全 文 ：气血并治方制剂中间体的质量控制
黄再芳 o栾连军 o邵 青 o程翼宇 3
k浙江大学 药学院 中药科学与工程学系 o浙江 杭州 vtssuzl
≈摘要 目的 }建立气血并治方制剂中间体指纹图谱分析及有效成分含量测定方法 o探讨中药复方制剂中间
体质量控制的有效途径 ∀方法 }建立制剂中间体指纹图谱定性分析和多种有效成分定量分析 °≤ 法 o定性 !定量
分析相结合控制制剂中间体的质量 ∀结果 }经方法学认证 o含量测定和指纹图谱分析各项参数均符合要求 ~ts批制
剂中间体样品含量分析显示 o芍药苷 !柚皮苷及新橙皮苷的含量在 tu1x h ∗ ty1s h o{1w h ∗ tu1w h otu1{ h ∗
tx1v h o平均含量分别为ktw1z ? t1tl h okts1y ? t1ul h oktw1u ? s1{l h k ν tsl ~各批次样品指纹图谱分析都显示
ux个共有峰 o与标准谱图比较 o指纹图谱相似度在 ||1s h以上 ∀结论 }该方法测定结果准确 !重复性好 o可对气血并
治方制剂中间体进行有效质量控制 ∀
≈关键词 质量控制 ~高效液相色谱 ~含量测定 ~指纹图谱
≈中图分类号 u{v ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussxls{2sx{s2sw
≈收稿日期 ussw2sy2sw
≈基金项目 国家重点基础研究发展规划 k|zv 计划l项目
kt|||sxwwsxl ~浙江省中医药重点开发项目kussvƒsswl
≈通讯作者 3 程翼宇 oר¯ }ksxztl{z|xttv{ o∞2°¤¬¯}¦«¨ ±ª¼¼
½∏1 §¨∏1¦±
色谱指纹图谱分析具有综合性 !可量化的特
点≈t o已成为中药质量控制与评价的有效方法 ∀目
前 o我国正在开展中药注射剂指纹图谱研究 o不久将
用于该类制剂的质量控制 ∀中药口服制剂也会逐步
采用这种分析方法 ∀
气血并治方k亦称精制血府逐瘀方l由清代名方
/血府逐瘀汤0化裁而得 o由红花 !赤芍 !枳壳 !川芎 !
桃仁和柴胡 y味药材组成 o在治疗冠心病 !心绞痛等
方面药效与原方相当甚至优于原方≈u ∀前期研究显
示 o从气血并治方获取的制剂中间体k称为 °ƒ o以下
同l具有降血脂 !抗炎 !抗凝血等多种药理作用 ∀作
者以 °ƒ为研究对象 o采用指纹图谱与多指标成分含
量测定相结合的分析方法 o考察制剂中间体批次间
的稳定性及产品质量 o旨在探索以有效部位为制剂
中间体的中药新药质量控制的有效方法 ∀
1 仪器与试药
• ¤·¨µ¶uy|x高效液相色谱仪 ou||y二极管阵列
检测器k美国 • ¤·¨µ¶公司l ~± p uxs
型超声器k昆
山市超声仪器有限公司l ∀赤芍kl !枳壳k
l !川芎
k≤l !红花k⁄l !柴胡k∞l !桃仁kƒlk中国中医研究院
中药所提供并鉴定l ~°ƒ样品kts批自制 o编号°ƒ¤∗
°ƒl ~芍药苷k批号 szvy2ussstw o中国药品生物制品
检定所l o柚皮苷 k美国 ≥¬ª°¤ 公司 o含量大于
|{1x h l o新橙皮苷k本实验室自制 o经波谱分析确证
其结构 o°≤ 归一化含量大于 |{1s h l ~色谱甲醇
k默克公司l ~重蒸馏水自制 o其余试剂均为分析纯 ∀
2 方法
211 °ƒ样品制备
气血并治方加乙醇回流提取 o提取液浓缩后上
大孔吸附树脂柱 o依次用水及不同含量乙醇梯度洗
脱 o收集相应部位 o减压浓缩 !干燥即得制剂中间体 ∀
212 对照品溶液制备
取芍药苷 xs °ª!柚皮苷 vs °ª!新橙皮苷 vs °ªo
精密称定 o置 ux °量瓶中 o加 xs h甲醇超声溶解并
