全 文 ：苦参碱对 ＴＩＭ２转基因小鼠肝癌细胞的作用研究
马玲娣１，张 彦２，文世宏１，何於娟２，刘小珊３，康格非２，蒋纪恺３
（１．南京医科大学 附属常州第二人民医院 中心实验室，江苏 常州 ２１３００３；
２．重庆医科大学 检验系 临床生化教研室，重庆 ４０００１６；
３．广东汕头大学 医学院 分子生物学中心，广东 汕头 ５１５０３１）
［摘要］ 目的：观察苦参碱对ＴＩＭ２转基因修饰小鼠Ｈ２２肝癌细胞瘤苗的体内作用。方法：构建小鼠ＴＩＭ２基
因真核表达载体并用以转染 Ｈ２２细胞，经体外稳定筛选后获得 ＴＩＭ２转基因 Ｈ２２肝癌细胞全细胞瘤苗（Ｈ２２
ＴＩＭ２），用以建立小鼠肝癌移植瘤模型，观察该瘤苗在小鼠体内的成瘤性和免疫原性；加用药物苦参碱（ｍａｔｒｉｎｅ，
Ｍ）治疗后，观察苦参碱对其体内抗癌活性的影响。结果：筛选得到的ＴＩＭ２转基因Ｈ２２肝癌细胞瘤苗有ＴＩＭ２ｍＲ
ＮＡ及ＥＧＦＰ的稳定表达，此瘤苗接种后，在小鼠体内的成瘤率为４１％，远低于 Ｈ２２对照组和 Ｈ２２ＥＧＦＰ空载体组
（Ｈ２２ＥＧＦＰ）（后两者成瘤率在９２％以上），对小鼠肿瘤的抑制率为６９２％，明显高于苦参碱治疗组（６７５％）和其
他各组。同时苦参碱可进一步增强Ｈ２２ＴＩＭ２瘤苗的肿瘤抑制率。Ｈ２２ＴＩＭ２组小鼠的脾指数，ＣＤ４＋Ｔ细胞亚群
和ＣＤ４／ＣＤ８较其他实验组明显增高。结论：ＴＩＭ２基因修饰Ｈ２２细胞瘤苗可显著降低Ｈ２２肝癌细胞在小鼠体内的
致瘤性，在体内具有一定的免疫原性，苦参碱可明显改善其体内抗癌活性，为进一步研究 ＴＩＭ２基因在肿瘤免疫中
的作用及苦参碱的抗癌机制奠定了基础。
［关键词］ ＴＩＭ２基因；苦参碱；瘤苗；肿瘤免疫；小鼠Ｈ２２肝癌细胞
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１０１１７５０５
［收稿日期］ ２００７０５２６
［通讯作者］ 蒋纪恺，Ｔｅｌ：（０５１９）８８１０７３０７，Ｅｍａｉｌ：ｊｋｊｉａｎｇ＠
ｓｔｕｅｄｕｃｎ
苦参是我国传统的中药材之一，苦参碱是苦参中
分离出的１种主要的生物碱成分，具有多种生理学活
性［１］。笔者以往的研究证实，苦参碱对 Ｈ２２细胞建
立的荷肝癌小鼠肿瘤的生长具有显著的抑制效应，可
通过直接杀伤肿瘤细胞和诱导肿瘤细胞凋亡等机制
发挥抗癌活性。然而实验中同时观察到苦参碱可一
定程度上抑制机体的免疫功能［２，３］。为此，将小鼠的
一种潜在的共刺激分子 ＴＩＭ２小鼠 Ｔ细胞免疫球蛋
白域和黏蛋白域蛋白分子２基因（Ｔｃｅｌｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂ
ｕｌｉｎｄｏｍａｉｎａｎｄｍｕｃｉｎｄｏｍａｉｎｐｒｏｔｅｉｎ２，ＴＩＭ２）导入
Ｈ２２细胞中，对 Ｈ２２细胞进行外源性基因修饰［４，５］，
试图通过改变Ｈ２２细胞表面分子的表达，达到增强抗
肿瘤免疫应答的效应，同时观察苦参碱对ＴＩＭ２基因
修饰Ｈ２２细胞体内成瘤作用的影响，进一步探讨苦参
碱抑瘤作用与机体免疫功能之间的关系。
１ 材料
１．１ 动物及细胞株 小鼠 Ｈ２２肝癌细胞本室自行
保存。ＳＰＦ级ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，体重（１６±２）ｇ，雌雄
兼用，重庆医科大学实验动物中心提供［动物饲养
许可证号ＳＹＸＫ（渝）２００２００１５］，中国人民解放军第
三军医大学野战外科研究所实验动物研究中心
（ＳＰＦ级动物实验室）代为饲养。
１．２ 药物 Ｇ４１８购自北方同正。苦参碱购自陕西
省科学院西安植物园植物化学开发研究所，纯度
９９９％。
１．３ 仪器 上海天平仪器厂 ＪＡ５００３型电子天平；
广州一途电子有限公司 ＹＴ－２０３型电子数显游标
