全 文 ：乌骨藤药材脂溶性成分的 ≤指纹图谱研究
赵陆华 tou o相秉仁 tou3 o李晓晶 tou o杨丽莉 v
kt1药物质量与安全预警教育部重点实验室 o江苏 南京 utsss|~
u1中国药科大学 分析测试中心 o江苏 南京 utsss|~
v1南京市环境监测中心站 o江苏 南京 utsstv l
≈摘要 目的 }采用 ≤和 ≤ 2 ≥色谱法研究并建立各产地乌骨藤药材脂溶性成分的指纹图谱 ∀方法 }采用
毛细管气相色谱分析 o⁄
2x石英毛细管柱 ks1ux °° ≅ vs °os1ux Λ°l~程序升温 o柱温 zs ε k保持 x °¬±lo以 {
ε # °¬±pt升至 uss ε k保持 tu °¬±lo再以 x ε # °¬±pt升至 uys ε k保持 ts °¬±l~以高纯氮为载气 ~氢火焰离子化
检测器 kƒ⁄lo检测器温度 vss ε ~气化室温度 u{s ε ~分流比 tsΒt∀结果 }乌骨藤药材指纹图谱选定了 tx个共有
峰 o质谱分析鉴定出其成分 o并对不同产地药材进行聚类分析及相似度评价 ∀结论 }本法重现性好 o可结合乌骨藤
药材的 °≤指纹图谱评价其质量 ∀
≈关键词 乌骨藤 ~脂溶性成分 ~指纹图谱 ~≤~≤ 2 ≥
≈中图分类号 u{x1x ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussylus2utwy2sw
≈收稿日期 ussz2st2uv
≈基金项目 江苏省自然科学基金项目 k
ussxtssl
≈通讯作者 3 相秉仁 oר¯}ksuxl {vuwtt{xo∞2°¤¬¯}½«¤²¯∏«∏¤
«²·°¤¬¯1¦²°
乌骨藤系萝藦科 ¶¦¯ ³¨¬¤§¤¦¨¤¨ 牛奶莱属植物
乌骨藤 Μαρσδενια τεναχισσιµ α k ²¬¥l1 • ¬ª«·¨·µ±1
的藤茎 ≈t o分布于云南 !贵州 !广西等地 ~性味苦 o微
寒 ~具清热解毒 !止咳平喘 !消炎镇痛等功效 ~可用于
治疗肺炎 !慢性支气管炎 !咳喘等 ≈u o曾经收载于
5云南省药品标准 6t|zw年版和 5中国药典 6t|zz年
版 ∀现代药理学研究表明 o乌骨藤含有的独特化学
成分具有明显的抗肿瘤活性 o是一种有发展前途的
抗癌中药 ≈v ∀乌骨藤含有多种甾体酯苷 !生物碱 !
有机酸 !多糖 !树脂及色素等化学成分 ≈w ∀据报道 o
乌骨藤中脂溶性成分具有一定的药理学活性 ≈x o主
要含有有机酸和甾体类成分 o为对该药材进行全面
的质量评价 o在对该药材的水溶性成分指纹图谱的
研究基础上再对其脂溶性成分的指纹图谱进行研究
十分必要 ∀
目前 o乌骨藤药材脂溶性成分的 ≤指纹图谱
的研究未见报道 o本研究采用气相色谱法对 tv个产
地乌骨藤药材的脂溶性成分进行了系统的指纹图谱
研究 o并对其中的共有峰通过 ≤ 2 ≥进行了鉴别 ∀
为评价不同产地乌骨藤的质量提供客观的依据 ∀
1 仪器与试药
岛津 ≤ ptw
气相色谱仪 oƒ⁄检测器 ~ª¬¯¨ ±·
y{|s p x|zv气 2质联用仪 o浙大 usss型色谱工作
站 ∀高纯氮 ~|xh乙醇和乙酸乙酯为分析纯 ∀
各产地乌骨藤药材来源见表 to经中国药科大
学生药学教研室张勉博士鉴定均为萝藦科植物乌骨
Μ1 τεναχισσιµ α的藤茎 ∀
表 t 样品来源
²1 产地 ²1 产地
t 昆明禄劝 { 贵州
u 贵州 | 云南曲靖
v 云南文山 ts 云南红河
w 云南红河 tt 云南
x 云南玉溪 tu 云南大理
y 云南楚雄 tv 云南楚雄
z 广西
2 方法
211 分析条件
21111 ≤分析条件 色谱柱为 ⁄
2x石英毛细管
柱 ks1ux °° ≅ vs °os1ux Λ°l~检测器温度 vss
ε ~气化室温度 u{s ε ~柱前压 t ®ª~载气高纯氮 ~载
气流速 t1s °# °¬±pt ~尾气流速 xs °# °¬±pt ~分
