全 文 ：细胞周期相关基因微阵列在中药抑制肝癌细胞
增殖作用机理研究中的应用
王广良 o陈成彬 o高建明 o倪 虹 o王同顺 o陈 力 3
k南开大学 生命科学学院 分子细胞遗传学研究室 o天津 vsssztl
≈摘要  目的 }设计 ⁄‘„微阵列并利用其研究中药抗肿瘤的分子机制 ∀方法 }制备了包含有与细胞周期和
⁄‘„损伤调控检测相关的 uw个基因的 ¦⁄‘„微阵列 o选择了本实验室已证明对肝癌细胞有抑制效果的中药 o通过
流式细胞仪检测其对细胞周期的影响 o提取药物作用后的 • ‘„ o反转录后标记探针与微阵列杂交 o检测中药作用细
胞后对细胞周期及损伤检测相关基因转录的影响 ∀结果 }w种中药作用 ≥  ≤2zzut后 o细胞周期基因和损伤检测点
基因均有不同程度改变 o表现为部分上调 o部分下调 o这些和流式细胞术检测的结果是相符合的 ∀结论 }⁄‘„微阵
列技术为中草药治疗癌症的研究提供了可供参考的分子生物学依据 ∀
≈关键词  ⁄‘„微阵列 ~细胞周期 ~中药 ~肝癌 ~基因表达
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussxlst2ssxs2sx
≈收稿日期  ussw2sy2ty
≈基金项目  天津市科委重点基金资助项目kssv{vwttl
≈通讯作者  3陈力 oר¯ }ksuuluvxssus{ oƒ¤¬}ksuuluvw|zsts o∞2
°¤¬¯ }¯¬¦«¨ ±ty ƒ ¼¨²∏1¦²°
⁄‘„ 微阵列k⁄‘„ ¤µµ¤¼l是近年来涌现出来的
一种新兴的生物学技术 o由于其高通量 o并行性的优
点≈t  o近年来国外的主要制药公司都不同程度地采
用了 ⁄‘„微阵列技术来寻找药物靶标 o查检药物的
毒性或副作用 ∀用微阵列作大规模的筛选研究可以
省略大量的动物试验 o缩短药物筛选所用时间 o在基
因组药学k³«¤µ°¤¦²ª¨±²°¬¦¶l领域带动新药的研究和
开发≈u  ∀中药多成分和作用的多位点特点≈v  o决定
了 ⁄‘„微阵列在中药机理研究中的优势地位 ∀本
实验室以扩增的基因片段作为分子探针 o制作了细
胞周期和 ⁄‘„损伤相关基因的 ¦⁄‘„微阵列 o并对
w种具有抑制肝癌细胞增殖效果的中药的作用机理
进行了初步分析 ∀
1 材料
111 中药
本研究所选用的 w种中草药包括乌药 Λινδερα
αγγρεγαταk≥¬°¶l Ž²¶·¨µ°1≈w  !青蒿 Αρτεµισια χαρϖιφολια
…∏¦«2‹¤°1 ¬¨ •²¬¥1≈x  !紫草 Λιτηοσπερµυµ ερψτηρορηιζον
≥¬¨¥1 ·¨ ∏¦¦1≈y  和黄芪 Αστραγαλυσ µεµβραναχευσ
kƒ¬¶¦«1l …∏±ª¨ 1≈z  o产地分别为四川 !河北 !内蒙古 !