卡尺；美国ＢｅｃｋｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ公司ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ流式
细胞仪。
１．４ 试剂 重组真核表达载体ｐＩＲＥＳ２ＥＧＦＰＴＩＭ２
自行构建。菌株 ＤＨ５α及质粒 ｐＩＲＥＳ２ＥＧＦＰ本室
保存。真核转染试剂 ＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎＴＭ２０００为 Ｉｎｖｉｔｒｏ
ｇｅｎ公司产品。小鼠 ＦＩＴＣＣＤ４，ＣＤ８单克隆抗体及
同型对照（流式用）：购自晶美生物工程有限公司。
２ 方法
２．１ ＴＩＭ２基因修饰 Ｈ２２肝癌细胞瘤苗的制备和
鉴定 生长良好的 Ｈ２２细胞转染前１ｄ传代，转染
前以不含抗生素、不含血清的 ＲＰＭＩ１６４０调整细胞
密度为５×１０５个／ｍＬ，接种于２４孔板中，每孔５００
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μＬ，以重组真核表达载体 ｐＩＲＥＳ２ＥＧＦＰＴＩＭ２进行
转染，ｐＩＲＥＳ２ＥＧＦＰ重组载体为阴性对照。具体操
作按照ＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎＴＭ２０００转染试剂盒说明书进行。
转染４８ｈ后，荧光显微镜下观察到培养孔中有较多
绿色荧光产生，将细胞按１∶１０～１∶３０的比例传代，
以８００μｇ·ｍＬ－１Ｇ４１８进行筛选。２～４周后，待
Ｇ４１８抗性克隆长出后，换用４００μｇ·ｍＬ－１Ｇ４１８维
持培养。将阳性细胞克隆取出，有限稀释法于９６孔
板中筛选单个克隆阳性细胞株，荧光显微镜及流式
细胞仪观察绿色荧光的发生；提取细胞内总 ＲＮＡ，
ＲＴＰＣＲ反应检测细胞中ＴＩＭ２ｍＲＮＡ的表达。
２．２ 小鼠肝癌移植瘤模型的建立 收集对数生长
期Ｈ２２细胞，以ＲＰＭＩ１６４０调整细胞密度为５×１０６
个／ｍＬ左右，于 ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠左侧下腹部行无菌皮
下接种，接种量每只０２ｍＬ，细胞总数为１×１０６个。
动物随机分为７组，每组６只，分组情况如下：Ｈ２２
ＴＩＭ２组：皮下接种 ｐＩＲＥＳ２ＥＧＦＰＴＩＭ２载体转染
Ｈ２２细胞（Ｈ２２ＴＩＭ２）；Ｈ２２ＴＩＭ２＋Ｍ组：皮下接种
Ｈ２２ＴＩＭ２细胞后给予苦参碱治疗；Ｈ２２ＥＧＦＰ组：
皮下接种 ｐＩＲＥＳ２ＥＧＦＰ重组载体转染 Ｈ２２细胞
（Ｈ２２ＥＧＦＰ）；Ｈ２２ＥＧＦＰ＋Ｍ组：皮下接种Ｈ２２ＥＧ
ＦＰ细胞后给予苦参碱治疗；Ｈ２２组：荷瘤对照组，皮
下接种Ｈ２２细胞；Ｈ２２＋Ｍ组：皮下接种 Ｈ２２细胞
后给予苦参碱治疗；正常对照组：给予等量 ＮＳ注射
液。给予苦参碱治疗组小鼠于细胞接种后次日按
１００ｍｇ· ｋｇ－１体重药物剂量腹腔注射苦参碱，隔日
１次，每只每次０２ｍＬ，共７次。
２．３ 苦参碱对ＴＩＭ２基因修饰Ｈ２２细胞的抗癌效应
各组小鼠接种Ｈ２２细胞后第３天起开始观察接种
部位是否有瘤块形成，若有肿瘤长出，以电子数显游
标卡尺测量瘤体大小，隔日１次，以瘤体长径和短径
均值表示肿瘤大小（ｍｍ３），绘制肿瘤生长曲线。同时
每日观察荷瘤小鼠的生长状态，包括体重、摄食、活动
等情况，隔日称重。苦参碱停药后次日，断颈椎处死
实验小鼠，剥瘤称重，计算肿瘤抑制率。
抑制 率 （％）＝对照组平均瘤重－治疗组平均瘤重对照组平均瘤重 ×
１００％
２．４ 苦参碱对荷瘤小鼠免疫器官的影响 各组小
鼠停药后次日采用颈椎脱臼法处死，完整取出脾脏
和胸腺后称重，计算胸腺指数和脾脏指数。
胸腺（脾）指数＝胸腺（脾）质量（ｍｇ）／体重（ｋｇ）
