全 文 ：中草黄 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月·199·
大鼠舌下静脉给药华蟾毒配基的药动学研究
张 磊1，齐 刚2，张 莉3，高艳荣3，柯峥3，熊小军3
(1．武警医学院附属医院药剂科，天津300162；2．武警医学院中心实验室，天津300162；
3．武警医学院药剂学教研室，天津300162)
摘要：目的建立华蟾毒配基在大鼠体内的血药浓度的HPLC测定方法，并根据血药浓度一时间数据计算其体内
药动学参数。方法经舌下静脉分别注射0．251、0．503、1．006mg／kg华蟾毒配基，采用RP—HPLC法测定血清中
药物浓度，用3P87药动学软件计算药动学参数。结果华蟾毒配基在大鼠体内的动力学过程可用一级动力学过程
的二室开放型模型来描述。高、中、低3个不同剂量组的主要药动学参数分别为：tl／2。：0．4830、0．377、0．2723h；
tl／2B：4．4189、5．8972、2．4682h；V(。)：2．5120、8．660、27．9378L／kg；AUC：12．1970、8．4123、2．905
6gg／(h·mL)；CL：2．0497、5．9437、34．4166L／(kg·h)。结论本研究建立的RP—HPLC测定大鼠静脉注射不
同剂量华蟾毒配基后血药浓度的实验方法简便、快速、灵敏，血清中内源性物质不干扰测定，可为华蟾毒配基临床
安全合理用药和制剂质量控制提供依据。
关键词：华蟾毒配基；血药浓度；药动学；高效液相色谱
中图分类号：R285．61；R286．02文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2007)02—0199—04
PharmacokineticstudiesofcinobufaginaftersublingualiVadministrationinrats
ZHANGLeil，QIGan92，ZHANGLi3， AOYan—ron93，KEZhen93，XIONGiao—jun3
(1．DepartmentofPharmacy，AffiliatedHospitalofM icalCo legeofChinesePeople
7
SArmedPoliceForces．
Tianjin300162，China；2．CentralLaboratory，MedicalCollegeofChinesePeople’SArmed
PoliceForces，Tianjin300162，China；3．DepartmentofPharmacy，MedicalCollege
ofChinesePeople
7
SArmedPoliceForces，Tianjin300162，China)
Abstract：ObjectiveTodevelopaRP—HPLCmethodfor eterminationofcin bufagininratserum
andtocalculatethepharmacokineticparametersofcinobufaginthroughbloodconcentration—timecurve．
MethodsThepharmacokineticsofeinobufaginw sinvestigatedinratsaftersublingualivadministration
ofcinobufaginin0．251，0．503，and1．006mg／kg．Serumconcentrationsofe nobufaginweredetermined
byHPLC．3P87Pharmacokineticprogramw susedtodescribethcompartment—modeoftheblood
concentration—timecurveofcinobufaginandtocalculatethemainphamacokineticparameters．Results
Thebloodconcentration—timecurvesofcinobufaginfollowings leiVadministrationinratsinvivo
conformedtotWOcompartmentop modelinonegradepharmacokinectics．Themajorpharmacokinetic
parametersofcinobufagin(1，O．5，and0．25mg／kg)weretl／2。：0．4830，0．377，0．2723h；tl／z口：4．
4189，5．8972，2．4682h；V(。)：2．5120，8．660，27．9378L／kg；AUC：12．1970，8．4123，2．9056
gg／(h·mL)；CL：2．0497，5．9437，34．4166L／(kg·h)．ConclusionRP-HPLCMethodissimple，
