全 文 ：栀子提取物抗病毒试验研究
王意忠u o崔晓兰t 3 o高英杰t o郭姗姗t o王秀坤t o
黄 洋t o赵 晔t o巩文峰t
kt1 中国中医科学院 中药研究所 o北京 tsszss ~u1 航天中心医院 o北京 tsssw|l
≈摘要  目的 }观察栀子提取物 Š对小鼠流感病毒性肺炎模型的影响和体外对多种病毒致细胞病变作用的
影响 ∀方法 }小鼠经滴鼻感染流感病毒造成肺炎模型 o观察肺部炎症 !死亡率和生命延长率 o体外抗病毒试验采用
≤°∞法 o按 • ¨¨ §2∏¨ ±¦«方法计算 ×≤’ o×≤x’ oŒ≤x’ o׌∀结果 }栀子提取物 Š对流感病毒致小鼠肺部炎症有明显抑制
作用 o可明显降低流感病毒感染后小鼠的死亡率 !延长存活时间 o同时降低小鼠血清中 ‘’含量 ~在体外对流感病毒
等 y种病毒引起的细胞病变有明显抑制作用 ∀结论 }栀子提取物 Š对流感病毒等 y种病毒有明显抑制作用 o其对
小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用与降低血清中 ‘’含量有关 ∀
≈关键词  栀子提取物 Š ~细胞病变 ~病毒性肺炎
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussyltw2ttzy2sv
≈收稿日期  ussx2tt2ut
≈基金项目  国家自然科学基金面上项目kvsvztzxwl
≈通讯作者  3 崔晓兰 oר¯ }kstsl{wstxuss o∞2°¤¬¯}¦∏¬¬¯u{tu ƒ
¶¬±¤q¦²°
中药栀子性味苦寒 !归心肺三焦经 o能泻火除
烦 !清热利尿 !凉血解毒 o具有通泻三焦火邪的功效 o
是中医药用于治疗温毒疫病的要药 ∀本研究采用体
内外试验对中药栀子提取物 Š的抗病毒作用进行
了研究 o并进行了反复验证 o其目的为进一步探讨其
抗病毒机制奠定基础 ∀
1 材料与方法
111 材料
11111 受试药物 中药栀子提取物 Š o由中国医
学科学院药物研究所化学室制备kys h l ∀体外试验
前用高纯水配制成 tss °ª#°pt的母液 o过滤除菌
后备用 o试验时按需要用维持液做倍比稀释 ∀体内
试验时小鼠用量为 wss °ª#®ªpt和 uss °ª#®ªpt ∀
11112 阳性对照药 病毒唑 o湖北湖滨制药公司产
品 o批号 |zsxs{ ∀体外试验前用高纯水配制成 u °ª#
°pt的原药液 o过滤除菌后备用 ∀小鼠试验时用量
为 s1sz °ª#®ªpt ∀
11113 病毒株及细胞 小鼠模型采用流感病毒亚
甲型鼠肺适应株 ∀体外试验采用甲型流感病毒 o副
流感病毒 t型k°Œ∂2tl o呼吸道合胞病毒k• ≥∂l o柯萨
奇 …族病毒 v ox 型k≤²¬…v o≤²¬…xl o单纯疱疹病毒
k‹≥∂2t o‹≥∂2ul o腺病毒 v ox型k„§v o„§xl分别购自
中国预防医学科学院病毒研究所及儿科研究所 o本
试验室传代后使用 ∀人喉癌上皮传代细胞 ‹ ³¨2u
株 o购自中国预防医学科学院病毒研究所 o本试验室
传代后使用 ∀
11114 动物 昆明种小鼠 o雌雄兼用 ∀体重ktw ?
