全 文 ：#研究报告#
川黄柏离体培养及药用成分的抑菌试验研究
王跃华t 3 o徐文俊t o何俊蓉u o朱剑宏t o孙雁霞t
kt1 成都大学 生物工程系 o四川 成都 ytstsy ~
u1 四川省农业科学院 生物技术核技术研究所 o四川 成都 ytssyyl
≈收稿日期 ussw2st2ts
≈基金项目 成都市科技局重点科技项目≈ussv tu号
≈通讯作者 3王跃华 oר¯ }ksu{l{|{zxtzw oƒ¤¬}ksu{l{vvwtssv o
∞2°¤¬¯}·¯©²µ «²·°¤¬¯1¦²°
黄柏是芸香科植物黄皮树 Πηελλοδενδρον χηινενσε ≥¦«±¨ ¬§
及黄柏树 Π1 αµυρενσε ¦«³µ除去栓皮的干燥树皮 o前者习称
/川黄柏0 o后者习称/关黄柏0 o其主要成分为盐酸小檗碱 o有
清热消炎抗腹泻之功效 ∀由于黄柏的主要成分与黄连相同 o
因此常用黄柏来代替黄连提取盐酸小檗碱 ∀
川黄柏主产于四川 !贵州等地 o关黄柏主产于东北 !河北
等地 ∀大量试验研究表明 o川黄柏中盐酸小檗碱的含量高于
关黄柏 ∀但川黄柏是雌雄异株 o种子变异率大 o插条难生根 o
故繁殖速度慢 o而组织培养可以进行川黄柏的快速繁殖 ∀本
试验主要探索川黄柏愈伤组织的诱导及活性成分的抑菌效
力大小研究 o为进一步开发川黄柏药物资源奠定基础 ∀
1 材料与方法
111 材料
材料 }川黄柏 Χ1 πηελλοδενδρον 采于成都市都江堰虹口
镇 o经四川师范大学马丹伟副教授鉴定为芸香科植物黄皮
树 ∀大肠杆菌和金黄色葡萄球菌来源于成都大学微生物实
验室 ∀
112 方法
11211 川黄柏离体培养 取川黄柏的叶片 !叶柄 !茎段和芽
用自来水冲洗后在 s1t h升汞溶液中消毒 { ∗ tv °¬±o再用无
菌水漂洗 v次 ∀然后切成适当大小 o接种在不同愈伤组织培
养基上 ∀vs §后将不同外植体产生的愈伤组织转接在不同
激素配比的不定芽诱导培养基上k见表 tl ∀所有培养基中蔗
糖浓度为 us1s ª#pt o琼脂浓度为 z1 s ª#pt o³ 为 x1{ ∗
y1s o培养温度为kux ? ul ε o光照强度为 t xss ∗ u sss ¬¯o光
照时间 tu «#§pt ∀
11212 川黄柏树皮 !叶和愈伤组织中抑菌试验的研究 提
取川黄柏树皮 !叶和愈伤组织中的抑菌成分 o采用琼脂平板
扩散法测定其抑菌效力大小 ∀
2 结果与讨论
211 川黄柏离体培养
21111 不同外植体愈伤组织的诱导 取川黄柏的叶片 !叶
柄 !茎段和芽 w个外植体在 ≥ n u ow2⁄t °ª#pt n y2
u °ª
#pt培养基上进行愈伤组织诱导 ∀每种外植体接种 y瓶 o每
瓶 x个 ∀us §后统计观察结果显示 }选用不同外植体的愈伤
组织诱导率分别是叶片 |y h ~叶柄 tss h ~茎段 tss h ~芽
tss h ∀愈伤组织的诱导难易与外植体的分化程度有关 o一
般认为植物组织的分化度越低越容易诱导出愈伤组织≈t ∀
但在此诱导实验中 o发现川黄柏的叶柄 !茎段和芽都能 tss h
诱导出愈伤组织 o而且还进一步选用了川黄柏多年生树的茎
段和一年生幼树茎段进行比较实验 o结果发现老树的茎段更
易被诱导出愈伤组织k老树茎段需 x §o幼树茎段需 { §l ∀此
为川黄柏外植体在愈伤组织诱导上的特殊方面 ∀
21112 不同培养基诱导愈伤组织比较 在 ≥ o≥ 和 • «¬·¨
