全 文 ：液相色谱2电喷雾质谱定量测定银杏内酯的研究
周 欣t 3 o张雪琴t ou o袁 牧t o王道平t
kt1 贵州省 中国科学院 天然产物化学重点实验室 o贵州 贵阳 xxsssu ~
u1 贵州大学 精细化工中心 o贵州 贵阳 xxssuxl
≈摘要  目的 }研究了用液相色谱2电喷雾质谱联用技术定量测定 w种银杏内酯的方法 ∀方法 }采用 ’• 2
…„÷• ÷2≤t{ku1t °° ≅ txs °°l色谱分析柱 o梯度洗脱 os °¬±时 o流动相甲醇2水kuxΒzxl oux °¬±o甲醇2水kvxΒyxl ~柱温
ux ε ~流速 s1ux °#°¬±pt o采用电喷雾负模式≈∞≥Œk‘¨ªl  !选择离子采集方式≈≥Œ 定量测定了银杏内酯 „ o…o≤ 和
白果内酯 ……∀结果 }该方法测定银杏内酯的线性范围为 w1sw ∗ t1st ≅ tsu ±ªoρ为 s1||v z ∗ s1||| { o• ≥⁄为 u1xs h ∗
w1zv h ∀选择离子采集方式的检测限可达 t1wz ≅ tsp v ∗ s1vus Λª#°pt ∀结论 }该方法稳定 !可靠 o能快速定量测定
微量银杏内酯 ∀
≈关键词  银杏 ~银杏内酯 ~液相色谱2质谱联用技术
≈中图分类号  • u{w1t ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussxluw2t|tx2sw
≈收稿日期  ussx2st2ts
≈基金项目  贵阳市科学技术计划项目kussu2uwl ~贵州省优秀
青年科技人才培养项目kussv2svttl
≈通讯作者  3 周欣 oר¯ }ks{xtlv{syvuz o∞2°¤¬¯}¤¯¬¦¨|{ss ƒ
¶¬±¤1¦²°
银杏 Γινκγο βιλοβα 为我国特有的珍稀植物 o
自 ty世纪银杏用于传统中药治疗哮喘 !咳嗽 !膀胱
炎等 o现在银杏叶标准提取物广泛地应用于治疗心
脑血管疾病 ∀银杏叶和银杏叶标准提取物中主要的
药效成分是两大类重要物质 }黄酮类k©¯¤√²±²¬§¶l和
银杏萜内酯kª¬±®ª²·¨µ³¨ ±¨ ¤¯¦·²±¨ ¶l类化合物 ∀银杏
萜内酯包括倍半萜白果内酯k¥¬¯²¥¤¯¬§¨ l和二萜的银
杏内酯kª¬±®ª²¯¬§¨¶l o银杏内酯包括银杏内酯 „ o…o
≤ okª¬±®ª²¯¬§¨ „ o…o≤ ol等 ∀大多数商业的银杏标
准提取物中银杏内酯不得少于 y h ∀银杏内酯成分
除具有扩张冠状动脉血管 !增加脑血流量 !改善脑营
养及抗菌作用外 o还有较强的血小板活化因子
k°„ƒl抑制作用≈t  ∀
文献报道曾有多种方法用于定量测定银杏内
酯 o׏≤≈u  o‹°≤2˜∂≈v  o‹°≤2•Œ≈w  o‹°≤2∞≥⁄≈x 和
Š≤2≥≈y 等 o王颖等≈z 还采用 ≤2⁄„⁄2∞≥Œ2≥ 对银
杏内酯提取物中微量成分进行结构鉴定 ∀由于银杏
内酯无紫外特征吸收 o‹°≤2˜∂ 检测的效果差 ~而
示差折光检测器不能采用梯度洗脱 o易产生基线漂
移 ~采用 Š≤2≥需对银杏内酯进行衍生化后才能检
测 ~蒸发激光散射检测器稳定性较差 o定量不易准
确 ∀而质谱灵敏度很高 o且精密度与准确度好 o同时
质谱仪可以只对所选定的质量产生信号 o秦日方等≈{ 
采用 ≤2≥定量测定了白果内酯k……l o银杏内酯 „
kŠ„l和银杏内酯 …kŠ…l ∀本研究改进了液相色谱2
质谱联用技术对银杏内酯进行定量测定的条件 o缩
短了分析时间 o提高了灵敏度 o建立了准确 !可靠 !快
