全 文 ：红花水提物对 ｏｘＬＤＬ损伤心肌微血管内皮细胞的
保护作用及 ＥＳＲ谱研究
叶锦霞１，梁日欣１，王 岚１，杨 滨１，安荣姝２
（１．中国中医科学院 中药研究所，北京 １００７００；
２．中日友好医院 临床医学研究所，北京 １００７００）
［摘要］ 目的：观察红花水提物对氧化低密度脂蛋白（ｏｘＬＤＬ）致体外培养大鼠乳鼠心肌微血管内皮细胞损伤
的保护作用，并初步探讨其抗氧化作用机制。方法：采用第３代大鼠乳鼠心肌微血管内皮细胞，用红花水提物预处理
（５００，１００，２０ｍｇ·Ｌ－１）２４ｈ后，ｏｘＬＤＬ（１００ｍｇ·Ｌ－１）孵育２４ｈ进行损伤，实验结束后取上清液，测定细胞上清液中
乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、丙二醛（ＭＤＡ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰｘ）、一氧化氮（ＮＯ）、一氧化
氮合酶（ＮＯＳ）和黄嘌呤氧化酶（ＸＯＤ）活性，用自旋捕集技术结合电子自旋共振波谱技术（ｅｌｅｃｔｒｏｎｓｐｉｎｒｅｓｏｎａｎｃｅ，
ＥＳＲ）检测各组细胞悬液中氧自由基信号的强弱。结果：红花水提物各剂量组能够明显减少内皮细胞ＬＤＨ的释放，降
低培养液中ＭＤＡ含量和ＸＯＤ的活性，同时提高ＳＯＤ，ＮＯ，ＮＯＳ和ＧＳＨＰｘ的活性，使细胞悬液中的ＥＳＲ自由基信号
明显减弱。结论：红花水提物具有抗ｏｘＬＤＬ致体外培养大鼠乳鼠心肌微血管内皮细胞损伤的作用，其机制与其减少
氧自由基产生、增强自由基的清除、增强内源性抗氧化剂的活性，使高毒性的自由基转化成无害物质等有关。
［关键词］ 红花水提物；内皮细胞；氧化低密度脂蛋白；电子自旋共振
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）２１２５１３０５
［收稿日期］ ２００８０５１４
［基金项目］ 科技部国际合作项目（十一五科技计划）（２００６
ＤＦＢ３１７２０）
［通讯作者］ 梁日欣，Ｔｅｌ：（０１０）６４０１４４１１２９４８，Ｅｍａｉｌ：ＲＸ
Ｌｉａｎｇ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ
自由基氧化应激而损伤生物分子包括蛋白质、
ＤＮＡ和脂质过氧化等，已涉及人类一些疾病的病因
学［１］，特别是动脉粥样硬化，低密度脂蛋白（ＬＤＬ）发
生氧化修饰后产生的氧化低密度脂蛋白（ｏｘＬＤＬ）
对内皮细胞造成损伤是关键环节。ｏｘＬＤＬ可进一
步促进氧自由基的产生，引发脂质过氧化的连锁反
应，引起内皮细胞功能障碍，最终发展为动脉粥样硬
化。红花的现代药理研究表明，红花是一种天然的
抗氧化剂，有明显的抗脂质过氧化和减轻自由基损
伤的作用，临床上广泛用于治疗动脉粥样硬化等心
血管疾病。笔者前期研究表明其具有明显的抗氧化
作用，但究竟通过何种途径发挥抗氧化作用，并不清
楚。因此，本项实验采用ｏｘＬＤＬ致心肌微血管内皮
细胞损伤模型，观察红花水提物对血管内皮细胞的
保护作用以及机制。
１ 材料
１．１ 动物
出生５～７ｄ的Ｗｉｓｔａｒ大鼠乳鼠，由中国医学科
学院实验动物研究所提供，动物饲养合格证号
ＳＣＸＫ（京）２００５００１３。
１．２ 药物
红花水提物（新疆红花０２０ｋｇ，加水２５００ｍＬ
加热至沸腾，提取１０ｈ，过滤，滤液浓缩至每１ｍＬ相
当于３３３３ｇ生药），由本所分析室杨滨教授提供。
１．３ 试剂
ｏｘＬＤＬ由中国协和医科大学基础所提供；ＰＢＮ
（ＮｔｅｒｔＢｕｔｙｌαｐｈｅｎｙｌｎｉｔｒｏｎｅ，批号 ３３７６２４７，Ｓｉｇｍａ
公 司）；ＭＤＡ（批 号 ２００７０１２４），ＬＤＨ（批 号
２００７０１２４），ＳＯＤ（批 号 ２００７０１２３），ＮＯ（批 号