rapid，sensitive，andaccur tefor eterminationofcinobufaginwithoutanyinterferencebyendogenous
substancesinrat erum，whichcanbeprovidedwithacademicfoundationforclinicalapplicationnd
qualitycontrolofcinobufagin．
Keywords：cinobufagin；bloodconcentration；pharmacokinetics；HPLC
蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufobufo
gargarizansCantor或黑眶蟾蜍B．melanosticutus
Schneider的耳后腺及皮肤腺分泌的白色浆液，经加
工干燥制成。蟾酥化学成分主要有蟾蜍毒素类、蟾毒
配基类、蟾毒色胺类以及吗啡等。华蟾毒配基是蟾酥
中主要的化学成分之一，具有较高的药理活性，可以
调节患者的细胞和体液免疫功能，防止乙肝慢性病
变和癌变，在临床上已广泛应用于肿瘤治疗，尤其是
对原发性肝癌、肺癌、食管癌和胃癌有较好的疗效，
在与化放疗药物合用时，起到增效减毒的作用。但是
收稿日期：2006—04—10
作者简介：张磊(1973一)，男，天津人，武警医学院附属医院药剂科主管药师，1996年毕业于天津医科大学，2003年获河jE医科大学药
理学硕士学位，主要从事临床药理学研究工作。
万方数据
·200· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月
华蟾毒配基治疗病毒型肝炎时不良反应发生率高达
43．28％[1~5]。本实验建立了华蟾毒配基血药浓度的
HPLC测定法，对其在大鼠体内的药动学过程进行
了研究[6~1⋯。
1材料与仪器
华蟾毒配基对照品(中国药品生物制品检定所，
批号：803—9202)。色谱纯甲醇，分析纯无水乙醚、醋
酸乙酯、无水乙醇。
雄性Wistar大鼠，体重220±25g，天津市实验
动物中心提供，实验前正常饲养2周。
日本岛津LC一10A高效液相色谱仪(LC一
10ATvP高压泵，CTo一10ASvP柱箱，SPD10AvP
UV检测器，CR一8A积分仪)；MilliQlaBo小型
纯水机(美国Millipore公司)；LC—P45分析天平
(瑞士Mettler公司)；HzS—H水浴振荡器(哈尔滨
市东联电子技术开发有限公司)；Xw一80A型旋涡
混合器(上海琪特分析仪器有限公司)。
2方法与结果
2．1 血清中华蟾毒配基HPLC测定方法的建立
2．1．1色谱条件：Shim—packVP—ODS色谱柱(150
mm×4．6mm，5／．Lm)；流动相为甲醇一水(70：30)；
体积流量：1．0mL／min；检测波长：290nm，柱温：
30℃：进样量：20”L。
2．1．2对照品溶液和内标溶液的制备：分别精密称
量华蟾毒配基对照品4．0mg和对羟基苯甲酸乙酯
10．0mg，用少量甲醇溶解后，加甲醇定容至100
mL，得质量浓度为40tlg／mL对照品储备液和100
／zg／mL内标液，4℃冰箱内保存备用。
2．1．3标准曲线的制备：取20肛I。内标溶液和不同
量的华蟾毒配基对照品溶液100弘L置于尖底离心
试管中，挥干溶剂后加入空白大鼠血清1mI。，共6
份，使血清中华蟾毒配基的质量浓度分别为0．25、
0．5、1．0、2．0、3．0、4．0tlg／mL。按照血清样品的处
理项下操作，以样品峰与内标峰面积比对相应的质
量浓度作线性回归，得标准曲线回归方程为Y一
0．09072+0．348C，r一0．9978，结果华蟾毒配基在
0．25～4弘g／mL线性关系良好。
2．1．4给药方法与样品采集：成年雄性Wistar大
鼠105只，随机分为3组，即华蟾毒配基低、中、高3
个剂量组，每组35只。大鼠实验前12h开始禁食，
但不禁水。根据动物和人体表面积比例换算出大鼠
给药量为每100g体重给药1mI．，设定低剂量为临
床等效剂量。低、中、高剂量之比为1：2：4。按照动
物分组，给各组大鼠舌下iv分别给药25．17、50．30、
100．66／tg／mL华蟾毒配基溶液。各试验组分别在
舌下iv给药后的30、60、90、120、180、240、360min
取5只大鼠断头取血。血液静置1h后，3000r／rain
离心20min，分离提取血清，冻存备用。
2．1．5 血清样品的处理：离心试管中加入
100ttg／mL对羟基苯甲酸乙酯甲醇溶液内标液20
肛I。，挥干溶剂后，加人大鼠血清1000肛L，旋涡混合
器上间断振荡3min，加入4mL提取液无水乙醚一
醋酸乙酯(5：1)，旋涡混合器上间断振荡3min，
2000r／min离心2min，冰箱冻存(控制冻存时间一
致)，倾出上清液。同法再提取1次，合并上清液，置
于水浴摇床上(40℃，50r／min)挥干溶剂。加入250
肛L色谱纯甲醇，旋涡混合器上间断混合2min，滤