速≤2≥测定 w种银杏内酯k……oŠ„ oŠ…和 Š≤l的
方法 ∀
1 材料与方法
111 仪器与试剂
‹°ttss ≤r≥高效液相色谱2电喷雾质谱联用
仪及 ≤«¨ °¶·¤·¬²±色谱工作站 ~w种银杏内酯对照品
均购自中国药品生物制品检定所 o批号分别为 s{yu2
ussssw os{yv2||su os{yw2||su 和 s{yx2|yst ∀甲醇为
色谱纯k×∞⁄Œ„ ≤’°„‘≠ oŒ‘≤l ~水为新鲜乐百氏纯
净水 ∀
112 方法
11211 色谱条件 ’• …„÷ • ÷2≤t{色谱柱ku1t °°
≅ txs °° ox Λ°l o产品号为 {{v zss1|su ~流动相 }线
性梯度洗脱 os °¬±时 o甲醇2水kuxΒzxl oxs °¬±o甲醇
2水kwxΒxxl ~柱温 ux ε ~流速 s1ux °#°¬±pt o检测
波长 uus ±° o进样量 x ˏ∀
11212 质谱条件 离子化方式 ∞≥Œk‘¨ªl ~选择离子
k≥Œl采集方式 o选定的分子离子为≈ 2‹ p和≈u2
‹ p o干燥气为 ‘u o干燥气温度 vxs ε ~干燥气流速
#xt|t#
第 vs卷第 uw期
ussx年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs oŒ¶¶∏¨ uw
⁄¨ ¦¨ °¥¨µoussx
ts # °¬±pt ~雾化器压力 tv{ ®°¤~毛细管电压
v xss ∂ ~碰撞诱导解离电压 zs ∂ ∀
113 对照品溶液的制备
分别精密称取经减压干燥过夜的 ……oŠ„ oŠ…o
Š≤ w种对照品 w °ªo用甲醇溶解定容在 xs °量瓶
中 o制成银杏内酯的对照品溶液 ∀
114 供试品的制备
采用均匀取样法从每个厂家的银杏叶片中取出
tx片 o去包衣后 o研成粉末 o精密称取 us °ªox h双
氧水 tss °回流提取 t «o过滤 o滤液用醋酸乙酯萃
取 v次 o醋酸乙酯萃取液用 t h的 ‘¤‹≤’v水溶液萃
取 v次后 o用 t h ‘¤u≥’v水溶液萃取 u次 o醋酸乙酯
层继续用蒸馏水和 x h ‘¤≤¯ 溶液各萃取 t次 o最后
得到的醋酸乙酯萃取液回收溶剂至干 o用 xs h ≤‹v
’‹定容至 ux °的量瓶中 o摇匀 o备用 ∀
115 标准曲线的制备
精密吸取上述银杏内酯对照品溶液 t1s ot1s o
t1s ot1s ot1x ou1x °分别至 tss oxs oux ots ots ots °
的量瓶中 o用 xs h 甲醇稀释至刻度 o摇匀 o进样 x
ˏ∀ ……oŠ„ oŠ…和 Š≤的线性方程 !相关系数 !线性
范围和检测限见表 t o测定结果见图 t ∀
图 t 银杏萜内酯对照品k„l与样品k…l≤2≥
选择离子质量色谱图
t1 白果内酯 ~u1 银杏内酯 ≤ ~v1 银杏内酯 „ ~w1 银杏内酯 …
116 稳定性试验
精密称取银杏叶片样品k上海某产品l o按建立
的供试品溶液制备方法制备供试品 o分别在 s ou ow o
{ otu «进行银杏内酯的稳定性实验 oŠ„ oŠ…oŠ≤ 及
…… 峰面积的 • ≥⁄ 分别为 w1z h ov1v h ow1t h o
w1s h o结果表明供试品溶液在 tu «内稳定 ∀
117 精密度试验
取上述配置好的银杏内酯对照品溶液 o连续进
样 x 次 o测得 Š„ oŠ…oŠ≤ 及 …… 的 • ≥⁄分别为
u1{ h ou1x h ov1t h ov1y h o表明精密度较好 ∀
118 重复性试验
精密称取银杏叶片样品k上海某产品l o按建立