山西 o并经天津中医学院朱亦民教授鉴别与确认 ∀
中药水浸取物过滤后真空干燥获得粉末 o于双蒸水
中定容 o经 s1uu Λ°滤膜抽滤除菌后 p us ε 保存 ∀
112 细胞
细胞系选用人肝癌细胞株 ≥ ≤2zzut细胞 o购
于天津市肿瘤医院 ∀细胞贴壁生长于含 ts h小牛
血清 otss Λª#°pt的青霉素及 tss Λª#°pt的链霉
素的 • °Œtyws营养液中 o置 vz ε ox h ≤’u 培养箱
中培养 ∀细胞数达到 t ≅ tsx# °pt时 o添加药物 ∀
依据 ×× 计算药物的半数抑制浓度kŒ≤xsl o分别为
紫草 u1s ª#pt o青蒿 u1s ª#pt o黄芪 t1s ª#pt o乌
药 t1s ª#pt ∀
2 方法
211 细胞周期的测定
收集药物处理的细胞 o°…≥清洗 ozs h的冰乙醇
w ε 固定 w «以上 ∀离心弃去乙醇 o°…≥清洗 o加入
含 • ‘¤¶¨ktss Λª#°ptl的 °…≥ s1x °于 vz ε 温育
s1x «∀°…≥清洗细胞 o加入 t °°…≥重悬细胞 o并
用 °Œkts Λª#°ptl避光染色 ∀于流式细胞仪 ƒ„≤
≥¦¤± k…¨ ¦·²± ⁄¬¦®¬±¶²±o˜≥„l下检测细胞周期 o并利
用 ²ƒ¬·× ©²µ¤¦∂u1s软件进行数据分析 ∀
212 ⁄‘„微阵列制备
21211 设计引物 首先选取与细胞周期和 ⁄‘„损
伤修复相关的基因≈{  o通过 ‘≤…Œ网站中的 ˜±¬Š¨ ±¨
获得其全序列 o首先利用 ’°¬ª¤u1s寻找序列保守
区 o再利用 ²¯¬ª²y1s软件对保守区设计引物k上海生
sx
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工合成l o引物配制为浓度 ts Λª#pt ∀选择的基因
包括 ³xv o ≤¼¦¯¬±⁄t o³• …o≤§®u o≤¼¦¯¬± …t o≤¼¦¯¬± „t o
¦¼¦¯¬± Št o≤¼¦¯¬± ∞t o³ty o≤¼¦¯¬± ≤ o°≤‘„ o‹∏¶t o„א o
…¤¬o…¦¯2u o…• ≤„t o≤§¦u o∞uƒt o≤§¦ux„ o≤§®w o≤«®t o
≤«®u oŠv°⁄‹ ∀
21212 °≤• 产物的获得 以未加药的 ≥ ≤2zzut
细胞总 • ‘„反转录后的 ¦⁄‘„为模板 o扩增基因片
断 o°≤• 采用降式 °≤• o程序为 |w ε v °¬±ψx¦¼¦¯¨~
|w ε vs ¶oyv ε vs ¶ozu ε t °¬± ψx¦¼¦¯¨~|w ε vs
¶oys ε vs¶ozu ε t °¬±ψx¦¼¦¯¨ ~|w ε vs¶oxz ε vs
¶ozu ε t °¬±ψus¦¼¦¯¨~|w ε vs ¶oxw1x ε vs ¶ozu ε
t °¬±ψzu ε ts °¬±ψw ε ©²µ √¨¨ µ∀s1u h琼脂糖电
泳检测结果 ∀°≤• 产物随后进行纯化 ∀
21213 点膜 利用 ‘ŽŠ ¬¦µ²2 ¶型点样仪k专利
号 }tvuuys|l将 °≤• 产物点在带正电荷的 •²¦«¨ 尼
龙膜k•²¦«¨ ⁄¬¤ª±²¶·¬¦¶Š°¥‹产品l上 o每个点采用 u
次重复 o共计 xy点 o在紫外线下交联 x °¬±ow ε 保
存 ∀微阵列长 t1x ¦° o宽 s1{ ¦°o每点间隔为 t1u
°°∀
213 微阵列检验操作
