全 文 :人工蛹虫草子实体化学成分研究
吕子明1,姜永涛2,吴立军3,刘 珂2
(1.北京以岭医药研究院,北京 102600;
2.烟台大学 药学院,山东 烟台 264005;
3.沈阳药科大学 中药学院,辽宁 沈阳 110016)
[摘要]目的:研究人工蛹虫草子实体的化学成分。方法:大孔吸附树脂和硅胶色谱柱分离纯化,根据理化性质
和波谱数据鉴定结构。结果:分离鉴定了9个化合物,分别为:麦角甾4,6,8(14)四烯3酮(1),柠檬甾二烯醇
(2),二十四烷酸单甘油酯(3),麦角甾醇(4),麦角甾醇过氧化物(5),麦角甾7,22二烯3β,5α,6β三醇(6),虫草
素(7),腺苷(8),N(2羟乙基)腺苷(9)。结论:化合物1~3,6,9均为首次从该种真菌子实体中分离得到。
[关键词] 人工蛹虫草;麦角甾醇;核苷
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)24291404
[收稿日期] 20080319
[通讯作者] 刘珂,Tel:(0535)6706068,Email:liuke@ytu.
edu.cn
人工蛹虫草Cordycepsmilitaris(L.er.Fr.)Link
又称北冬虫夏草,与冬虫夏草同属麦角菌科虫草属。
北方民间曾把蛹虫草作为冬虫夏草应用,为珍贵的
中药材。野生虫草资源十分缺乏,因而导致虫草价
格昂贵,人工培养因而意义重大。目前人工培养技
术比较成熟。天然的蛹虫草研究不是很多,人工蛹
虫草子实体化学成分研究更少,仅见姜泓等报道[1]
从中分离得到7个化合物,分别为核苷、甾醇和环肽
类化合物。为了开发新的药用资源,系统研究人工
蛹虫草子实体的化学成分,作者从其人工培养的子
实体中分离得到9个化合物,化合物1~3,6,9均为
首次从该种真菌子实体中分离得到。
1 仪器与试药
X-4数字显示微熔点测定仪(熔点未校正),
PerkinElmer型红外光谱仪(KBr压片),JeolJnmeep
型600核磁共振仪,PerseptiveBiosystems型质谱仪
(ESIMS),KYKY-ZHP-5#型质谱仪(FABMS),
AEIMS50型质谱仪(EIMS);薄层色谱用硅胶为烟
台化学工业研究所生产,柱色谱硅胶(200~300目)
为青岛海洋化工厂生产;D-101型大孔吸附树脂为
烟台化学工业研究所生产;色谱用试剂均为分析纯。
人工蛹虫草子实体由沈阳中大生物工程有限公司提
供,经烟台大学药学院刘珂教授鉴定为蛹虫草 C.
militaris的子实体。
2 提取分离
取阴干的人工蛹虫草子实体细粉2kg,5倍量
95%乙醇回流提取(15h,6次),合并提取液,减压
浓缩,得红黑色浸膏。将此浸膏分散于1000mL去
离子水中,静置过夜。离心(3000r·min-1)分出不
溶于水的红色黏稠固体悬浮物和水溶液 Fr.F。红
色黏稠悬浮物用无水乙醇1000mL回流(05h,3
次),冷却至室温抽滤,得红色粉末 Fr.A(5g)。滤
液回收乙醇,得黑色浸膏,拌以适量硅藻土,分别以
石油醚,乙醚,95%乙醇洗脱,得石油醚洗脱部分
Fr.B(20g),乙醚洗脱部分 Fr.C(2g),95%乙醇洗
脱部分Fr.G。Fr.F与Fr.G经TLC检查合并,减压
浓缩至无乙醇后,加水稀释5倍,经 D101型大孔吸
附树脂(500g)柱色谱。先用去离子水洗至无颜色,
再用95%乙醇洗脱。水溶液减压浓缩得 Fr.E(200
g),95%乙醇洗脱液减压浓缩得Fr.D(10g)。
Fr.B进行干柱加压色谱分离。环己烷醋酸乙
酯(10∶1)开始梯度洗脱,洗脱液收集210份(每份
40mL)。5∶1洗脱部分,第25~44份,甲醇重结晶
得化合物1(7mg);第62~68份,经硅胶柱色谱,氯
仿甲醇(50∶1)洗脱,丙酮重结晶得化合物 2(20
mg)。2∶1洗脱部分,第73~80份,95%乙醇重结晶
得化合物3(8mg);第81~91份,重结晶得化合物4
(95mg);第 152~159份,丙酮重结晶得化合物 5
(10mg)。
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Fr.C进行干柱加压色谱分离。氯仿甲醇(25∶
1)开始梯度洗脱,洗脱液收集70份(每份20mL)。
第93~101份,丙酮重结晶得化合物6(8mg)。
Fr.D进行干柱加压色谱分离,氯仿醋酸乙酯
异丙醇氨水(8∶2∶6∶08)开始梯度洗脱,洗脱液收
集184份(每份50mL)。第15~21份,经95%乙醇
重结晶得到化合物7(12g);第32~35份,经95%
乙醇重结晶得到化合物8(04g);第40~49份,经
95%乙醇重结晶得到化合物9(03g)。
3 结构鉴定
化合物1 黄色晶体,mp112~114℃(甲醇)。
FABMSm/z393[M+H]+。1HNMR(CDCl3,600
MHz)δ:658(1H,d,J=95Hz,H7),600(1H,d,
J=95Hz,H6),571(1H,s,H4),523(1H,dd,
J=152,73Hz,H23),517(1H,dd,J=152,85
