｅｒｅ９７５％ （ＲＳＤ１３５％）ａｎｄ９８１％ （ＲＳＤ１８２％），ｒｅ
ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｃｏｎｔｅｎｔｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ（ｎｕｅｚｈｅｎｏｓｉｄｅａｎｄＧ１３）ｏｆｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍｄｉｆｅｒｅｎｔｐｌａｃｅｓｖａｒｉｅｄｇｒｅａｔｌｙ．Ｔｈｉｓｍａｙｂｅ
ｃａｕｓｅｄｂｙｄｉｆｅｒｅｎｔｓｐｅｃｉｅｓｓｏｕｒｃｅｓａｎｄｄｉｆｅｒｅｎｔｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ，ｅｔｃ．Ｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｌｅｄｕｐｔｏｔｈｅｆａｃｔｔｈａｔｆｒｏｍｔｈｅｂｅｇｉｎｎｉｎｇｔｏ
ｔｈｅｍｉｄｄｌｅｏｆＮｏｖｅｍｂｅｒｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｎｕｅｚｈｅｎｏｓｉｄｅａｎｄＧ１３ｒｅａｃｈｅｄｔｈｅｍａｘｉｍｕｍ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｍｅｔｈｏｄｃａｎｂｅｕｓｅｄ
ｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｗｏｍａｊｏｒｓｅｃｏｉｒｉｄｏｉｄｇｌｕｃｏｓｉｄｅｓ（ｎｕｅｚｈｅｎｏｓｉｄｅａｎｄＧ１３）ｉｎＦｒｕｃｔｕｓＬｉｇｕｓｔｒｉＬｕｃｉｄｉｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅｉｔｃａｎｂｅ
ｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＦｒｕｃｔｕｓＬｉｇｕｓｔｒｉＬｕｃｉｄｉ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＦｒｕｃｔｕｓＬｉｇｕｓｔｒｉＬｕｃｉｄｉ；ｓｅｃｏｉｒｉｄｏｉｄｇｌｕｃｏｓｉｄｅｓ；ｎｕｅｚｈｅｎｏｓｉｄｅ；Ｇ１３；ＨＰＬＣ
［责任编辑 王亚君］
［收稿日期］ ２００７１２１８
［基金项目］ 青海省重点科技攻关（２００７Ｎ１３６）
［通讯作者］ 邵
，Ｔｅｌ：（０９７１）６１１７２６４，Ｅｍａｉｌ：ｓｈａｏｙｕｎ１１＠
１２６．ｃｏｍ
ＲＰＨＰＬＣ测定几种花类药材黄酮含量
牛迎凤１，２，邵
１，赵晓辉１，文怀秀１，陶燕铎１
（１．中国科学院 西北高原生物研究所，青海 西宁 ８１０００１；
２．中国科学院 研究生院，北京 １０００４９）
［摘要］ 目的：为充分利用花类药材，建立马蔺花、桃花、月季等１５种花类药材中黄酮含量测定的 ＲＰＨＰＬＣ
方法，并比较它们的含量。方法：花类药材用甲醇提取，反相高效液相色谱法分析药材中槲皮素、山柰酚、异鼠李素
３种黄酮苷元。结果：采用ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），以甲醇０１％ 磷酸（５０∶５０）为流动相，可使３
种黄酮苷元达到基线分离，其中马蔺花含槲皮素１５３６％，桃花含山柰酚０５７２％，茶花含异鼠李素００２９％，皆为
听测样品中最高。结论：本实验首次采用ＲＰＨＰＬＣ法测定这１５种花类药材的总黄酮含量，本方法操作简便，快速，
准确，可作为黄酮的定量分析方法。
［关键词］ ＲＰＨＰＬＣ；槲皮素；山柰酚；异鼠李素；含量测定
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１８２１０２０３
黄酮类化合物类型多样，分布广泛，最集中分布
于被子植物中。研究表明，黄酮类化合物具有抗癌、
抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血
糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗
辐射等作用［１２］。近年来，世界上掀起了植物药开发
的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄
酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目。目前我
国黄酮类保健食品的功效成分测定是比色法测总黄
酮，测定的是一大类混合物的总量，但这不一定是有