21311 • ‘„提取 利用 ×µ¬½²¯kŒ±√¬·µ²ª¨±l试剂提取
• ‘„ o参照试剂说明书 ∀药物作用细胞 uw «后 o在
xs ¦°u培养瓶中加入 x °×µ¬½²¯ o静置 tx °¬±o转入
离心管中 tu sss µ#°¬±pt离心 x °¬±~取上清加入 t
°氯仿 o剧烈震荡 vs ¶otu sss µ#°¬±p t离心 tx °¬±~
取上清加入 u °异丙醇微混匀 ow ε 静置 x °¬±后
tu sss µ#°¬±pt离心 ts °¬±o弃上清 o加入 w °zx h
的乙醇洗涤沉淀 ots sssµ#°¬±pt离心 x °¬±o弃乙醇 o
w ε 晾干 ot1x h琼脂糖电泳检测结果 ∀
21312 探针标记 取 y ˏ¦⁄‘„ o|x ε 热变性 z
°¬±o然后立即冰浴 v °¬±∀向管内加入 v ˏ• ° ¬¬
k含有随机引物标记的 ⁄¬ª探针l ot ˏŽ¯¨ ±²º酶kw
˜ oׄŽ„• „l ovz ε 水浴温育 uu «∀
21313 微阵列杂交 制作杂交袋 o装入一张微阵列
膜 ∀加入杂交液 vss ˏo用封好杂交袋 oyw ε 预杂
交 t «o随后弃去预杂交液 ∀标记好的 ¦⁄‘„探针 ts
ˏ于 |x ε 变性 z °¬±o冰浴 v °¬±ovss ˏ杂交液混
合 o加入杂交袋中 o赶走气泡 o封好 oyw ε 杂交 ts «∀
取出微阵列 o室温 u ≅ ≥≥≤rs1x h ≥⁄≥洗 u次 o每
次 u °¬±~xx ε s1u ≅ ≥≥≤rs1x h ≥⁄≥洗 u次 o每次 u
°¬±~ב×溶液洗 x °¬±~将微阵列放入干净杂交袋中 o
混合 vs ˏts ≅封阻液 !uzs Λ×‘¥∏©©¨µ加入袋中 o封
口 ovz ε 水浴 vs °¬±~弃杂交液 o混匀 vs ˏts ≅ ¥¯²¦®
¥∏©©¨µouzs Λ×‘溶液 !s1v ˏ⁄¬ª抗体加入塑料袋
中 o封口 ovz ε 水浴 vs °¬±~然后取出微阵列 oב×溶
液漂洗 u次 o每次 v °¬±∀微阵列放入杂交袋 o混匀 y
ˏ⁄„…显色液 !y ˏ⁄„…缓冲液和 u{{ ˏ灭菌双
蒸水 o加入袋中 o显色 tx °¬±直到能够清晰地看到
棕褐色的点为止 ~弃去显色液 o加入 t °°…≥终止 o
封口 ∀t «后 o取出微阵列 o晾干放入干净塑料袋保
存 ∀
21314 结果分析 利用 ˜±¬¶¦¤± ’usss紫光扫描仪
扫描微阵列 o分辨率为 t uss §³¬o获得的图像利用本
实验室独自开发的 ≤«¬³ °µ²­¨¦·{1ux软件进行数据
提取及分析 o统计学分析采用 τ检验 ∀
3 结果
311 流式细胞仪测定药物对细胞周期的影响
药物作用细胞后 o对细胞的周期有较明显影响 o
不同药物影响不同 o其中紫草 ≥期比例相对较低 o
Šur 期比例相对较高 oŠt 期稍微减小 o但变化不
大 ~青蒿比较特殊 o其 Šur 期比例很高 oŠt 和 ≥期
比例都相对比较低 ~黄芪 Št 期比例相对较高 o≥期
比例相对较低 o而 Šur 比例基本和对照一样 ~乌药
Št期略增大 o≥期相对较低 oŠur 相对较高 o但改变
不大k表 tl ∀
表 t 药物作用后对细胞各周期的影响
药物rª#pt ŠtrŠs ≥ Šur
紫草 u1x xy1yw uv1{s t|1xy
青蒿 u1x tw1xz ts1t{ zx1ux
黄芪 t1s yw1ux uv1sy tu1zs