Hz,H22),103(3H,d,J=70Hz,CH321),096
(3H,s,CH319),093(3H,s,CH318),090(3H,d,
J=70Hz,CH328),082(3H,d,J=66Hz,CH3
27),080(3H,d,J=70Hz,CH326)。
13CNMR
(CDCl3,150MHz)δ:1986(C3),1635(C5),
1551(C14),1340(C22),1331(C7),1315(C
23),1234(C8),1219(C4),564(C17),432
(C9),429(C13),418(C24),383(C20),357
(C10),345(C12),331(C1),331(C2),320
(C25),267(C16),243(C15),202(C21),
202(C27),186(C27),179(C11),179(C
18),160(C28),156(C19)。以上数据与文献
[2]报道数据基本一致,故鉴定化合物1为麦角甾
4,6,8(14)四烯3酮。
化合物2 白色粉末,mp124~126℃(丙酮)。
LiebermannBurchard反应阳性。EIMSm/z426
[M]+。1HNMR(CDCl3,600MHz)δ:511(1H,d,
J=41Hz,H7),504(1H,q,J=66Hz,H28),
305(1H,dt,J=107,64Hz,H3),152(3H,d,
J=66Hz,CH329),092(3H,d,J=63Hz,CH3
30),091(6H,d,J=71Hz,CH326,27),088
(3H,d,J=66Hz,CH321),076(3H,s,CH319),
047(3H,s,CH318)。
13CNMR(CDCl3,150MHz)δ:
1458(C24),1391(C8),1174(C7),1160(C
28),762(C3),560(C17),549(C14),496(C
9),466(C5),433(C13),402(C4),95(C
12),370(C1),366(C20),359(C22),348(C
10),309(C2),286(C26),280(C16,23),266
(C6),229(C15),213(C11),211(C25),210
(C21),189(C21),151(C30),141(C19),
127(C29),118(C18)。以上数据与文献[34]
报道的数据基本一致,故鉴定化合物2为柠檬甾二
烯醇。
化合物3 白色固体,mp123~126℃(95%乙
醇)。EIMSm/z442[M]+,369,355,341,327,313,
299,285,147,129,112,98,84,71,57,43(基峰)。1H
NMR(DMSOd6,600MHz)δ:403(1H,dd,J=111,
44Hz,Ha1),389(1H,dd,J=111,66Hz,Hb
1),362(1H,m,H2),333(2H,m,H3),167
(2H,m,H2′),151(2H,m,H3′),123(40H,
brs),085(3H,t,H24′)。13CNMR(DMSOd6,150
MHz)δ:1728(C1′),691(C2),653(C1),624
(C3),333~219(C2′23′),138(C1,C24′)。
以上数据与文献[5]报道的数据基本一致,故鉴定
化合物3为二十四烷酸单甘油酯。
化合物4 白色针晶,mp124~126℃(丙酮)。
FABMSm/z396[M]+。LiebermannBurchard反应
阳性。1HNMR(CDCl3,600MHz)δ:557(1H,dd,
J=55,28Hz,H6),538(1H,ddd,J=55,28,
28Hz,H8),521(1H,dd,J=153,74Hz,H
23),517(1H,dd,J=153,83Hz,H22),36
(1H,m,H3),103(3H,d,J=66Hz,CH321),
094(3H,s,CH319),091(3H,d,J=69Hz,CH3
28),083(3H,d,J=68Hz,CH326),080(3H,d,
J=66Hz,CH327),063(3H,s,CH318)。
13CNMR
(CDCl3,125MHz)δ:1413(C8),1400(C5),
1355(C22),1320(C23),1197(C6),1162(C
7),704(C3),557(C17),545(C14),462(C
9),428(C13),428(C24),408(C4),404(C
20),391(C12),370(C10),389(C1),331(C
25),320(C2),283(C16),230(C15),211(C
21),211(C11),199(C27),196(C26),176
(C19),163(C28),120(C18)。以上数据与文
献[6]报道的数据基本一致,故鉴定化合物4为麦
角甾醇。
化合物5 白色针晶,mp177~180℃(丙酮)。
LiebermannBurchard反应阳性。FABMSm/z429
[M+H]+,411[M+H-H2O]
+,377[M-O2-H2O]
