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Chemical constituents from dried sorophore of cultured Cordyceps militaris

人工蛹虫草子实体化学成分研究



全 文 :人工蛹虫草子实体化学成分研究
吕子明1,姜永涛2,吴立军3,刘 珂2
(1.北京以岭医药研究院,北京 102600;
2.烟台大学 药学院,山东 烟台 264005;
3.沈阳药科大学 中药学院,辽宁 沈阳 110016)
[摘要]目的:研究人工蛹虫草子实体的化学成分。方法:大孔吸附树脂和硅胶色谱柱分离纯化,根据理化性质
和波谱数据鉴定结构。结果:分离鉴定了9个化合物,分别为:麦角甾4,6,8(14)四烯3酮(1),柠檬甾二烯醇
(2),二十四烷酸单甘油酯(3),麦角甾醇(4),麦角甾醇过氧化物(5),麦角甾7,22二烯3β,5α,6β三醇(6),虫草
素(7),腺苷(8),N(2羟乙基)腺苷(9)。结论:化合物1~3,6,9均为首次从该种真菌子实体中分离得到。
[关键词] 人工蛹虫草;麦角甾醇;核苷
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)24291404
[收稿日期] 20080319
[通讯作者] 刘珂,Tel:(0535)6706068,Email:liuke@ytu.
edu.cn
  人工蛹虫草Cordycepsmilitaris(L.er.Fr.)Link
又称北冬虫夏草,与冬虫夏草同属麦角菌科虫草属。
北方民间曾把蛹虫草作为冬虫夏草应用,为珍贵的
中药材。野生虫草资源十分缺乏,因而导致虫草价
格昂贵,人工培养因而意义重大。目前人工培养技
术比较成熟。天然的蛹虫草研究不是很多,人工蛹
虫草子实体化学成分研究更少,仅见姜泓等报道[1]
从中分离得到7个化合物,分别为核苷、甾醇和环肽
类化合物。为了开发新的药用资源,系统研究人工
蛹虫草子实体的化学成分,作者从其人工培养的子
实体中分离得到9个化合物,化合物1~3,6,9均为
首次从该种真菌子实体中分离得到。
1 仪器与试药
X-4数字显示微熔点测定仪(熔点未校正),
PerkinElmer型红外光谱仪(KBr压片),JeolJnmeep
型600核磁共振仪,PerseptiveBiosystems型质谱仪
(ESIMS),KYKY-ZHP-5#型质谱仪(FABMS),
AEIMS50型质谱仪(EIMS);薄层色谱用硅胶为烟
台化学工业研究所生产,柱色谱硅胶(200~300目)
为青岛海洋化工厂生产;D-101型大孔吸附树脂为
烟台化学工业研究所生产;色谱用试剂均为分析纯。
人工蛹虫草子实体由沈阳中大生物工程有限公司提
供,经烟台大学药学院刘珂教授鉴定为蛹虫草 C.
militaris的子实体。
2 提取分离
取阴干的人工蛹虫草子实体细粉2kg,5倍量
95%乙醇回流提取(15h,6次),合并提取液,减压
浓缩,得红黑色浸膏。将此浸膏分散于1000mL去
离子水中,静置过夜。离心(3000r·min-1)分出不
溶于水的红色黏稠固体悬浮物和水溶液 Fr.F。红
色黏稠悬浮物用无水乙醇1000mL回流(05h,3
次),冷却至室温抽滤,得红色粉末 Fr.A(5g)。滤
液回收乙醇,得黑色浸膏,拌以适量硅藻土,分别以
石油醚,乙醚,95%乙醇洗脱,得石油醚洗脱部分
Fr.B(20g),乙醚洗脱部分 Fr.C(2g),95%乙醇洗
脱部分Fr.G。Fr.F与Fr.G经TLC检查合并,减压
浓缩至无乙醇后,加水稀释5倍,经 D101型大孔吸
附树脂(500g)柱色谱。先用去离子水洗至无颜色,
再用95%乙醇洗脱。水溶液减压浓缩得 Fr.E(200
g),95%乙醇洗脱液减压浓缩得Fr.D(10g)。
Fr.B进行干柱加压色谱分离。环己烷醋酸乙
酯(10∶1)开始梯度洗脱,洗脱液收集210份(每份
40mL)。5∶1洗脱部分,第25~44份,甲醇重结晶
得化合物1(7mg);第62~68份,经硅胶柱色谱,氯
仿甲醇(50∶1)洗脱,丙酮重结晶得化合物 2(20
mg)。2∶1洗脱部分,第73~80份,95%乙醇重结晶
得化合物3(8mg);第81~91份,重结晶得化合物4
(95mg);第 152~159份,丙酮重结晶得化合物 5
(10mg)。
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2008年12月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.33,Issue 24
 December,2008
Fr.C进行干柱加压色谱分离。氯仿甲醇(25∶
1)开始梯度洗脱,洗脱液收集70份(每份20mL)。
第93~101份,丙酮重结晶得化合物6(8mg)。
Fr.D进行干柱加压色谱分离,氯仿醋酸乙酯
异丙醇氨水(8∶2∶6∶08)开始梯度洗脱,洗脱液收
集184份(每份50mL)。第15~21份,经95%乙醇
重结晶得到化合物7(12g);第32~35份,经95%
乙醇重结晶得到化合物8(04g);第40~49份,经
95%乙醇重结晶得到化合物9(03g)。
3 结构鉴定
化合物1 黄色晶体,mp112~114℃(甲醇)。