２００７０１２１），ＮＯＳ（批号 ２００７０１１０），ＧＳＨＰｘ（批号
２００７１０２６）和 ＸＯＤ（批号２００７１０２４）测定试剂盒，均
为南京建成生物工程研究所产品。
１．４ 仪器
ＭＣＯ－１５ＡＣ型 ＣＯ２培养箱（日本 ＳＡＮＹＯ公
司），４５０型酶联免疫检测仪（日本 ＢＩＯＲＡＤ）；
ＥＳＲ２００Ｄ－ＳＲＣ型电子自旋共振波谱仪（德国
Ｂｒｕｋｅｒ公司）。
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２ 方法
２．１ 大鼠乳鼠心肌微血管内皮细胞原代培养及鉴定
参照Ｎｉｓｈｉｄａ等［２］的方法略加改动。取２只出生
５～７ｄ的Ｗｉｓｔａｒ大鼠心脏，用ＰＢＳ液洗除血液，将心
脏放于７５％乙醇中浸泡３０ｓ，ＰＢＳ液冲洗后，剪碎心
肌组织，加入适量 ０２％Ⅱ型胶原酶，在３７℃摇摆水
浴孵育消化３０ｍｉｎ；加入等体积终浓度为００２％的胰
蛋白酶，３７℃水浴消化１０ｍｉｎ。加入等量含２０％小
牛血清ＤＭＥＭ培养基中和，分离下的细胞过２００目筛
网，取过滤液，离心（２０００ｒ·ｍｉｎ－１，１０ｍｉｎ），重复２
次。所得细胞重悬于含血清培养基中，并调整细胞密
度为１０４～１０５个／ｍＬ，接种于１％明胶处理的培养瓶
中，３７℃培养４ｈ，以除去未黏附细胞，更换含５０ｍｇ
·Ｌ－１肝素、１０ｍｇ·Ｌ－１内皮细胞生长因子的ＤＭＥＭ
完全培养基培养。每２～３ｄ换液１次，选第３代内皮
细胞，０２５％胰蛋白酶消化备用。经Ⅷ因子免疫细胞
化学鉴定为血管内皮细胞，见图１。
图１ 内皮细胞免疫组化鉴定
２．２ 分组
２．２．１ 红花水提物对ｏｘＬＤＬ损伤的心肌微血管内
皮细胞抗氧化作用的影响［３５］ 第３代内皮细胞以
１５×１０５个／ｍＬ的密度接种于 ９６孔板，每孔 ０１
ｍＬ，２４ｈ细胞贴壁后，分为５组：空白组：正常完全
培养基培养；模型组：加入ｏｘＬＤＬ（１００ｍｇ·Ｌ－１）孵
育２４ｈ；红花水提物５００，１００，２０ｍｇ·Ｌ－１剂量组：
分别加入不同质量浓度的红花水提物预处理２４ｈ，
然后换为 １００ｍｇ·Ｌ－１的 ｏｘＬＤＬ溶液孵育 ２４ｈ。
用ＭＴＴ法测定其存活率，收集上层培养液，备测
ＳＯＤ，ＭＤＡ，ＬＤＨ，ＮＯ，ＮＯＳ，ＸＯＤ和ＧＳＨＰｘ等指标。
２．２．２ 红花水提物对内皮细胞悬液中氧自由基信号
的影响［６７］ 实验分为６组：空白组：孔中加入无血清
培养基０８ｍＬ；模型组：孔中加入无血清培养基０８
ｍＬ；红花水提物组：在孔中加入不同质量浓度的红花
水提物０８ｍＬ（５００，１００，２０ｍｇ·Ｌ－１，ＤＭＥＭ完全培
养基配制），共同孵育２４ｈ。然后各组（除空白组为
０２５ｍＬ无血清培养基外）换为１００ｍｇ·Ｌ－１的 ｏｘ
ＬＤＬ的无血清培养基０２５ｍＬ，接着每组同时加入终
浓度为１００ｍｍｏｌ·Ｌ－１的ＰＢＮ０２５ｍＬ，小心吹打均
匀，于３７℃，孵育４５ｍｉｎ后，取出培养板，用无菌消毒
过的细胞刀，小心刮取细胞，收集细胞悬液于５ｍＬ的
ＥＰ管中。于每个ＥＰ管中加入０４ｍＬ醋酸乙酯，充
分混匀后，３０００ｒ·ｍｉｎ－１，离心１０ｍｉｎ；小心吸取上
层无色液体６０μＬ于样品管中，放入ＥＳＲ波谱仪的谐
振腔中进行测定。测定条件：Ｘ波段，中心磁场３３８５
Ｇ，扫描宽度４００Ｇ，调制幅度３２Ｇ，增益４×１０５，微
波功率２０ｍＶ，测试温度为室温。
２．３ 统计方法
应用ＳＰＳＳ１１０统计软件，数据以珋ｘ±ｓ表示，多
组间比较使用单因素方差分析，统计学显著性设定
Ｐ＜００５。
３ 结果
３．１ 内皮细胞形态学变化
在倒置显微镜下观察到，红花水提物高、低剂量
组细胞形态与正常组较相似，呈单层铺路石状生长，
无显著性变化；而模型组和中剂量组细胞出现皱缩，