２．５ 荷瘤小鼠ＣＤ４，ＣＤ８的ＦＡＣＳ分析 各实验组
小鼠处死后，无菌取脾，分离得到脾细胞悬液，小鼠
淋巴细胞分离液按常规方法操作得到小鼠外周血淋
巴细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌ，ＰＢＬＣ）悬
液，ＰＢＳ缓冲液洗２次，制备５×１０５个／ｍＬ的单细胞
悬液，加入ＦＩＴＣ标记的小鼠ＣＤ４，ＣＤ８单抗，混匀后
置于４℃冰箱中孵育３０ｍｉｎ，ＰＢＳ洗２次，流式细胞
仪检测。
２．６ 统计学处理 数据用 珋ｘ±ｓ表示，使用 ＳＰＳＳ
１００统计学软件进行分析，多组间差异性比较采用
方差分析（ＡＮＯＶＡ），Ｐ＜００５为有统计学意义。
３ 结果
３．１ ＴＩＭ２基因修饰 Ｈ２２肝癌细胞瘤苗的制备和
鉴定 ｐＩＲＥＳ２ＥＧＦＰ／ＴＩＭ２和ｐＩＲＥＳ２ＥＧＦＰ重组质
粒分别转染Ｈ２２细胞后，加入８００μｇ·ｍＬ－１Ｇ４１８
筛选，阴性对照 Ｈ２２细胞１周左右基本死亡，阳性
转化细胞２周左右可见散在的细胞生长，３～４周出
现单克隆细胞的生长。取出阳性克隆细胞行有限稀
释，于９６孔板中筛选单个细胞克隆。荧光倒置显微
镜下观察，阳性单克隆细胞体内始终有绿色荧光蛋
白（ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＦＰ）的稳定表达（图
１）。提取阳性转化细胞总 ＲＮＡ，行 ＲＴＰＣＲ分析，
得到９１８ｂｐ大小的条带，而ｐＩＲＥＳ２ＥＧＦＰ空载转化
的Ｈ２２细胞未扩增出相应大小条带（图２）。
图１ ＴＩＭ２基因修饰Ｈ２２细胞ＥＧＦＰ蛋白的表达
（×２００）
图２ ＴＩＭ２基因修饰Ｈ２２细胞的ＲＴＰＣＲ鉴定
１．Ｈ２２ＴＩＭ２细胞；２．Ｈ２２ＥＧＦＰ细胞；３．Ｈ２２对照
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３．２ 苦参碱对 ＴＩＭ２基因修饰 Ｈ２２细胞体内作用
观察 接种后第５天观察，Ｈ２２ＴＩＭ２组小鼠约半数
未成瘤（５／１２），成瘤率为４１％，２次接种后才全部
成瘤；其余各组小鼠（接种Ｈ２２ＥＧＦＰ和Ｈ２２细胞）
初次接种成瘤率为 ９２％（２２／２４），远远高于 Ｈ２２
ＴＩＭ２组。第１７天实验结束时，经测量Ｈ２２ＴＩＭ２组
小鼠肿瘤的平均体积为（３１３４±９２１）ｍｍ３，明显
小于Ｈ２２ＥＧＦＰ和 Ｈ２２组（Ｐ＜００１），后两者肿瘤
平均体积分别为（９８２５±２５２３）ｍｍ３和（１１４０８±
３６４５）ｍｍ３；Ｈ２２ＥＧＦＰ组小鼠的肿瘤体积与 Ｈ２２
组相比没有显著差异。各实验组动物中，加用苦参
碱治疗后瘤体体积明显小于未加苦参碱组（图３）。
Ｈ２２ＴＩＭ２细胞（Ｈ２２ＴＩＭ２组）可明显抑制小鼠移
植瘤的形成，对小鼠 Ｈ２２移植瘤的总体抑制率为
６９２％，加用苦参碱后（Ｈ２２ＴＩＭ２＋Ｍ组），抑瘤率
达９０６％，明显高于苦参碱治疗组（Ｈ２２＋Ｍ，
６７５％）（Ｐ＜００１）；而Ｈ２２ＥＧＦＰ细胞对小鼠肿瘤基
本无抑制作用（６２２％），加用苦参碱后（Ｈ２２ＥＧＦＰ＋
Ｍ组），肿瘤生长被明显抑制，抑制率７０８％，两者相
比结果有显著性差异（Ｐ＜００１）（表１）。
图３ 不同处理因素对小鼠移植瘤生长情况的影响
（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
表１ 苦参碱对接种Ｈ２２细胞小鼠移植瘤的抑制作用
（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
组别 剂量／ｍｇ· ｋｇ－１ 抑制率／％
Ｈ２２ＴＩＭ２ － ６９２１）
Ｈ２２ＴＩＭ２＋Ｍ １００ ９０６１，２）
Ｈ２２ＥＧＦＰ － ６２２
Ｈ２２ＥＧＦＰ＋Ｍ １００ ７０８１）
Ｈ２２ － －
Ｈ２２＋Ｍ １００ ６７５１）