tl ªo由北京生物制品研究所动物饲养室提供 o许可
证号京动许字kt|||l第 stu号 ∀
11115 仪器和试剂 ≤’u培养箱k日本 ≠¤°¤·²松株
式会社l o倒置显维镜k日本 ’¯ ¼°³∏¶l o酶标仪k…Œ’2
• „⁄ ²§¨¯p xxsl ∀一氧化氮 ∞Œ≥„检测试剂盒k北
京邦定泰克生物技术公司 o批号 ussvttsvl ∀ ∞¤ª¯ .¨ ¶
∞k日本日水制药株式会社 o批号 usswtsuxl ∀
112 方法
11211 栀子提取物 Š对 ‹ ³¨2u培养细胞的毒性试
验 将母液用 ∞¤ª¯ .¨ ¶培养液做 tΒ{ ∗ tΒxtu倍比稀
释后 o加到已长成单层的 ‹ ³¨2u细胞培养板中 otss
ˏr孔 o每个稀释度药液做 w个复孔 o同时设正常细
胞对照 ∀将培养板置 vz ε x h ≤’u培养箱中培养 w
§o每日倒置显微镜下观察细胞病变情况 o确定细胞
不出现明显退变的最低稀释倍数k最大无毒浓度l ∀
试验时顺延做到最小有效浓度 ∀按 • ¨¨§2∏¨±¦«法
计算 xs h 细胞毒性浓度k×≤xsl和最大无毒浓度
k×≤sl ∀
11212 栀子提取物 Š体外抗病毒作用k≤°∞法l
#yztt#
第 vt卷第 tw期
ussy年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt oŒ¶¶∏¨ tw
∏¯¼ oussy
取已长成单层细胞的培养板 o倒掉培养液 o加入相应
稀释度的药液 otss ˏr孔 o每个稀释度平行做 w个
复孔 ∀置 vz ε x h ≤’u培养箱中作用 t «后倒掉药
液 o接种 tss×≤Œ⁄xs的不同病毒液 oxs ˏr孔 o置 vz ε
x h ≤’u培养箱中吸附 t «后倒掉病毒液 ∀用不含小
牛血清的 ∞¤ª¯ .¨ ¶维持液冲洗细胞面 u次 ∀再加入
相应稀释度的药液 o同时设病毒对照 !阳性药对照及
正常细胞对照 ∀置 vz ε x h ≤’u培养箱中培养 o每
日倒置显微镜下观察细胞病变情况 o当病毒对照组
细胞病变为 8 时记录试验结果 ∀细胞病变按 y级标
准判断k p }细胞生长正常 o无病变出现 ~? }细胞病
变少于整个单层的 ts h ~n }细胞病变约占整个单
层细胞的 ux h以下 ~6 }细胞病变约占整个单层细
胞的 xs h以下 ~7 }细胞病变约占整个单层细胞的
zx h以下 ~8 }细胞病变约占整个单层细胞的 zx h
以上l ∀并按 • ¨¨§2∏¨±¦«计算 xs h有效浓度kŒ≤xsl
和治疗指数k׌l ∀ ׌€ ×≤xsrŒ≤xs ∀
11213 对小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用 取小
鼠 xs只 o按体重随机分成 x组 ∀分别为栀子提取物
Š u个剂量组k剂量分别为 wss ouss °ª#®ªptl !病毒
唑对照组 !病毒感染对照组及正常对照组 ∀除正常
组外 o将小鼠用乙醚轻度麻醉 o以 tx个 ×≤Œ⁄xs流感
病毒液滴鼻感染 o每只 s1sx °∀感染前 t §开始灌
胃给药 o每次 s1u °#ts ªp t o每天 u次 o连续 x §o对
照组在同等条件下蒸馏水灌胃 ∀第 y天称取小鼠体
重后 o摘眼球取血测定血清中 ‘’含量 ~解剖摘取全
肺称重 o计算肺指数值 o并求出肺指数抑制率 ∀
肺指数 € ≈肺重kªlr体重kªl  ≅ tss h
肺指数抑制率k h l €
病毒对照组肺指数均值 p试验组肺指数均值
病毒对照组肺指数均值 ≅ tss h
11214 对流感病毒致小鼠死亡的保护作用 病毒
引起小鼠死亡最小毒力的测定 }将病毒用生理盐水
稀释成 s1x ∗ w ⁄xs的不同病毒液 o取小鼠 xs只 o每
个稀释度 ts只 os1sx °r只 o滴鼻感染 ∀然后观察
动物的死亡情况连续 tx §∀取感染后 tx §内动物
死亡率在 |s h 以上的最小浓度 o为试验时的感染
量 ∀试验结果显示 ou ⁄xs感染时 o小鼠的死亡率为
|s h o故将其定为试验时的感染量 ∀
取小鼠 {s只 o按体重随机分成 w组 ∀分别为栀
子提取物 Š u个剂量组k剂量分别为 wss ouss °ª#
®ªptl !病毒唑组及病毒感染组 ∀各给药组灌胃给
药 o每次 s1su °#ªpt o每天 u次 o连续 z §o对照组在