流进样 o分流比 tsΒt~升温程序 o柱温为 zs ε o保持
x °¬±o然后以 { ε # °¬±pt的速度升至 uss ε o保持
tu °¬±o再以 x ε # °¬±pt的速度升至 uys ε o保持
ts °¬±∀
#ywtu#
第 vu卷第 us期
ussz年 ts月
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ us
¦·²¥¨ µo ussz
21112 ≤ 2 ≥分析条件 同 ≤方法 ∀
质谱条件 电子轰击源 ∞~电子能量 zs ∂¨ ~扫
描范围 µ / ζ xs ∗ xss~离子源温度 uvs ε ~倍增电压
t uxs ∂ ~进样口温度 u{s ε ~传输线 uys ε ∀
212 供试品溶液的制备
取乌骨藤药材粉末 k过 v号筛 l约 u ªo精密称
定 o置 uxs °圆底烧瓶中 o加 |xh乙醇 xs °o加热
回流 u «o放冷 o过滤 o滤液蒸干 o残渣加水 us °溶
解 o移置分液漏斗中 o用醋酸乙酯萃取 u次 o每次 us
°o合并醋酸乙酯层 o浓缩至 t °o即得供试品溶
液 ∀
213 测定方法
分别吸取供试品溶液 u Λo注入气相色谱仪 o
测定并记录色谱图 o结果见图 t∀
图 t 乌骨藤药材 ≤指纹图谱
214 方法学考察
21411 空白试验 精密吸取空白溶剂醋酸乙酯 u
Λo注入气相色谱仪 o记录 ys °¬±内的色谱峰 o并进
行基线补偿 ∀结果表明 o溶剂对乌骨藤药材指纹图
谱中共有峰检出无干扰 ∀
21412 精密度试验 取供试品溶液 k第 t号样
品 lo连续进样 y次 o测得各共有峰相对峰面积的
≥⁄小于 uh o表明进样的精密度良好 ∀
21413 重复性试验 取供试品 k第 t号样品 ly份 o
精密称定 o按照 212项下方法制备供试品溶液 o分别
进样 o测得大多数共有峰相对峰面积的 ≥⁄小于
vh o少数峰相对峰面积的 ≥⁄小于 xh o表明方法
重复性良好 ∀
21414 稳定性试验 取供试品溶液 k第 t号样
品 lo分别在 souowoyo{otu «进样 o测得各共有峰相
对峰面积的 ≥⁄小于 vh o表明样品溶液在 tu «内
稳定 o均可进行测定 ∀
215 样品测定
在上述条件下测定 tv个产地乌骨藤药材样品 o
它们的叠加图见图 u∀
图 u 不同产地乌骨藤的指纹图谱
216 乌骨藤 ≤色谱指纹图谱中共有峰的建立
乌骨藤 ≤指纹图谱中可分离出 us个左右主
要峰 o经过比较道地产区昆明禄劝产的 ts个批号乌
骨藤药材所记录和测定的色谱图后 o从中选定了 tx
个共有峰作为构成乌骨藤脂溶性成分指纹图谱的稳
定的特征峰 ∀在共有峰中 o以 y号峰作为参照峰 o分
别求出各组分与之的相对保留时间和峰面积之比 o
各共有峰相对保留时间的 ≥⁄在 s1wh ∗ w1zh ∀
217 共有峰的 ≤ 2 ≥解析
乌骨藤脂溶性成分经 ≤ 2 ≥分离 o并通过质谱
库检索 o对选定的 tx个共有峰进行了化合物鉴别 o
结果见表 u∀
218 系统聚类分析
本实验以 tv个不同产地的乌骨藤药材为研究
对象 o进行指纹图谱研究 o将各色谱峰相对于内参照
物 ky号峰 l的峰面积量化 k表 vlo得到 tv ≅ tx阶原
始数据矩阵 o运用 ¤·¯¤¥z1s1t软件编写程序对其
进行系统聚类分析 o采用离差平方和法 k• ¤µ§. ¶
·¨«²§lo利用欧氏距离 k∞∏¦¯¬§¨ ¤±l作为样品的测
度 otv个样品基本可以分为 v大类 o云南 o贵州 o广
西产的样品各成一类 o聚类结果见图 v∀
图 v 乌骨藤样品聚类谱系图
219 指纹图谱相似度分析
选取昆明禄劝道地产区 ts个批号药材作为共
有模式 ∀以共有模式为参照 o分别采用夹角余弦 !相
#zwtu#