呈现空泡。ＭＴＴ染色后，模型组大部分细胞不着
色，仅有少数细胞出现紫色结晶物，而红花水提物的
各个给药组紫色结晶物随着水提物浓度的增加，紫
色结晶物的数量增多。见图２。
Ａ．空白组；Ｂ．模型组；Ｃ．红花水提物５００ｍｇ·Ｌ－１组；
Ｄ．红花水提物１００ｍｇ·Ｌ－１组；Ｅ．红花水提物２０ｍｇ·Ｌ－１组
图２ 红花水提物对各组内皮细胞的影响
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３．２ 对细胞存活率的影响
１００ｍｇ·Ｌ－１的ｏｘＬＤＬ诱导内皮细胞产生氧化
损伤后，细胞存活率明显下降。而红花水提物５００，
１００，２０ｍｇ·Ｌ－１均能明显抑制 ｏｘＬＤＬ引起的内皮
细胞损伤，使细胞存活率明显提高，与 ｏｘＬＤＬ模型
组相比，具有极显著差异（Ｐ＜００１）。说明红花水
提物具有减轻内皮细胞ｏｘＬＤＬ氧化应激损伤，保护
细胞的作用。见表１。
表１ 红花水提物对ｏｘＬＤＬ（１００ｍｇ·Ｌ－１）损伤的
微血管内皮细胞存活率的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝５）
组别 剂量／ｍｇ·Ｌ－１ Ａ 抑制率／％
空白 － ０３３０±０００８１） －
模型 － ００７９±０００５ ７６
红花水提物 ５００ ０３７０±００３４１） －１２２４
１００ ０３３２±００４４１） －０６６
２０ ０３１３±００４１１） ５０９
注：与模型组相比１）Ｐ＜００１（表２，３同）
３．３ 对细胞上清液中 ＭＤＡ，ＬＤＨ，ＳＯＤ，ＮＯ，ＮＯＳ，
ＧＳＨＰｘ和ＸＯＤ水平的影响 不同剂量的红花水提
物对ｏｘＬＤＬ所致的微血管内皮细胞的ＳＯＤ，ＮＯ，ＮＯＳ
和ＧＳＨＰｘ含量降低具有很好的抑制作用，而又可以
减少细胞上清液中ＭＤＡ，ＬＤＨ和ＸＯＤ的含量。说明
红花水提物具有减轻ｏｘＬＤＬ损伤作用的趋势，与模
型组相比，具有显著性差异。见表２，３。
３．４ 对氧自由基信号的影响 活性氧自由基的信
号峰为典型的３个峰，而以第二峰受干扰因素最小，
也最稳定，故每组细胞氧自由基与ＰＢＮ形成的自旋
加合物信号的相对值可用各组谱线第二峰的高度来
表示。模型组中自旋加合物信号峰值明显较高，与
空白组比较，具有显著性差异，而红花水提物各给药
组能不同程度使信号峰值降低，其中以 ５００ｍｇ·
Ｌ－１和２０ｍｇ·Ｌ－１尤为显著。说明红花水提物能够
减少ｏｘＬＤＬ损伤的微血管内皮细胞氧自由基生成，
具有保护内皮细胞免受氧化损伤的作用。见表４，
图３。
表２ 红花水提物对ｏｘＬＤＬ（１００ｍｇ·Ｌ－１）损伤内皮细胞的ＬＤＨ，ＭＤＡ和ＳＯＤ水平的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝５）
组别 剂量／ｍｇ·Ｌ－１ ＬＤＨ／Ｕ·Ｌ－１ ＭＤＡ／ｎｍｏｌ·ｍＬ－１ ＳＯＤ／Ｕ·ｍＬ－１
空白 － ４７６９９４±２３４０７８１） ０７３５±００６０ １６４４９±０６０６１）
模型 － ２３４２０２５±４３１９２６ ４７３１±１０２２１） １２６３１±０８３２
红花水提物 ５００ １７４５３９９±８９１８９１ １４６３±０１１７１） １５７４９±０３２１１）
１００ １５６２８８３±５４９５１５１） １５３７±０１００１） １５６２７±０６１５１）
２０ ２２６９９３９±２６３９８６ １５６６±０１０８１） １５６１０±０８３９１）
表３ 红花水提物对内皮细胞ｏｘＬＤＬ（１００ｍｇ·Ｌ－１）损伤ＮＯ，ＮＯＳ，ＸＯＤ，ＧＳＨＰｘ水平的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝５）
