免费文献传递   相关文献

Investigation on one-pot extraction of active ingredient group from Yupingfeng powder by HPLC

HPLC研究玉屏风散活性组分群一釜法提取效果



全 文 :透皮速度参数T30%相当于透皮总量(最大量接
近60%)的50%所需时间,透皮总量参数Q90h(90h
后释药量极少,几乎测不出)相当于每贴的使用时
间。
[参考文献]
[1] 奚 炜,胡晋红,朱全刚,等.来氟米特贴片的制备及体外释药
特性[J].药学服务与研究,2004,4(3):240.
[2] 黄绳武,宋宵宏.中药复方制剂心安康贴剂的透皮吸收促进剂
选择研究[J].药学研究,2003,6(7):391.
[3] 张 奇,邓英杰,刘令勉.透皮吸收促进剂对青龙贴中麻黄生
物碱透皮吸收的影响[J].中国中药杂志,2000年 3月,25
(3):154.
[4] 寿 旦,张静芸.化瘀巴布膏体外透皮吸收研究[J].中草药,
2003,34(3):220.
[5] 李西林,徐莲英,蔡贞贞.麻黄体外透皮吸收特性研究[J].中
成药,2004,26(5):356.
[6] 中国药典[S].一部,2005:92,224.
[7] 张 杰,杜 进,张志勇.HPLC法测定麻黄碱含量[J].黑龙江
医药,2003,16(2):95.
CutaneouspermeationcomparisonofKechuanacupointpatchandpower
HEQun,DENGGuiming,YANGGuangnin,XULi,WANGShi
(ColegeofPharmaceutics,HuNanUniversityofTraditionalChineseMedicineandDrug,Changsha410208,China)
[Abstract] Objective:TocomparethecutameouspermeationofKechuanacupointpatchandpower,andevaluatethepossibil
ityofdosageformreformofKechuanrecipe.Method:TaketheEugendandEphedrineastheindexes,HPLCwasemployedtodeter
minetheircontents,thepondwithFranzdifusionwereusedtomeasuredthecutameous.Result:ThepermeationofPatchmatched
withHiguchiEquation.TakeEugendastheindex,thepermeationrateoftotalofPatchis2319and1738timesofthepowder,and
1784and1215timesofthepowderwiththeEphedrineasasindex.Conclusion:ThepermeationrateofKechuanacupointpatchwas
morerapidthanthepowder.Moreover,thetotalquantityofpermeationofpatchwasalsomorethanthepowder.
[Keywords] Kechuanacupointpatch;Kechuanacupointpowder;Franzdifusion;eugend;ephedrine;HPLC;HiguchiEqua
tion;Weibuldistribution [责任编辑 鲍 雷]
[收稿日期] 20060927
[基金项目] 广西教育厅项目(桂教科研[2004]20)
[通讯作者] 杨克迪,Tel:(0771)2945608,Fax:(0771)3233718,Email:kdyang@163.com
HPLC研究玉屏风散活性组分群一釜法提取效果
杨克迪,暴惠宾,李 宏,何开鹏
(广西大学 化学化工学院,广西 南宁 530004)
[摘要] 目的:研究玉屏风散中活性成分群(黄芪甲苷、升麻苷及5O甲基维斯阿米醇苷)的提取条件。方
法:采用一釜法提取玉屏风散中活性成分群,HPLC分析各活性成分含量。以提取物中活性成分含量及得率为指
标,通过正交实验考察乙醇体积分数、溶剂用量、提取时间和提取温度4个因素对提取效果的影响。结果:较佳的
提取条件为:单位质量(g)药材以10mL体积分数为90%的乙醇,在80℃下提取4h。提取物中活性成分总含量和
得率分别为0.53%,0.16%。结论:在文中较优提取条件下,玉屏风复方中活性成分群得到有效提取。
[关键词] 高效液相色谱;玉屏风散;活性成分群;一釜法提取
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2007)18188004
·0881·
第32卷第18期
2007年9月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.32,Issue 18
September,2007
  玉屏风散由黄芪、防风、白术3味药组成,药简
力宏,为益气和卫、固表止汗的传统方剂,临床应用
广泛[1]。玉屏风制剂(口服液、颗粒、胶囊等)均以
黄芪甲苷、升麻苷及5O甲基维斯阿米醇苷为指标
成分,对制剂质量进行定性或定量控制,玉屏风散中
活性成分提取效果对制剂质量影响较大。目前玉屏
风制剂生产以水为溶剂,一釜法煎煮提取方中上述
活性组分群,尚无文献研究玉屏风散活性组分群的
提取条件。作者在文献[24]基础上,采用HPLC定
量分析提取物中各活性成分含量,研究活性成分群