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ us
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表 u 乌骨藤药材脂溶性成分的鉴别
特征峰 化合物 相对分子质量 分子式
t 环己基二甲氧基甲基硅烷 ¦¼¦¯²«¨ ¬¼¯ §¬° ·¨«²¬¼° ·¨«¼o¶¬¯¤±¨ t{{ ≤| us u ≥¬
u 松柏醇 w2«¼§µ²¬¼¬¶²¨ ∏ª¨ ±²¯ t{s ≤ts tu v
v 棕榈酸 ν2«¨ ¬¤§¨ ¦¤±²¬¦¤¦¬§ uxy ≤ty vu u
w 亚油酸 |otu2²¦·¤§¨ ¦¤§¬¨±²¬¦¤¦¬§ u{s ≤t{ vu u
x 油酸 |2²¦·¤§¨ ¦¨±²¬¦¤¦¬§ u{u ≤t{ vw u
y 雄甾烷 2tz2醇 ¤±§µ²¶·¤±2tz2²¯ uzy ≤t| vu
z 萘 2t2羧酸 2u2苯甲酰 u2¥¨ ±½²¼¯ ot2±¤³«·«¤¯ ±¨ ¦¨¤µ¥²¬¼¯¬¦¤¦¬§ uzy ≤t{ tu v
{ 油菜甾醇 ¦¤°³¨ ¶·¨µ²¯ wss ≤u{ w{
| Β2谷甾醇 Β2¶¬·²¶·¨µ²¯ wtw ≤u| xs
ts 豆甾醇 ¶·¬ª°¤¶·¨µ²¯ wtu ≤u| w{
tt 雄甾 2wow2二甲基 2votz2二酮 2t|2羧酸 wow2§¬° ·¨«¼¯ ¤±§µ²¶·¤2votz2§¬²±2t|2²¬¦¤¦¬§ vwy ≤ut vs w
tu 雄甾 2votz2二乙酸基 2z2稀 2y2酮 votz2§¬¤¦¨·²¬¼¤±§µ²¶·2z2¨ ±2y2²±¨ v{{ ≤uv vu x
tv vottous2三酮 2ut2羟基 2孕甾 2w2烯 vottous2·µ¬²± o¨ut2«¼§µ²¬¼o³µ¨ª±2w2¨ ±¨ vww ≤ut u{ w
tw w2孕烯 2yotz2二醇 2vous2二酮 w2³µ¨ª± ±¨2yotz2§¬²¯2vous2§¬²±¨ vwy ≤ut vs w
tx tu2羟基 2voz2二酮 2胆甾烷 2uw2酸甲酯 tu2«¼§µ²¬¼2voz2§¬²¬²2x2¦«²¯¤±2uw2¤·¨ ° ·¨«¼¯ wt{ ≤ux v{ x
关系数为测度 o本研究以 tx个共有峰的峰面积计算
各样品与共有模式间的相似度 ∀
tv个产地乌骨藤指纹图谱相关系数依次为
s1|u{ {os1xts yos1{z{ wos1{v{ yos1x|z uos1{xt xo
s1tzs uos1v{{ wos1{{z sos1z|t tos1{|v xos1zyw to
s1|st |o夹角余弦依次为 s1|yy sos1xzv sos1|vy uo
s1{zy sos1zst vos1|ty vos1wzs sos1yws |os1|uw xo
s1|s| {os1|tw wos1{vv {os1|wz z∀结果表明 o广西产
乌骨藤 kz号样品 l相似度很低 o在聚类分析中 z号样
品也单独聚为一类 o表明相似度计算与聚类分析结果
一致 o两种方法得到了相互验证 ∀对于待测样品 o只
需测得该样品的色谱指纹数据 o计算其与共有模式的
相似度 o即可评价其质量 ∀
3 讨论
311 色谱条件的优化
本试验采用 |sotxsouss ε 等温洗脱时分析速
度慢 o且分离不好 ∀所以采用程序升温 o选择程序升
温条件要按以下原则进行 }一是在所选择的升温程
序下对难分离物质能得到分离 o二是该程序的最终
问题在色谱柱允许的前提下尽可能要高 o以便高沸
点的化合物也可以出峰 ∀比较了升温速率 uoxo{o
ts ε # °¬±pt !终止温度 uxsouysouzs ε o阶梯程序
k一阶 o二阶 o三阶 o四阶 l∀最终确定色谱条件为柱
温 zs ε 保持 x °¬±o然后以 { ε # °¬±pt的速度升至