效成分的含量，为了使黄酮类物质的有效成分与功
效对应起来，测定黄酮类物质的功效成分单体是势
之所趋［３］。本实验定了１５种花类药材中３种苷元
的含量，桃花、菊花、雪梨花、月季、马蔺花、绿绒蒿中
均含有较为丰富的黄酮类化合物，具有广泛的开发
和利用价值。
１ 材料
Ｗａｔｅｒｓ５１５高效液相色谱输液泵；Ｗａｔｅｒｓ２９９６
ＤＡＤ检测器；ＷａｔｅｒｓＥｍｐｏｗｅｒ色谱工作站；Ｗａｔｅｒｓ
色谱柱恒温箱；ＤＺＫＷ－Ｃ型电子恒温水浴锅（北京
化玻联医疗器械公司）；超声振荡仪。
葛花、千日红、桃花、凤尾花、杭白菊、菊花、雪梨
花、月季、鸡冠花、槐花、雪莲花、马蔺花、绿绒蒿、细
果角茴香、镰形棘豆由中国科学院西北高原生物研
·２０１２·
第３３卷第１８期
２００８年９月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １８
Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００８
究所梅丽娟高级工程师鉴定。
氯仿、甲醇、磷酸均为分析纯，２５％盐酸溶液，色
谱甲醇。槲皮素、山柰酚、异鼠李素均购自中国药品
生物制品检定所。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×２５０
ｍｍ，５μｍ），以甲醇０１％磷酸（５０∶５０）为流动相，
流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，柱温３０℃，检测波长３６０ｎｍ，
采集时间２０ｍｉｎ。对照品色谱图见图１。
１．槲皮素；２．山柰酚；３．异鼠李素
图１ 标准品ＲＰＨＰＬＣ图
２．２ 对照品溶液的制备 分别精密称取经五氧化
二磷干燥过夜的槲皮素、山柰酚、异鼠李素对照品适
量，加甲醇制成０１６，０２２，０１２ｇ·Ｌ－１的溶液，摇
匀，０４５μｍ的微孔滤膜过滤后作为对照品溶液。
２．３ 供试品溶液的制备［４］ １５种花类药材粉末各
取约０５ｇ，精密称定，置索式提取器中；加氯仿７０
℃回流提取２ｈ，弃去氯仿，药渣挥干；加甲醇９０℃
回流提取４ｈ，提取液蒸干；残渣加甲醇２５％盐酸溶
液（４∶１）混合液２５ｍＬ，９０℃回流３０ｍｉｎ，冷却；转
移至５０ｍＬ量瓶中，用甲醇定容，摇匀，即得。
２．４ 标准曲线及线性范围 分别精密吸取对照品
溶液２，４，６，８，１０μＬ，在上述色谱条件依次进样，以
进样量（Ｘ）为横坐标，峰面积（Ｙ）为纵坐标绘制标
准曲线，回归方程见表１。
表１ ３种黄酮标准曲线
化合物 线性范围／μｇ 标准曲线 ｒ
槲皮素 ０１０８～０５４０Ｙ＝２６１×１０７Ｘ－２４１×１０５ ０９９９９
山柰酚 ０１４８～０７４０Ｙ＝１８８×１０７Ｘ＋６３×１０５ ０９９９８
异鼠李素 ００８０～０４００Ｙ＝３５５×１０７Ｘ－１７５×１０５ ０９９９８
由于一些样品中，３种黄酮苷元的含量不在线
性范围内，所以将对照品溶液稀释２０倍，分别吸取
稀释后对照品溶液２，４，６，８，１０μＬ进样，测得峰面
积，以进样量（Ｘ）为横坐标，峰面积（Ｙ）为纵坐标绘
制标准曲线，回归方程见表２。
２．５ 精密度试验 精确吸取对照品溶液１０μＬ，按
２．１项下色谱条件测定５次，结果槲皮素，山柰酚和
表２ ３种黄酮标准曲线（稀释后）
化合物 线性范围／μｇ 标准曲线 ｒ
槲皮素 ０００５～００２１ Ｙ＝２１１×１０７Ｘ－１７４×１０３ ０９９９９
山柰酚 ０００７～００３０ Ｙ＝１９１×１０７Ｘ＋３１４×１０３ ０９９９８
异鼠李素 ０００４～００１６ Ｙ＝３０５×１０７Ｘ＋８１７×１０３ ０９９９９
异鼠李素峰面积的 ＲＳＤ分别为 １０％，０８１％和
０９６％，表明仪器精密度良好。
２．６ 稳定性试验 精密称取镰形棘豆粉末０５ｇ，
按２．３项下方法制备供试品溶液，分别在０，２，４，６，
８ｈ后在上述色谱条件下进样１０μＬ，结果槲皮素，
山柰酚和异鼠李素峰面积的 ＲＳＤ分别为 １３％，
１２％和１７％，表明样品溶液在８ｈ内稳定。
２．７ 重复性试验 精密称取镰形棘豆粉末０５ｇ，
按上述供试品溶液的制备方法和测定条件，重复测
定５份，结果槲皮素，山柰酚和异鼠李素峰面积的
ＲＳＤ分别为 １３％，１２％和 １４％，表明重复性良
好。
２．８ 加样回收率试验 称取已知槲皮素，山柰酚和
异鼠李素含量的镰形棘豆粉末５份，每份约０５ｇ，
加入对照品储备液１０ｍＬ，制备样品溶液。精密吸
取１０μＬ进样分析，计算平均回收率，结果见表３。
表３ 槲皮素、山柰酚、异鼠李素加样回收率
化合物
样品中量
／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
槲皮素 ０２０４ ０１６０ ０３６０ ９７５ ９８８ １３