的提取效果,通过提取条件探讨和优化,为玉屏风制
剂生产、研发提供依据。
1 仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪;Laborota4000旋
转蒸发器(德国 Heidolph公司);BS124S型电子分
析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。
黄芪(批号20051125)、防风(批号20050301)和
白术(麸炒,批号200411291)药材(广西一心药业股
份有限公司),经广西民族医药研究所戴斌主任药师
鉴定均为药典正品;黄芪甲苷(批号078120011)、升
麻苷(批号1522200202)、5O甲基维斯阿米醇苷对
照品(批号1523200203)均购自中国药品生物制品检
定所;乙腈、甲醇为色谱纯,其余试剂为分析纯。
2 方法
2.1 活性成分群提取
黄芪、防风、白术3味药材分别粉碎,按照2005
年版《中国药典》(一部)中玉屏风口服液的处方配
比[黄芪防风白术(3∶1∶1)],准确称取一定量玉屏
风散粉末置于圆底烧瓶中,加入一定体积 20% ~
100%的乙醇在一定温度下浸提,提取后的药渣在同
样条件下再浸提1次,合并2次滤液,减压挥去溶
剂,得玉屏风提取物浸膏。
2.2 玉屏风提取物中活性成分含量测定
2.2.1 色谱条件 ZorbaxSBC18色谱柱(46mm×
150mm,5μm),柱温 30℃,流动相流速 1mL·
min-1,升麻苷、5O甲基维斯阿米醇苷以甲醇水
(40∶60)为流动相,检测波长254nm;黄芪甲苷色谱
分析以乙腈水(32∶68)为流动相,检测波长 200
nm。
2.2.2 标准曲线及线性范围 精确称取适量对照
品,用甲醇溶解,定容。升麻苷、5O甲基维斯阿米
醇苷及黄芪甲苷对照品溶液质量浓度分别为
0128,0128,0704g·L-1。分别吸取2,4,6,8,10
μL上述对照品溶液进样,以对照品进样量为横坐标
(X),以峰面积为纵坐标(Y),进行线性回归,对照
品标准曲线见表1。
2.2.3 样品供试液制备 升麻苷、5O甲基维斯阿
米醇苷供试液:精密称取玉屏风浸膏约15mg置于
25mL量瓶中,用甲醇超声溶解,定容至25mL,溶液
用045μm微孔滤膜过滤,取滤过液作为供试液。
   表1 对照品标准曲线
对照品 标准曲线 r 线性范围/μg
升麻苷    Y=1963396X-341509999 0256~1280
 5O甲基维 Y=2060764X-382509999 0256~1280
斯阿米醇苷       
黄芪甲苷   Y=72289X-4904 09999 1408~7040
  黄芪甲苷供试液:精密称取玉屏风浸膏约1g,加
入10mL正丁醇饱和水超声溶解,溶液用水饱和的正
丁醇萃取4次,每次40mL,合并正丁醇液,用1%
NaOH溶液洗涤3次,每次40mL,然后用正丁醇饱和
水洗至中性,回收正丁醇,残渣用5mL水溶解,备用。
取C18固相萃取柱依次用5mL甲醇和5mL水预处
理,将样品水溶液过固相萃取柱,先用3mL双蒸水洗
涤,然后用20%甲醇溶液5mL洗涤,弃去洗涤液。用
60%甲醇20mL洗脱,收集洗脱液。洗脱液挥干溶
剂,用甲醇定容至5mL作为供试品溶液。
3 结果与讨论
3.1 黄芪甲苷SPEHPLC分析
3.1.1 样品中黄芪甲苷固相萃取 采用 HPLC分
析黄芪甲苷时,样品中黄芪甲苷通常采用 D101大
孔树脂吸附纯化,HPLC分析表明其纯化效果不理
想,样品中杂质较多。实验结果表明,采用 C18反相
固相萃取柱处理黄芪甲苷样品,方法简单,能有效地
去除样品中杂质,所得样品液杂质相对较少,有利于
黄芪甲苷分析。玉屏风散样品HPLC图见图1。
图1 玉屏风散样品HPLC图
A.对照品;B.样品;1.黄芪甲苷
3.1.2 SPEHPLC测定黄芪中黄芪甲苷含量 分
别称取3份批号为20050316的黄芪药材粉末,每份
·1881·
第32卷第18期
2007年9月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.32,Issue 18
September,2007
约4g,分别加甲醇60mL,80℃下回流提取4h,提
取液挥干甲醇。浸膏按2.2.3方法制备黄芪甲苷供
试品溶液,按2.2.1色谱条件分析,药材中黄芪甲苷
平均含量为00908%,RSD063%。同法测定批号
为20051125的黄芪药材,黄芪甲苷含量平均值为
00693%,RSD087%。
3.1.3 精密度试验 精密吸取黄芪甲苷对照品溶
液10μL,按2.2.1色谱条件重复进样5次,测定峰
面积,黄芪甲苷峰面积RSD087%。
3.1.4 加样回收率试验 精密称取已知黄芪甲苷
含量的黄芪约20g,加入适量黄芪甲苷对照品,按
3.1.2方法测定黄芪甲苷含量,计算黄芪甲苷平均
回收率,结果见表2。
表2 黄芪甲苷加样回收率
No.
取样量
/g
样品中
含量/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
1 20089 18241 0704 25441 1023
2 19532 17735 1408 32095 1020 1015 112
3 23840 21647 3280454502 1002    
3.2 正交试验结果及分析
以提取物中3个活性成分的总含量、得率为试
验指标,考察了乙醇体积分数(A)、溶剂用量(B)、
提取时间(C)和提取温度(D)4个影响因素对玉屏
风散活性成分群提取效果的影响,正交试验因素水
平设置见表3,实验结果见表4,方差分析见表5。
表3 因素与水平
水平