的供试品溶液制备方法平行制备 x份供试品溶液 o
并进行 ‹°≤2≥检测 o测得 Š„ oŠ…oŠ≤ 及 ……含量
的 • ≥⁄分别为 w1v h ov1v h ov1| h ov1{ h o结果表明
方法的重现性较好 ∀
119 回收率试验
精密称取银杏叶片粉末 tu °ªo定量加入 w种银
杏内酯对照品溶液k精密称取 Š„ oŠ…oŠ≤各 t °ª和
…… v °ªo置 ts °量瓶中 o用 xs h的甲醇溶解并稀
释至刻度lu °o按 114中的供试品溶液制备方法制
备供试品溶液 x份 o进行 ≤2≥检测 o结果 Š„ oŠ…o
Š≤及 …… 的平均回收率 k ν € xl分别为 |u1v h o
tsu1t h otst1x h otsw1s h o • ≥⁄ 分 别 为 v1t h o
v1z h ou1| h ot1| h ∀
1110 样品测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 x
ˏo注入液相色谱2质谱联用仪 o依上述测定条件 o对
|个不同厂家生产的银杏叶片进行测定 o以外标法
计算含量 o测定结果见表 u ∀
表 t w种萜类内酯的线性方程 !相关系数 !线性范围及检测限
对照品 线性方程 ρ 线性范围r±ª 检测限rΛª#°pt
…… Α€ y1s|s ≅ tsv Χn t1zzz ≅ tsw s1||{ y w1sxs ∗ t1stu ≅ tsu t1xy ≅ tsp v
Š„ Α€ v1{xw ≅ tsv Χp t1vyy ≅ tsw s1||v z w1sws ∗ t1ss| ≅ tsu s1vus
Š… Α€ t1xzw ≅ tsw Χp |1w{w ≅ tsv s1||| { w1sws ∗ t1ss| ≅ tsu t1xx ≅ tsp u
Š≤ Α€ t1ss| ≅ tsw Χn |1txs ≅ tsv s1||| v v1{uu ∗ |x1xt t1wz ≅ tsp v
2 结果与讨论
211 按建立的≤2≥测定方法 o对不同厂家的银杏
叶片样品中的银杏内酯含量进行了测定 o测定结果
见表 u ∀
212 质谱条件的选择
电喷雾电离k∞≥Œl是一种软电离方式 o能得到较
强的分子离子峰 ∀用银杏萜内酯对照品k银杏内酯
„ !银杏内酯 … !银杏内酯 ≤和白果内酯l对质谱检测
条件进行优化 ∀采用流动进样 o全扫描模式≈≥≤„‘ 
检测 o结果发现在负模式k±¨ ª¤·¬√¨ ¬²± °²§¨ l下的测
定结果最好 o因而采用 ∞≥Œ负离子采集方式 ∀每个
对照品主要观察到有较强吸收峰的离子见表 v ∀
#yt|t#
第 vs卷第 uw期
ussx年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs oŒ¶¶∏¨ uw
⁄¨ ¦¨ °¥¨µoussx
表 u 不同厂家的银杏叶片中银杏内酯含量k ν € ul °ªrtss °ª片剂
银杏叶片生产地及批号 银杏内酯 „ 银杏内酯 … 银杏内酯 ≤ 白果内酯 萜类总内酯
贵州kussuttuwl s1|w s1x| s1wx t1xw v1xu
江苏ksutuusl s1z{ s1xv s1u| s1uu t1{u
河南ksvsvsvl s1z| s1wx s1ut s1zs u1tx
深圳kussustsyl s1|u s1xw s1wt s1y| u1xy
泰州ksvsvtxl t1su s1yy s1ut v1t{ x1sz
德国ku|{swsul s1us s1tv s1t{ s1wy s1|z
