全 文 ：反相高效液相色谱法测定鸡血藤中
儿茶素类成分的含量
刘 超t o马 林t o陈若芸t 3 o刘 屏u
kt1 中国医学科学院 中国协和医科大学 药物研究所 o北京 tsssxs ~
u1 解放军总医院 o北京 tss{xvl
≈摘要 目的 }建立鸡血藤中儿茶素类化合物的含量测定方法 ∀方法 }以没食子儿茶素kª¤¯ ²¯¦¤·¨¦«¬±l o儿茶素
k¦¤·¨¦«¬±l o表儿茶素k ³¨¬¦¤·¨¦«¬±l为对照品 o反相 ≤t{柱 o流动相甲醇2冰醋酸2水系统 o梯度洗脱 o流速 s1{ °#°¬±p t o
检测波长 uzs ±° ∀结果 }v种对照品分别在 s1v|z ∗ t1|{y os1wsw ∗ u1st| os1wsx ∗ u1suw Λª有良好的线性关系 o平均
加样回收率分别为 |z1u h otss1{ h o|{1{ h ~ ≥⁄分别为 t1z h ou1w h ou1w h k ν xl ∀结论 }本法操作简便 !快捷 o适
用于鸡血藤中儿茶素类化合物含量的测定 ∀
≈关键词 鸡血藤 ~没食子儿茶素 ~儿茶素 ~表儿茶素 ~反相高效液相色谱法
≈中图分类号 u{w qt ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussxlt{2twvv2sv
≈收稿日期 ussw2sx2ts
≈基金项目 国家自然科学基金项目kvsszs{|sl
≈通讯作者 3陈若芸 oר¯ }kstslyvtyxvux oƒ¤¬}kstslyvstzzxz o
∞2°¤¬¯}µ∏²¼∏±¦«¨ ± «²·°¤¬¯1¦²°
鸡血藤 ≤¤∏¯¬¶ ≥³¤·ª¬¯²¥¬为豆科植物密花豆
Σπατηολοβυσσυβερεχτυσ ⁄∏±±的干燥藤茎 o始见于5本草
备要6 o多用于行血补血 o通经活络 ∀鸡血藤中含有
多种化学成分 o作者从中分到了儿茶素 !表儿茶素 !
没食子儿茶素k见图 tl !染料木素和芒柄花苷等化
合物≈t ou o并在解放军总医院进行活性筛选 o发现儿
茶素k编号 ≥≥{l可显著刺激骨髓细胞 o抑制小鼠造
血祖细胞的增殖 o从而加速造血干细胞的增殖 !分
化≈v ow ∀文献还报道儿茶素有明显的清除体内自由
基 !抗癌 !抗炎 !抗突变 !抗衰老及防辐射 !抑制厌氧
菌增殖 !改善高胆固醇和改善肝功能等药理活
性≈x oy o以及儿茶和茶叶中儿茶素类成分的含量测
定方法≈z o{ o但目前尚未见鸡血藤有效成分含量测
定的相关报道 ∀本研究采用反相高效液相色谱法 o
利用甲醇2冰醋酸2水系统梯度洗脱的方法 o测定了
鸡血藤中没食子儿茶素 o儿茶素和表儿茶素的含量 ∀
该法操作简便 o灵敏度高 o适用性强 o可用于检测和
控制该药材的内在质量 ∀
1 药品和仪器
111 试剂及药材 对照品没食子儿茶素kª¤¯ ²¯¦¤·¨2
¦«¬±l o儿茶素k¦¤·¨¦«¬±l o表儿茶素k ³¨¬¦¤·¨¦«¬±l均为
本实验室从广西柳州药材市场购得的鸡血藤中分离
制备并经光谱分析鉴定结构 ∀纯度经液相检测分别
为没食子儿茶素 |y1x h o儿茶素 |{1u h o表儿茶素
|z1w h ∀所测样品均来自广西 o分别购于柳州药材
市场 !广西药用植物园及桂林药材市场 o并经马林副
研究员鉴定 ∀其中药用植物园购得的鸡血藤包括
根 !嫩茎及叶 v个部分 ∀甲醇为色谱纯k江苏淮安塑
料制品厂精细化学研究所l o三氯甲烷 !甲醇 !|x h乙
醇 !冰醋酸均为分析纯k北京化工厂l o液相用水为双
蒸水 ∀
图 t 鸡血藤中儿茶素类成分的结构
ª¤¯ ²¯¦¤·¨¦«¬± u Ρ ovΣ1 t 2 ~¦¤·¨¦«¬± u Ρ ovΣ1 t 2 ~
³¨¬¦¤·¨¦«¬± u Ρ ov Ρ1 t 2
112 仪器 ª¬¯¨ ±·ttss高效液相色谱系统kª¬¯¨ ±·
