全 文 ：牡荆素鼠李糖苷对内皮细胞血管舒缩因子
表达影响的实验研究
朱晓新１，李连达２，刘建勋２，刘志云２，马雪英２
（１中国中医科学院 中药研究所，北京 １００７００；
２中国中医科学院 西苑医院，北京 １０００９１）
［摘要］ 目的：观察牡荆素鼠李糖苷对缺氧再给氧损伤内皮细胞产生血管舒缩因子表达的影响。方法：采用
脐静脉内皮细胞培养的方法，以缺氧再给氧造成内皮细胞损伤，分别以放射免疫、Ｇｒｉｅｓｓ法、免疫组化法测定细胞培
养上清中内皮素１（ＥＴ１）、一氧化氮（ＮＯ）、细胞内一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性；ＲＴＰＣＲ方法测定细胞内 ＥＴ１，ＮＯＳｍＲ
ＮＡ的转录。结果：不同浓度的牡荆素鼠李糖苷均可明显提高内皮细胞ＮＯＳｍＲＮＡ的表达和 ＮＯＳ的活性；使内皮细
胞血管舒张因子ＮＯ产量明显增加；缩血管因子ＥＴ１ｍＲＮＡ表达及 ＥＴ１明显减少。结论：牡荆素鼠李糖苷能通过
蛋白及基因水平有效地调节缺氧再给氧损伤血管内皮细胞产生的血管活性物质的表达。
［关键词］ 牡荆素鼠李糖苷；内皮细胞；缺氧再给氧损伤；血管舒缩因子
［中图分类号］Ｒ２８５５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００６）０７０５６６０４
［收稿日期］ ２００５０９２１
［基金项目］ 科技部１０３５计划项目（９５ｚ１０）
［通讯作者］ 朱晓新，Ｔｅｌ：（０１０）６４０５６１５４，Ｆａｘ：６４０１３９９６，Ｅ
ｍａｉｌ：ｚｈｕｘｉａｏｘｉｎ＠ｍａｉｌ．ｃｉｎｔｃｍ．ｃｏｍ．ｃｎ
牡荆素鼠李糖苷（ｖｉｔｅｘｉａｒｈａｍｎｏｓｉｄｅ）是从山楂叶
中提取出来的一种新的黄酮类成分，有保护实验性
心肌缺血、改善血流动力学等作用［１］；可通过稳定心
肌细胞膜，减轻其损伤，调节前列腺素（ＰＧｓ）的表达，
降低心肌细胞搏动频率等机制保护心肌细胞缺氧再
给氧性损伤［２］。为了进一步研究其作用机制，作者
以缺氧再给氧损伤的血管内皮细胞为病理模型，从
血管舒缩因子及其ｍＲＮＡ转录角度观察了牡荆素鼠
李糖苷对其影响。
１ 材料
１１ 药品及试剂
牡荆素鼠李糖苷（淡黄色颗粒，易溶于水，纯度
为９８７％，中国中医科学院西苑医院基础医学研究
室药化室）。ＤＭＥＭ培养基（ＧＩＢＣＯ公司），９９９９％
Ｎ２（北京分析仪器厂）。ＮＯ，ＥＴ１检测试剂盒（北京
东亚免疫技术研究所），ｅｃＮＯＳ，ｉＮＯＳ单抗（南京弘阳
生物技术有限公司），ＨＲＰ标记的兔抗大鼠 ＩｇＧ（ＳＩＧ
ＭＡ公司），ＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔＴＭＣｈｏｉｃｅＳｙｓｔｅｍｆｏｒｃＤＮＡＳｙｎ
ｔｈｅｓｉｓ试剂盒（ＧＩＢＣＯＢＲＬ）。ＴＲＩＺＯＬＲｅａｇｎｔ（ＧＩＢ
ＣＯ）。焦碳酸二乙酯（ＤＥＰＣ），３（Ｎ玛琳代）丙磺酸
（ＭＯＰＳ）、溴化乙锭（ＥＢ）（Ｓｉｇｍａ公司产品）；核苷酸、
ｄＮＴＰ，ＡＴＰ（ＧＩＢＣＯＢＲＬ公司）；琼脂糖、鲑精 ＤＮＡ
（Ｐｒｏｍｅｇａ公司）；寡聚核苷酸（ＧＩＢＣＯＢＲＬ公司）；胰
蛋白酶（１∶２５０）（Ｓｉｇｍａ公司）；Ｔｙｒｏｄｅ’ｓ液（ＮａＣｌ１２５，
ＫＣｌ２６，ＫＨ２ＰＯ４１２，ＭｇＳＯ４１２，ＣａＣｌ２１０，ＨＥＰＥＳ２５
ｍｍｏｌ·Ｌ－１，ｐＨ７４）。
１２ 人脐带
健康足月孕妇剖腹产后，无菌剪取２０～３０ｃｍ，
立即浸于灭菌 ＰＢＳ中，４℃保存。由北京市海淀区
妇幼保健院手术室提供。
１３ 仪器
ＢｅｃｋｍａｎＧＳ－１５Ｒ高速离心机（美国），ＳＡＮＹＯ
ＭＣＯ１７５ＣＯ２培养箱（日本），ＳＷ－ＣＪ－ＩＦ超净工作台
（苏州净化仪器厂），ＯＬＹＭＰＵＳ倒置显微镜（日本），