乌药 t1s yt1ux uw1wt tw1vw
对照 x{1tt vs1us tt1y|
312 扩增基因
以 ≥ ≤2zzut细胞的 • ‘„ 反转录的 ¦⁄‘„ 为
模板 o对基因进行扩增 o如图 t !图 u所示 o产物为单
一亮带 o片断大小在 vss ∗ {ss ¥³∀
313 • ‘„提取及反转录
不同药物作用后提取 • ‘„ o’⁄uysru{s 大于
t1{ o电泳可以看到 v条带 o且 u{≥亮于 t{≥ ox≥带形
模糊 o如图 v所示 o证明 • ‘„提取结果理想 o总 • ‘„
反转录为 ¦⁄‘„ o利用持家基因 Šv°⁄‹ 扩增检测反
转录效率 o均可得到清楚的单一条带 ∀
314 微阵列灵敏性检测
将总 • ‘„反转录的¦⁄‘„ks1ty Λª#ˏptl o分别
tx
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图 t 部分基因扩增的电泳结果
t1‹∏¶t ~u1¦¼¦¯¬±Št ~v1≤§¦u ~w1¦¼¦¯¬±≤t ~x1≤§®u ~y1≤«®u ~
z1¦¼¦¯¬±„t ~{1³ty ~|1„א ~ts1°≤‘„ ~tt1¦¼¦¯¬±⁄t ~tu1≤«®t ~
tv1¦¼¦¯¬±…t ~tw1¦¼¦¯¬±∞t ~tx≤§¦ux„ ~ty1Šv°⁄‹ ~tz1 ¤µ®¨µ
图 u 部分基因扩增的电泳结果
t1≤§®w ~u1…¤¬~v1…• ≤„ ~w1…¦¯2u ~x1³• …t ~y1³xv ~z1³ut ~1°¤µ®¨µ
图 v 药物作用后细胞提取 • ‘„电泳结果
稀释 ts oxs otss oxss ot sss倍 o标记后同微阵列杂
交 ∀结果说明 o随稀释倍数的增加 o信号强度减弱 ∀
当稀释到时 o信号强度已很弱 ~而稀释到 v1u ≅ tsp w
Λª#ˏpt时 o检测不到信号 o说明微阵列的检测极限
是 t1y ≅ tsp v Λª#ˏptk图 wl ∀
图 w 微阵列灵敏度的检测
315 探针浓度对杂交信号的影响
以 Šv°⁄‹基因为研究对象 o检测 °≤• 产物稀
释不同浓度后对杂交信号的影响 o紫外分光光度计
测定 °≤• 产物浓度为 v Λª#ˏpt o分别稀释 t os1x o
s1u os1t os1sx os1su os1st os1ssx o点膜 os1x ˏr点 ∀
杂交 o在低浓度范围内ks1ssx ∗ s1ul o杂交信号随探
针浓度的增加而增加 o在较高浓度范围 o探针浓度对
杂交信号影响无明显差异 o如图 x o因此 o在随后利
用点样仪进行点样时 o选用稀释 x倍的 °≤• 产物即
s1y Λª#ˏpt制作微阵列 ∀
图 x 探针浓度对杂交信号的影响
316 微阵列重复性检测
对同一种 ¦⁄‘„ 标记探针后同微阵列杂交 o统
计 v次杂交结果 o利用 Šv°⁄‹ 归一化处理后 o分析
两张微阵列上对应点之间的比值 o总共 xy个点 o上
下 u个对照之间互相的比值大于 t1t的总共有 t{
个 o占总数的 vu1t h o比值大于 t1u的总共有 y个 o
占总数的 ts1z h o比值大于 t1v的 o有 t个 o占总数
的 t1{ h o没有比值大于 t1w的 o同一样品在不同微
阵列上 v次重复实验的灰度值之间无明显差异 o表
明微阵列杂交的重复性较好k图 yl ∀
图 y 对微阵列重复性的检测
„1¦®v与 ¦®w灰度值结果比值 ~…1 ¦®w与 ¦®u灰度值结果比值 ~