uss ε o保持 tu °¬±o再以 xε # °¬±pt的速度升至
uys ε o保持 ts °¬±∀该方法得到的色谱峰数较多 o
重复性较好 o在 ys °¬±内可使样品全部色谱峰流
出 o且大部分得到基线分离 ∀
312 提取方法的考察
提取条件的优化选择是保证获得尽可能多色谱
峰的重要因素 ∀考察了乙醚 !石油醚 !醋酸乙酯为提
取溶剂 o加热回流和浸泡的方法 o得到的峰数均较
少 o经比较和不断实验 o最后采用 |xh乙醇回流后
醋酸乙酯萃取的方法 o得到的色谱峰最多 o可以提供
的信息量最大 ∀
313 不同产地药材的差异
不同产地药材指纹图谱的主要差别在于各峰面
积比值不同 o甚至有些样品出现严重的峰缺失 o这些
差别可以用相似度值来进行评价 ∀ z号样品广西产
乌骨藤的相似度极低 o其指纹峰有严重的缺失现象 o
us °¬±以前基本没有峰 o与标准样品指纹图谱差别
很大 ∀这种差异可能是由于产地不同所造成的 ∀由
聚类分析结果可知 o云南 !贵州 !广西不同省份所产
乌骨藤药材指纹图谱差异很大可各聚为一类 o并且
即使是云南本省不同地区所产的乌骨藤药材之间仍
然存在较大的差异 o因此 o要保证药材质量的稳定 o
必须固定药材的产地 o甚至要把药材产地尽可能缩
小到最小的范围 ∀
314 中药指纹图谱建立的目的
全面反映中药所含内在化学成分的种类和数
量 o进而反映其内在质量 ∀在目前乌骨藤药效成分
尚未完全阐明的情况下 o利用中药指纹图谱作为质
量控制指标是一种有效的质量控制方法 ∀为了全面
体现药材的药效化学物质基础 o应获得包含尽可能
多色谱峰的指纹图谱用来作为质量控制标准 ∀
≈参考文献
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ussz年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ us
¦·²¥¨ µo ussz
≈t 刑旺兴 o程荣珍 o陈 斌 o等 1乌骨藤常用混用品种辨析 ≈ 1现
代中药研究与实践 ousswot{ktl}vv1
≈u 江苏新医学院 1中药大辞典 ≈ 1下册 1上海 }上海科学技术
出版社 ot|||}t|zy1
≈v 孙 珏 o沈建华 o朱美华 o等 1消癌平对人胃癌细胞治疗作用
的实验研究 ≈ 1上海中医药大学学报 ousss otwkul }wt1
≈w 蔡兴东 o刘 新 o钟国跃 o等 1 抗癌中药乌骨藤的研究进展
≈ q井冈山学院学报 oussxouykul}tuv1
≈x 刑旺兴 1中药通光藤活性成分的研究 ≈⁄ 1上海 }第二军医大
学 ousss}uy1
Στυδιεσ ον χηαραχτεριστιχ φινγερπριντσ οφ φατ2σολυβλε
χοµ πονεντσ οφΜαρσδενια τεναχισσιµ α βψ Γ Χ
∏2«∏¤tou o÷
¬±ª2µ¨±tou o÷¬¤²2¬±ªtou o≠ ¬2¯¬v
(t. Κεψ Λαβορατορψ οφ ∆ρυγ Θυαλιτψ Χοντρολανδ Πηαρµ αχοϖιλανχε Μινιστρψ οφ Εδυχατιον, Νανϕινγ utsss|, Χηινα;
u1 Χεντερφορ Ινστρυµ ενταλΑναλψσισ, Χηινα Πηαρµ αχευτιχαλΥνιϖερσιτψ, Νανϕινγ utsss|, Χηινα;
v1Μανϕινγ Ενϖιρονµ ενταλΜονιτορινγ Χεντερ, Νανϕινγ utsstv, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¶·∏§¼ ¦«¤µ¤¦·¨µ¬¶·¬¦©¬±ª¨ µ³µ¬±·¶²©·«¨ ©¤·2¶²¯∏¥¯¨¦²°³²± ±¨·¶²©§¬©©¨µ¨±·Μαρσδενια τεναχισσιµ α ¶¤°2