同等条件下蒸馏水灌胃 ∀给药第 u天各组小鼠乙醚
轻度麻醉后 o以 u ⁄xs流感病毒液滴鼻感染 os1sx
°r只 ∀记录感染后 tx §内小鼠的死亡数 o计算死
亡率 !死亡保护率及平均存活天数 !生命延长率 ∀
死亡保护率 € k病毒对照组死亡率 p试验组死亡率lr病
毒对照组死亡率
生命延长率 €
试验组平均存活天数 p病毒对照组平均存活天数
病毒对照组平均存活天数 ≅ tss h
3 结果
311 体外抗病毒作用k≤°∞法l
栀子提取物 Š在体外对甲型流感病毒 o°Œ∂2t o
• ≥∂ o‹≥∂2t o‹≥∂2u病毒的致细胞病变有明显抑制
作用 o其Œ≤xs分别为 t1wt ot1wt os1y{ ot1tu和 t1sz °ª
#°pt o׌分别为 y1vu oy1vu otv1ts oz1|y和 {1vv ~对
„§v o„§z病毒有一定的抑制作用 oŒ≤xs为 y1wy oy1wy
°ª#°pt o׌为 t1v{ ot1v{ ~对 ≤²¬…v o≤²¬…x病毒未显
示出抑制作用 ∀
312 对小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用
栀子提取物 Š wss ouss °ª#®ªpt剂量组小鼠的
肺指数值明显低于病毒组 o与病毒组比较有显著性
差异k Π s1st , Π s1sxl o表明中药提取物 Š对流
感病毒引起的小鼠肺部炎症有明显抑制作用 ~病毒
组小鼠血清中的 ‘’ 含量较正常组明显升高 o栀子
提取物 u个剂量组的 ‘’ 含量较病毒组明显降低 o
且呈现良好的量效相关k表 tl ∀
表 t 对小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用k ν € tsl
组别
剂量
r°ª#®ªpt
肺指数
抑制率
r h
‘’
rΛ°²¯#pt
抑制率
r h
正常 p s q|u ? s qsy p vx quu ? tx qsy p
病毒 p t q{{ ? s qwttl p zs quz ? u| quv p
病毒唑 zs t qsw ? s qtsvl wx qvu u| qu| ? tu qs{vl x{ qvw
提取物 Š wss t qu| ? s qvzvl vt qvw t{ q{w ? x qw|vl zw qxy
uss t qv| ? s qvyul uw quv vw qwv ? tu qz{vl xt qwu
注 }与正常组比tl Π s1st ~与病毒组比ul Π s1sx ovl Π s qst
313 对流感病毒所致小鼠死亡的保护作用
小鼠感染病毒 tx §内 o栀子提取物 Š wss °ª#
®ªpt和 uss °ª#®ªpt剂量组动物的死亡数均少于病
毒组 o死亡保护率分别为 vy1{w h ovt1x{ h o与病毒
组比较有显著性差异k Π s1sxl ~小鼠的平均存活
天数较病毒组明显延长 o与病毒组比较有显著性差
异k Π s1sxl o生命延长率均为 uu1uu h k表 ul ∀
#zztt#
第 vt卷第 tw期
ussy年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt oŒ¶¶∏¨ tw
∏¯¼ oussy
表 u 栀子提取物 Š对流感病毒后
小鼠死亡率的影响k ν € usl
组别
剂量
r°ª#®ªp t
死亡率
r h
保护率
r h
平均存活
天数
生命延长率
r h
病毒 p |x p | qzx ? t q|u p
病毒唑 zs ws xz q{|tl tu q{x ? t qw|tl vt qz|
提取物 Š wss ys vy q{wul tt qus ? v qwwul uu quu
uss yx vt qx{ul tt qvs ? v qvwul uu quu
注 }与病毒组比较tl Π s1st oul Π s1sx
4 讨论
本试验在以往研究的基础上 o反复验证栀子提
取物 Š体外对多种病毒致细胞病变的影响和对小
鼠流感病毒性肺炎的影响 o目的为进一步进行抗病
毒机制探讨奠定基础 ∀试验结果显示 o体外抗病毒
试验中 o栀子提取物 Š 对甲型流感病毒 o°Œ∂2t o
• ≥∂ o‹≥∂2t o‹≥∂2u o„§v o„§x所致细胞病变有明显抑
制作用 ~在体内抗病毒试验中 o栀子提取物 Š可明
显减轻流感病毒性小鼠肺部炎症 !降低小鼠死亡率 !
