全 文 ：不同填料的固相小柱对人参皂苷 ¨血浆
样品萃取回收率的研究
茅向军 o章晨峰 o孙 棣 o盛龙生 o王广基 o刘文英 3
k中国药科大学 o江苏 南京 utsss|l
≈摘要 目的 }以人参皂苷 ¨为研究对象 o考察固相萃取小柱的洗脱条件和不同填料固相小柱的萃取效率 o
从而确定固相萃取人参皂苷 ¨血浆样品的实验方法 ∀方法 }以水 o乙腈及不同含量的甲醇对固相小柱进行洗脱 o
将洗脱液在 ²µ¥¤¬≥
2≤t{kw1y °° ≅ zx °° ox Λ°l柱上以乙腈2水进行梯度洗脱 o进行高效液相色谱分析 ∀确定人参
皂苷 ¨在固相萃取小柱上的洗脱条件 ∀通过比较不同固相填料的萃取回收率 o选择最佳的固相萃取小柱 ∀结果 }
最大可用甲醇清洗含量为 ws h甲醇 o甲醇洗脱最小含量为 {s h的甲醇 ~在所考察的 v种固相填料中 o以 • ¤·¨µ¶¤¶¬¶
柱为固相填料时样品的萃取回收率最好 ∀结论 }经试验 o• ¤·¨µ¶¤¶¬¶
柱的萃取回收率在 tsv h ∗ ttv h o适
用于血浆中人参皂苷 ¨的分析 ∀
≈关键词 固相萃取 ~人参皂苷 ¨~血浆样品 ~°≤
≈中图分类号 u{w1t ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussxlt|2txty2sv
≈收稿日期 ussw2sx2ux
≈通讯作者 3 刘文英 oר¯ }ksuxl{vuztuxt o∞2°¤¬¯ }¯º¦³∏ tuy q
¦²°
三七为五加科植物三七 Παναξ νοτογινσενγ
k
∏µ®lƒ11≤«¨ ±的根 o三七的主要活性成分是三七
总皂苷 o其主要成分与人参基本一致 o为人参皂苷
ªt o人参皂苷 ¥t o人参皂苷 ¨o人参皂苷 §和三
七皂苷 t等 ∀三七具有广泛的药理作用 o其中人参
皂苷 ¨能减少乙酰胆碱引起的豚鼠离体子宫的收
缩 o对大鼠有减慢心率和和双相性k先升后降l血压
调节作用 o对猫的行为和脑电图显示中等程度抑制
作用≈t2v ∀在对以三七总皂苷为主要成分的血塞通
和血栓通注射液指纹图谱的研究基础上 o分别对三
七总皂苷及其 x种主要成分即人参皂苷 ªt !人参皂
苷 ¥t !人参皂苷 ¨!人参皂苷 §和三七皂苷 t进
行体内药代动力学等研究工作 o以期进一步阐明三
七的药效物质基础 ∀
样品前处理是体内药物分析工作的关键步骤 o
前处理技术一般有脱蛋白 o液2液萃取k∞l o固相萃
取k≥°∞l o离子对萃取等 ∀≥°∞法是基于样品在两相
间的分配差异对生物样品进行分离 o提取效率高 o是
目前国内外血浆样品前处理最常用方法之一 ∀所以
本实验采用 ≥°∞固相萃取法对人参皂苷 ¨的血浆
样品进行前处理研究 ∀
1 仪器及试剂
ª¬¯¨ ±·° ttss系列液相色谱仪k带自动进样
器l o⁄⁄紫外检测器 o≤«¨ °≥·¤·¬²±色谱工作站 o• ¤2
·¨µ¶¤¶¬¶
柱k美国 • ¤·¨µ¶公司l o⁄≥小柱k美国
¯ ·¯¨¦«公司l o≥·µ¤·¤小柱k美国 °«¨ ±²°¨ ±¨ ¬公司l o人
参皂苷 ¨对照品k含量测定用 ottszxw2ussvus o中国
药品生物制品检定所l ~内标 }地高辛原料药k浙江杭
州民生药业公司提供 o含量 |z1sv h o批号 suststl ~
甲醇k色谱纯 o江苏汉邦公司l ~乙腈k色谱纯 o µ¨¦®
公司l o重蒸水 o其余所用试剂均为分析纯 ∀
2 色谱条件
²µ¥¤¬≥
2≤t{分析柱kw1y °° ≅ zx °° ox Λ°l o
²µ¥¤¬≥
2≤t{保护柱kw1y °° ≅ tu °° ox Λ°lk美国
ª¬¯¨ ±·公司l o流动相乙腈2水梯度洗脱 o梯度见表 t o
流速 t °#°¬±pt o检测波长 usv ±° o柱温室温 ∀
表 t 流动相梯度表
τr°¬± 乙腈r h
s us
u qs xs
x qx xs
y qx {s
ts qs {s
tt qs us
3 固相萃取小柱洗脱条件
#ytxt#
第 vs卷第 t|期
ussx年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs o¶¶∏¨ t|
¦·²¥¨µoussx
311 溶液的配制 分别取人参皂苷 ¨对照品及内
标地高辛适量 o精密称定 o人参皂苷 ¨用 zs h甲醇
稀释成含量为 t ª#pt的对照液 o内标地高辛先用
⁄≥k二甲基亚砜l溶解后 o再用 zs h甲醇稀释成