注：与模型组比较１）Ｐ＜００５；与Ｈ２２＋Ｍ组比较２）Ｐ＜００５
对各组小鼠肿瘤生长情况的观察发现：Ｈ２２
ＴＩＭ２组小鼠生长状态良好，除１只小鼠实验晚期出
现腹水外，其余小鼠肿瘤形状规则，呈局限性生长；
Ｈ２２ＥＧＦＰ组和Ｈ２２组小鼠肿瘤生长迅速，瘤体较
大，晚期多有浸润性生长，半数以上小鼠有腹水形
成。
３．３ 对荷瘤小鼠免疫器官的影响 与 Ｈ２２组相
比，各组小鼠胸腺指数均有所降低，加用苦参碱者治
疗后降低更为明显（Ｐ＜００５）；Ｈ２２ＴＩＭ２组稍高于
Ｈ２２ＥＧＦＰ组，差别不显著；与正常对照组相比，荷
瘤动物的胸腺指数和脾指数均下降，苦参碱治疗组
小鼠的脾指数降低稍明显（表 ２）。各实验组中
Ｈ２２ＴＩＭ２组小鼠脾指数显著高于其他组（Ｐ＜
００５），加用苦参碱（Ｈ２２ＴＩＭ２＋Ｍ组）后，脾指数降
低，与其他组比较无明显差异。
表２ 不同处理因素对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠免疫器官的影响
（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
组别
剂量
／ｍｇ·ｋｇ－１
胸腺指数 脾指数
Ｈ２２ＴＩＭ２ － ３０２±１１１２） ９１７±３０９１，２）
Ｈ２２ＴＩＭ２＋Ｍ １００ １７６±０８５１，２） ６８４±２０１１，２）
Ｈ２２ＥＧＦＰ － ２６７±１０２２） ６９７±２５４１）
Ｈ２２ＥＧＦＰ＋Ｍ １００ １５６±００６１，２） ６１４±２７６１，２）
Ｈ２２ － ３４１±１１４２） ６２５±２１２
Ｈ２２＋Ｍ １００ １９７±００７１，２） ５５３±１９３２）
正常 － ４７４±１２３ ７０８±２１５
注：与模型组比较１）Ｐ＜００５；与正常组比较２）Ｐ＜００５
３．４ 荷瘤小鼠 ＣＤ４，ＣＤ８的 ＦＡＣＳ分析 Ｈ２２
ＴＩＭ２组小鼠脾淋巴细胞 ＣＤ４亚群和 ＣＤ４／ＣＤ８均
高于Ｈ２２组和 Ｈ２２ＥＧＦＰ组，除 Ｈ２２ＴＩＭ２组外，荷
瘤组小鼠的ＣＤ４／ＣＤ８均低于正常对照组。此外，苦
参碱治疗组小鼠的脾淋巴细胞 ＣＤ４亚群和 ＣＤ４／
ＣＤ８较未治疗组降低。
４ 讨论
ＴＩＭ２为小鼠Ｔ细胞免疫球蛋白域和黏蛋白域
蛋白分子２（Ｔｃｅｌｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｄｏｍａｉｎａｎｄｍｕｃｉｎ
ｄｏｍａｉｎｐｒｏｔｅｉｎ２，ＴＩＭｓ）基因家族成员，目前发现的３
种ＴＩＭ家族成员均为活化的 Ｔ细胞所表达，与体内
ＣＤ４＋Ｔ细胞的活化、增殖和分化过程密切相关。
ＴＩＭ２与其在 ＤＣ细胞和静止的 Ｂ细胞膜表面的配
体相互作用后可以诱导其胞内区段的酪氨酸激酶自
身磷酸化位点磷酸化，继而引起一系列的激活性信
号的转导，促使ＣＤ４＋Ｔ细胞活化和增殖，早期合成
和分泌多种细胞因子，增强 ＣＤ４＋ Ｔ细胞的活
性［７９］。这些表明 ＴＩＭ２可能是一种新的免疫共刺
激分子，通过促进ＣＤ４＋Ｔ细胞的活化，提高机体的
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抗原特异性免疫应答反应。
本研究通过基因克隆与重组技术，得到小鼠
ＴＩＭ２转基因修饰肝癌细胞瘤苗 Ｈ２２ＴＩＭ２，对其体
内的成瘤活性及免疫原性进行了初步研究，并进一
步研究了中药苦参碱体内抑瘤活性与机体免疫功能
的关系。研究结果显示，小鼠 ＴＩＭ２转基因修饰肝
癌细胞瘤苗可以显著抑制小鼠体内肿瘤的发生和发
展，体内的致瘤性明显降低；苦参碱可有效改善
Ｈ２２ＴＩＭ２瘤苗的抑瘤活性，增强其对体内肿瘤的抑
制作用。脾是机体受外来抗原刺激时，免疫应答反
应最为活跃的器官之一。Ｈ２２ＴＩＭ２瘤苗接种后小
鼠的脾指数较高，提示所制备的 Ｈ２２ＴＩＭ２瘤苗具