ＤＹ－Ｗ２型电泳仪（北京六一仪器厂），ＵＶ－６４０
Ｂｅｃｋｍａｎ紫外分光光度计（美国），ＩｍａｇｅＭａｓｔｅｒＤｅｓｋ
ＴｏｐＳｃａｎｎｅｒ扫描仪（Ｐｈａｒｍａｃｉａ公司），Ｒｏｂｏｃｙｃｌｅｒ（Ｓｔｒａ
ｇｅｎｅＩｎｃ）ＰＣＲ扩增仪。
２ 方法
２１ 人脐静脉内皮细胞培养方法
根据文献［３］的方法略加改进。取脐带，以 ＰＢＳ
反复冲洗内腔至无残留血色，注入灌流消化液，３７
℃孵育３０ｍｉｎ，吸取消化液移于离心管中，牛血清中
·６６５·
第３１卷第７期
２００６年４月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ３１，Ｉｓｓｕｅ ７
Ａｐｒｉｌ，２００６
止消化，１５００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，用无血清培养基
洗１～２次，悬浮细胞，计数，以１×１０５·ｍＬ－１密度接
种于培养瓶或培养板中，３７℃，５％ＣＯ２中培养。一
般４ｈ后细胞即可贴壁。２４ｈ后换液，以后每天或
隔天换液１次。７２ｈ基本融合后用于实验。
２２ 内皮细胞的鉴定
内皮细胞悬液，１０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，沉淀
加内皮细胞单抗１００μＬ，４℃作用１ｈ，ＰＢＳ洗２遍，
沉淀加荧光二抗１００μＬ，混匀，４℃作用１ｈ，ＰＢＳ洗
２遍，荧光显微镜下观察荧光细胞数量及比例。
２３ 内皮细胞的缺氧再给氧损伤［４］
培养好的细胞用缺氧（充入 ９９９９％ Ｎ２２０ｍｉｎ
以上）的Ｔｙｒｏｄｅ’ｓ液洗３遍，按２ｍＬ／孔加入缺氧的
Ｔｙｒｏｄｅｓ液，移入缺氧室（快速充入 ９９９９％ Ｎ２，当
Ｏ２＜０１％时，低速充 Ｎ２，维持此 Ｏ２含量）２ｈ以缺
氧；ＣＯ２培养箱中２ｈ，以再给氧。
２４ 细胞的分组处理
正常对照组：常规培养 ４ｈ（简称为正常组）；缺
氧再给氧对照组：缺氧损伤２ｈ，再给氧２ｈ（简称为
模型组）；牡荆素鼠李糖苷用药组：细胞中分别加入
终浓度为１０－３，１０－４，１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１的牡荆素鼠李糖
苷后，再进行缺氧再给氧损伤；分别称为牡荆素鼠李
糖苷１０－３，１０－４，１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１组（简称为牡荆素鼠
李糖苷１０－３，１０－４，１０－５）。取细胞培养上清或细胞
检测拟定的观察指标。
２５ ＮＯ代谢产物亚硝酸盐、ＥＴ１测定
测定操作程序按试剂盒说明书进行。
２６ 内皮细胞内ＮＯＳ的检测（免疫组化法）
参照ＮＯＳ产品说明书的方法略加改进。镜检，
将图象读入计算机，每组取５０个细胞，用图象分析
仪扫描其吸光度、灰度值等，代表 ＮＯＳ的相对含量，
并做统计学处理。细胞的密度参数是利用摄象机输
入细胞图象信息的光电转换原理，将细胞在同一光
源下吸收光的数值作为吸光度。平均灰度是指图象
中黑白深浅的程度（分为２５６级），最黑的灰度为０；
最白的灰度为２５６。
２７ 细胞总ＲＮＡ的提取
２７１ 细胞总 ＲＮＡ的提取 离心收集细胞 ５×
１０６，按ＴＲＩＺＯＬＲｅａｇｅｎｔ（ＧＩＢＣＯ）说明操作。紫外分光
光度计测 Ａ２６０，Ａ２８０值以及 Ａ２６０／Ａ２８０比值，判断 ＲＮＡ
的含量及纯度，－７０℃保存备用。
２７２ 总 ＲＮＡ的甲醛变性电泳［５］ 制备琼脂糖、
５×ＭＯＰＳ和甲醛终浓度分别为１％，１×和２２ｍｍｏｌ·
Ｌ－１的变性凝胶，制备样品，将凝胶浸入 １×ＭＯＰＳ
中，点样［４５μＬＲＮＡ（２０μｇ）］，８０Ｖ电压降进行电
泳，结束后，凝胶浸入０５μｇ·ｍＬ