含量为 t ª#pt的内标溶液 ∀实验时 o用空白人血浆
稀释成人参皂苷 ¨和内标地高辛含量分别为 s1sx
ª#pt的样品液 ∀另外用重蒸水和纯甲醇分别配制
成 ts h ous h ovs h ows h oxs h oys h ozs h o{s h o
|s h的甲醇溶液 o作为清洗和洗脱溶液 o备用 ∀
312 固相萃取小柱的处理 采用 • ¤·¨µ¶¤¶¬¶
柱进行固相萃取小柱洗脱条件的实验研究 o参照
¤¶¬¶
小柱的通用方法学≈w o对人参皂苷 ¨的
血浆样品进行提取k手工操作l ∀
t °甲醇活化 • ¤·¨µ¶¤¶¬¶
小柱 ot °水
平衡小柱 o加入样品液 t °o分别用 t °水清洗 w
次kt ∗ wl o再用 t °乙腈洗脱kxl ~同样用 t °
甲醇活化 • ¤·¨µ¶¤¶¬¶
小柱 ts支 ot °水平衡
小柱 o加入样品液 t °o分别用 ts h ous h ovs h o
ws h oxs h oys h ozs h o{s h o|s h otss h的甲醇各 t
°进行洗脱k
t ∗
tsl o上述洗脱液均收集于 t °
量瓶中 o并用相应的洗脱液稀释至刻度 ∀分别取各
洗脱液 us Λ按上述 °≤色谱条件进样分析 o结果
见表 u ∀
表 u 人参皂苷 ¨和内标地高辛的清洗洗脱比较
样品 人参皂苷 ¨峰面积 地高辛峰面积
t s s
u s s
v s s
w s s
x w{ qy{ vuu qu
t s s
u s s
v s s
w s s
x twx qv txt qw
y uzw q| t|z q|
z uz| qx vyx qu
{ u{u q| xtt qy
| u|s qz xvw qt
ts u|| qu xws qy
从表 u可知 o最大可用甲醇清洗含量为 ws h甲
醇 o甲醇洗脱最小含量为 {s h o固相萃取人参皂苷
¨血浆样品用 tss h甲醇洗脱效果最好 ∀
4 不同填料固相小柱的萃取效率
411 血浆样品的制备 取 311 项制备的对照品和
内标溶液 o用空白人血浆稀释成人参皂苷 ¨低 !中 !
高 v个含量为 ts oxs otss Λª#°ptk内标地高辛含量
均为 xs Λª#°ptl的血浆样品溶液k每个含量 v份l o
加入磷酸 us Λ¯ o涡旋 vs ¶o作为样品液 ∀以 ¤¶¬¶
小柱 o⁄≥小柱 o≥·µ¤·¤小柱进行比较 ∀分别用
t °甲醇活化上述固相小柱 ot °水平衡 o取人参
皂苷 ¨血浆样品液 t °上样 ot °水清洗 v次 o弃
去水洗液 ot °甲醇洗脱 o收集洗脱液 o取 us Λ按
上述 °≤条件进行分析 o得人参皂苷 ¨与内标地
高辛峰面积比为 t ∀另取 t °重蒸水代替人血浆
配制低 !中 !高 v个含量为 ts oxs otss Λª#°pt的对
照品溶液 o内标地高辛含量均为 xs Λª#°pt o涡旋
vs ¶o作为对照溶液 o不经萃取 o按上述 °≤ 色谱条
件进样 us Λ分析 o得人参皂苷 ¨与内标地高辛峰
面积比为 u o按下式计算 ∀测定结果见表 v ∀ °≤
色谱图见图 t ∀
回收率k h l ktrul ≅ tss h
图 t 萃取后的空白血浆加对照品人参皂苷 ¨
和血浆样品加内标 °≤ 图
1 对照品 ~
1 样品 ~t1 人参皂苷 ¨~u1 内标地高辛
5 结果与讨论
511 由表 u可知 o甲醇的最大清洗含量为 ws h o最
小洗脱含量为 {s h o乙腈的洗脱能力不如甲醇 o故
以纯甲醇进行洗脱 ∀由表 v 可知 o以 • ¤·¨µ¶ ¤¶¬¶
小柱为固相填料进行人参皂苷 ¨的血浆样品
萃取时 o萃取回收率在 tsv h ∗ ttv h o回收率较好 ∀
512 采用 ≥°∞对人参皂苷 ¨的血浆样本进行前
处理 o有以下优点 }有效地从样品基质中去除干扰杂
#ztxt#
第 vs卷第 t|期
ussx年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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表 v 不同填料固相小柱的萃取回收率k ν vl
含量
rΛª#°pt
小柱 ⁄≥小柱 ≥·µ¤·¤小柱
回收率r h ≥⁄r h 回收率r h ≥⁄r h 回收率r h ≥⁄r h
ts ttu qzs tv qxy twt qyv tt q{| t|z qv{ tz qy{