上海 tksvstswl s1w{ s1vu s1uu s1wy t1w{
上海 ukussutut|l s1ww s1tz s1tz s1{z t1yx
上海 vksvsvsxl s1zw s1wu s1u{ t1tv u1xz
表 v 银杏内酯的 ≤2≥数据
化合物 τ• r°¬± ≈ 2‹  p ≈u2‹  p 分子质量
白果内酯 y1sz vux p vuy
银杏内酯 „ {1|w wv| {z| wws
银杏内酯 … tw1u| wsz {tx ws{
银杏内酯 ≤ tx1vu wuv {wz wuw
采用流动进样 o调节各参数 o以便得到最强的分子离
子峰≈ 2‹ p和≈u2‹ p o选定 z个相对分子质量
k分别为 ……}vux oŠ„ }wv|和 {z| oŠ…}wsz和 {tx oŠ≤ }
wuv和 {wzl作为选择离子k≥Œl采集对象 o大大提高
了检测灵敏度 o选择离子k≥Œl测定的检测限分别可
达 vus ∗ t1x ±ª#°pt ∀
213 结论
≤2∞≥Œ2≥能分离并直接测定银杏复杂混合体
中的银杏内酯 o本研究所建立的方法专属性强 !重现
性好 o能快速定量测定不同样品中的 w种银杏内酯 o
样品前处理简单 ∀与其他测定方法相比 o≤2∞≥Œ2≥
的高灵敏度使检测微量的银杏内酯成为可能 o这为
将来研究不同样本中微量银杏内酯k如银杏内酯的
体内代谢情况l打下基础 ∀
≈参考文献 
≈t  陈仲良 1 银杏提取物的化学成分和制剂的质量 1 中国药学杂
志 ot||y ovtkyl }vuy1
≈u  颜玉贞 o谢培山 o钱浩良 o等 1 银杏提取物及制剂萜内酯薄层色
谱荧光扫描定量测定研究 1 中国中药杂志 ot||z ouukvl }tx|1
≈v  °¬¨·¤ ° Š o ¤∏µ¬° o •¤√¤ „1 „±¤¯¼¶¬¶²©·¨µ³¨ ±¨ ¶©µ²° Š¬±®ª²
¥¬¯²¥¤ 1 ¬¨·µ¤¦·¶¥¼ µ¨√ µ¨¶¨§ ³«¤¶¨ «¬ª«2³¨µ©²µ°¤±¦¨ ¬¯´∏¬§ ¦«µ²2
°¤·²ªµ¤³«¼1 ϑ Χηροµατογρot||s ou|kxryl }uxt1
≈w  管玉民 o尤慧莲 o王 健 o等 1 不同类型银杏叶中银杏内酯的含
量测定 1 药物分析杂志 ousst outkul }tsz1
≈x  颜玉贞 o谢培山 1 ‹°≤2∞≥⁄法测定银杏叶中的 w种萜类内酯
含量 1 药物分析杂志 ousst outkvl }tzv1
≈y  唐红芳 o郑自强 o朱哓雨 o等 1 银杏叶中银杏萜内酯的 Š≤2≥
定性定量分析 1 中草药 oussv ovwkvl }utw1
≈z  王 颖 o盛龙生 o楼凤昌 1 银杏内酯提取物中微量成分的 ≤r
⁄„⁄r∞≥Œr≥分析及结构鉴定 1 药学学报 ousst ovyk{l }ysy1
≈{  秦 日方 o陶冠军 o王林祥 1 液质联用方法测定微量银杏内酯 1
无锡轻工大学学报 oussv ouukwl }{s1
Θυαντιτατιϖε δετερµινατιον οφ γινκγολιδεσ βψλιθυιδ
χηροµατογραπηψ2ελεχτροσπραψ µασσσπεχτροµετρψ
‹’˜ ÷¬±t o‹„‘Š ÷∏¨2±¬±tou o ≠˜„‘ ∏t o• „‘Š ⁄¤²2°¬±ªt
(t1 Τηε Κεψ Λαβορατορψ οφ Χηεµιστρψφορ Νατυραλ Προδυχτσ οφ Γυιζηου Προϖινχε ανδ