≤1 ¦®u与 ¦®v灰度值结果比值
317 微阵列特异性检测
为了考察微阵列杂交的特异性 o作者分别对
≤¼¦¯¬± ⁄t oŠv°⁄‹ o≥„⁄wk细胞信号传导相关l的
°≤• 产物进行标记 o同微阵列杂交 o结果如图 z所
示 o≤¼¦¯¬± ⁄t和 Šv°⁄‹分别在微阵列上相应位置出
现杂交信号 o同时没有较强的背景干扰 ~而 ≥ „⁄w
因为在微阵列上没有探针而没有出现任何信号 o说
明微阵列具有很好的杂交专一性 ∀
用 Šv°⁄‹ 作为看家基因对结果扫描后的灰度
值进行归一化处理 o并确定同对照灰度值比值大于
u1s或小于 s1x作为差异的标准 o据此标准 o作者统
ux
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图 z 对微阵列特异性的检测
318 检测结果
药物作用后的细胞提取总 • ‘„ o反转录为 ¦⁄2
‘„并标记后 o同微阵列杂交的结果如图 { ∀
图 { 几种药物作用细胞后同微阵列的杂交结果
计了每种药物作用后上调和下调的基因k表
ul ∀
表 u 药物作用后对细胞基因转录表达的影响
药物 改变情况 基因
紫草 上调 °ty ku1tvxl
下调 ¦¼¦¯¬±⁄tks1vzul ¦¼¦¯¬±∞tk s1uzwl ¦¼¦¯¬±≤ ks1wyyl
¦¼¦¯¬±Štks1w|zl ¦«®uks1wssl
青蒿 上调 ≤¼¦¯¬±⁄tku1st{l
下调 ≤§®w ks1sz{l ∞uƒu ks1v{wl ¦¼¦¯¬±„tks1u|vl
≤§¦ux„ks1tw|l …¤¬ks1twxl ¦«®u ksww{l
„א ks1tuzl
黄芪 上调 °ut ku1tvsl ³ty ku1wxvl
下调 ≤§¦ux„ ks1v{ul …• ≤„tks1uu{l ‹∏¶tks1vzul
„א ks1ux{l
乌药 上调 °≤‘„ ku1tszl
下调 ≤§®w ks1ws{l „א ks1v||l
注 }括号中为该基因表达量与加药前的比值
4 讨论
细胞周期与肿瘤的关系是近年来生命科学研究
中热门课题之一 o细胞周期调控异常与肿瘤发生是
密切相关的≈|  ∀本研究选择了细胞周期相关的基因
作为研究中药作用机理的靶点 o自行设计 ⁄‘„微阵
列 o并在对它的灵敏性 !重复性和特异性测定后的基
础上 o对几种中药作用的机理进行了研究 ∀
流式细胞术的实验结果表明 o青蒿作用后 o细胞
周期改变十分显著 oŠur 相对有很大提高 o而 Št和
≥期相对减少 ∀在微阵列杂交结果中作者发现青蒿
作用细胞后 o几乎完全抑制了 ¦§®w的表达k同加药
前表达的比值为 s1sz{l o虽然 ≤¼¦¯¬± ⁄t上调 o而 ≤¼2
¦¯¬± ⁄t只有和 ¦§®w结合才能够行使细胞周期引擎
的功能≈ts  o因此作者推测青蒿因完全抑制了 ¦§®w
表达而导致细胞周期不能进入 Št期 ~另外青蒿下调
了 ≤§¦ux„ o≤§¦ux„是维持 ≥期复制检测点的关键因
子≈tt  o它的下调使得 ≥期检测不能有效的阻滞细胞
周期于 ≥ 期 o从而使得细胞过多地进入 Šur 期 ~
∞uƒu为 ⁄‘„复制相关因子 o≤¼¦¯¬± „t在 ≥期 !Šu期
和  期均有表达 o它只是通过结合不同的 ≤⁄Ž分子
来促进细胞周期的进行≈tu  o这 u个基因的下调可能
和青蒿对细胞增殖的抑制作用有关 ∀
其他几类中药对细胞周期的改变不是很明显 ∀
