全 文 ：黄连解毒汤抗肿瘤作用的实验研究
孙 健 t o温庆辉 t o宋 宇 u o李 夏 t o金 瑾 t o马吉胜 v o周秋丽 t3
kt1吉林大学 药学院 o吉林 长春 tvssut~ u1吉林大学 畜牧兽医学院 o吉林 长春 tvssut~
v1吉林天药科技股份有限公司 o吉林 长春 tvsstul
≈摘要 目的 }研究黄连解毒汤的抗肿瘤作用 ∀方法 }采用 uu小鼠肝癌实体瘤移植性肿瘤模型进行体内实
验 o通过检测抑瘤率 !胸腺指数 !脾脏指数等指标观察黄连解毒汤的体内抑瘤作用及对免疫器官的影响 ∀并运用血
清药理学方法研究了对人结肠癌 ≥º¬¯¯ o¨人肺腺癌 ≥°≤ 2 2to人胃癌 ≥≤ 2z|sto人乳腺癌细胞 ≤ƒ2z体外生长的抑
制作用 ∀结果 }对荷瘤小鼠肝癌 uu在体内有抗肿瘤活性 o抑瘤率大 !中 !小剂量组分别为 wx1wxh kΠ s1sstlo
u{1zvh kΠ s1sxlotz1z{h ∀含药血清在体外用 ××法测试结果显示 o对 w种人瘤株 o大 !中剂量组抑瘤作用均呈
现极显著差异 kΠ s1sstl∀结论 }黄连解毒汤对 uu小鼠肝癌实体瘤有一定的体内抗肿瘤活性 o并具剂量依赖
性 ~其含药血清体外对 w种人的肿瘤细胞也有一定抑制作用 ∀
≈关键词 黄连解毒汤 ~ uu小鼠肝癌实体瘤 ~血清药理学 ~抗肿瘤作用
≈中图分类号 u{x1x ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussyltz2twyt2sv
≈收稿日期 ussx2tt2uw
≈基金项目 吉林省中医药管理局中医药科研课题 kussw2
ttvl
≈通讯作者 3 周秋丽 oר¯} kswvtlxyt|ztyo∞2°¤¬¯} ¶∏±¬¤±®º
tyvq¦²°
黄连解毒汤 k⁄×l由黄连 !黄芩 !黄柏 !栀子组
成 o为常用清热解毒代表方剂 o文献报道该方含有小
檗碱 !黄芩素等 ≈t 抗肿瘤活性成分 o有明显抑制恶性
肿瘤的作用 o临床用于治疗胰腺癌 !乳腺癌 !肝癌 !大
肠癌 ≈uov ∀为观察黄连解毒汤抗肿瘤的疗效 o作者对
其进行了抗肿瘤药效学研究 o考察黄连解毒汤对 uu
小鼠肝癌实体瘤的抑制作用 o对脾脏 !胸腺等免疫器
官的影响 o并运用血清药理学试验 o研究其对人结肠
癌 ≥º¬¯¯ !¨人肺腺癌 ≥°≤22t!人胃癌 ≥≤2z|st!人乳
腺癌细胞 ≤ƒ2z体外增殖的抑制作用 ∀
1 材料
111 药物 黄连 !黄芩 !黄柏 !栀子均购于长春市药
材公司 o经吉林大学白求恩医学部生药教研室王广
树教授鉴定为毛茛科植物黄连 Χοπτισ χηινενσισ
ƒµ¤±¦«干燥根茎 o唇形科植物黄芩 Σχυτελλαρια βα2
ιχαλενσισ ²¨µª¬干燥根 o芸香科植物黄檗 Πηελλοδεν2
δρον αµ υρενσε ∏³µ1除去栓皮的干燥树皮 o茜草科
植物栀子 Γαρδενια ϕασµ ινοιδεσ ∞¯¯¬¶的干燥成熟果
实 ∀阳性对照药环磷酰胺 k≤×÷ lo上海华联制药有
限公司出品 o批号 sxsztx∀
112 动物与瘤株 健康雌性昆明种小鼠 o体重
t{ ∗ uu ªo由长春高新医学动物实验研究中心提供 o
合格证号 }sss{{tv∀人肺腺癌 ≥°≤ 22t!人结肠癌
细胞 ≥º¬¯¯ !¨灌胃癌 ≥≤ 2z|st!人乳腺癌细胞 ≤ƒ2z
购自吉林省肿瘤研究所 ∀
113 仪器 ≤u培养箱 k ∞ ⁄2yvwxs德国 l~倒
置显微镜 k≠ °≥ ≤u日本 l~酶标仪 k ×∞≤
澳地利 l~低速离心机 k⁄u ∃ 北京医用离心机
厂 l~
usw ∃ 型单量程 trts万电子天平 k上海
梅特勒 2托利多仪器有限公司 l~ |y孔培养板 k≤²¶·¤µ
美国 l∀
114 试剂 胎牛血清 }北京元亨圣马生物技术研究