０２０６ ０１６０ ０３６２ ９７５
０２０１ ０１６０ ０３５９ ９８８
０２１２ ０１６０ ０３７１ ９９４
０２０６ ０１６０ ０３６７ １００６
山柰酚 ０２２１ ０２２０ ０４３７ ９８２ ９８５ ０７５
０２１２ ０２２０ ０４３０ ９９１
０２１３ ０２２０ ０４３２ ９９５
０２１３ ０２２０ ０４２９ ９８２
０２１７ ０２２０ ０４３２ ９７７
异鼠李素 ０１２８ ０１２０ ０２４８ １０００ ９８７ ０９７
０１３０ ０１２０ ０２４８ ９８３
０１３３ ０１２０ ０２５２ ９９２
０１２１ ０１２０ ０２３８ ９７５
０１２６ ０１２０ ０２４４ ９８３
２．９ 样品含量测定 取供试品溶液，过 ０４５μｍ
的微孔滤膜，分别进样１０μＬ，测定（ｎ＝３），取３次
测定的平均值，结果见表４。
３ 讨论
本实验做了冷浸提取，热回流和索氏提取３种
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第３３卷第１８期
２００８年９月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １８
Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００８
表４ １５种花类药材中黄酮含量（ｎ＝３） ％
药材 槲皮素 山柰酚 异鼠李素
葛花 ００８２ ０００７ ０００１
千日红 ０００９ ００２０ ０００４
桃花 ０１６５ ０５７２ ０００１
凤尾花 ００００ ００００ ００２０
杭白菊 ０００８ ００１２ ０００１
菊花 ０００６ ０００６ ０２９０
雪梨花 ０００８ ０１５８ ００００
月季 ０３７７ ０００５ ００９５
鸡冠花 ０００６ ００１９ ０００１
槐花 ０００４ ０００７ ０００２
雪莲花 ００１８ ００００ ００１０
马蔺花 １５３６ ０１３０ ０００８
绿绒蒿 ０３６４ ００１４ ０００６
细果角茴香 ０１０２ ００２４ ０００３
镰形棘豆 ００４２ ００４４ ００２６
提取方法的比较及６５％乙醇，甲醇不同溶剂对黄酮
甙元分离的影响，结果发现索氏提取并以甲醇为溶
媒，提取效率最高。
从表４中可以看出，桃花、菊花、雪梨花、月季、
马蔺花、绿绒蒿、细果角茴香、镰形棘豆的黄酮含量
都较高，其中马蔺花中的槲皮素含量明显高于其他
几种花，桃花中的山柰酚含量远远高于其他，菊花中
的异鼠李素含量也高于其他花。所以这几种花类药
材可用于提取黄酮制品。本实验选用的１５种花类
药材中，许多都用于藏药，如：十二味翼首散中用到
镰形棘豆，治疗流行性感冒［４］；二十五味绿绒蒿丸
中用到绿绒蒿，可解毒，清肝热；二十九味羌活散中
用到角茴香、镰形棘豆，清热消炎，镇痛杀疠［５］。通
过对这１５种花类药材总黄酮含量的测定及比较，可
以更好的开发和利用它们。
［参考文献］
［１］ 谭 萍，赵云婵．黔产酢浆草总黄酮含量的测定及提取方法研
究［Ｊ］．山西医药杂志，２００６，３５（５）：４６２．
［２］ 俞一心，戈升荣，王桂珍．槲皮素及其衍生物的药理作用研究
进展［Ｊ］．中药材，２００３，２６（１２）：９０２．
［３］ 王春娥，潘振球，冯家力，等．ＨＰＬＣ法测定保健食品中二氢杨
梅素的研究［Ｊ］．中国卫生检验杂志，２００６，１６（６）：６９４．
［４］ 才让吉．藏药十二味翼首散合四味藏木香汤治疗流行性感冒
１０８例［Ｊ］．中国民族医药杂志，１９９９，５（３）：１３．
［５］ 药典委员会．卫生部药品标准藏药．第 １册［Ｓ］．１９９５：１４１，
１６０．
ＲＰＨＰＬＣｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｉｎｓｅｖｅｒａｌｆｌｏｗｅｒｓ
ＮＩＵＹｉｎｇｆｅｎｇ１，２，ＳＨＡＯＹｕｎ１，ＺＨＡＯＸｉａｏｈｕｉ１，ＷＥＮＨｕａｉｘｉｕ１，ＴＡＯＹａｎｄｕｏ１
（１．ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｌａｔｅａｕＢｉｏｌｏｇｙ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｘｉｎｉｎｇ８１０００１，Ｃｈｉｎａ；
２．ＧｒａｄｕａｔｅＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００４９，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｄｅｖｅｌｖｐａＲＰＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｉｎｆｉｆｔｅｅｎｋｉｎｄｓｏｆｆｌｏｗｅｒｓｓｕｃｈａｓＩｒｉｓ