FABMSm/z393[M+H]+。1HNMR(CDCl3,600
MHz)δ:658(1H,d,J=95Hz,H7),600(1H,d,
J=95Hz,H6),571(1H,s,H4),523(1H,dd,
J=152,73Hz,H23),517(1H,dd,J=152,85
Hz,H22),103(3H,d,J=70Hz,CH321),096
(3H,s,CH319),093(3H,s,CH318),090(3H,d,
J=70Hz,CH328),082(3H,d,J=66Hz,CH3
27),080(3H,d,J=70Hz,CH326)。
13CNMR
(CDCl3,150MHz)δ:1986(C3),1635(C5),
1551(C14),1340(C22),1331(C7),1315(C
23),1234(C8),1219(C4),564(C17),432
(C9),429(C13),418(C24),383(C20),357
(C10),345(C12),331(C1),331(C2),320
(C25),267(C16),243(C15),202(C21),
202(C27),186(C27),179(C11),179(C
18),160(C28),156(C19)。以上数据与文献
[2]报道数据基本一致,故鉴定化合物1为麦角甾
4,6,8(14)四烯3酮。
化合物2 白色粉末,mp124~126℃(丙酮)。
LiebermannBurchard反应阳性。EIMSm/z426
[M]+。1HNMR(CDCl3,600MHz)δ:511(1H,d,
J=41Hz,H7),504(1H,q,J=66Hz,H28),
305(1H,dt,J=107,64Hz,H3),152(3H,d,
J=66Hz,CH329),092(3H,d,J=63Hz,CH3
30),091(6H,d,J=71Hz,CH326,27),088
(3H,d,J=66Hz,CH321),076(3H,s,CH319),
047(3H,s,CH318)。
13CNMR(CDCl3,150MHz)δ:
1458(C24),1391(C8),1174(C7),1160(C
28),762(C3),560(C17),549(C14),496(C
9),466(C5),433(C13),402(C4),95(C
12),370(C1),366(C20),359(C22),348(C
10),309(C2),286(C26),280(C16,23),266
(C6),229(C15),213(C11),211(C25),210
(C21),189(C21),151(C30),141(C19),
127(C29),118(C18)。以上数据与文献[34]
报道的数据基本一致,故鉴定化合物2为柠檬甾二
烯醇。
化合物3 白色固体,mp123~126℃(95%乙
醇)。EIMSm/z442[M]+,369,355,341,327,313,
299,285,147,129,112,98,84,71,57,43(基峰)。1H
NMR(DMSOd6,600MHz)δ:403(1H,dd,J=111,
44Hz,Ha1),389(1H,dd,J=111,66Hz,Hb
1),362(1H,m,H2),333(2H,m,H3),167
(2H,m,H2′),151(2H,m,H3′),123(40H,
brs),085(3H,t,H24′)。13CNMR(DMSOd6,150
MHz)δ:1728(C1′),691(C2),653(C1),624
(C3),333~219(C2′23′),138(C1,C24′)。
以上数据与文献[5]报道的数据基本一致,故鉴定
化合物3为二十四烷酸单甘油酯。
化合物4 白色针晶,mp124~126℃(丙酮)。
FABMSm/z396[M]+。LiebermannBurchard反应
阳性。1HNMR(CDCl3,600MHz)δ:557(1H,dd,
J=55,28Hz,H6),538(1H,ddd,J=55,28,
28Hz,H8),521(1H,dd,J=153,74Hz,H
23),517(1H,dd,J=153,83Hz,H22),36
(1H,m,H3),103(3H,d,J=66Hz,CH321),
094(3H,s,CH319),091(3H,d,J=69Hz,CH3
28),083(3H,d,J=68Hz,CH326),080(3H,d,
J=66Hz,CH327),063(3H,s,CH318)。
13CNMR
(CDCl3,125MHz)δ:1413(C8),1400(C5),
1355(C22),1320(C23),1197(C6),1162(C
7),704(C3),557(C17),545(C14),462(C
9),428(C13),428(C24),408(C4),404(C
20),391(C12),370(C10),389(C1),331(C
25),320(C2),283(C16),230(C15),211(C
21),211(C11),199(C27),196(C26),176
(C19),163(C28),120(C18)。以上数据与文
献[6]报道的数据基本一致,故鉴定化合物4为麦
角甾醇。
化合物5 白色针晶,mp177~180℃(丙酮)。