组别 剂量／ｍｇ·Ｌ－１ ＮＯ／μｍｏｌ·Ｌ－１ ＮＯＳ／Ｕ·ｍＬ－１ ＸＯＤ／Ｕ·Ｌ－１ ＧＳＨＰｘ／Ｕ·ｍＬ－１
空白 － ８１９６９±８９９８２） ６００６±０７２３２） ７１１０±０４３７２） ４１１３７±０４６１２）
模型 － ２２７５４±６６７３ ２４４６±０９５３ ７４９７±０４３２ ４００４４±０５４０
红花水提物 ５００ ２９８８７±８７１０ ６１５２±１２５１２） ６９４８±０１９３２） ４１３６４±０５７１２）
１００ ３０４２４±４９６１ ６２０３±２４３６２） ７１２５±０２１５ ４０４６９±０４３１
２０ ２５４７１±４７１９ ５３５７±１８５６２） ７０５２±０１５４２） ４０８４４±０４５８
Ａ．空白组；Ｂ．模型组；Ｃ．红花水提物５００ｍｇ·Ｌ－１组；
Ｄ．红花水提物１００ｍｇ·Ｌ－１组；Ｅ．红花水提物２０ｍｇ·Ｌ－１组
以Ｂ组为例，图中箭头之间的距离，为自由基ＥＳＲ
波谱中的第２峰峰值
图３ 红花水提物对内皮细胞ｏｘＬＤＬ损伤后自由基的
ＥＳＲ波谱影响
表４ 红花水提物对ｏｘＬＤＬ（１００ｍｇ·Ｌ－１）损伤微血管
内皮细胞后自由基信号的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝５）
组别 剂量／ｍｇ·Ｌ－１ 自由基信号（峰峰值）／ｃｍ
空白 － １１８±０１９１）
模型 － １６６±０１５
红花水提物 ５００ ０６８±０２５２）
１００ １３０±０４７
２０ ０９４±０２５２）
注：与模型组相比１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１
４ 讨论
在生物体内，ＬＤＬ的氧化修饰是１个自由基的
链式反应过程，氧化修饰的低密度脂蛋白能够促进
脂过氧自由基的形成，引发脂质过氧化的连锁反应，
而且其产生的脂质过氧化产物还有潜在的细胞毒性
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作用，在动脉粥样硬化斑块的形成过程中起着关键
作用。用ｏｘＬＤＬ对心肌微血管内皮细胞造成氧化
损伤，可以体现脂质过氧化损伤方面的发病机制。
生物体内存在抗氧化系统，包括 ＳＯＤ，ＣＡＴ，
ＧＳＨＰｘ，ＧＳＨ和维生素等。ＳＯＤ是体内自由基清除
系统内１个重要的抗氧化酶，能催化超氧阴离子生
成 Ｈ２Ｏ２，从而阻断毒性更强的羟自由基产生。
ＧＳＨＰｘ能特异性催化还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）对过
氧化氢的还原反应，可使有害自由基转化成无害物
质，以起到保护细胞膜结构和功能完整的作用。ＮＯ
是体内产生的强脂质过氧化链式反应阻断剂，能保
护ＶＥ免受过氧基介导的氧化。ＬＤＨ广泛存在于身
体各器官组织中，细胞膜受到氧自由基的攻击后，细
胞内ＬＤＨ释放增加，故 ＬＤＨ的释放是观察细胞自
由基损伤的重要指标。ＭＤＡ是脂质过氧化反应的
产物，其高低常常可以反映脂质过氧化的程度，间接
反映出细胞受自由基攻击的严重程度。
本实验发现模型组的 ＳＯＤ，ＮＯ，ＮＯＳ值明显降
低，说明ｏｘＬＤＬ损伤内皮细胞，可使其抗氧化能力
降低，而与自由基生成密切相关的促氧化酶ＸＯＤ活
力、脂质过氧化物ＭＤＡ含量和ＬＤＨ含量显著升高，
造成细胞大量损伤和死亡。说明 ｏｘＬＤＬ对内皮细
胞的损伤与增加氧化产物及促氧化酶有关。而给予
红花水提物预处理，发现各剂量组能抵抗ｏｘＬＤＬ对
内皮细胞的氧化损伤，提示可能是通过抑制ＸＯＤ活
性，有效清除自由基，抑制 ＭＤＡ和 ＬＤＨ的生成，提
高ＳＯＤ，ＮＯ，ＮＯＳ和ＧＳＨＰｘ的活性，使高毒性的自
由基转化成无害物质而达到保护内皮细胞，抑制其
氧化损伤的作用。
应用自旋捕集技术结合电子自旋共振仪测试自