培养基中分别加入植物激素 u ow2⁄ t °ª1pt和 y2
u °ª#
pt o以叶柄为外植体 o在每种培养基上接种 us瓶 o每瓶接种
v个 ous §后观察结果显示 }其愈伤组织诱导率分别是 ≥培
养基 tss h ~≥培养基 tss h ~• «¬·¨培养基 x h ∀从以上愈伤
组织的诱导结果可知 o≥和 ≥ 培养基均能 tss h诱导出川
黄柏愈伤组织 ~而 • «¬·¨培养基诱导率很低 o因此不适宜用于
川黄柏愈伤组织的培养 ∀
21113 芽分化的诱导 在 ≥基本培养基中添加不同的生
长调节物质组合配比成 ≠ ≈ … ¡共 y种芽分化培养基 o
每种培养基接种 us瓶 o每瓶接种 u块 o培养 vs §结果见表 t ∀
表 t 不同生长调节物质对芽分化的诱导影响
²1
生长调节物质
r°ª#pt
芽分化率r h
叶愈伤
组织
叶柄愈伤
组织
茎段愈伤
组织
≠ y2
t n s1v tt wx vs
y2
t n s1v tx |t xz
≈ y2
u n s1x w1y xu wz
… y2
u n s1x w uw uy
y2
u n u ow2⁄t u { y
¡ y2
u n u ow2⁄u s x z
注 }每种培养基均为 ws块愈伤组织的统计结果
实验结果显示 ou ow2⁄不利于芽的分化 ∀叶柄愈伤组织
在以上多种培养基中都能进行芽的分化 o而叶愈伤组织的芽
分化率较低 ∀根据结果可确定最佳芽分化培养基为 ≥ n
s1z h琼脂 n u h蔗糖 n y2
t1s °ª#pt n s1v °ª#pt ∀
#usst#
第 u|卷第 ts期
ussw年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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212 川黄柏树皮 !叶和愈伤组织中抗菌成分的研究
21211 川黄柏树皮 !叶和愈伤组织中抗菌成分的提取 取
树皮 !叶和愈伤组织各 us ªo于 ys ε 下干燥 o精确称重 o分别
置索氏提取器中 o加入甲醇冷浸过夜 o水浴回流提取至无色 o
定容于容量瓶中 ∀
21212 琼脂平板扩散法测定药物的抑菌效力 本原理是利
用药物在培养基中扩散 o使细菌生长受到抑制而形成抑菌
圈 o并根据抑菌圈的大小测定该药物的抑菌能力 ∀本试验采
用改良平板打孔法≈u o即在平板上先铺一层琼脂垫底 o冷却
后放上牛津杯再倒一层混有菌液的琼脂将牛津杯围住 o待琼
脂冷却后取出牛津杯 o在琼脂上形成圆孔 o每个直径为 y
°° ∀然后将待测药液按不同浓度分别滴入孔内 o每孔一般
加 s1u °药液 o培养 uw «o结果见表 u ∀
3 小结
表 u 川黄柏不同组织提取液对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的抑菌试验结果
抗菌
药材
供试
细菌
抑菌圈直径测得值r°°
t u v w x y z { | ts
平均值
r°°
标准方差
r°°
|x h正常范围r°°
上限 下限
川黄 ¤ vs vt vu u| vs u| vs vt vs vs vs1us s1{z vt1|t u{1w|
柏皮 ¥ uy u{ u{ u{ uz u{ uy u{ uz uz uz1vs s1z{ u{1{v ux1zz