所 ~ ° 2tyws培养基 }美国 ¼¦¯²±¨公司 ~谷氨酰
胺 }美国
≤公司 ~胰蛋白酶 }⁄¬©¦²公司进口 o长
春宝泰克生物科技公司分装 ~四甲基偶氮唑盐
k ××lo∞°∞≥o⁄ ≥均为美国 ≥¬ª°¤公司 ∀
2 方法
211 ⁄×药液制备 复方煎煮 }黄连 !黄芩 !黄
柏 !栀子按原方比例 kvΒuΒuΒvl煎煮 u次 o分别加
ts倍 !{倍的水煎煮 ysows °¬±o合并煎煮液 o浓缩至
每毫升含生药 t1w ªo置 w ε 冰箱保存备用 ∀
212 动物分组及给药剂量 取雌性昆明种小鼠 ys
只 o体重 t{ ∗ uu ªo随机分为 x组 o每组 tu只 ∀分别
为对照组 o灌胃生理盐水 o用量 us °# ®ªpt ~环磷
#tywt#
第 vt卷第 tz期
ussy年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφΧηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vto¶¶∏¨ tz
≥ ³¨·¨°¥¨ µoussy
酰胺组 k≤×÷ lo剂量 ux °ª# ®ªpt ~⁄×大 !中 !小
剂量组 ow|1xoty1x ox1x ª# ®ªpt ∀ ⁄×大 !中 !小
剂量分别相当于 ys ®ª成人日用量的 |ovot倍 ∀
213 给药方法 各组按常规方法 ≈w 接种 uu瘤
株 o瘤细胞 k冰浴 lu ≅ tsz # °pt o每鼠于右前腋下
接种 s1u °o接种次日开始给药 o每日 t次 o用药 {
§∀各组小鼠均于末次给药后 t «进行以下试验 }
称重后 o摘眼球取血 o滴入离心管内 o全血于 vz ε 温
孵 vs °¬±后 ov xss µ# °¬±pt离心 ts °¬±o吸取上部
血清 o同组血清合并 os1uu Λ°微孔滤膜过滤除菌 o
置 pus ε 冰箱保存备用 ∀颈椎脱臼处死 o完整剥离
瘤块 o取胸腺 !脾脏 o精密电子天平称重并记录 o分别
计算肿瘤抑制率 !胸腺指数 !脾脏指数 ∀
肿瘤抑制率 kh l ≈k对照组平均瘤重 p给药组平均瘤
重 l r对照组平均瘤重 ≅ tssh
胸腺指数 胸腺平均重量 k°ªl r平均体重 kªl
脾脏指数 脾脏平均重量 k°ªl r平均体重 kªl
214 细胞培养 将 w种人肿瘤细胞分别接种在
tsh胎牛血清的 ° 2tyws培养液中 o置于温度为
vz ε o xh ≤u培养箱中饱和湿度下培养 o传 v代
后 o取对数生长细胞 o用胰酶消化传代 o配成
t ≅ tsx # °pt细胞悬液接种于 |y孔板中 o每孔 tss
Λ∀培养 uw «后 o换入含 ush不同实验组血清的
培养液 o每组 ts个复孔 ∀培养箱中连续培养 zu «o
加入 ts Λx °ª# °pt的 ××溶液 o继续培养 w «
后吸去上清液 o每孔加入二甲基亚枫 txs Λo振荡
至溴代噻唑蓝完全溶解 o在 xzs ±°波长处用酶标仪
测其吸光度 kΑ) ,测定时需减去空白对照的 Α∀
细胞生长抑制率 k≤h l ≈k对照组 Α p给药组 Α) /对
照组 Α ≅ tssh
215 统计学处理 各项参数均以 cξ ? σ表示 o数据
用 ≥°≥≥tt1s软件分析 o并用 ¨ º°¤±2¨ ∏¯¶和 ⁄∏±2
± ·¨π¶进行组间比较 ∀
3 结果
311 黄连解毒汤对小鼠 uu肝癌实体瘤的抑制作
用 抑瘤率与给药剂量呈较好的量 !效关系 o该药各
剂量组的给药后体重与对照组相比无显著性差异
k表 tl∀
312 黄连解毒汤对 uu荷瘤小鼠免疫器官的影响
环磷酰胺组和 ⁄×大剂量组的脾脏 k胸腺 l指
数与对照组相比均有显著性差异 o中 !小剂量组对脾
脏 k胸腺 l指数无影响 k表 ul∀
表 t 黄连解毒汤对小鼠 uu肝癌实体瘤的抑制作用 kcξ ? σl