乙醇体积分数
/%

药材∶溶剂
/g∶mL

提取时间
/h

提取温度
/℃
1 50 1∶5 2 25
2 70 1∶10 4 50
3 90 1∶15 6 80
表4 正交试验结果 %
No. 活性成分总含量 得率
1 025 006
2 038 013
3 036 015
4 041 013
5 030 0074
6 036 011
7 055 0085
8 047 011
9 041 0035
表5 方差分析表
方差来源
离差平方和
含量 得率
自由度
方差
含量 得率

含量 得率

含量 得率
A 00340 00021 2 00170 00011 2429 1486 <005 <010
B 00014 00003 2 00007 00002 100 229 >010 >010
C 00034 00002 2 00017 00001 243 100 >010 >010
D 00210 00088 2 00110 00044 1571 6285 <010 <005
  注:F005(2,2)=1900,F010(2,2)=900
  由表 5可知,各因素对含量的影响顺序为
A>D>B>C,乙醇体积分数、提取温度对活性成分
群的含量影响较显著,溶剂用量及提取时间的影响
较小;各因素对得率影响的顺序为D>A>B>C,其
中提取温度对活性成分群得率的影响非常显著,乙
醇体积分数对得率有显著性影响,乙醇用量和提取
时间的影响甚小。在所考虑因素的水平范围,根据
试验结果确定玉屏风散活性成分群最佳提取条件组
合为A3B2C2D3,即单位质量玉屏风散粉末加入10
mL90%乙醇在80℃下提取4h。
3.3 最佳提取方案验证实验
称取玉屏风散粉末约20g,加入200mL90%乙
醇,80℃下提取4h,同样条件下提取2次。得到的
提取物浸膏经HPLC分析,提取物中3个活性成分
的总含量及得率分别为053%,016%。
4 结论
采用HPLC方法定量分析玉屏风散活性成分群
一釜法提取效果时,提取物中升麻苷及5O甲基维
斯阿米醇苷在文中色谱条件与其他组分达到基线分
离,样品不须进一步处理;样品中黄芪甲苷需富集纯
化后才能进行 HPLC分析。采用 C18反相固相萃取
柱富集样品中黄芪甲苷,方法简单,分析结果具有较
好的准确性与重现性。
乙醇体积分数、溶剂用量、提取时间和提取温度
4个因素中,乙醇体积分数、提取温度是影响玉屏风
散活性成分群一釜法提取效果的2个显著因素,溶
剂用量、提取时间对提取效果的影响不显著。玉屏
风散以90%乙醇为溶剂,在80℃下,活性成分群能
得到有效提取。
[参考文献]
·2881·
第32卷第18期
2007年9月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.32,Issue 18
September,2007
[1] 许济群,王锦之.方剂学[M].上海:上海科技出版社,1995:128.
[2] 肖 娟,王秀兰,马 鹏.RPHPLC测定玉屏风颗粒中黄芪甲
苷的含量[J].华西药学杂志,2000,15(3):16.
[3] 陈恩瑜.HPLC法测定玉屏风口服液中升麻苷和5O甲基维阿
米醇苷含量[J].海峡药学,2004,16(3):80.
[4] 伍 毅,郑 国.HPLC测定复聪香液中黄芪甲苷的含量[J].
中国中药杂志,2005,30(12):945.
Investigationononepotextractionofactiveingredientgroupfrom
YupingfengpowderbyHPLC
YANGKedi,BAOHuibin,LIHong,HEKaipeng
(SchoolofChemistryandChemicalEngineering,GuangxiUniversity,Nanning530004,China)