ｌａｃｔｅａｌｐａｌ，ｐｒｕｎｕｓｐｅｒｓｉｃａａｎｄｒｏｓａｃｈｉｎｅｎｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｑｕｅｒｃｅｔｉｎ，ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌａｎｄｉｓｏｒｈａｍｎｔｉｎｉｎｆｉｆｔｅｅｎｋｉｎｄｓｏｆｆｌｏｗ
ｅｒｓｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｗｉｔｈｍｅｔｈａｎｏｌ．ＴｈｅａｎａｌｙｓｉｓｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎａＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８ｃｏｌｕｍｎ（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）ｗｉｔｈｍｅｔｈａｎｏｌ
０１％ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃａｃｉｄ（５０∶５０）ａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｑｕｅｒｃｅｔｉｎ，ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌａｎｄｉｓｏｒｈａｍｎｔｉｎｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄｗｅｌ，ａｎｄｔｈｅｒｅ
ｓｕｌｔｓｈｏｗｓｔｈａｔｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｑｕｅｒｃｅｔｉｎｉｎｔｈｅＩｒｉｓｌａｃｔｅａＰａｌｗａｓｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔ（１５３６％），ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｅｏｆｋａｅｍｐｆｅｒｏｌｉｎＰｅｒｓｉｃａｐｅｒｓｉｃｅ
ｗａｓｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔ（０５７２％），ａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｉｓｏｒｈａｍｎｔｉｎｉｎｃｈｒｙｓａｍｔｈｅｍｕｍｍｏｒｉｆｏｌｉｕｍｗａｓｕｐｔｏ０２９０％Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｃｏｎ
ｔｅｎｔｓｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｉｎｔｈｅｓｅｆｌｏｗｅｒｓｗｅｒｅｂｙｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄＲＰＨＰＬＣｆｏｒｔｈｅｆｉｒｓｔｔｉｍｅａｎｄｔｈｅｍｅｔｈｏｄｃａｎｂｅｕｓｅｄｆｏｒｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｒｍｉ
ｎａｔｉｏｎｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｉｎｔｈｅｆｌｏｗｅｒｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＲＰＨＰＬＣ；ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ；ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ；ｉｓｏｒｈａｍｎｔｉｎ；ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
［责任编辑 王亚君］
·４０１２·
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ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
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Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００８