由基的方法，是目前国内检测自由基的最准确和最
直接的方法，其结果能准确地反映药物清除氧自由
基的能力。而自旋捕获剂ＰＢＮ的应用，又避免了自
由基信号的丢失。实验发现，５００ｍｇ·Ｌ－１和２０ｍｇ
·Ｌ－１的红花水提物组细胞悬液中氧自由基信号明显
比模型组信号弱。结果提示，ｏｘＬＤＬ损伤内皮细胞，
直接使自由基产生增多，从而造成氧化应激可能是其
损伤的机制之一，而红花水提物对抗内皮细胞 ｏｘ
ＬＤＬ损伤的作用可能也是通过相应减少自由基产生，
增强其清除而实现的，与前期实验结果有一致性，从
而揭示了红花水提物抗ｏｘＬＤＬ损伤的可能机制。
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ｏｎｏｘＬＤＬｉｎｄｕｃｅｄｉｎｊｕｒｙｉｎｒａｔｃａｒｄｉａｃｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌ
ＹＥＪｉｎｘｉａ１，ＬＩＡＮＧＲｉｘｉｎ１，ＷＡＮＧＬａｎ１，ＹＡＮＧＢｉｎ１，ＡＮＲｏｎｇｓｈｕ２
（１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ；
２．ＩｎｓｔｉｔｕａｔｅｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＣｈｉｎａＪａｐａｎＦｒｉｅｎｄｓｈｉｐＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｅｆｅｃｔｓｏｆｗａｔｅｒｅｘｔｒａｃｔｏｆＣａｒｔｈａｍｕｓｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓｏｎｏｘＬＤＬｉｎｄｕｃｅｄｉｎｊｕｒｙｉｎ
ｒａｔｃａｒｄｉａｃｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｎｇｏｘｙｇｅｎｄｅｒｉｖｅｄｆｒｅｅｒａｄｉｃａｌｓ（ＯＦＲ）ｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．
Ｍｅｔｈｏｄ：Ｂｙｕｓｉｎｇｔｈｅｔｈｉｒｄｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆｒａｔｃａｒｄｉａｃｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ（ｒＣＭＥＣ），ｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎｏｆｗａｔｅｒｅｘｔｒａｃｔｏｆＣ．
ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓｗａｓｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄａｆｔｅｒｏｘＬＤＬ（１００ｍｇ·Ｌ－１）ｉｎｄｕｃｅｄｄａｍａｇｅ．Ｔｈｅｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｗａｓｃｏｌｅｃｔｅｄｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｎｇｌａｃｔａｔｅｄｅｈｙｄｒｏ
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ｇｅｎａｓｅ（ＬＤＨ），ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ（ＭＤＡ），ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ（ＳＯＤ），ｘａｎｔｈｉｎｅｏｘｉｄａｓｅ（ＸＯＤ），ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＧＳＨ
Ｐｘ），ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ（ＮＯ），ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ（ＮＯＳ）ａｃｔｉｖｉｔｙ，ａｎｄｃｅｌｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｗａｓｃｏｌｅｃｔｅｄｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｎｇｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ
（ＲＯＳ）ｂｙｅｌｅｃｔｒｏｎｓｐｉｎｒｅｓｏｎａｎｃｅ（ＥＳＲ）．Ｒｅｓｕｌｔ：ＷａｔｅｒｅｘｔｒａｃｔｏｆＣ．ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｒＣＭＥＣｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅ，ｒｅｄｕｃｅｄＬＤＨ，
ＭＤＡａｎｄＸＯＤｌｅｖｅｌｓ，ａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｄＳＯＤ，ＧＳＨＰｘａｎｄＮＯＳａｃｔｉｖｉｔｙ，ｗｈｉｌｅｉｎｔｈｅｃｅｌｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎＲＯＳｓｉｇｎａｌｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ．
Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＷａｔｅｒｅｘｔｒａｃｔｏｆＣ．ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓｈａｓａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓａｒｅｌｉｋｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｓｃａｖｅｎｇｉｎｇｏｆｆｒｅｅｒａｄｉｃａｌｓ，ｅｎ
ｈａｎｃｉｎｇｉｔｓｃｌｅａｒａｎｃｅ，ｅｎｈａｎｃｉｎｇｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｗａｔｅｒｅｘｔｒａｃｔｏｆＣａｒｔｈａｍｕｓｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ；ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ；ｏｘｉｄｉｚｅｄｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ；ｅｌｅｃｔｒｏｎｓｐｉｎｒｅｓｏｎａｎｃｅ
［责任编辑 古云侠］
［收稿日期］ ２００８０５１５
［基金项目］ 浙江省中医药项目（２００６Ｃ０８５，２００７ＣＡ０５９）
［通讯作者］ 许东航，Ｔｅｌ：（０５７１）８７７８３８９１，Ｅｍａｉｌ：ｘｕｄｏｎｇ
ｈａｎｇ＠ｚｊｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
鸦胆子油乳对人肺癌 Ａ５４９细胞血管内皮