[Abstract] Theextractionofactiveingredientgroup,i.e.,primoglucosylcimifugin,astragaloside,and5omethylvisammio
sodefromYupingfengpowderwithonepotmethodwasstudiedinthiswork.AHPLCmethodwasusedtodeterminethecontentofeach
activeconstituentmentionedaboveintheextract.Theinfluencesofextractiontemperature,time,volumepercentofethanolinwater
anditsamountaddedonthecontentandyieldofactiveingredientgroupwereinvestigatedbyorthogonaltest.Theexperimentalresults
showedthattheoptimizedextractionconditionswereasfolows:1gofYupingfengpowderwasonepotextractedfor4hoursat80℃
with90% ethanolassolvent,andtheyieldandcontentofactiveingredientgroupwere016%,053% respectively.Theactiveingre
dientgroupinYupingfengpowdercouldbeefectivelyonepotextractedundertheconditionsabove.
[Keywords] HPLC;Yupingfengpowder;activeingredientgroup;onepotextraction
[责任编辑 鲍 雷]
[收稿日期] 20070000
[通讯作者] 李天傲,Tel:(010),Email:@
蛇床子中5种成分的 HPLC测定法
翁德新1,李天傲
(1.浙江省德清县第三人民医院,浙江 德清 313201;
2.浙江大学 城市学院 医学与生命科学院,杭州 310015)
[摘要] 目的:建立对蛇床子药材中花椒毒素、异虎耳草素、香柑内酯、欧前胡素、蛇床子素进行同时测定的
RPHPLC法。方法:采用AltechC18色谱柱(46mm×250mm,5μm),流动相乙腈01%醋酸水溶液,梯度洗脱,流
速:1mL·min-1,检测波长245,325nm;柱温为40℃。结果:花椒毒素、异虎耳草素、香柑内酯、欧前胡素、蛇床子
素的线性范围分别为1~20μg·mL-1(r=09999),1~20μg·mL-1(r=09999),1~20μg·mL-1(r=0999
8),100~1200μg·mL-1(r=09997),100~2000μg·mL-1(r=09999),回收率均大于95%。结论:本法简便、
准确、重现性好,适用于蛇床子中5种成分的同时测定。
[关键词] RPHPLC;蛇床子;花椒毒素;异虎耳草素;香柑内酯;欧前胡素;蛇床子素;含量测定
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2007)18188303
  蛇床子为伞形科蛇床属植物蛇床子 Cnidium
monnieri(L.)Cuss.的成熟果实,具有温肾壮阳、祛
风湿燥、杀虫止痒之功效。蛇床子主要含蛇床子素
(osthole)、香柑内酯 (bergapten)、异虎耳草素
(isopimpinelin)、花椒毒素(xanthotoxin)、欧前胡素
(imperatorin)等具有生物活性的香豆素类化合物。
现代药理学研究表明,蛇床子中香豆素类成分在抗
·3881·
第32卷第18期
2007年9月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.32,Issue 18
September,2007