过，得滤液。
2．1．6最低检出量和最低检出质量浓度：取4份质
量浓度为40／．tg／mL华蟾毒配基对照品溶液10弘L，
分别用甲醇定容为1、2、5、10mL，进样20弘L，结果
均能清晰测出华蟾毒配基的色谱峰，故最低检出量
为1ng，最低检出质量浓度为0．05／，g／mL(信噪比
为3．5)。
2．1．7方法的专属性：在本实验色谱条件下，华蟾
毒配基与血清中杂质峰及内标峰达到良好分离，完
全可以满足定量的要求。华蟾毒配基和内标的保留
时间分别为6．1min和3．2rain，色谱图见图1。
O 45 9 0 45 90
，／mln
A一空白血清 B加样空白血清C—iv给药后血清
1一内标2一华蟾毒配基
Ablankserum，Bblankserumspikedwitheinobufagin
C—serumsampleafterivadministration
1-internalst ndard2-cinobufagin
图1大鼠血清中华蟾毒配基的HPLC图谱
Fig．1HPLCChromatogramsfcinobufagininratserum
2．1．8 回收率试验：取内标液20／1L，加入0．25、1．0、
4．0／tg／mL华蟾毒配基对照品溶液20raL，吹干，加入
l mI。空白血清，混匀，处理后，进样20_uL，将峰面积
值代入标准曲线方程，计算华蟾毒配基质量浓度，以测
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月·201·
定值与理论值之比计算回收率，结果3种质量浓度的
平均回收率分别为100．10％、99．87％、99．81％，
RSD分另0为2．16％、1．84％、1．93％(笼=5)。
2．1．9精密度试验：取3个剂量华蟾毒配基血清样
品，处理后，于1d内重复测定及连续6d内测定6
次，计算日内及日问精密度，结果RSD均小于5％。
2．2 数据分析：血药浓度一时间数据采用中国药理
学会数学药理专业委员会的3P87实用药动学计算
程序软件进行拟合。
2．3华蟾毒配基在大鼠体内的药时过程：大鼠iv
不同剂量华蟾毒配基后，不同时间的华蟾毒配基的
血药浓度测定结果见表1。不同用药剂量的华蟾毒
配基平均血药浓度C—t曲线见图2。
表1大鼠iv给药后血药浓度(i±s，n一5)
Table1 Bloodconcentrationofratafteriv
cinobufagin(i±s，弹一5)
f
■
仨
南
丑
＼
描
留
Ⅻ时
磐
粤
图2 iv给药后华蟾霉配基在大鼠体内的平均
血药浓度一时间曲线
Fig．2Meanbloodconcentration—timecurve
ofratsafterivcinobufagininvivo
2．4华蟾毒配基在大鼠体内的药动学参数：将低、
中、高不同剂量组华蟾毒配基在大鼠体内的血药浓
度一时间数据输入3P87药代动力学计算程序处理，
分别用一室、二室模型拟合药时曲线。将两种模型的
处理结果进行比较，选择其中残差平方和(SUM)值
最小、拟合度(广)最佳、AIC值最小者定为所测药物
的最佳室型。结果华蟾毒配基在大鼠体内的药动学
过程符合二室模型。华蟾毒配基在大鼠体内药动学
参数见表2。
表2大鼠iv给药后华蟾毒配基的药动学参数(厅一5)
Table2 Pharmacokineticparametersofrat
afterivcinobufagin(阼一5)
3讨论
3．1 给药方法的选择：在预试验中，对3组大鼠分
别采用口服、腹腔注射、舌下静脉3种给药方法。结
果发现，口服给药所需剂量大，且有肝脏首过效应，
药品起效相对慢，实验结果个体差异较大。而腹腔给
药，由于在腹腔给药部位和深浅的不同，极易造成局
部血药浓度过高，导致在检测时得出错误的结论。相
对而言，舌下静脉给药，药物直接人血，干扰因素较
少，数据更为可靠。
3．2取血方法的选择：选择断头取血法，因为该法
处死动物迅速，可马上摘取组织，保证取样时间的准
确性。
3．3提取条件的选择：加入提取液乙醚一醋酸乙酯
(5：1)4mL，旋涡混合器上间断振荡混合3min，可
以保证让血清中药物充分提取且又不致因振荡时问
过长使匀浆液乳化。本方法提取率可达到100％。
3．4 本研究建立的HPLC法测定大鼠静脉注射华
蟾毒配基后血药浓度的实验方法，操作简便、结果可
靠，仪器较为普及，方法专属性好，回收率、精密度和
重现性均较好。血浆中的内源性物质不干扰华蟾毒
配基的测定，为临床监测华蟾毒配基血药浓度提供
了可借鉴的方法。药动学参数显示大鼠单次静脉注
射华蟾毒配基后，血浆药一时曲线符合二室开放模
型。血药浓度下降迅速，体内分布快，消除也较快。提
示在临床用药中应考虑缩短给药间隔，且有必要对
华蟾毒配基进行剂型方面的改进，如研究其缓释剂
型，延长药物作用时间。
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纳米化对三七中有效成分溶出的影响