+,
363,395,269,253,221。1HNMR(CDCl3,600MHz)
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δ:649(1H,d,J=85Hz,H7),623(1H,d,J=85
Hz,H6),521(1H,dd,J=151,78Hz,H23),
514(1H,dd,J=151,78Hz,H22),396(1H,m,
H3),099(3H,d,J=66Hz,CH321),090(3H,
d,J=69Hz,CH328),087(3H,s,CH319),082
(3H,d,J=69Hz,CH327),081(3H,d,J=69
Hz,CH326),081(3H,s,CH318)。
13 CNMR
(CDCl3,125MHz)δ:1354(C6),1352(C22),
1323(C23),1307(C7),821(C5),794(C8),
664(C3),562(C17),517(C14),511(C9),
445(C13),427(C24),397(C20),393(C
12),369(C4),369(C10),347(C1),330(C
25),301(C2),286(C16),234(C11),209
(C21),206(C15),200(C26),196(C27),
196(C21),182(C19),175(C28),128(C
18)。以上数据与文献[6]报道的数据基本一致,故
鉴定化合物5为麦角甾醇过氧化物。
化合物6 白色晶体,mp224~226℃(甲醇)。
LiebermannBurchard反应阳性。FABMSm/z429
[M-H]+。1HNMR(DMSOd6,600MHz)δ:523
(1H,dd,J=152,72Hz,H23),517(1H,dd,J=
152,28Hz,H22),508(1H,s,H7),376(1H,
m,H3),337(1H,s,H6),099(3H,d,J=64
Hz,CH321),091(3H,s,CH319),089(3H,d,J=
68Hz,CH328),081(3H,d,J=71Hz,CH327),
080(3H,d,J=71Hz,CH326),055(3H,s,CH3
18)。13CNMR(DMSOd6,125MHz)δ:1396(C8),
1353(C22),1311(C23),1194(C7),744(C
5),721(C6),659(C3),541(C14),553(C
17),430(C13),422(C9),420(C24),400(C
4),395(C20),389(C12),366(C10),324(C
1),324(C25),312(C2),277(C16),226(C
15),213(C11),194(C26),191(C27),209
(C21),177(C19),172(C28),120(C18)。以
上数据与文献[7]报道的数据基本一致,故鉴定化
合物6为麦角甾7,22二烯3β,5α,6β三醇。
化合物7 白色结晶形粉末,mp227~228℃
(95% 乙醇)。ESIMSm/z252[M +H]+。IR
cm-1:3330(NH),3144(OH),2918(CH),1676,
1609(C=N)。1HNMR(DMSOd6,600MHz)δ:813
(1H,s,H2),835(1H,s,H8),586(1H,d,J=22
Hz,H1′),456(1H,m,H2′),222(1H,ddd,J=
130,81,58Hz,Ha3′),190(1H,ddd,J=135,
65,30Hz,Hb3′),434(1H,m,H4′),365(1H,
ddd,J=120,55,33Hz,Ha5′),351(1H,ddd,
J=120,55,41Hz,Hb5′),566(1H,d,J=44
Hz,2′OH),516(1H,t,J=55Hz,5′OH),729
(2H,brs,N6H2)。
13CNMR(DMSOd6,125MHz)δ:
1524(C2),1484(C4),1194(C5),1560(C
6),390(C8),908(C1′),746(C2′),341(C
3′),807(C4′),626(C5′)。以上数据与文献[8
9]数据基本一致,故鉴定化合物7为虫草素。
化合物 8 白色结晶粉末,mp235~237℃
(95% 乙醇)。ESIMSm/z268[M +H]+。IR
cm-1:3335(NH),3160(OH),1666(C=N)。1H
NMR(DMSOd6,600MHz)δ:812(1H,s,H2),834
(1H,s,H8),587(1H,d,J=63Hz,H1′),460
(1H,dd,J=112,63Hz,H2′),413(1H,m,H
3′),395(1H,dd,J=66,36Hz,H4′),367(1H,
dt,J=121,47Hz,Ha5′),354(1H,ddd,J=
121,77,36Hz,Hb5′),544(1H,d,J=64Hz,
2′OH),518(1H,J=47Hz,3′OH),542(1H,dd,