公司 o美国l }四元泵 o二极管阵列检测器 o自动进样
器 oª¬¯¨ ±·色谱工作站 ∀
2 色谱条件
色谱柱 °«¨ ±²°¨ ±¨ ¬°µ²§¬ª¼ ⁄≥vtss k w 1 y
°° ≅ uxs °° ox Λ°l ~流动相 }x ϕ醋酸2水 o流动相
}甲醇 ∀梯度洗脱 }s ∗ us °¬±otx h
~us ∗ vv °¬±o
#vvwt#
第 vs卷第 t{期
ussx年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs o¶¶∏¨ t{
≥¨ ³·¨°¥¨µoussx
tx h
变至 ux h
o流速 s1{ °# °¬±pt ~检测波长
uzs ±° ~室温检测 ∀ °≤ 色谱图见图 u ∀ ⁄⁄检测
样品中各峰纯度 o峰 t纯度系数 ||y1wxu t ~峰 u纯度
系数 ||x1tvu w ~峰 v纯度系数 ||y1sxu z ∀
3 方法和结果
311 对照品溶液的制备 精密称取适量的没食子
儿茶素 !儿茶素和表儿茶素 o用 |x h乙醇分别定容
于 u °量瓶中 o配成含量为 s1||v ot1sts ot1stu °ª#
°pt的对照品溶液 ∀然后依次吸取 uss Λ至另一
个 t °量瓶中 o用 |x h乙醇定容后 o制成混合对照
品溶液 ∀
图 u 鸡血藤对照品及样品 °≤图
t1ª¤¯ ²¯¦¤·¨¦«¬±~u1¦¤·¨¦«¬±~v1 ³¨¬¦¤·¨¦«¬±
312 供试品溶液的制备 准确称取鸡血藤样品粉
末k过 ws目筛luxs °ªo用甲醇 tss °冷浸 w «o过
滤 ∀用定量少许甲醇反复冲洗残渣 o合并至滤液中 o
减压回收至干 ∀再加少许甲醇溶解 o定容于 u °量
瓶中 o摇匀 o过 s1wx Λ°的微孔滤膜 o作为供试品溶
液 ∀
313 线性关系考察 对照品混合溶液过 s1wx Λ°
的微孔滤膜 o分别进样 u ow oy o{ ots Λo作 °≤ 分
析 ∀以峰面积k Ψl为纵坐标 o以所进对照品的质量
k Ξl为横坐标 o绘制标准曲线 ∀v种对照品的峰面积
与进样量呈良好线性关系 o线性范围分别为 }没食子
儿茶素 s1v|z ∗ t1|{y Λªo儿茶素 s1wsw ∗ u1st| Λªo
表儿茶素 s1wsx ∗ u1suw Λª~对应的回归方程分别
为 }Ψ t1svw ≅ tsy Ξ p w1{tz ≅ tsw oρ s1||| x ~Ψ
t1zyu ≅ tsy Ξ p t1uws ≅ tsw oρ s1||| x ~Ψ u1tys ≅
tsy Ξ p t1ywv ≅ tsw oρ s1||| w ∀
314 稳定性试验 混合对照品溶液 o放置 s ow o{ o
uw ow{ «后分别进样 ts Λo保留时间和峰面积相差
较小k峰面积 ≥⁄分别为 s1| h ot1u h ot1t h l ∀同
一份样品溶液 o放置上述时间后各进样 ts Λo保留
时间和峰面积相差也不大 k峰面积 ≥⁄分别为
t1w h ot1z h ot1{ h l ∀但各对照品在甲醇中放置 t
周以上 o溶液颜色会加深并出现杂质峰 o而在 |x h
乙醇中密封 !冷藏及避光保存 o情况有所改善 ∀
315 精密度和重复性试验 在上述色谱条件下将
混合对照品溶液连续进样 y次 o每次 ts Λ∀v种对
照品 ≥⁄ 分别为没食子儿茶素 u1u h o儿茶素
t1y h o表儿茶素 t1v h k ν yl ∀按供试品溶液制备
方法处理同一批样品 x份 o各进样 ts Λo没食子儿
茶素 !儿茶素和表儿茶素 ≥⁄分别为 u1x h ou1w h
和 t1{ h k ν xl ∀
316 加样回收率试验 准确称取已知含量的鸡血
藤样品粉末 x份 o每份 uxs °ªo分别加入一定量的 v
种对照品溶液 o然后按供试品溶液制备方法制备 o
°≤分析 o进样量均为 ts Λ∀结果没食子儿茶素 !