组 别
剂量
rª# ®ªpt
ν
体重 rª
给药前 给药后
瘤重
rª
抑瘤率
rh
对照组 p tu t|qv ? sqww vvq{ ? vqux uqtt ? sqx{
≤×÷ sqsux tu t|qz ? sqwz u|qv ? uqwutl sqy| ? squwvl yzqut
⁄× w|qx tt t|qy ? sqzv vvqt ? vqy| tqtx ? sqyzvl wxqwx
tyqx tt usqu ? sqwy vwqu ? vqys tqxt ? sqzuul u{qzv
xqx tt usqv ? sqyz vwqw ? wqsy tqzw ? sq|{ tzqz{
注 }与对照组比较 tl Π s. sx, u) Π s. st, v) Π sqsst k表 uov同 l
表 u 黄连解毒汤对 uu荷瘤小鼠免疫器官指数的影响
组别
剂量
rª# ®ªpt
ν
脾脏指数
r°ª# ªpt
胸腺指数
r°ª# ªpt
对照组 p tu zqw{z ? uqzy| uqyyu ? sq{ww
≤×÷ sqsux tu wqt{w ? tqtswvl tqvut ? sqxxtvl
⁄× w|qx tt yqt|| ? tq{xwul tqy{s ? sqzwxvl
tyqx tt zqvzx ? uqstu uq{tz ? tqu{w
xqx tt zqwu{ ? tqwzz uqutw ? sqyzv
313 含药血清对 w种人肿瘤细胞株的体外抑制作
用 ≤×÷血清 !⁄×大 !中剂量组含药血清的 Αxzs
与空白血清相比 o差异极显著 kΠ s1ssto表 vl∀
4 讨论
作者选择了 uu肝癌实体瘤移植于昆明种小
白鼠 o用黄连解毒汤进行实验研究 o结果表明 }该药
对小鼠 uu实体瘤抑瘤率在大 !中 !小剂量组中分
别为 wx1wxh ou{1zvh otz1z{h o呈良好的量效依
赖关系 o其中大剂量组的抑瘤率均超过 vsh o符合
抗癌药筛选标准 o而且大 !中剂量组瘤重与对照组相
比有显著性差异 o其中大剂量组差异极显著 kΠ
s1sstl∀该方大剂量组脾脏 k胸腺 l指数有所降低 o
说明该方仅在大剂量应用时有一定的免疫抑制作
用 ~但中 !小剂量组脾脏 k胸腺 l指数无任何影响 o且
仍有抗肿瘤作用 ∀
基于吸收入血并发挥药理作用的成分 o才是真
正有效成分的思想 o本试验观察了含药血清对肿瘤
细胞体外生长的影响 o对其抗肿瘤作用进行再评价 ∀
结果显示 o对 w种人的瘤株 o⁄×大 !中剂量组含
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表 v ush含药血清对人结肠癌 ≥º¬¯¯ !¨人乳腺癌细胞 ≤ƒ2zo人肺腺癌 ≥°≤ 22to人胃癌 ≥≤ 2z|st
的体外抑制作用 kcξ ? σ, ν tsl
组别
剂量
rª# ®ªpt
抑制率 rh
≥º¬¯¯¨ ≤ƒ2z ≥°≤ 2 2t ≥≤ 2z|st
空白血清 p p p p p
≤×÷血清 sqsux vwqut ? uqyuvl u{qyu ? wqsuvl w{qy| ? uqyvvl vwqy ? yq{zvl
⁄×血清 w|qx vsqty ? uqvwvl vyqtw ? vqxtvl w|qvz ? vqz|vl wxqy ? uqvvvl
tyqx u|qv{ ? vqwyvl uxqty ? vqzyvl w{qxt ? wq{wvl v{qu ? vq|wvl
xqx xqtu ? zqwu tzqx{ ? yqwsul usqzu ? uqyyul uuqw ? wqvzul
药血清与空白血清相比 o均呈现极显著差异 kΠ
s1sstlo且抑制率接近或超过环磷酰胺组血清 o这
一结果证明该中药血清有抑制此 w种肿瘤细胞增殖