作者注意到紫草下调了 Št 和 ≥期的细胞周期素基
因 ≤¼¦¯¬± ⁄t o≤¼¦¯¬± ∞t o≤¼¦¯¬± ≤t o≤¼¦¯¬± Št o这些基
因均是细胞周期引擎分子 o他们的下调会阻滞细胞
周期的进行≈tu  ~紫草上调的 ³ty作为 Št 期的引擎
抑制因子与 ≤¼¦¯¬± ⁄t竞争 ¦§®w o它的上调会抑制细
胞 • …的磷酸化而抑制 ⁄‘„的合成≈ts  o从而抑制细
胞的增殖 ∀黄芪下调了 ≤§¦ux„和 °≤‘„ o它们与细
胞周期中 ≥期增殖有关≈tv  ~另外黄芪上调的 ³ty和
³ut为公认的抑癌基因 ∀乌药仅改变了 v个基因 o
°≤‘„ o„א 和 ≤§®w o推测乌药的可能存在其他的抑
癌机制 o这些需要进一步的研究 ∀
另外 o在对结果的分析中 o作者发现损伤检测相
关的基因均有不同程度的下调 o这是一个比较有趣
的现象 ∀细胞在损伤检测点处对复制前和纺锤体组
装前的 ⁄‘„损伤状况进行检测 o如果发现损伤 o细
胞会停止细胞周期的进行以修复细胞 ⁄‘„损伤 o来
维持细胞遗传的保真性≈tw  ∀损伤检测基因缺失固
然为肿瘤细胞提供了一个生长优势 o不过矛盾的是 o
它也使肿瘤失去了一个保护机制 o有异常检测点功
能的细胞对通常引发检测点缺陷反应的化学试剂或
射线会更加敏感 o很多文献均报道了损伤检测缺陷
导致肿瘤细胞生命力变得脆弱 ∀如 „א 基因参与
离子射线诱导的 ⁄‘„损伤修复检测点途径 o细胞在
„א 发生突变后会很容易被离子射线杀死≈tx  ∀
≤¤©©¨¬±¨ 与射线同时处理肿瘤细胞后会导致 Šu期损
伤检测功能的失活而使细胞凋亡 o进一步对小鼠上
的异体移植肿瘤的研究显示 ³xv或 ³ut的缺失使体
内肿瘤细胞对化疗的敏感性增加≈ty  o作者的研究结
果亦发现了这一种现象 o例如紫草k¦«®ul !青蒿
k…¤¬o¦«®u o„אl !黄芪k…• ≤„t o‹∏¶t o„אl和乌药
vx
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k„אl o其中青蒿和黄芪下调的损伤检测基因较多 o
这对于通过中药与化疗药物的联合来治疗癌症具有
很好的理论指导意义 ∀
作者认为微阵列在中药药理研究应用中在一定
程度上还受到基因表达与调控研究滞后的影响 ∀由
于各基因表达之间的关系没有明确 o导致如何解释
这些基因同时变化还有相当大的难度 o再加上一些
表达发生变化的的基因本身的功能不清 o使得困难
进一步加大 ∀其次 o基因表达不能完全代表其产物
的功能 o即基因表达正常 o其表达产物不一定能发挥
正常功能 ∀再加上基因表达具有组织差异性 !较强
的时相性等 o也会给实验结果的解释带来困难 ∀总
之 o在不断丰富药物靶点基因的同时 o也要加大基因
功能和调控的研究 o以充分发挥 ⁄‘„微阵列高通量
的优势 ∀
≈参考文献 
≈t  ¬∏ ‹ ≤ o ‹¨  o •²¶¨±º¤®¶1 „³³¯¬¦¤·¬²± ²©¦²°³¯ °¨¨ ±·¤µ¼ ⁄‘„
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§¨ √¨ ²¯³° ±¨·¤±§¦«¤µ¤¦·¨µ¬½¤·¬²± ²©¤ ª¨ ±²° º¨¬§¨ ¦²¯¯¨ ¦·¬²± ²©ª¨ ±¨ 2
¥¤¶¨§¶¬±ª¯¨ ±∏¦¯ ²¨·¬§¨ ³²¯¼°²µ³«¬¶° °¤µ®¨µ¶¥¼ ¦«¬³2¥¤¶¨§ °¤·µ¬¬2