儿茶素和表儿茶素的平均回收率分别为 |z1u h o
tss1{ h o|{1{ h o ≥⁄分别为 t1z h ou1w h ou1w h
k ν xl o结果见表 t ∀
表 t 鸡血藤样品加样回收率
对照品
样品量
r°ª
样品中
含量r°ª
加入量
r°ª
测得值
r°ª
回收率
r h
平均值
r h
ª¤¯ ²¯¦¤·¨¦«¬± uxs1t s1tvz { s1s|| v s1uvw u |z1t |z1u
uxs1v s1tvz | s1s|| v s1uvw s |y1{
uxs1t s1tvz { s1s|| v s1uvv v |y1u
uxs1u s1tvz | s1sw| z s1t{x x |x1{
uxs1u s1tvz | s1t|{ y s1vvy z tss1t
¦¤·¨¦«¬± uxs1t s1szt { s1tst s s1tzx v tsu1x tss1{
uxs1v s1szt { s1tst s s1tzt u |{1w
uxs1t s1szt { s1tst s s1tzu s ||1u
uxs1u s1szt { s1sxs x s1tuu u ||1{
uxs1u s1szt { s1usu s s1u{u t tsw1t
³¨¬¦¤·¨¦«¬± uxs1t s1ty| { s1tst u s1uy| s |{1s |{1{
uxs1v s1tzs s s1tst u s1uy{ y |z1w
uxs1t s1ty| { s1tst u s1uzt u tss1u
uxs1u s1ty| | s1sxs y s1ut{ y |y1u
uxs1u s1ty| | s1usu w s1vzy y tsu1t
317 样品的测定 准确称取各样品 ∀按供试品溶
液制备方法制备 o各进样 ts Λ∀取平均值计算含
量 o结果见表 u ∀
4 讨论
411 不同提取溶剂的比较 选用甲醇 !zs h甲醇 !
|x h乙醇 !zs h乙醇 !xs h乙醇及三氯甲烷等 y种提
取溶剂做正交试验 o分别冷浸 t ow o{ oty ouw «o回流
s1x ot ou ow «或超声提取 tx ovs owx oys °¬±∀结果表
#wvwt#
第 vs卷第 t{期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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≥¨ ³·¨°¥¨µoussx
明生药以甲醇冷浸 w «o儿茶素类化合物提取率最
高 o且色素干扰最少 o故选用甲醇为提取溶剂 ∀另
外 o儿茶素与表儿茶素互为同分异构体 o文献报道表
儿茶素经长时间加热易发生差向立体异构化效应 o
向儿茶素转化≈| ∀这为本试验选取冷浸的方法提供
了参考依据 ∀
表 u 鸡血藤中儿茶素类化合物的含量k ν ul h
样品 ª¤¯ ²¯¦¤·¨¦«¬± ¦¤·¨¦«¬± ³¨¬¦¤·¨¦«¬±
柳州药材市场 x1xt ≅ tsp u u1{z ≅ tsp u y1z| ≅ tsp u
药用植物园k根l w1u| ≅ tsp t y1zv ≅ tsp u x1xt ≅ tsp u
药用植物园k嫩茎l t1wv ≅ tsp t u1zy ≅ tsp u t1zv ≅ tsp u
药用植物园k叶l p t1tt ≅ tsp u y1{y ≅ tsp v
桂林药材市场 t1vz ≅ tsp t x1{y ≅ tsp u t1w{ ≅ tsp t
412 不同生药样品含量的比较 从表 u数据可以
看出 o地区的差异和药用部位的不同会直接影响含
量 ∀桂林市售药材鸡血藤中儿茶素类化合物的含量
均普遍高于柳州市售药材 o且表儿茶素在前者中的
含量为所测样品中最高 ∀在不同药用部位的比较
中 o鸡血藤叶中 v种儿茶素类化合物含量均较少 o甚
至不含没食子儿茶素 o而在根中没食子儿茶素和儿
茶素均较高 ∀
≈参考文献
≈t 崔艳君 o刘 屏 o陈若芸 1 鸡血藤的化学成分研究 1 药学学报 o
ussu ovzktsl }t{w1
≈u 崔艳君 o刘 屏 o陈若芸 1 鸡血藤有效成分的研究 1 中国中药
杂志 oussx ovskul otut1
≈v 王东晓 o陈孟莉 o殷建芬 o等 1 鸡血藤活性成分 ≥≥{对骨髓抑制
小鼠造血祖细胞增殖的作用 1 中国中药杂志 oussv ou{kul }txu1
≈w 刘 屏 o王东晓 o陈若芸 o等 1 儿茶素对骨髓细胞增殖周期及造