稀释至刻度 ∀精密量取 t °o置 ux °量瓶中 o加
xs h甲醇稀释至刻度 o摇匀 o即得含芍药苷 s1szx wu
°ª# °pt ! 柚皮苷 s1sw {vz °ª# °pt !新橙皮苷
s1sxs xv °ª#°pt含量测定用对照品溶液 ∀
213 °ƒ供试品溶液制备
取 °ƒ样品约 ys °ªo精密称定 o置 tss °量瓶
中 o加 xs h甲醇超声溶解并稀释至刻度 o即得含量
测定用供试品溶液 ∀同法制备 { °ª#°pt的 °ƒ 样
品溶液 o即得指纹图谱分析用供试品溶液 ∀tu sss µ
#°¬±pt离心 ts °¬±o取上清液进样分析 ∀
214 药材供试品溶液制备
按处方量分别称取各药材 o按 °ƒ样品相同制备
#s{x#
第 vs卷第 {期
ussx年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs o¶¶∏¨ {
³µ¬¯oussx
方法处理 o得 o
o≤ o⁄o∞oƒ y个药材部位 ∀分别称
取适量样品 o用 xs h甲醇超声溶解 o即得药材供试
品溶液 ∀
215 色谱条件
ª¬¯¨ ±·≥
2≤t{色谱柱kw1y °° ≅ uxs °° ox Λ°l ~
流动相 } 相为甲醇 o
相为 s1t h 醋酸 o含量测定
梯度洗脱程序 }s °¬±ku{Βzul otw °¬±ku{Βzul otx °¬±
kwsΒysl ovs °¬±kwsΒysl ~指纹图谱分析梯度洗脱程
序 }s °¬±ku{Βzul ows °¬±kvxΒyxl ozs °¬±kwuΒx{l ~流
速 t1s °#°¬±pt ~柱温 vs ε ~含量测定检测波长 }芍
药苷 uvs ±° o柚皮苷 !新橙皮苷 u{s ±° ~指纹图谱检
测波长 }uys ±° ~进样量 us Λ∀
3 结果
311 含量测定
31111 专属性 在上述色谱条件下 o对照品溶液和
°ƒ供试品溶液的色谱图见图 t ∀采用二极管阵列检
测器峰纯度检测功能 o对供试品中芍药苷 !柚皮苷 !
新橙皮苷色谱峰进行峰纯度分析 o结果各色谱峰的
纯度角 k°l 均小于纯度阈值 k°×l o表明色谱峰纯
度较高 o专属性良好 ∀
图 t 样品溶液的 °≤图
1对照品 ~
1°ƒ¤样品
t1芍药苷 ~u1 柚皮苷 ~v1 新橙皮苷
31112 标准曲线 取对照品溶液分别进样 t ox ous o
vs oxs o{s otss Λo以进样量kΛªl为横坐标 Ξ o色谱
峰面积为纵坐标 Ψo绘制标准曲线 o结果芍药苷在
s1szx wu ∗ z1xwu Λª!柚皮苷在 s1sw{ vz ∗ v1{y| Λª!
新橙皮苷在 s1sx sxv ∗ w1swu Λª呈良好线性关系 o线
性回归方程分别为 Ψ芍 t xuu vxt1s Ξ p tu zys1x o
ρ s1||| | ~ Ψ柚 t {yx ztz1x Ξ p tz tuz1{ o
ρ s1||| | ~Ψ新 u tt| ty|1w Ξ p us yy|1x oρ
t1sss ∀
31113 精密度 制备 y份 °ƒ¤样品溶液 o进样分析 o
以外标法计算芍药苷 !柚皮苷 !新橙皮苷含量 o结果日
内精密度 ≥⁄分别为 s1{u h os1{t h ot1u h kν yl ~
每日制备 °ƒ¤样品溶液 t份 o连续 y §o结果日间精密
度 ≥⁄分别为 t1| h ot1 { h ou1y h kν yl∀
31114 加样回收率 取已知含量的 °ƒ¤约 tx °ªo
精密称定 o按芍药苷 !柚皮苷 !新橙皮苷含量的
{s h otss h otus h准确加入各对照品溶液 o制成高 !