³¯ ¶¨¥¼ ≤ ¤±§≤ 2 ≥1 Μετηοδ : ׫¨ ¶¤°³¯¨º¤¶¶³¯¬·¬± ·«¨ u{s ε ¬±¨¦·¬²± ³²µ·o º¬·«tsΒt ¶³¯¬·µ¤·¬²o ¤±§¶¨³¤µ¤·¨§²± ¤©∏¶¨§
¶¬¯¬¦¤¦¤³¬¯¯¤µ¼ ¦²¯∏°± k⁄
2xo vs ° ≅ squx °° q⁄qo squx Λ° ©¬¯°lq ׫¨ ·¨°³¨ µ¤·∏µ¨ ³µ²ªµ¤° º¤¶zs ε ©²µx °¬±o { ε # °¬±pt
·²uss ε o ·«¨ ± x ε # °¬±pt ·²uys ε ouys ε ©²µts °¬±o ׫¨ «¬ª«³∏µ¨ ±¬·µ²ª¨ ± º¤¶∏¶¨§¤¶¤¦¤µµ¬¨µª¤¶o ׫¨ ƒ⁄ ·¨°³¨ µ¤·∏µ¨ º¤¶
vss ε 1 Ρ εσυλτ: ׫¨ µ¨ ¤µ¨ tx ¦²°°²± ³¨ ¤®¶¬± ·«¨ ≤ ©¬±ª¨ µ³µ¬±·¶²©Μ1 τεναχισσιµ α ¤±§·«¨ ¼ ¤µ¨ ¬§¨ ±·¬©¬¨§¥¼ ≤ 2 ≥1 ׫¨ ¤±¤¯¼¶¨¶
²± ¦¯∏¶·¨µ¤±§¶¬°¬¯¤µ¬·¼ §¨ ªµ¨¨²©·«¨ ©¬±ª¨ µ·«¨ ¦µ∏§¨ §µ∏ª¶©µ²° √¤µ¬²∏¶«¤¥¬·¤·¶«¤√¨¥¨ ±¨ ³¨ µ©²µ° §¨1 Χονχλυσιον: ׫¨ ° ·¨«²§«¤¶
ª²²§µ¨³¨ ¤·¤¥¬¯¬·¼1 ׫¨ ≤ ©¬±ª¨ µ³µ¬±·¦²°¥¬± §¨º¬·«·«¨ °≤ ©¬±ª¨ µ³µ¬±·²©Μ1 τεναχισσιµ ¦¤± ¥¨ ∏¶¨§·² √¨¤¯∏¤·¨¬·¶ ∏´¤¯¬·¼ ¬±·¨ªµ¤¯2
¼¯1
[ Κεψ ωορδσ] Μαρσδενια τεναχισσιµ α~ ©¤·2¶²¯∏¥¯¨¦²°³²± ±¨·¶~ ©¬±ª¨ µ³µ¬±·~ ≤~ ≤ 2 ≥
≈责任编辑 牛泽宇
≈收稿日期 ussz2st2sv
≈基金项目 国家自然科学基金项目 kvsyzuystl
≈通讯作者 3 王智民 oר¯ rƒ¤¬}kstsl{wstwtu{o∞2°¤¬¯}½«°º
tuv uyvq± ·¨
° p °≤法同时测定金银花中的 u种三萜皂苷
张小光 tou o王智民 t3 o宋小妹 u o朱晶晶 t o高慧敏 t o林丽美 t
ktq中国中医科学院 中药研究所 o北京 tsszss~
uq陕西中医学院 o陕西 咸阳 ztuswyl
≈摘要 目的 }建立同时测定金银花中三萜皂苷成分忍冬苦苷 和忍冬苦苷 ≤含量的方法 ∀方法 }采用反相
高效液相色谱法 o¯¯·¨¦«≤t{柱 kw1y °° ≅ uxs °°ox Λ°lo流动相甲醇 2乙腈 2s1th磷酸 o检测波长 uts ±°∀结果 }忍
冬苦苷 和忍冬苦苷 ≤分别在 s1tx ∗ u1ux Λªkρ s1||| |l和 s1tt ∗ t1yx Λªkρ s1||| tlo呈现良好线性关系 o平
均加样回收率分别为 ||1|h o|{1vh ∀结论 }忍冬苦苷 和忍冬苦苷 ≤在不同地区的金银花药材中含量差异较大 ∀
≈关键词 金银花 ~忍冬苦苷 ~忍冬苦苷 ≤~ °2 °≤
≈中图分类号 u{wqt ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusszlus2utw|2sv
金银花为忍冬科植物忍冬 Λονιχερα ϕαπονιχα
׫∏±¥q的干燥花蕾或带初开的花 o功能清热解毒 !
凉散风热 o主治痈肿疔疮 ! 喉痹 ! 丹毒 ! 热毒血
#|wtu#
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ us
¦·²¥¨ µo ussz