血生长因子基因表达的作用 1药学学报 oussw ov|kyl }wuw1
≈x ≠¤°¤±¨ × o¤®¤·¤±¬ o¬®∏²®¤o ετ αλ1 ±«¬¥¬·²µ¼ ©¨©¨¦·¶¤±§·²¬¬2
¦¬·¼ ²©ªµ¨ ±¨ ·¨¤ ³²¯¼³«¨ ±²¯¶©²µª¤¶·µ²¬±·¨¶·¬±¤¯ ¦¤µ¦¬±²ª¨ ±¨ ¶¬¶1 Χαν2
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°¨ µ¤¶¨¶1 Βιοχηεµιστρψot||s ou|kttl }u{wt1
≈z 王钢力 o于建东 o田金改 o等 1 儿茶药材化学成分分析2反相高
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志 ot||| ot|kul }{{1
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°≤分析 1药学学报 ot||x ovsktul }|us1
≈| 陆蕴茹 1中药化学 1北京 }学苑出版社 ot||z1tvx1
∆ετερµινατιον οφ χατεχηιν ανδ ιτσ αναλογυεσιν
Σπατηολοβυσσυβερεχτυσ βψ ΡΠ2ΗΠΛΧ
≤«¤²t o ¬±t o≤∞∏²2¼∏±t o °¬±ªu
(t1 Ινστιτυτε οφ Ματεριαλ Μεδιχα , Χηινεσε Αχαδεµψ οφ Μεδιχαλ Σχιενχεσ ανδ Πεκινγ Υνιον Μεδιχαλ Χολλεγε , Βειϕινγ tsssxs , Χηινα ;
u1 Τηε Χηινεσε ΠΛΑ Γενεραλ Ηοσπιταλ, Βειϕινγ tss{xv , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ §¨ √¨¯²³¤ ° ·¨«²§©²µ§¨·¨µ°¬±¤·¬²± ²©¦¤·¨¦«¬±¤±§¬·¶¤±¤¯²ª∏¨¶¬± Σπατηολοβυσσυβερεχτυσ1 Μετηοδ : ¤¯ ²¯2
¦¤·¨¦«¬± o¦¤·¨¦«¬± ¤±§ ³¨¬¦¤·¨¦«¬± ¤µ¨ ∏¶¨§¤¶µ¨©¨µ¨±¦¨ ¶∏¥¶·¤±¦¨¶1 ≤«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦¤¶¶¤¼¬¶³¨µ©²µ° §¨²± ¤ ≤t{ ¦²¯∏°1 ׫¨ °²¥¬¯¨ ³«¤¶¨ ¬¶
¦²°³²¶¨§²© ° ·¨«¤±²¯ ¤±§¤¦¨·¬¦¤¦¬§¶²¯∏·¬²± º¬·«ªµ¤§¬¨±·¨ ∏¯·¬²±1 ∂¨¯²¦¬·¼ ²©©¯²º¬¶s1{ °#°¬±p t¤±§·«¨ §¨·¨¦·¬²± º¤√¨¯ ±¨ª·«¬¶uzs ±°1
Ρεσυλτ : ׫¨ ¦¤¯¬¥µ¤·¬²± ¦∏µ√ ¶¨²©ª¤¯ ²¯¦¤·¨¦«¬±o¦¤·¨¦«¬± ¤±§ ³¨¬¦¤·¨¦«¬± ¤µ¨ ¬¯±¨ ¤µº¬·«¬±·«¨ µ¤±ª¨ ²©s1v|z Λª·² t1|{y Λªos1wsw Λª·²
u1st| Λª¤±§s1wsx Λª·²u1suw Λª1 ׫¨ µ¨¦²√ µ¨¬¨¶²©·«¨ ° ¤µ¨ |z1u h otss1{ h ¤±§|{1{ h o¤±§·«¨ ≥⁄ ¤µ¨ t1z h ou1w h ou1w h
k ν xl1 Χονχλυσιον : ׫¨ ° ·¨«²§¬¶¶¬°³¯¨oµ¤³¬§¤±§¶∏¬·¤¥¯¨©²µ·«¨ §¨·¨µ°¬±¤·¬²± ²©¦¤·¨¦«¬± ¤±§¬·¶¤±¤¯²ª∏¨¶¬± Σ1 συβερεχτυσ1
[ Κεψ ωορδσ] Σπατηολοβυσσυβερεχτυσ~ª¤¯ ²¯¦¤·¨¦«¬±~¦¤·¨¦«¬±~ ³¨¬¦¤·¨¦«¬±~ °≤
≈责任编辑 李 禾
本刊启事
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其在上述及所有媒介再次发表的权利 o作者如不同意可作声明 ∀作者著作权使用费与本刊稿酬将在我刊刊用后一次性给付 o
并赠样刊 t本 o单行页若干份 ∀
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