中 !低 v种供试品溶液 o平行制备 v份 o进样分析 o计
算回收率 ∀平均加样回收率为 ktst1t ? v1yl h o
ktss1s ? v1tl h oktsv1u ? t1xl h k ν |l ∀
31115 溶液稳定性 °ƒ¤样品溶液室温保存 o按上
述色谱条件 o分别于 s ou o{ otu ouw «进样 o记录色
谱图 o考察样品溶液的稳定性 ∀结果芍药苷 !柚皮
苷 !新橙皮苷峰面积 ≥⁄分别小于 s1zw h os1|w h o
u1z h o表明供试品溶液至少在 uw «内稳定 ∀
312 指纹图谱
31211 精密度 取 °ƒ¥样品溶液 t份 o连续进样 y
次 o记录色谱指纹图谱 ∀结果表明 o各共有峰相对保
留时间 ≥⁄均小于 s1t{ h o归一化面积大于 x h总
峰面积的各色谱峰相对峰面积 ≥⁄均小于 u1t h o
符合指纹图谱分析要求 ∀
31212 重复性 取 y份 °ƒ¥样品制成供试品溶液 o
进样分析 o记录色谱指纹图谱 ∀结果表明 o各共有峰
相对保留时间 ≥⁄均小于 t1| h o归一化面积大于
x h总峰面积的各色谱峰相对峰面积 ≥⁄均小于
t1{ h ∀取 °ƒ¥样品于 y §内每天制备 t份供试品
溶液 o进样分析 o记录色谱指纹图谱 ∀结果表明 o各
共有峰相对保留时间的 ≥⁄均小于 t1t h o归一化
面积大于 x h总峰面积的各色谱峰相对峰面积 ≥⁄
均小于 u1v h o符合指纹图谱分析要求 ∀
31213 溶液稳定性 °ƒ¥样品溶液室温保存 o分别
在 s ox otx ovs ow{ «进样分析 o结果各共有峰相对
保留时间 ≥⁄均小于 s1|t h o归一化面积大于 x h
总峰面积的各色谱峰相对峰面积 ≥⁄ 均小于
t1x h o表明供试品溶液在 w{ «内基本稳定 ∀
313 样品分析
31311 含量测定 按 211 项下方法制备 ts批 °ƒ
样品 o测定其中有效成分芍药苷 !柚皮苷 !新橙皮苷
的含量 o结果分别为 tu1x h ∗ ty1s h o{1w h ∗
tu1w h otu1{ h ∗ tx1v h o平均含量分别为ktw1z ?
t1tl h okts1y ? t1ul h oktw1u ? s1{l h k ν tsl o见
表 t ∀
31312 指纹图谱分析 按 213 项制备 °ƒ供试品溶
液 o照 215 项下色谱条件进行测定 o图 u为 °ƒ样品
的指纹图谱 ∀取 ts批 °ƒ样品测定指纹图谱 o可确
定共有峰 ux个 o其中有 ts个峰面积占总峰面积 t h
#t{x#
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以上的色谱峰 ∀以 |号峰为内标参照物 o测得各色
谱峰相对保留时间 ≥⁄ v1s h o共有峰峰面积之和
大于 |x h ∀
图 u °ƒ¤样品的 °≤图
tw1 芍药苷 ~us1柚皮苷 ~uv1新橙皮苷
按 214 项制备组方药材 o
o≤ o⁄o∞oƒ的供试
品溶液 o同法测定 o图 v为各药材供试品溶液指纹图
谱 o图 w为主要色谱峰的紫外吸收光谱 ∀以色谱峰
保留时间及其紫外吸收光谱为指标 o分析方剂的制
剂中间体组成与各药材的相关性 o确认制剂中间体
各主要色谱峰的来源 ∀结果显示 ou o| otw otz号峰来
自赤芍 ~us ouu ouv号峰来自枳壳 ~tu ot|号峰来自川
芎 ~ux号峰来自红花 ∀可见 °ƒ 样品的指纹图谱能
够体现气血并治方的主要化学组成特征 ∀
图 v 与 °ƒ同法制备的各药材样品液 °≤图
1 赤芍 ~
1 枳壳 ~≤1 川芎 ~⁄1 红花 ~∞1 柴胡 ~ƒ1桃仁
通过对照品分析 o确认了 °ƒ 样品中的 x种成
分 ∀其中 u号峰为羟基芍药苷 otu号峰为阿魏酸 o
tw号峰为芍药苷 ous号峰为柚皮苷 ouv号峰为新橙
皮苷 ∀
图 w 归一化面积大于 x h总峰面积的各色谱峰紫外光谱
1°ƒ样品色谱峰 ~
1药材中对应色谱峰
31313 指纹图谱相似度 按 213 项制备 ts批 °ƒ
样品溶液并测定 o图 x为指纹图谱 ∀采用自主开发
的/中药指纹图谱计算机辅助相似度计算软件0≈v 计
算各批次供试品指纹图谱相似度 o考察制备工艺的
稳定性 o结果各批次样品相似度均在 ||1s h 以上 o
见表 t ∀
4 讨论
结合含量测定及指纹图谱分析结果 o可以认为
各批次样品具有良好的整体一致性 o表明制备工艺
图 x ts批 °ƒ样品的 °≤图
#u{x#
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表 t °ƒ样品含量和指纹图谱结果分析k ν ul h
样品 芍药苷 柚皮苷 新橙皮苷 相似度
¤ ty qs tt qw tw qx || q{
¥ tx qy tu qw tw qv || qw
¦ tw q| ts qx tw qw || q{