－１ＥＢ溶液中染色，
紫外透射反射仪下照相，记录２８，１８ｓ位置。
２８ ＲＴＰＣＲ
采用 ＧＩＢＣＯＢＲＬ的 ＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔＴＭＣｈｏｉｃｅＳｙｓｔｅｍ
ｆｏｒｃＤＮＡＳｙｎｔｈｅｓｉｓ试剂盒，利用所提总ＲＮＡ为模板，
进行单链ｃＤＮＡ的合成。
根据 ＭｉｙａｈａｒａＫ等［６］发表的 ｅＮＯＳ的 ｃＤＮＡ序
列合成上下游引物，分别为：
上游引物（５’）：５’ＣＡＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＧＡＣ
ＡＣＡＴＣＡＣ３’；下游引物（３’）：５’ＣＣＡＣＣＡＴＴＡ
ＣＴＴＴＧＧＣＴＧＴＴＴＣ３’；根据 Ｂｌｏｃｈ等［７，８］发表的
ＥＴ１的ｃＤＮＡ序列合成上下游引物，分别为：上游引
物（５’）：５’ＧＣＴＣＡＴＧＡＴＴＴＴＣＴＣＴＣＴＧＣＴＧ
３’；游引物（３’）：５’ＴＣＧＧＧＡＧＴＧＴＴＧＡＣＣＣＡＡ
ＡＴＧＡ３’。
两引物之间的 ｃＤＮＡ片段长分别为 ５７１ｂｐ和
２３０ｂｐ，ＰＣＲ所需的变性、退火和延伸温度分别为
９５，５８，７２℃，反应时间分别为：１，１，１ｍｉｎ，反应体积
为５０μＬ，共进行 ４０轮循环，分别于 ２５，３０，４０轮取
样，每次取样 １０μＬ，在 １２％琼脂糖凝胶上进行电
泳分析，分子质量标准为经 ６种内切酶消化的
ＰＢＲ３２２，电泳缓冲液为 １×ＴＢＥ。电泳完毕后，用溴
化乙锭（ＥＢ）染色，凝胶成像系统分析 ＰＣＲ产物的 Ａ
×ｍｍ值，并拍照。
２９ 统计方法
所有结果的显著性差异检验均采用成组资料的
ｔ检验进行处理，结果以珋ｘ±ｓ表示。
３ 结果
３１ 牡荆素鼠李糖苷对内皮细胞培养上清中 ＮＯ，
ＥＴ１含量的影响
模型组内皮细胞分泌ＮＯ水平较正常组明显降
低，ＥＴ１分泌水平则明显增高，与模型组比较有显
著性。不同浓度的牡荆素鼠李糖苷均可明显增加
ＮＯ含量；终浓度为１０４ｍｏｌ·Ｌ１的牡荆素鼠李糖苷能
明显减少细胞培养上清中ＥＴ１的含量，不同浓度药
物的作用无明显差异（表１）。
３２ 牡荆素鼠李糖苷对内皮细胞内ＮＯＳ表达的影响
内皮细胞经缺氧再给氧损伤后，细胞内 ｅｃＮＯＳ，
ｉＮＯＳ表达量明显减少，细胞内染色颗粒的积分吸光
·７６５·
第３１卷第７期
２００６年４月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ３１，Ｉｓｓｕｅ ７
Ａｐｒｉｌ，２００６
表１ 各组内皮细胞培养上清中ＮＯ，ＥＴ１含量；内皮细胞内ｅｃＮＯＳ，ｉＮＯＳ比较（珋ｘ±ｓ）
组别
剂量
／ｍｏｌ·Ｌ－１
ＮＯ（ｎ＝１０）
／ｎｍｏｌ·Ｌ－１
ＥＴ１（ｎ＝１０）
／ｐｇ·ｍＬ－１
ｅｃＮＯＳ（ｎ＝５０） ｉＮＯＳ（ｎ＝５０）
积分光度 平均灰度 积分光度 平均灰度
正常对照 ８．５０±３．３１３） ９．９７±２．９０２） １１８．１±３５．４７３） １６０．１±２０．０１３） ５６．５１±１９．２５３） １８７．３±６．７６３）
模型对照 ３．７９±０．６８ １６．６３±２．８４ ５５．９３±１６．９１ １８３．７０±１２．５１ ４３．３６±１５．３３ １９１．４０±８．２１
牡荆素鼠李糖苷 １０－３ ５．４６±０．７５３，４） １６．３２±４．３０４） ６８．０３±２１．２６２，６） １８３．９±７．０５６） ４６．０６±１５．２８５） １８５．００±６．３９３）
１０－４ ５．１９±１．１９２，５） １１．５０±２．５５２） ７５．２２±１４．３６３，６） １７２．９±１２．８５３，６） ４９．６０±１５．２３１，４） １８３．８０±７．０４３，４）