¤¶¶¬¶·¨§ ¤¯¶¨µ§¨¶²µ³·¬²±r¬²±¬½¤·¬²± ·¬°¨ 2²©2©¯¬ª«·°¤¶¶¶³¨¦·µ²°¨ ·µ¼1
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¦¨¯¯¶º¬·«²µº¬·«²∏·³xv1 Εξπ Χελλ Ρεσousst ouyuktl }vz1
Ινϖεστιγατιον ον τηε µ ολεχυλαρ µεχηανισµσ οφ αντι2ηεπατοχαρ χινοµα ηερβσ
οφ τραδιτιοναλ Χηινεσε µεδιχινε βψ χελλ χψχλε µιχροαρραψ
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( Μολεχυλαρ Χψτογενετιχσ Λαβ , Νανκαι Υνιϖερσιτψ, Τιανϕιν vssszt , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ §¨¶¬ª± ⁄‘„ °¬¦µ²¤µµ¤¼ ¤±§¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ °²¯ ¦¨∏¯¤µ¤±·¬2·∏°²µ° ¦¨«¤±¬¶° ²© «¨µ¥¶²©·µ¤§¬·¬²±¤¯ ¦«¬±¨ ¶¨
° §¨¬¦¬±¨ 1 Μετηοδ : ¦⁄‘„ °¬¦µ²¤µµ¤¼¶¦²±¶¬¶·¬±ª²©xy ³µ²¥¨¶µ¨³µ¨¶¨±·¬±ªuw «∏°¤± ¦¨¯¯ ¦¼¦¯¨ª¨ ±¨ ¶º µ¨¨ ¦²±¶·µ∏¦·¨§oƒ²∏µ¤±·¬2«¨ ³¤·²¦¤µ¦¬2
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¦«¤±ª¨§¬± §¬©©¨µ¨±·§¨ªµ¨ ¶¨¤©·¨µ«¨µ¥¶·µ¨¤·¨§1 ≥²°¨ª¨ ±¨ ¶º µ¨¨ §²º±2µ¨ª∏¯¤·¨§¤±§¶²°¨ª¨ ±¨ ¶º µ¨¨ ∏³2µ¨ª∏¯¤·¨§1 ׫¨ ¦«¤±ª¨¶¬± ª¨ ±¨ ¬¨2
³µ¨¶¶¬²± ¤ªµ¨ §¨ º¬·«·«¨ µ¨¶∏¯·¶²©©¯²º ¦¼·²° ·¨µ¼ ¤¶¶¤¼1 Χονχλυσιον : ׫¨ µ¨¶∏¯·¶¶∏ªª¨¶··«¤··«¨ ¶¨ «¨µ¥¶°¤¼ «¤√¨ ©¨©¨¦·¶²± ¦¨¯¯ ¦¼¦¯¨¤±§
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[ Κεψ ωορδσ] ⁄‘„ °¬¦µ²¤µµ¤¼~·µ¤§¬·¬²±¤¯ ≤«¬±¨ ¶¨ ° §¨¬¦¬±¨ ~«¨ ³¤·²¦¤µ¦¬±²°¤~¦¨¯¯ ¦¼¦¯¨~ª¨ ±¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ≈责任编辑 方文贤 
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第 vs卷第 t期
ussx年 t月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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