§ tx q{ tt qy tx qv || q|
¨ tw qu ts q| tv qs || qs
© tw qw ts qz tw qv || qy
ª tw qz ts qy tw qu || qz
« tu qx { qw tu q{ || qv
¬ tv qv { q| tv qy || qz
tx qw ts qw tx qt || qz
基本稳定 ∀在实际应用中 o可根据产品设定相应指
标成分的含量限度范围和指纹图谱相似度水平 o用
于制备工艺稳定性及产品质量考察 ∀
实验中考察了不同型号色谱柱 !不同流动相系
统 !不同洗脱梯度 !不同柱温等对色谱分离的影响 o
筛选出最佳色谱条件 ∀因 °ƒ样品中指标成分的含
量较高 o因此 o供试品进样量对指纹图谱共有峰的数
目有较大影响 ∀在确定流动相系统和洗脱梯度后 o
还考察不同含量样品k{1ss ots1s otu1s otw1s °ª#
°ptl及不同进样体积kts ous ows Λl对色谱分析的
影响 o以便得到更多的色谱峰信息 ∀根据各色谱峰
在 t|s ∗ wss ±°扫描结果 o以获取的色谱峰数目较
多 !各峰分离度较好为指标 o最终选择 uys ±°为指
纹图谱分析检测波长 ∀在该波长下获取的指纹图
谱 o峰数目较多 o各峰比例较为匀称 o分离度较好 ∀
≈参考文献
≈t 谢培山 q中药色谱指纹图谱质量控制模式的研究和应用 ) ) )
若干实质性问题的探讨k一l q世界科学技术#中药现代化 o
usst ovkvl }t{ q
≈u 王 伟 o马晓昌 o汪晓芳 o等 q精制血府胶囊治疗冠心病心绞
痛 vs例临床观察 q中医杂志 ousss owtk{l }wzt q
≈v 程翼宇 o陈闽军 o吴永江 q化学指纹图谱的相似性测度及其评
价方法 q化学学报 oussu oyskttl }ustz q
Στυδψ ον θυαλιτψ χοντρολ οφ εφφεχτιϖεφραχτιον ιν Θιξυε Βινγζηι δεχοχτιον
¤¬2©¤±ªo¬¤±2∏±o≥ ±¬±ªo≤∞ ≠¬2¼∏
( ∆επαρτµεντ οφ Χηινεσε Μεδιχινε Σχιενχε ανδ Ενγινεερινγ , Χολλεγε οφ Πηαρµαχευτιχαλ Σχιενχεσ ,
Ζηεϕιανγ Υνιϖερσιτψ, Ηανγζηου vtssuz , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ §¨ √¨¯²³¤ ° ·¨«²§©²µ ∏´¤¯¬·¼¦²±·µ²¯ ²© ©¨©¨¦·¬√¨©µ¤¦·¬²±¬± ±¬2÷∏¨2
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° §¨¬¦¬±¨ k×≤ l q Μετηοδ : °ƒ ¶¤°³¯ ¶¨o ©¨©¨ ¦·¬√¨©µ¤¦·¬²± ©µ²° ±¬2÷∏¨2
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³¨µ¬§¬± kl ¬± ©¨©¨¦·¬√¨©µ¤¦·¬²±¶º µ¨¨ ¦«¤±ª¨§©µ²° tu1x h 2ty1s h o{1w h 2tu1w h otu1{ h 2tx1v h o¤±§·«¨¬µ¤√ µ¨¤ª¨ ¦²±·¨±·¶º µ¨¨
ktw1z ? t1tl h okts1y ? t1ul h oktw1u ? s1{l h k ν tsl oµ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ q׫¨ ©¬±ª¨µ³µ¬±·¶²© °ƒ ¶¤°³¯ ¶¨¶«²º §¨ux ¦²°°²± ³¨ ¤®¶o¤±§
·«¨ ©¬±ª¨µ³µ¬±·¶¬°¬¯¤µ¬·¼©²µ°ƒ ¶¤°³¯ ¶¨º µ¨¨ ¤¯¯ ¤¥²√¨||1ss h ¥¼ ¦²°³¤µ¬±ªº¬·«·«¨ ¶·¤±§¤µ§¦«µ²°¤·²ªµ¤° qΧονχλυσιον : ׫¨ ° ·¨«²§µ¨2
³²µ·¨§¦²∏¯§¥¨ ∏¶¨§ ©¨©¨¦·¬√¨¯¼©²µ·«¨ ∏´¤¯¬·¼ ¦²±·µ²¯ ²© ©¨©¨¦·¬√¨©µ¤¦·¬²±©µ²° ×≤ q
[ Κεψ ωορδσ] ∏´¤¯¬·¼ ¦²±·µ²¯ ~«¬ª«2³¨µ©²µ°¤±¦¨ ¬¯´∏¬§¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼~ ∏´¤±·¬·¤·¬√¨¤±¤¯¼¶¬¶~©¬±ª¨µ³µ¬±·
≈责任编辑 刘
5中国中药杂志6荣获中华人民共和国新闻出版署
组织的第三届国家期刊奖百种重点期刊
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