生长因子表达的影响
徐 翔，许东航，江 波，吕庆华
（浙江大学 医学院 附属第二医院 药剂科，浙江 杭州 ３１０００９）
［摘要］ 目的：研究鸦胆子油乳对人肺癌 Ａ５４９细胞血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，
ＶＥＧＦ）表达的影响。方法：以健康人外周血单个核细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｎｕｃｌｅａｒｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ，ＰＭＮ）为正常对照，
分别用不同剂量的鸦胆子油乳（０５，１２５，２５，５ｇ·Ｌ－１）与人肺癌Ａ５４９细胞共育４８ｈ，采用定量ｓａｎｄｗｉｃｈ酶免疫
技术和ＲＴＰＣＲ法分别测定ＰＭＮ细胞和Ａ５４９细胞培养上清液ＶＥＧＦ分泌和细胞内 ＶＥＧＦｍＲＮＡ的表达，未加药
组采用等量ＲＰＭＩ１６４０培养液。结果：Ａ５４９细胞上清液 ＶＥＧＦ分泌量较外周血单个核细胞显著上升（１２０７３ｖｓ
２１２１，Ｐ＜００５），２５ｇ·Ｌ－１鸦胆子油乳作用４８ｈ能使 Ａ５４９细胞 ＶＥＧＦ分泌显著减少（２０３０ｖｓ１２０７３，Ｐ＜
００５）。Ａ５４９细胞ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达较骨髓单个核细胞也显著上升（０９５７３ｖｓ０４６４９，Ｐ＜００５），鸦胆子油乳
（０５，１２５，２５ｇ·Ｌ－１）作用４８ｈ对 Ａ５４９细胞 ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达无显著影响，５ｇ·Ｌ－１鸦胆子油乳可显著降低
Ａ５４９细胞ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达（０４６８２ｖｓ０９５７３，Ｐ＜００５）。结论：鸦胆子油乳能降低Ａ５４９细胞ＶＥＧＦ的分泌和
表达，该作用可能是其抗肿瘤的作用机制之一。
［关键词］ 血管内皮生长因子；Ａ５４９细胞；鸦胆子油乳
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）２１２５１７０４
鸦胆子为苦木科植物 Ｂｒｕｃｅａｊａｖａｎｉｃａ（Ｌ．）
Ｍｅｒ．的成熟果实，鸦胆子油乳以鸦胆子石油醚提取
物为原料，以精制大豆磷脂为乳化剂制成的水包油
乳剂，临床上用于治疗肺癌、肺癌脑转移、消化道恶
性肿瘤、膀胱癌、前列腺癌等［１］。临床研究证明鸦
胆子油乳联合化疗药品能显著提高癌症患者的治愈
率，减少毒副作用，促进和恢复肌体免疫力，疗效确
切。近年来有关鸦胆子油乳抗肿瘤机制有较深入研
究，包括对多药耐药性逆转作用［２］、对胃癌增殖作
用机制研究［３］、抑制膀胱癌作用机制研究［４］等。认
为鸦胆子油乳对胃癌多药耐药有一定的逆转作用，
可以抑制一些细胞株的增殖，有抑制消化道癌细胞
的生长和ＤＮＡ合成等作用。然而，目前鸦胆子油乳
对肿瘤血管新生的影响国内外均未见报道。
本研究以小细胞肺癌 Ａ５４９细胞株为研究对
象，考察鸦胆子油乳对小细胞肺癌 Ａ５４９细胞血管
内皮生长因子分泌和表达的影响。
１ 材料
１．１ 药物
鸦胆子油乳（浙江三九邦而康药业有限公司提
供，每支１０ｍＬ，含鸦胆子油１ｇ），４℃冰箱保存，使
用时用双蒸水或生理盐水稀释。
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第３３卷第２１期
２００８年１１月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ２１
Ｎｏｖｅｍｂｅｒ，２００８