有一定的免疫原性，可以刺激 ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠免疫器
官产生相应的免疫应答反应。此外，荷瘤小鼠的胸
腺指数明显低于正常对照组小鼠，一定程度上表明
肿瘤发生时荷瘤机体的确存在有一定程度的免疫抑
制状态。实验结果进一步证实，苦参碱具有抗癌作
用的同时对机体的免疫功能有一定的抑制作用，可
能一定程度上影响了它抗癌活性的发挥，提示改善
和增强机体的免疫功能状态可能有助于提高苦参碱
的抗癌疗效。
本研究从整体水平初步验证了ＴＩＭ２转基因Ｈ２２
瘤苗体内的免疫反应原性，同时证明，苦参碱可进一
步降低小鼠ＴＩＭ２Ｈ２２瘤苗在小鼠体内的成瘤活性，
这为下一步研究ＴＩＭ２基因在肿瘤免疫中的作用及苦
参碱抗癌作用的分子机制奠定了理论基础。
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ｓｅｖｅｒｉｔｙｏｆａｎａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２００２，４１５：５３６．
ＥｆｅｃｔｓｏｆｍａｔｒｉｎｅｏｎｏｎｃｏｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆＨ２２ｃｅｌｓｍｏｄｉｆｉｅｄｂｙＴＩＭ２ｇｅｎｅｉｎｖｉｖｏ
ＭＡＬｉｎｇｄｉ，ＺＨＡＮＧＹａｎ，ＷＥＮＳｈｉｈｏｎｇ，ＨＥＹｕｊｕａｎ，ＬＩＵＸｉａｏｓｈａｎ，ＫＡＮＧＧｅｆｅｉ，ＪＩＡＮＧＪｉｋａｉ
（１．ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＣｅｎｔｅｒ，ｔｈｅＳｅｃｏｎｄＣｈａｎｇｚｈｏｕＨｏｓｐｉｔａｌ，ＡｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＮａｎｊｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｃｈａｎｇｚｈｏｕ２１３００３，Ｃｈｉｎａ；
２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒｏｔａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００１６，Ｃｈｉｎａ；
３．ＣｅｎｔｅｒｆｏｒＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＳｈａｎｔｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｔｏｕ５１５０３１，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆｍａｔｒｉｎｅｏｎｔｈｅａｎｔｉｔｕｍｏｒｅｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆＨ２２ｍｕｒｉｎｅｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌ
ｂａｓｅｄｖａｃｃｉｎｅｍｏｄｉｆｉｅｄｂｙＴＩＭ２ｇｅｎｅｉｎｖｉｖｏ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｐＩＲＥＳ２ＥＧＦＰＴＩＭ２ｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃ
ｔｅｄａｎｄｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＨ２２ｃｅｌｓｂｙｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ．ＴｈｅｍｏｎｏｃｌｏｎｅｏｆｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅＨ２２ＴＩＭ２ｃｅｌｓａｎｄｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌＨ２２ＥＧＦＰｃｅｌｓ
ｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｂｙＧ４１８ｐｒｅｓｓｕｒｅａｎｄｌｉｍｉｔｅｄｄｉｌｕｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｉｎｔｕｒｎ．ＴｈｅＨ２２ｗｈｏｌｅｃｅｌｂａｓｅｄｖａｃｃｉｎｅｗｅｒｅｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅ
ｔｕｍｏｒｂｅａｒｉｎｇｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌ，ａｎｄｉｔｓｏｎｃｏｇｅｎｉｃｉｔｙａｎｄｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｉｎｖｉｖｏ．Ｔｈｅｎｔｈｅｍａｔｒｉｎｅｗａｓａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄｔｏｔｈｅ
ｔｕｍｏｒｂｅａｒｉｎｇｍｉｃｅｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｂｙＨ２２ＴＩＭ２ｃｅｌｓ，Ｈ２２ＥＧＦＰｃｅｌｓａｎｄＨ２２ｃｅｌｓ，ａｎｄｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｅｃｔｏｆｍａｔｒｉｎｅｏｎｔｕｍｏｒｗａｓ
ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＴｈｅｃｏｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＥＧＦＰｐｒｏｔｅｉｎａｎｄＴＩＭ２ｍＲＮＡｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎＨ２２ＴＩＭ２ｃｅｌｓ．Ｔｈｅｒａｔｅｏｆｔｕｍｏｒｆｏｒｍａｔｉｏｎｉｎ
ｍｉｃｅｉｎｊｅｃｔｅｄｏｆＨ２２ＴＩＭ２ｃｅｌｓｗａｓ４１％，ｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆＨ２２ｃｅｌｓａｎｄＨ２２ＥＧＦＰｃｅｌｓｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（９２％）ｉｎｍｉｃｅ．Ｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆ
ｔｕｍｏｒｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｈｉｂｉｔｅｄｖａｃｃｉｎａｔｅｄｗｉｔｈＨ２２ＴＩＭ２ｃｅｌｓｉｎｍｉｃｅ．Ｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｒａｔｅｏｆｔｕｍｏｒ（ＩＲ）ｗａｓ６９２％ ｉｎｍｉｃｅｏｆ
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·８７１１·
第３３卷第１０期
２００８年５月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １０
Ｍａｙ，２００８