作用 o间接证明该复方在体内可起到抗肿瘤作用 ∀
≈参考文献
≈t 孙 健 o马吉胜 o金 瑾 o等 q黄连解毒汤各成分的 °≤ r
∂ r ≥定性与定量的测定方法研究 ≈ q药学学报 oussyowt
kwl}v{sq
≈u 钱伯文 q肿瘤的辨证施治 ≈ q上海 }上海科学技术出版社 o
t|{s} {tq
≈v 常敏毅 q实用抗癌方剂 ≈ q北京 }中国医药科技出版社 o
t||{} t|zq
≈w 李仪奎 q中药药理实验方法学 ≈ q上海 }上海科学技术出版
社 ot||t} xtuq
Στυδψ ον αντιτυµ ορ αχτιϖιτιεσ οφ Ηυανγλιαν ϑιεδυ δεχοχτιον
≥¬¤±t o • ∞±¬±ª2«∏¬t o ≥ ≠∏u o÷¬¤t o ¬±t o ¬2¶«¨ ±ªv o ±¬∏2¯¬t
(t. Σχηοολοφ Πηαρµ αχψ, ϑιλιν Υνιϖερσιτψ, Χηανγχηυν tvssut, Χηινα; u. Φαρµ ινγ ανδ ΦαρριερΧολλεγε οφ ϑιλιν Υνιϖερσιτψ,
Χηανγχηυν tvssut, Χηινα; v. ϑιλιν ΝατυραλΠηαρµ ατεχη Χο. , Λτδ, Χηανγχηυν tvsstu, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¶·∏§¼ ·«¨ ¤±·¬·∏°²µ¤¦·¬√¬·¼ ²©∏¤±ª¯¬¤± ¬¨§∏ §¨ ¦²¦·¬²±k⁄×lq Μετηοδ : ±·¬·∏°²µ¤¦·¬√¬·¬¨¶
º µ¨¨ ·¨¶·¨§¬± °¬¦¨ º¬·« ¬¨³¨ µ¬° ±¨·¤¯ ·∏°²µuu ιν ϖιϖοo ¤±§·«¨ ·«¼°∏¶¬±§¨ ¬o ¶³¯¨¨ ± ¬±§¨ ¬¤±§·∏°²µ¬±«¬¥¬·²µ¼ µ¤·¨º µ¨¨ √¨¤¯∏¤·¨§q
׫¨ ©¨©¨¦·¶²± ¦¤±¦¨µ¦¨¯¯¶©µ²° «∏°¤± º µ¨¨ ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨§ ιν ϖιτρο ∏¶¬±ª¶¨µ∏° ³«¤µ°¤¦²¯²ª¬¦¤¯ ¤³³µ²¤¦«q ≥º¬¯¯ o¨ ≥°≤ 22to ≥≤ 2z|st
¤±§ ≤ƒ2z ¦¤±¦¨µ¦¨¯¯¶º µ¨¨ ¬±¦∏¥¤·¨§¬± ¦∏¯·∏µ¨ ° §¨¬¤¦²±·¤¬±¬±ª¶¨µ∏° ©µ²° °¬¦¨ ° §¨¬¦¤·¨§º¬·«⁄×q ׫¨ ¬±«¬¥¬·²µ¼ ©¨©¨¦·¶²©
⁄× ¶¨µ∏° º µ¨¨ ²¥¶¨µ√ §¨¥¼ ×× ¤¶¶¤¼q Ρ εσυλτ: ⁄× ¶«²º §¨¶¬ª±¬©¬¦¤±·¤±·¬·∏°²µ¤¦·¬√¬·¬¨¶²± uu ¬± °¬¦¨q ¯¯ ²©·«¨ ⁄×
¶¨µ∏° ¬± §¬©©¨µ¨±·§²¶¤ª¨ ªµ²∏³¶¦²∏¯§«¬ª«¯¼ ¬±«¬¥¬··«¨ ³µ²¯¬©¨µ¤·¬²± ²©w ¦¤±¦¨µ¦¨¯¯ ¬¯± ¶¨©µ²° «∏°¤±q Χονχλυσιον: ׫¨ ⁄× ¦¤±
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[ Κεψ ωορδσ] ∏¤±ª¯¬¤± ¬¨§∏§¨ ¦²¦·¬²±~ ·∏°²µuu ¬± °¬¦¨~ ¶¨µ∏°2³«¤µ°¤¦²¯²ª¼~ ¤±·¬·∏°²µ¤¦·¬√¬·¼
≈责任编辑 古云侠
更正 }本刊 ussy年第 tw期第 ttzv页图 u应为下图 ∀本刊失误 o特向作者 !读者致歉 d
图 u u个蛋白点的局部放大图像
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