J=77,44Hz,5′OH),735(2H,brs,N6H2)。
13C
NMR(DMSOd6,125MHz)δ:1523(C2),1490(C
4),1193(C5),1561(C6),1391(C8),879(C
1′),734(C2′),706(C3′),859(C4′),617
(C5′)。以上数据与文献[1011]报道的数据基本
一致,故鉴定化合物8为腺苷。
化合物9 白色结晶形粉末,mp194~196℃
(95%乙醇)。ESIMSm/z312[M+H]+,180[M-
C5H9O4]
+,162[M-C5H9O4-H2O]
+。IRcm-1:
3450(NH),3300,3268,3151(OH),1627
(C=N)。1HNMR(DMSOd6,600MHz)δ:822
(1H,s,H2),836(1H,s,H8),587(1H,d,J=63
Hz,H1′),460(1H,dd,J=113,60Hz,H2′),
415(1H,m,H3′),396(1H,dd,J=66,36Hz,
H4′),367(1H,dt,J=121,39Hz,Ha5′),354
(1H,m,Hb5′),544(1H,d,J=63Hz,2′OH),
520(1H,J=47Hz,3′OH),542(1H,dd,J=69,
47Hz,5′OH),735(1H,brs,N6H),356(4H,br
s,H1″,2″),476(1H,brs,OH2″)。13CNMR
(DMSOd6,125MHz)δ:1523(C2),1428(C4),
1198(C5),1547C6),1397(C8),879(C1′),
735(C2′),706(C3′),859(C4′),616(C5′),
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424(C1″),596(C2″)。以上数据与文献[12]报
道的基本一致,故鉴定化合物9为 N6(2羟乙基)
腺苷。
[参考文献]
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ChemicalconstituentsfromdriedsorophoreofculturedCordycepsmilitaris
LVZiming1,JIANGYongtao2,WULijun3,LIUKe2
(1.BejingYilingPharmaceuticalResearchandDevdlopmontcenter,Bejing102600,China;
2.SchoolofPharmacy,YantaiUniversity,Yantai264005,China;
3.SchoolofTraditionalChineseMateriaMedica,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016,China)
[Abstract] Objective:ToinvestigatethechemicalconstituentsofthedriedsorophoreofculturedCordycepsmilitaris.Method:
Compoundswereisolatedandpurifiedbymacroporousadsorptionresinandsilicagelcolumnchromatography.Theirchemicalstructures
wereelucidatedonthebasisofphysicochemicalpropertiesandspectraldata(IR,FABMS,1HNMRand13CNMR).Result:Nine
compoundswereisolatedandidentifiedas:ergosta4,6,8(14)tetraen3one(1),citrostadienol(2),tetracosanoicacid2,3di
hydroxypropylester(3),ergosterol(4),ergosterolperoxide(5),ergosta7,22dien3β,5α,6βtriol(6),cordycepin(7),adeno
sine(8),N(2hydroxyethyl)adenosine(9),respectively.Conclusion:Compounds13,6,9wereseparatedfromthesorophoreof
culturedC.militarisforthefirsttime.
[Keywords] Cordycepsmilitaris;ergosterol;nucleoside
[责任编辑 王亚君
櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗
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毉
毉
毉
毉
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