LiebermannBurchard反应阳性。FABMSm/z429
[M+H]+,411[M+H-H2O]
+,377[M-O2-H2O]
+,
363,395,269,253,221。1HNMR(CDCl3,600MHz)
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δ:649(1H,d,J=85Hz,H7),623(1H,d,J=85
Hz,H6),521(1H,dd,J=151,78Hz,H23),
514(1H,dd,J=151,78Hz,H22),396(1H,m,
H3),099(3H,d,J=66Hz,CH321),090(3H,
d,J=69Hz,CH328),087(3H,s,CH319),082
(3H,d,J=69Hz,CH327),081(3H,d,J=69
Hz,CH326),081(3H,s,CH318)。
13 CNMR
(CDCl3,125MHz)δ:1354(C6),1352(C22),
1323(C23),1307(C7),821(C5),794(C8),
664(C3),562(C17),517(C14),511(C9),
445(C13),427(C24),397(C20),393(C
12),369(C4),369(C10),347(C1),330(C
25),301(C2),286(C16),234(C11),209
(C21),206(C15),200(C26),196(C27),
196(C21),182(C19),175(C28),128(C
18)。以上数据与文献[6]报道的数据基本一致,故
鉴定化合物5为麦角甾醇过氧化物。
化合物6 白色晶体,mp224~226℃(甲醇)。
LiebermannBurchard反应阳性。FABMSm/z429
[M-H]+。1HNMR(DMSOd6,600MHz)δ:523
(1H,dd,J=152,72Hz,H23),517(1H,dd,J=
152,28Hz,H22),508(1H,s,H7),376(1H,
m,H3),337(1H,s,H6),099(3H,d,J=64
Hz,CH321),091(3H,s,CH319),089(3H,d,J=
68Hz,CH328),081(3H,d,J=71Hz,CH327),
080(3H,d,J=71Hz,CH326),055(3H,s,CH3
18)。13CNMR(DMSOd6,125MHz)δ:1396(C8),
1353(C22),1311(C23),1194(C7),744(C
5),721(C6),659(C3),541(C14),553(C
17),430(C13),422(C9),420(C24),400(C
4),395(C20),389(C12),366(C10),324(C
1),324(C25),312(C2),277(C16),226(C
15),213(C11),194(C26),191(C27),209
(C21),177(C19),172(C28),120(C18)。以
上数据与文献[7]报道的数据基本一致,故鉴定化
合物6为麦角甾7,22二烯3β,5α,6β三醇。
化合物7 白色结晶形粉末,mp227~228℃
(95% 乙醇)。ESIMSm/z252[M +H]+。IR
cm-1:3330(NH),3144(OH),2918(CH),1676,
1609(C=N)。1HNMR(DMSOd6,600MHz)δ:813
(1H,s,H2),835(1H,s,H8),586(1H,d,J=22
Hz,H1′),456(1H,m,H2′),222(1H,ddd,J=
130,81,58Hz,Ha3′),190(1H,ddd,J=135,
65,30Hz,Hb3′),434(1H,m,H4′),365(1H,
ddd,J=120,55,33Hz,Ha5′),351(1H,ddd,
J=120,55,41Hz,Hb5′),566(1H,d,J=44
Hz,2′OH),516(1H,t,J=55Hz,5′OH),729
(2H,brs,N6H2)。
13CNMR(DMSOd6,125MHz)δ:
1524(C2),1484(C4),1194(C5),1560(C
6),390(C8),908(C1′),746(C2′),341(C
3′),807(C4′),626(C5′)。以上数据与文献[8
9]数据基本一致,故鉴定化合物7为虫草素。
化合物 8 白色结晶粉末,mp235~237℃
(95% 乙醇)。ESIMSm/z268[M +H]+。IR
cm-1:3335(NH),3160(OH),1666(C=N)。1H
NMR(DMSOd6,600MHz)δ:812(1H,s,H2),834
(1H,s,H8),587(1H,d,J=63Hz,H1′),460
(1H,dd,J=112,63Hz,H2′),413(1H,m,H
3′),395(1H,dd,J=66,36Hz,H4′),367(1H,
dt,J=121,47Hz,Ha5′),354(1H,ddd,J=
121,77,36Hz,Hb5′),544(1H,d,J=64Hz,
2′OH),518(1H,J=47Hz,3′OH),542(1H,dd,
J=77,44Hz,5′OH),735(2H,brs,N6H2)。