延长生存时间 ∀
本试验采用流感病毒造成小鼠急性肺炎模型 o
在肺部出现明显炎症的同时 o动物血清中 ‘’ 含量
明显增加≈t  o给予中药栀子提取物 Š后动物血清
中的 ‘’含量较模型组显著降低 o说明栀子提取物
Š治疗流感病毒性肺炎与影响体内 ‘’ 的生成有
一定关系 ∀有关栀子提取物 Š治疗流感病毒性炎
症机制已做了大量研究 o相关内容将会陆续报道 ∀
≈参考文献 
≈t  邱海波 o德昌陈 o潘家琦 o等 q抑制一氧化氮合成对急性肺损
伤炎症反应的调节作用 q急诊医学 ot||| o{kvl }txv q
Αντιϖιρυσ εφφεχτσ οφ εξτραχτ φροµ γαρδενια
• „‘Š ≠¬2½«²±ªu o≤˜Œ ÷¬¤²2¯ ¤±oŠ„’ ≠¬±ª2­¬¨t oŠ˜’ ≥«¤±2¶«¤±t o • „‘Š ÷¬∏2®∏±t o ‹˜„‘Š ≠¤±ªt o‹„’ ≠ t¨ o Š’‘Š • ±¨ª2©¨ ±ªt
(t . Ινστιτυτε οφ Χηινεσε Μετερια Μεδιχα , Χηινα Αχαδεµψ οφ Χηινεσε Μεδιχαλ Σχιενχεσ , Βειϕινγ tsszss , Χηινα ;
u . Αεροσπαχε Χεντερ Ηοσπιταλ, Βειϕινγ tsssw| , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ ²¥¶¨µ√¨·«¨ ©¨©¨¦·²©·«¨ ¬¨·µ¤¦·©µ²° ª¤µ§¨±¬¤²±¬±©¯∏¨ ±½¤√¬µ¤¯ ³±¨ ∏°²±¬¤¬± °¬¦¨ ¤±§√¬µ∏¶2¬±§∏¦¨§¦¼·²2
³¤·«¬¦ ©¨©¨¦·q Μετηοδ : ׫¨ °¬¦¨ º µ¨¨ ¬±©¨¦·¨§¥¼¬±©¯∏¨ ±½¤√¬µ∏¶¬± ±¤¶¤¯ o·«¨ ∏¯±ª¬±©¯¤°°¤·¬²±o°²µ·¤¯¬·¼µ¤·¨ ¤±§ ¬¯©¨ ¨¯²±ª¤·¬²±µ¤·¨ º µ¨¨
²¥¶¨µ√ §¨µ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ q׫¨ ¤±·¬2√¬µ¤¯ ¤¦·¬√¬·¼ ²©·«¨ ¬¨·µ¤¦·©µ²° ª¤µ§¨±¬¤º¤¶¤¦¦¨¶¶¨§¥¼¦¼·²³¤·«¬¦ ©¨©¨¦·k≤°∞l¬± √¬·µ²¤±§s h·²¬¬¦¬·¼¦²±2
¦¨±·µ¤·¬²± k×≤sl oxs h ·²¬¬¦¬·¼¦²±¦¨±·µ¤·¬²± k×≤xsl oxs h ¬±«¬¥¬·²µ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± kŒ≤xsl o·«¨µ¤³¨ ∏·¬¦¬±§¨¬k׌l º µ¨¨ §¨·¨µ°¬±¨ §¥¼ • ¨¨ §2