苏艳丽1，傅正义H，马培艳1‘2，马晶晶1，王为民1
(1．武汉理工大学材料复合新技术国家重点实验室，湖北武汉430070；2．武汉理工大学理学院，湖北武汉430070)
摘 要：目的 研究三七纳米化前后显微结构及其有效成分的变化。方法 采用高速离心剪切式超细粉碎仪对三
七进行纳米化粉碎，通过光散射粒度分析仪进行粒度分析、扫描电镜、透射电镜观察其显微结构，采用HPLC法测
定了纳米化对人参皂苷Rb。的影响。结果随着主轴转速的增大和粉碎时间的延长，三七粉碎颗粒尺寸呈逐渐减
小趋势，在主轴转速1500r／min，固体比例5．5％，粉碎时间50rain时，三七颗粒平均尺寸达到133．5rim；三七纳
米化后人参皂苷Rb。的溶出率有较大提高，与原粉相比提高了59．7％。结论高速离心剪切式超细粉碎仪可以对
根茎类中药进行超细粉碎，纳米化后可促进中药有效成分的溶出。
关键词：三七；纳米粉碎；人参皂苷Rb。；高效液相色谱
中图分类号：R284．2；R286．06文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)02—0202一03
Effectofnano—-grindingo dissolving·-outratioofactiveconstituents
fromPanaxnotoginseng
SUYan—lil，FUZheng—yil，MAPei—yanl“，MAJing—jin91，WANGWei—rainl
(1．StateKeyLaboratoryofAdvancedTechnologyforMaterialsSynthesisandProcessing，WuhanUniversityofTech
nology，Wuhan430070，China；2．SchoolofScience，WuhanUniversityofTechnology，Wuhan430070，China)
Keywords：Panaxnotoginseng(Burk．)F．H．Chen；nano—grinding；ginsenosideRbl；HPLC
三七为五加科植物三七Panaxnotoginseng
(Burk．)F．H．Chen的干燥根，具有活血化瘀、散瘀
定痛等功效，用于治疗心血管疾病。中药产生的药理
效应不能唯一地归功于该药特有的化学组成，还与
药物的物理状态密切相关。当颗粒尺寸小到一定程
度时，药效可能会发生突变。据此提出了纳米中药的
概念。目前，获得纳米中药的方法为高能球磨法[1“1
和超音速射流喷雾于燥法[5“]。本实验采用高速离心
剪切技术研究了三七纳米化，并观察了粉碎前后三
七颗粒显微结构的变化，采用HPLC法考察了三七
纳米化对其有效成分人参皂苷Rb。的影响。
1仪器与试剂
Micros--0高速离心剪切式超细粉碎仪(日本
奈良机械制作所)；ZetaPALS光散射粒度分析仪
(美国Brookhaven公司)；JSM--5610LV型扫描电
子显微镜、JEM一2000FXⅡ分析型透射电镜(日本
电子株式会社)；Agilent1110高效液相色谱仪(美
国Agilent科技公司)。
收稿日期：2006—04—29
基金项目：国家自然科学基金资助(50272047，50220106657)
作者简介：苏艳丽(1979一)，女，湖北荆州人，博士，主要从事中药纳米化的研究。Tel：(027)87865484E—mail：susiayr@sohu．eom
*通讯作者傅正义Tel：(027)87865484E—mail：zyfu@public．wh．hb．cn
万方数据
大鼠舌下静脉给药华蟾毒配基的药动学研究
作者： 张磊， 齐刚， 张莉， 高艳荣， 柯峥， 熊小军， ZHANG Lei， QI Gang， ZHANG Li，
GAO Yan-rong， KE Zheng， XIONG Xiao-jun
作者单位： 张磊,ZHANG Lei(武警医学院附属医院,药剂科,天津,300162)， 齐刚,QI Gang(武警医学院
,中心实验室,天津,300162)， 张莉,高艳荣,柯峥,熊小军,ZHANG Li,GAO Yan-rong,KE
Zheng,XIONG Xiao-jun(武警医学院,药剂学教研室,天津,300162)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(2)
被引用次数： 2次

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研究[期刊论文]-华中科技大学学报（自然科学版）2000,28(5)

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2.张红霞.于辉.张磊.朱铁梁.张莉 HPLC法测定华蟾素注射液中华蟾素含量及有关物质[期刊论文]-武警医学
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