13C
NMR(DMSOd6,125MHz)δ:1523(C2),1490(C
4),1193(C5),1561(C6),1391(C8),879(C
1′),734(C2′),706(C3′),859(C4′),617
(C5′)。以上数据与文献[1011]报道的数据基本
一致,故鉴定化合物8为腺苷。
化合物9 白色结晶形粉末,mp194~196℃
(95%乙醇)。ESIMSm/z312[M+H]+,180[M-
C5H9O4]
+,162[M-C5H9O4-H2O]
+。IRcm-1:
3450(NH),3300,3268,3151(OH),1627
(C=N)。1HNMR(DMSOd6,600MHz)δ:822
(1H,s,H2),836(1H,s,H8),587(1H,d,J=63
Hz,H1′),460(1H,dd,J=113,60Hz,H2′),
415(1H,m,H3′),396(1H,dd,J=66,36Hz,
H4′),367(1H,dt,J=121,39Hz,Ha5′),354
(1H,m,Hb5′),544(1H,d,J=63Hz,2′OH),
520(1H,J=47Hz,3′OH),542(1H,dd,J=69,
47Hz,5′OH),735(1H,brs,N6H),356(4H,br
s,H1″,2″),476(1H,brs,OH2″)。13CNMR
(DMSOd6,125MHz)δ:1523(C2),1428(C4),
1198(C5),1547C6),1397(C8),879(C1′),
735(C2′),706(C3′),859(C4′),616(C5′),
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    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
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424(C1″),596(C2″)。以上数据与文献[12]报
道的基本一致,故鉴定化合物9为 N6(2羟乙基)
腺苷。
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药物中的应用杂志,中国:2004100945110[P].20050511.
ChemicalconstituentsfromdriedsorophoreofculturedCordycepsmilitaris
LVZiming1,JIANGYongtao2,WULijun3,LIUKe2
(1.BejingYilingPharmaceuticalResearchandDevdlopmontcenter,Bejing102600,China;
2.SchoolofPharmacy,YantaiUniversity,Yantai264005,China;
3.SchoolofTraditionalChineseMateriaMedica,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016,China)
[Abstract] Objective:ToinvestigatethechemicalconstituentsofthedriedsorophoreofculturedCordycepsmilitaris.Method:
Compoundswereisolatedandpurifiedbymacroporousadsorptionresinandsilicagelcolumnchromatography.Theirchemicalstructures
wereelucidatedonthebasisofphysicochemicalpropertiesandspectraldata(IR,FABMS,1HNMRand13CNMR).Result:Nine
compoundswereisolatedandidentifiedas:ergosta4,6,8(14)tetraen3one(1),citrostadienol(2),tetracosanoicacid2,3di
hydroxypropylester(3),ergosterol(4),ergosterolperoxide(5),ergosta7,22dien3β,5α,6βtriol(6),cordycepin(7),adeno
sine(8),N(2hydroxyethyl)adenosine(9),respectively.Conclusion:Compounds13,6,9wereseparatedfromthesorophoreof
culturedC.militarisforthefirsttime.
[Keywords] Cordycepsmilitaris;ergosterol;nucleoside
[责任编辑 王亚君
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第33卷第24期
2008年12月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.33,Issue 24
 December,2008