Χηινεσε Αχαδεµψ οφ Σχιενχεσ , Γυιψανγ xxsssu , Χηινα ;
u1 Φινε ΧηεµιχαλΙνδυστρψ Χεντερ, Γυιζηου Υνιϖερσιτψ, Γυιψανγ xxssux , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ׫¬¶³¤³¨µµ¨³²µ·¶¤° ·¨«²§¥¤¶¨§²± ¬¯´∏¬§¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼¦²∏³¯ §¨º¬·«¨¯ ¦¨·µ²¶³µ¤¼ °¤¶¶¶³¨¦·µ²° ·¨µ¼©²µ·«¨
¤±¤¯¼¶¬¶²©·¨µ³¨ ±²¬§¶¬± ª¬±®ª² ¤¯°¬±¤¨ 1 Μετηοδ : ׫¨ ¤±¤¯¼¶¬¶ º¤¶ ³¨µ©²µ° §¨ ²± ’• …„÷ • ÷2≤t{ ku1t °° ≅ txs °°l¦²¯∏°± º¬·«
° ·¨«¤±²¯2º¤·¨µkº¬·«ªµ¤§¬¨±·l ¤¶°²¥¬¯¨ ³«¤¶¨ ¤·¤©¯²º µ¤·¨ ²©s1ux °#°¬±p t o¤±§¦²¯∏°±·¨°³¨µ¤·∏µ¨ ²©ux ε 1„±¤¯¼¶¨¶º µ¨¨ ¦¤µµ¬¨§²∏·
¬±·«¨ ¶¨¯¨ ¦·¨§¬²± °²±¬·²µ¬±ªk≥Œl °²§¨ 1 Ρεσυλτ : Š¬±®ª²¯¬§¨¶kŠ„ o Š… ¤±§ Š≤l ¤±§¥¬¯²¥¤¯¬§¨ º µ¨¨ ∏´¤±·¬·¤·¬√¨¯¼ §¨·¨¦·¨§¥¼ ¬¨·¨µ±¤¯
¶·¤±§¤µ§¬½¤·¬²± º¬·« ¬¯±¨ ¤µ¬±·«¨ µ¤±ª¨ ²©w1sw2t1stu ≅ tsu ±ªo º¬·«¦²¨©©¬¦¬¨±·¤±§µ¨ ¤¯·¬√¨¶·¤±§¤µ§§¨√¬¤·¬²±¶¥¨¬±ªs1||v z2s1||| { ¤±§
u1xs h 2w1zv h 1 ≤2∞≥Œ2≥ ¶«²º¶¤ªµ¨¤·¯¼¬±¦µ¨¤¶¨§¶¨±¶¬·¬√¬·¼¦²°³¤µ¨§º¬·«²·«¨µ° ·¨«²§¶1 ׫¨ §¨·¨¦·¬²± ¬¯°¬·²©·«¬¶° ·¨«²§¥¼ ≥Œ º¤¶
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第 vs卷第 uw期
ussx年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs oŒ¶¶∏¨ uw
⁄¨ ¦¨ °¥¨µoussx
t1wz ≅ tsp v2s1vus Λª#°pt1 Χονχλυσιον : ׫¬¶° ·¨«²§¬¶¶³¨¦¬©¬¦oµ¨³µ²§∏¦¬¥¯¨oµ¤³¬§¯¼ ¤±§ ³¨µ°¬·¶ ∏´¤±·¬·¤·¬√¨¤±¤¯¼¶¨¶²©ª¬±®ª²¯¬§¨¶
¤±§¥¬¯²¥¤¯¬§¨ ¬± §¬©©¨µ¨±·¶¤°³¯ ¶¨º¬·«¶¬°³¯¨³µ¨2³∏µ¬©¬¦¤·¬²± ¶·¨³¶1
[ Κεψ ωορδσ] Γινκγο βιλοβα ~ª¬±®ª²¯¬§¨¶~ ¬¯´∏¬§¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼2¨¯ ¦¨·µ²¶³µ¤¼ °¤¶¶¶³¨¦·µ²° ·¨µ¼
≈责任编辑 刘  
药品微生物限度检查法中细菌和
真菌计数方法的验证试验
许华玉t 3 o杜 芸u o钱文静v o鲍 英w o
郎 非x o袁林娜y o李 汶z o梁月秋{ o石瑞棉{