１０－５ ５．５４±２．２１１，４） １４．３４±３．０１５） ６０．７±１５．４８６） １７６±８．７６３，６） ４９．７２±１９．６０６） １８３．１０±５．４３３，６）
注：与模型组比较１）Ｐ＜０．０５，２）Ｐ＜０．０１，３）Ｐ＜０．００１；与正常组比较４）Ｐ＜０．０５，５）Ｐ＜０．０１，６）Ｐ＜０．００１
度明显降低，平均灰度明显升高，与正常对照组比较
Ｐ＜０００１。牡荆素鼠李糖苷３个用药浓度均可不同
程度地增加其表达（表１）。
３３ 牡荆素鼠李糖苷对内皮细胞 ＥＴ１，ＮＯＳｍＲＮＡ
表达的影响
３３１ 内皮细胞总 ＲＮＡ的提取 用 ＴＲＩＺＯＬＴＭ
Ｒｅａｇｅｎｔ，可以从 ５×１０６内皮细胞在提取约 １０～１００
μｇ的总ＲＮＡ，提取的样品 Ａ２６０／Ａ２８０一般在１８～２０
之间，说明样品蛋白质去除干净。经甲醛变性电泳
分析，可见清晰的２８ｓ和１８ｓ条带，未见其他杂带，
说明提取及保存过程中未使ＲＮＡ降解。
３３２ 牡荆素鼠李糖苷对内皮细胞 ＥＴ１，ＮＯＳｍＲ
ＮＡ表达的影响 用自动凝胶扫描仪扫描 ＲＴＰＣＲ
产物凝胶电泳结果，以其 Ａ×ｍｍ代表ｍＲＮＡ的相对
含量。缺氧再给氧损伤的内皮细胞 ＥＴ１ｍＲＮＡ相
对表达量（图 １）由（０２８７±００６３）升至（０９０７±
００７９），升高３１６倍。牡荆素鼠李糖苷３种用药浓
度分别使损伤细胞 ＥＴ１ｍＲＮＡ相对表达量降低
５４５％，３７９％和 １５４％。各用药浓度的抑制作用
具有一定的剂量依赖关系。
ＮＯＳｍＲＮＡ相对表达量（图 ２）由（２００６±
０１３５）降至（１０８９±０１４９），降低４５７％。牡荆素鼠
李糖苷３种用药浓度分别使损伤细胞 ＮＯＳｍＲＮＡ相
对表达量升高 ６２２％，２５２％，２３１％，模型组比较
差异均有显著性。１０－３ｍｏｌ·Ｌ－１组效果好于１０－４ｍｏｌ
·Ｌ－１和１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１浓度组（Ｐ＜００１）。
４ 讨论
血管内皮细胞能产生多种血管活性物质，这些
物质具有调节血管张力、血液流动性与黏附性等功
能状态的作用。实验中以其中 ＥＴ１，ＮＯ，ＮＯＳ活性，
从蛋白和 ｍＲＮＡ转录２个层次，观察了牡荆素鼠李
糖苷对内皮源血管活性物质的影响及其机制。
ＮＯ主要由血管内皮细胞产生，合成 ＮＯ的前体
物质 Ｌ精氨酸（Ｌａｒｇｉｎｉｎｅ）在一氧化氮合酶（ＮＯＳ）作
图１ ＥＴｍＲＮＡ表达ＲＴＰＣＲ产物电泳
１βａｃｔｉｎ；２Ｍａｒｋｅｒ；３１０
－５ｍｏｌ·Ｌ－１；４１０－４ｍｏｌ·Ｌ－１；
５１０－３ｍｏｌ·Ｌ－１；６模型；７正常
图２ ＮＯＳｍＲＮＡ表达ＲＴＰＣＲ产物电泳
１，８βａｃｔｉｎ；２正常；３模型；４１０
－３ｍｏｌ·Ｌ－１；
５１０－４ｍｏｌ·Ｌ－１；６１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１；７Ｍａｒｋｅｒ
用下，由 Ｌ精氨酸的胍基部分的氮分解产生，具有
多种心血管效应：舒张血管平滑肌、抗血小板凝集、
抗血小板和血细胞黏附、抗血管平滑肌细胞增生等。
有研究证实，缺血再灌注的早期，即出现内皮依赖
的冠状动脉扩张功能损伤，ＮＯ合成障碍，并有心肌
白细胞浸润和心肌细胞坏死［９］。因而认为 ＥＣ的
ＮＯ合成减少是缺血再灌注损伤的重要病理改
变［１０］。本研究表明，所采用的３个浓度的牡荆素鼠
李糖苷均可在一定程度上逆转缺氧再给氧损伤所造
成的内皮细胞 ＮＯ产量的减少。但 ＮＯ在体内的半
衰期很短，一经生成便迅速降解，因而ＮＯＳ是 ＮＯ合
成的一个限速因素。根据 ＮＯＳ对钙的依赖性不同，
可将 ＮＯＳ分为原生型和诱生型两大类。原生型
ＮＯＳ（ｃＮＯＳ，存在于内皮细胞的为 ｅｃＮＯＳ）和诱生型