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［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＴＩＭ２ｇｅｎｅ；ｍａｔｒｉｎｅ；ｖａｃｃｉｎｅ；ｔｕｍｏｒｉｍｍｕｎｉｔｙ；Ｈ２２ｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｉｎｅ
［责任编辑 古云侠］
［收稿日期］ ２００７０４１０
［基金项目］ 教育部新世纪优秀人才支持计划（ＮＣＥＴ０４０６５７），
河南省高等学校创新人才培养工程（２００４２３）
［通讯作者］ 苗明三，Ｔｅｌ：（０３７１）６５９６２５４６，Ｅｍａｉｌ：ｍｉａｏｍｉｎｇｓａｎ
＠１６３．ｃｏｍ
玉米须总皂苷对大鼠糖尿病模型肾脏和
胰脏超微结构的影响
苗明三，张桂兰，苗艳艳，史晶晶，刘会丽
（河南中医学院，河南 郑州 ４５０００８）
［摘要］ 目的：探讨玉米须总皂苷对链脲佐菌素所致大鼠糖尿病模型肾脏和胰脏超微结构的影响。方法：采
用尾静脉注射链脲佐菌素造大鼠糖尿病模型，通过观察肾脏、胰脏超微结构的改变，探讨玉米须总皂苷不同剂量
（２００，１００，５０ｍｇ·ｋｇ－１）对该模型大鼠血糖及肾脏和胰脏组织的影响。结果：采用尾静脉注射 ＳＴＺ的方法成功复
制出大鼠糖尿病模型。与模型组比，高、中剂量玉米须总皂苷和二甲双胍均可显著降低第３０天血糖（Ｐ＜００１）；各
剂量玉米须总皂苷和二甲双呱均显著对抗链脲佐菌素对胰岛细胞的损伤；二甲双胍、高、中剂量玉米须总皂苷均可
显著升高肾小管上皮细胞线粒体体密度（Ｖｖ）、比膜面（δｍ）、常染色质 Ｖｖ（Ｐ＜００１），均可显著降低比表面（δ）、核
δ、异染色质Ｖｖ（Ｐ＜００１）；低剂量玉米须总皂苷可明显增加近曲小管上皮细胞 Ｖｖ（Ｐ＜００５）。结论：玉米须总皂
苷有较好的降糖作用，对链脲佐菌素致糖尿病大鼠模型所引起的肾脏、胰脏损伤有较好保护作用。
［关键词］ 玉米须总皂苷；糖尿病；链脲佐菌素；超微结构
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１０１１７９０５
玉米须为禾本科植物玉蜀黍ＺｅａｍａｙＬ．的干燥
花柱和柱头，性平、味甘，具有利水消肿、利湿退黄之
功。临床用于治疗糖尿病、慢性肾炎、乳糜血尿、泌
尿系感染等疗效确切［１，２］。玉米须含皂苷、挥发油、
多糖、黄酮等成分。作者的前期研究表明，玉米须总
皂苷有一定的预防和治疗糖尿病的作用，其降糖作
用可靠，降糖效果明显［１，２］；玉米须总皂甘对大鼠糖
尿病肾病模型也有较好疗效，可显著降低模型大鼠
血肌酐、尿肌酐、肾指数、尿微量白蛋白（ＭＡＵ）、尿
素氮（ＢＵＮ）水平，光镜观察可显著改善胰脏、肾脏
等病理变化［３］。我国玉米须资源极为丰富，研究及
应用玉米须作为降糖药用资源具有广阔的前景。
１ 材料
１．１ 药品及试剂 玉米须总皂苷（ＺＭＬＳ），由本院
化学教研室提供，含量近６０％；盐酸二甲双胍片，上
海医药集团有限公司信宜制药总厂生产，批号
０４０６０２；链脲佐菌素，美国Ｓｉｇｍａ公司。
１．２ 动物 Ｗｉｓｔａｒ大鼠，雄性，体重１６５～１８５ｇ，河
南医学动物实验中心提供，动物许可证号４１０１１７。
１．３ 仪器 ＵＶ－２０００分光光度计，尤尼柯（上海）
仪器有限公司；日立Ｈ－７５００透射电子显微镜。
２ 方法与结果
取大鼠１００只，禁食１２ｈ后尾静脉注射链脲佐
菌素（ＳＴＺ）６０ｍｇ·ｇ－１［２］（用 ｐＨ４２的枸橼酸缓冲
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第３３卷第１０期
２００８年５月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １０
Ｍａｙ，２００８