kt1国家药典委员会 o北京 tsssyt ~u1浙江省药品检验所 o浙江 杭州 vtsssw ~
v1江苏省药品检验所 o江苏 南京 utsss{ ~w1上海市药品检验所 o上海 ussuvv ~
x1辽宁省药品检验所 o辽宁 沈阳 ttssuv ~y1贵州省药品检验所 o贵州 贵阳 xxsssw ~
z1 汕头市药品检验所 o广东 汕头 xtxswt ~{1广西药品检验所 o广西 南宁 xvssutl
≈摘要  目的 }建立 ussx年版药典微生物限度检查法中的细菌真菌计数的验证方法和判断标准 ∀方法 }按设
立的验证试验方法 o在样品中加入试验菌 o测定试验菌的回收率 ∀结果 }各试验菌在试验样品中的回收率基本可达
到 zs h以上 ∀结论 }药品中污染的细菌真菌计数方法的验证试验可按设立的验证试验方法进行 o试验菌的回收率
不得低于 zs h ∀
≈关键词  验证试验 ~回收率
≈中图分类号  • u{y1s ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussxluw2t|t{2sv
≈收稿日期  ussx2ts2s|
≈通讯作者  3 许华玉 oר¯ }kstslyztxww{{2vsx o∞2°¤¬¯}¬∏«∏¤¼∏
ƒ ¦«³1²µª1¦±
微生物试验的结果易受试验条件的影响 o特别
是药品中含有对微生物生长有抑制作用组分时表现
较为突出 ∀因此 o在进行微生物限度检查时 o应保证
在检验条件下的样品浓度不足以抑制污染微生物的
生长 o以保证结果的准确性 ∀所以任何产品的微生
物限度检查法均需验证 o确认所采用的方法适合于
样品的微生物限度检查 o方可使用 ∀为此 oussx年
版5中国药典6附录中的微生物限度检查法增加了方
法验证试验的要求 ∀本试验就所设计的细菌真菌计
数的验证方法和判断标准进行了确认试验 o并对验
证试验应注意的有关方面提出建议 ∀
1 细菌真菌计数的验证方法和判断标准的确认
111 样品
正骨水 !桂林西瓜霜 !通宣理肺丸 !银翘解毒片 !
藿香正气水 !利巴韦林滴鼻液 !克霉唑软膏 ∀以上均
为药典品种 o包括中药和化学药 o口服及外用的品
种 ∀
112 菌株
大肠埃希菌 Εσχηεριχηια χολι≈≤ ≤≤k…l ww tsu  o
金黄色葡萄球菌 Σταπηψλοχοχχυσ αυρευσ≈≤ ≤≤k…l uy
ssv  o枯草芽孢杆菌 Βαχιλλυσ συβτιλισ≈≤ ≤≤ k…l yv
xst  o白色念珠菌 Χανδιδα αλβιχανσ≈ ≤ ≤≤ kƒl |{
sst  o黑曲霉 Ασπεργιλλυσ νιγερ≈≤ ≤≤kƒl|{ ssv 
113 方法与结果
11311 菌液制备 接种大肠埃希菌 !金黄色葡萄球
菌 !枯草杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中 ovs
∗ vx ε 培养 t{ ∗ uw «os1| h无菌氯化钠溶液稀释成
每 t °含 xs ∗ tss ¦©∏的菌悬液 ∀
接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养
基中 ous ∗ ux ε 培养 t{ ∗ uw «o用 s1| h无菌氯化钠
#{t|t#
第 vs卷第 uw期
ussx年 tu月
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs oŒ¶¶∏¨ uw
⁄¨ ¦¨ °¥¨µoussx