ＮＯＳ（ｉＮＯＳ）。进而用免疫组化及 ＲＴＰＣＲ的方法观
·８６５·
第３１卷第７期
２００６年４月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ３１，Ｉｓｓｕｅ ７
Ａｐｒｉｌ，２００６
察到牡荆素鼠李糖苷还可升高损伤后内皮细胞 ｅｃ
ＮＯＳ，ｉＮＯＳ的产量和ｅｃＮＯＳｍＲＮＡ表达，且有一定的
剂量依赖性。综合 ＮＯ和 ＮＯＳ的情况来看，牡荆素
鼠李糖苷对损伤后内皮细胞 ＮＯ产量影响的机理，
可能是首先增加了ＮＯＳｍＲＮＡ的表达量，使 ＮＯＳ的
产量增加、活性增强，进而使内皮细胞利用 Ｌ精氨
酸合成ＮＯ的能力增强，最终表现为ＮＯ分泌量的增
加。也有实验表明，Ｌ精氨酸或 ＮＯ供体等能抑制
白细胞向心肌的黏附浸润，减少心肌细胞坏死，减轻
缺血再灌注损伤［１１］。
ＥＴ为含２１个氨基酸的多肽，人的血管内皮细
胞主要产生 ＥＴ１。ＥＴ是迄今所知作用最强的收缩
血管物质，它比ＡｎｇⅡ至少强１０倍。与ＥＴ１升高有
关的病例主要为高血压、心肌缺血、肾功能衰竭等。
通过内皮细胞培养上清中 ＥＴ１含量和 ＥＴ１ｍＲＮＡ
表达检测发现，牡荆素鼠李糖苷能明显抑制缺氧再
给氧后ＥＴ１ｍＲＮＡ的过度表达、ＥＴ１产量的增加。
从以上结果可以推测牡荆素鼠李糖苷扩张血
管、保护损伤的心肌组织作用，可能与其可以从基
因、蛋白水平影响内皮细胞增加内皮细胞 ＮＯ和
ＥＴ１分泌量有关，这可能是其扩张血管和用于治疗
缺血性心脏病的机制之一。
［参考文献］
［１］ 李连达，靖雨珍．中医药研究．北京：科学技术文献出版社，
２００１．４７０．
［２］ 朱晓新，李连达，刘建勋，等．牡荆素鼠李糖苷对缺氧再给氧
损伤心肌细胞的保护作用研究．中国天然药物，２００３，１（１）：
４４．
［３］ 日本组织培养学会．组织の培养技术．第２版，东京：朝仓书
店，１９８８．１５７．
［４］ ＺｈｏｕＸＢ，ＺｈａｉＸＬ，ＭｕｈａｍｍａｄＡｓｈｒａｆｌ．Ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｏｆｂｏｖｉｎｅ
ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ．ＣｉｒｃＲｅｓ，１９９６，７８，（１）：７３．
［５］ ＪＳａｍｂｒｏｏｋ，ＥＦＦｒｉｔｓｃｈ，ＴＭａｎｉａｔｉｓ．分子克隆实验指南．第２
版，北京：科学出版社，１９９３．３６６．
［６］ ＭｉｙａｈａｒａＫ，ＫａｗａｍｏｔｏＴ，ＳａｓｅＫ，ｅｔａｌ．Ｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｈｕｍａｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅｇｅｎｅ．
ＥｕｒＪＢｉｏｃｈｅｍ，１９９４，２２３（３）：７１９．
［７］ ＢｌｏｃｈＫＤ，ＦｒｉｅｄｒｉｃｈＳＰ，ＬｅｅＭＥ，ｅｔａｌ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ
ａｎｄｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌａｓｓｉｇｎｍｅｎｔｏｆｔｈｅｇｅｎｅｅｎｃｏｄｉｎｇｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ．ＪＢｉｏｌ
Ｃｈｅｍ，１９８９，２６４（１８）：１０８５１．
［８］ ＬｅｅＭＥ，ＢｌｏｃｈＫＤ，ＣｌｉｆｏｒｄＪＡ，ｅｔａｌ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅ
ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ１ｇｅｎｅｐｒｏｍｏｔｅｒｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒａｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓｐｅｃｉｆｉｃ
ｃｉｓａｃｔｉｎｇｓｅｑｕｅｎｃｅ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，１９９０，２６５（１８）：１０４４６．
［９］ ＫｕｂｅｓＰ，ＳｕｚｕｋｉＭ，ＧｒａｎｇｅｒＤＮ．Ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ：ａｎｅｎｄｏｂｅｎｓｉｓｍｏｄ
ｕｌａｔｏｒｏｆｌｅｕｋｏｃｙｔｓａｄｈｅｓｉｏｎ．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，１９９１，８８：
４６５１．
［１０］ ＬｅｆｅｒＡＭ，ＴｓａｏＰＳ，ＬｅｆｅｒＤＪ，ｅｔａｌ．Ｒｏｌｅｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｄｙｓｆｕｎｃ
ｔｉｏｎｉｎｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙａｆｔｅｒｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉ
ａ．ＦＡＳＥＢＪ，１９９１，５：２０２９．
［１１］ ＷｅｙｒｉｃｈＡＳ，ＭａＸＬ，ＬｅｆｅｒＡＭ．ＴｈｅｒｏｌｅｏｆＬａｒｇｉｎｉｎｅｉｎａｍｅｌｉｏ
ｒａｔｉｎｇｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙａｆｔｅｒｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａｉｎｔｈｅｃａｔａ．Ｃｉｒｃｕ
ｌａｔｉｏｎ，１９９２，８６：２７９．
Ｅｆｅｃｔｏｆｖｉｔｅｘｉａｒｈａｍｎｏｓｉｄｅ（ＶＲ）ｏｎｖａｓｏｍｏｔｏｒｆａｃｔｏｒｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌ
ＺＨＵＸｉａｏｘｉｎ１，ＬＩＬｉａｎｄａ２，ＬＩＵＪｉａｎｘｕｎ２，ＬＩＵＺｈｉｙｕｎ２，ＭＡＸｕｅｙｉｎｇ２
（１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ；
２．ＸｉｙｕａｎＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００９１，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｖｉｔｅｘｉａｒｈａｍｎｏｓｉｄｅ（ＶＲ）ｏｎｖａｓｏｍｏｔｏｒｆａｃｔｏｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌ（ＥＣ）
ｄａｍａｇｅｄｂｙｈｙｐｏｘｉａａｎｄｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅｄｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｖｅｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ（ＨＵＶＥＣｓ）ｗｅｒｅｓｕｂｊｅｃｔｔｏｉｓｃｈｅｍｉａ
ａｎｄｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｆｏｌｏｗｉｎｇｈｙｐｏｘｉａａｎｄｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎ．ＴｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＥＴ１，ＮＯａｎｄＮＯＳｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒｉｎｃｕｌｔｕｒｅｓｕｐｅｒｔａｎａｎｔｓｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｂｙ
ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｉｔｙ，Ｇｒｉｅｓｓａｎｄｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＡｎｄｔｈｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＥＴ１ａｎｄＮＯＳｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｂｙｒｅ
ｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＶＲａｔｄｉｆｅｒｅｎｔｄｏｓｅｓｍａｒｋｅｄｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＮＯＳ，ｅｎ
ｈａｎｃｅｄｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｖａｓｏｄｉｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒＮＯ，ａｎｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｖａｓｏｃｏｎｓｔｒｉｃｔｉｎｇｆａｃｔｏｒＥＴ１ｏｆ
ＥＣ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＷｅｈａｖｅｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔＶＲｈａｄｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｅｆｅｃｔｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｖａｓｏａｃｔｉｖｅｓｕｂｓｔａｎｃｅｓｏｆＥＣｄａｍａｇｅｄｂｙｈｙ
ｐｏｘｉａａｎｄｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｇｅｎｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｏｆｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｖｉｔｅｘｉａｒｈａｍｎｏｓｉｄｅ；ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌ；ｈｙｐｏｘｉａａｎｄｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎ；ｖａｓｏｍｏｔｏｒｆａｃｔｏｒｓ ［责任编辑 方文贤］
·９６５·
第３１卷第７期
２００６年４月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ３１，Ｉｓｓｕｅ ７
Ａｐｒｉｌ，２００６