xs tsz qzv s qzu ts{ qty t qyu tvt qyz tw qyv
tss tsv qtt s qwz tsy qss s qyz tus q|| { q{y
质 o以利于获得高灵敏度 !选择性及稳定可靠 o能适
用于 °≤或 ≤r≥分析的方法 ∀≥°∞可以在不浓
缩干扰物质的情况下 o富集感兴趣的目标组分 ∀
≥°∞技术的发展及自动化 o不仅使 ≥°∞更经济 o而且
使样品处理更省时 o分析系统性能改善 ∀
513 • ¤·¨µ¶¤¶¬¶
小柱的填料 o是由亲水性 2
乙烯基吡咯烷酮和亲脂性二乙烯基苯以一定的平衡
比例聚合而成 ~美国 ¯ ·¯¨¦«公司 ⁄≥小柱的填料是
普通的十八烷基键合硅胶k⁄≥l ~美国 °«¨ ±²°¨ ±¨ ¬
公司的 ≥·µ¤·¤小柱的填料不详k厂家保密 o未提供填
料名称l ∀萃取回收率偏高的原因有待进一步研究 ∀
514 ≥°∞萃取回收率研究中 o°≤ 采用快速柱
kw1y °° ≅ zx °° ox Λ°l o在 usv ±° 检测 o以确定
≥°∞纯化结果 ∀在血浆药物浓度测定中 o可采用质
谱检测器以提高检测灵敏度 !排除干扰 !快速定量分
析 ∀
≈参考文献
≈t 黄成勇 q三七的药理研究进展 q广西中医学院学报 ot||{ otx
kul }ys oy{ q
≈u 王永发 o杨福春 o张 艳 q三七总皂甙治疗心脑血管疾病的研
究进展 q云南中医中药杂志 ot||z ot{kwl }vy q
≈v 马 珂 o汤金土 q三七皂甙的实验研究进展 q浙江中西医结合
杂志 oussu otukvl }t|z q
≈w ≤∞ ≠∏±ª2©²±ªoº¨ ⁄ ¨∏¨ o¤∏µ¤
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k{u{l }uzv q
≈x 高立勤 q不同填料的固相小柱对替诺昔康血浆样本萃取回收
率的研究 q中国药学杂志 oussu ovzktsl }zzw q
Στυδψ ον τηε εξτραχτιον ρεχοϖερψ οφ γινσενοσιδε Ρειν πλασµα
βψ διφφερεντ σολιδ2πηασε χαρτριδγεσ
÷¬¤±ª2∏±o ≤«¨ ±2©¨ ±ªo≥⁄¬o≥∞ ²±ª2¶«¨ ±ªo • ∏¤±ª2¬o • ±¨2¼¬±ª
( Χηινα Πηαρµαχευτιχαλ Υνιϖερσιτψ, Νανϕινγ utsss| , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ²³·¬°¬½¨ ·«¨ ¶²¯¬§2³«¤¶¨ ¬¨·µ¤¦·¬²± ° ·¨«²§¥¼¦²°³¤µ¬¶²± ²©·«¨ ¬¨·µ¤¦·¬²±µ¨¦²√ µ¨¼ ²©ª¬±¶¨±²¶¬§¨ ¨³¯¤¶°¤
¶¤°³¯ ¶¨q Μετηοδ : ©·¨µ ¬¨·µ¤¦·¨§¥¼ §¬©©¨µ¨±·¶²¯¬§2³«¤¶¨ ¦¤µ·µ¬§ª¨¶º¬·«º¤·¨µo¤¦¨·²±¬·µ¬¯¨ o¤±§§¬©©¨µ¨±·¦²±·¨±·° ·¨«¤±²¯ ¨¯∏·¬²±o·«¨ ³¯¤¶2
°¤¶¤°³¯ ¶¨ º µ¨¨ ¤±¤¯¼½¨ §²± ¤± ²µ¥¤¬ ≥
2≤t{ ¦²¯∏°± º¬·«¤¦¨·²±¬·µ¬¯¨ 2º¤·¨µªµ¤§¬¨±·¨¯∏·¬²±q ƒµ²° ·«¨ µ¨¦²√ µ¨¼ ¤¦«¬¨√ §¨o·«¨ ¥¨¶·¶²¯¬§
³«¤¶¨ ¦¤µ·µ¬§ª¨ º¤¶©²∏±§q Ρεσυλτ : ׫¬¶° ·¨«²§¦²±¶¬¶·¶²©∏¶¬±ªws h ° ·¨«¤±²¯ ¤¶·«¨ º¤¶«¶²¯√ ±¨·o¤±§{s h ° ·¨«¤±²¯ ©²µ·«¨ ¨¯∏·¬²±q2
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[ Κεψ ωορδσ] ¶²¯¬§2³«¤¶¨ ¬¨·µ¤¦·¬²±~ª¬±¶¨±²¶¬§¨ ¨~³¯¤¶°¤¶¤°³¯¨~ °≤
≈责任编辑 刘
5中国中药杂志6荣获中华人民共和国新闻出版署
组织的第三届国家期刊奖百种重点期刊
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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