川黄 ¤ tx ty tw tx tw tx tx tx tw tx tw1{s s1ys tx1|{ tv1yu
柏叶 ¥ t{ t| t{ t{ t| t{ tz t{ t{ t| t{1us s1ys t|1v{ tz1su
川黄柏愈 ¤ t{ tz t| t| t{ t{ t| t{ tz t{ t{1ts s1zs t|1wz ty1zv
伤组织 ¥ t{ tz t| tz t{ t{ t{ tz t{ tz tz1zs s1yw t{1|y ty1ww
注 }¤1 大肠杆菌 ~¥1 金黄色葡萄球菌 ~本试验药液浓度均为 ws1ss ª#ptk试验证实 ts h乙醇助溶剂对两种试验菌都不具有抑菌作用l
311 川黄柏愈伤组织易于诱导 无论是采用 ≥培养基还
是 ≥培养基均能成功诱导出愈伤组织 ∀鉴于 ≥培养基成
本低 !易于保存储藏 o建议川黄柏组织培养可以选用 ≥培养
基为基础培养基 ∀
312 尽管川黄柏中主要抗菌成分是盐酸小檗碱 o但在川黄
柏植物体中还含有巴马亭 !药根碱 !黄柏碱和黄柏酮等其他
一些抗菌成分 ∀本实验根据中药是多成分用药原则 o综合研
究川黄柏植物体中多种抗菌成分的联合抗菌作用 o从而真实
客观地反映川黄柏药物的抑菌效力 ∀
313 通过测定抑菌圈大小可知 o川黄柏树皮 !叶和愈伤组织
对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌都有较好的抑菌效果 ~其中川
黄柏树皮抑菌作用最强 o叶和愈伤组织次之 ∀而 ts h乙醇作
为助溶剂并无抑菌作用 o从而可排除对实验结果的影响 ∀
≈参考文献
≈t • 巴而茨 o∞赖因哈德 1 植物组织培养及其在生物技术上的应
用 1 夏镇澳译 1 北京 }科学出版社 ot|{v1uyy1
≈u 马绪荣 o苏德模 1药品微生物学检验手册 1 北京 }科学出版社 o
usst1uts1
≈v 李春喜 o王志和 o王文林 1 生物统计学 1 北京 }科学出版社 o
ussv1us1
≈责任编辑 王康正
k上接第 tsst页l
7 谷芽配麦芽
谷芽 !麦芽皆入脾 !胃二经 o麦芽甘而微温 o消食
和中 o具生发之气 o又能助胃气上升 o行阳道而资健
运 o5日华子本草6云其能/ , ,温中 !下气 !开胃0 ~谷
芽甘温 o健脾开胃 o和中消食 o5本草纲目6谓 }/快脾
开胃0 o5本草经疏6云 }/具生发之性 o故为消食健脾 !
开胃和中之要药也 ∀0两药均有生发之气 o配伍应用 o
升发脾胃之气 o开胃健脾 o相得益彰 ∀临床对慢性萎
缩性胃炎食积不消 o脘腹胀满 o纳谷不馨等效佳 ∀然
谷芽 !麦芽虽为同类之品 o功效相似 o实有区别 ∀麦
芽消食力强 o而兼有舒肝气 !行滞血之功 o如5本草求
原6云 }/凡怫郁致成膨隔等症 ok麦芽l用之甚妙 o人
知其消谷而不知其疏肝也 ∀0 5医学衷中参西录6也
云 }/虽为脾胃之药 o而实善舒肝气 ∀05本草述6又云 }
/微咸能行上焦滞血 o使营和而卫益畅 ∀0谷芽则和养
功胜 o能生津液 o益元气 ~麦芽力猛 o元气中虚者 o多
用则消肾 ~谷芽性平力缓 o而能补中 o不似麦芽之克
削也 ∀麦芽消面积 o谷芽消米食 ~临证之时 o当详察
病情 o分而使用 ∀此外 o麦芽炒用专入脾胃 o消食开
胃为主 o生用则舒理肝胃之力增 ∀
≈责任编辑 古云侠
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