∏¨ ±¦« ° ·¨«²§q Ρεσυλτ : ׫¨ ³±¨ ∏°²±¬¤¬±§∏¦¨§¥¼¬±©¯∏¨ ±½¤ √¬µ∏¶¬± °¬¦¨ º¤¶¬±«¬¥¬·¨§¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ ¥¼·«¨ ¬¨·µ¤¦·©µ²° ª¤µ§¨±¬¤o¤¶·«¨
°²µ·¤¯¬·¼µ¤·¨ §¨¦µ¨¤¶¨§¤±§·«¨ ¬¯©¨ ¨¯²±ª¤·¬²±µ¤·¨¬±¦µ¨¤¶¨§µ¨°¤µ®¤¥¯¼ q  ¤¨±º«¬¯¨ ·«¨ ‘’ ¦²±·¨±·¬± ¶¨µ∏° §¨¦µ¨¤¶¨§¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ ~׫¨ ¦¼2
·²³¤·«¬¦ ©¨©¨¦·¬±§∏¦¨§¥¼ ¶¬¬®¬±§¶²©√¬µ∏¶¨¶º¤¶¬±«¬¥¬·¨§µ¨°¤µ®¤¥¯¼ q Χονχλυσιον : ׫¨ ¶¬¬ ®¬±§¶²©√¬µ∏¶¨¶º µ¨¨ ¬±«¬¥¬·¨§¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ ¥¼
·«¨ ¬¨·µ¤¦·©µ²° ª¤µ§¨±¬¤ º«¬¦«¬±«¬¥¬·²µ¼ ©¨©¨¦·²± °¬¦¨ ¬±©¯∏¨ ±½¤√¬µ¤¯ ³±¨ ∏°²±¬¤ º¤¶µ¨ ¤¯·¨§·²·«¨ ‘’ ¦²±·¨±·§¨¦µ¨¤¶¨§q
[ Κεψ ωορδσ] ¬¨·µ¤¦·©µ²° ª¤µ§¨±¬¤~¦¼·²³¤·«¬¦ ©¨©¨¦·~¬±©¯∏¨ ±½¤√¬µ¤¯ ³±¨ ∏°²±¬¤
≈责任编辑 刘  
封面图片简介
茄科植物莨菪 Ηψοσχψαµυσ νιγερq∀一年或二年生草本 o高可达 t米 o全体被有黏性腺毛和柔毛 ~基生叶常丛生成莲座状 o
茎生叶互生 o基部半抱茎 o叶片长圆形 o边缘羽状深裂或浅裂 ~花单生叶腋 o常于茎端密集 o花冠漏斗状 o黄绿色 o具紫色脉纹 o雄
蕊 x o不等长 o花药深紫色 ~蒴果藏于宿萼内 o卵球形 o成熟时盖裂 ~种子细小 o扁卵形或扁肾形 o表面具细密隆起的网状纹理 ∀
花期 y ∗ z月 o果期 { ∗ |月 ∀莨菪常生于林边 !田野 !路旁等处 o有少量栽培 ∀主要分布于河北 !河南 !内蒙古及东北 !西北诸省
区 ∀
莨菪种子入药为中药天仙子 o始载于5神农本草经6 o原名莨菪子 o列入下品 ∀李时珍释其名谓 }/其子服之 o令人狂狼放宕 o
故名0 ∀天仙子味苦 !辛 o性温 o有大毒 ∀功能解痉止痛 !安神定喘 o用于胃痉挛疼痛 !喘咳 !癫狂 ∀天仙子主要含茛菪碱和东茛
菪碱 o均系抗胆碱药 ∀ k北京大学药学院 陈虎彪l
#{ztt#
第 vt卷第 tw期
ussy年 z月
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