全 文 ：怀槐愈伤组织形成与异黄酮积累
罗建平 o吴礼福 o姜绍通
k合肥工业大学 生物与食品工程学院 o安徽 合肥 uvsss|l
≈摘要  目的 }考察怀槐愈伤组织形成与总异黄酮积累的关系 ∀方法 }不同培养基诱导怀槐子叶和下胚轴产
生愈伤组织 o紫外分光光度术测定愈伤组织中总异黄酮并含量 ∀结果 } ‘„„ r …„ 及含 u ow2⁄组合有利子叶愈伤
组织的诱导 ~ ≥ o‘y o…x培养基适宜子叶形成愈伤组织 o而 ≥‹ 较适宜下胚轴产生愈伤组织 ∀愈伤组织具有异黄酮
合成能力 o含有 ‘„„激素组合诱导的子叶愈伤组织总异黄酮含量较高 o而 u ow2⁄r …„组合诱导的下胚轴愈伤组织
总异黄酮含量较高 o高浓度 u ow2⁄ r Ž× 组合抑制子叶和下胚轴愈伤组织积累异黄酮 ∀愈伤组织根据发育的形态
特征可分为 w种类型 o以黄色 !疏松 !颗粒状的 µ型愈伤组织中总异黄酮含量最高 ∀结论 }培养基与激素组合影响
愈伤组织的形成及发育形态特征 o并反映在愈伤组织异黄酮合成差异上 o获得的黄色 !疏松颗粒状愈伤组织为后续
的细胞液体悬浮培养及异黄酮合成代谢的调控研究奠定了基础 ∀
≈关键词  怀槐 ~愈伤组织 ~形态特征 ~异黄酮
≈中图分类号  ≥ xyz ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvltu2ttvz2sw
野生药用植物怀槐 Μααχκια αµ υρενσισ • ∏³µq
·¨¤¬¬° q属豆科马鞍树属 o是我国一种古老的珍贵
树种 o5本草纲目6早有记载 o具有祛风湿 !消炎 !镇
痛 !健胃 !止血等疗效 o民间也用于治疗肝脏疾病和
胆囊炎≈t2v  ∀us世纪 |s年代始国外对怀槐化学成
分的分离 !鉴定和生物活性进行了许多研究 o发现怀
槐异黄酮类k©²µ°²±²±¨ ·¬±oª¨ ±¬¶·¨¬±oµ¨·∏¶¬±等l是关
键药用组分 o可以抑制蛋白酪氨酸激酶 !⁄‘„ 拓扑
异构酶 !核糖体 ≥y激酶的活性 o有显著的保肝和治
疗肝炎的作用≈t ov ow  ∀因此 o新发现的怀槐保肝作用
正引起国外高度重视 o国内也注意到怀槐的药用开
发前景 o已开展有关化学成分分离鉴定的工
作≈u ox2z  ∀怀槐生长缓慢 !多散生 o常见花蕾不育 o一
直作为木材和薪柴大量砍伐 o野生资源遭受破
坏≈t  ∀作为我国的珍贵植物 o加强早期基础研究 o
积极探索怀槐资源的合理利用途径 o对既保护野生
资源又可持续开发其药用价值十分必要 ∀本实验对
怀槐愈伤组织诱导的影响因素 !愈伤组织发育特征
以及愈伤组织异黄酮积累之间的关系进行了研究 o
为植物次生代谢细胞工程开发怀槐药用资源奠定基
≈收稿日期  ussu2s|2us
≈基金项目  国家自然科学基金项目kvstzssx|l
≈通讯作者  罗建平 ר¯ }ksxxtl u|sss|s ƒ¤¬}ksxxtl
u|sss|y ∞2°¤¬¯}­¬¤±³¬±ª¯∏²ƒ ¶²«∏q¦²°
础 ∀
1 材料与方法
1 q1 植物材料 怀槐 Μ. αµ υρενσισ种子采自黑
龙江 o由佳木斯大学王良信教授鉴定和提供 ∀种子
经浓硫酸预处理 x °¬±后 o流水洗净 o于 s qt h
‹ª≤ u¯中灭菌 tx °¬±o无菌水洗涤 v ∗ x次后接种在
无激素的 tru  ≥ 基本培养基上 !ux ε !光照下萌
发 ∀t周后 o长成的无菌苗分别切取下胚轴和子叶
作为愈伤组织诱导用的外植体 ∀
1 q2 愈伤组织诱导 愈伤组织诱导培养基为  ≥ o
…x o‘y o≥‹ 等 w 种基本培养基 o分别附加 u ow2⁄o
‘„„ o…„和 Ž× 等 w种激素的不同浓度组合 ∀当外
植体在培养基中诱导 vs §后 o将形成的愈伤组织剥
离下来 o一部分留待测定总异黄酮含量 o另一部分根
据其发育的形态特征分别继代培养于附加 u qs °ª#
pt u ow2⁄和 s qx °ª#pt …„ 的 ≥‹ 培养基上 ∀愈
伤组织诱导和继代培养均于 ux ε !光照下进行 ∀愈
伤组织在继代培养中的生长以生长参数k≈愈伤组织
收获量 p接种量 r接种量l表示 ∀
1 q3 愈伤组织中总异黄酮含量的测定 按
°²®∏¶«¤¯²√¤等人≈w 建立的怀槐心材总异黄酮分离
与含量测定方法 o ‹°≤ 检测怀槐愈伤组织中的异
黄酮 o紫外分光光度法分析总异黄酮的积累 ∀异黄
酮标准品购自 ≥¬ª°¤公司 ∀
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2 结果
2 q1 愈伤组织形成及发育形态特征 当外植体接
种在诱导培养基上 x §后 o可见一些外植体在切口
处膨大 o开始形成愈伤组织 ∀在所有实验的基本培
养基类型和激素组合中 o怀槐下胚轴和子叶均可诱
导出愈伤组织 ∀在  ≥基本培养基中 o添加 ‘„„ r
Ž× 组合对下胚轴和子叶具有相近的愈伤组织诱导
效应 o添加 ‘„„ r …„ ~u ow2⁄ r …„ 和 u ow2⁄ r Ž×
组合时 o子叶的愈伤组织诱导率均显著高于下胚轴
k图 tl ∀不同激素组合对形成的愈伤组织生长的影
响和源外植体相关 o子叶产生的愈伤组织长势明显
优于下胚轴产生的愈伤组织 ∀
图 t  ≥基本培养基中不同激素组合
对怀槐愈伤组织形成的影响
‘„„rŽ× ~‘„„r…„ ~u ow2⁄r…„ 组合中 ‘„„ ~u ow2⁄~Ž× 和 …„ 的浓
度范围均在 s qt ∗ u qs °ª#p t ~u ow2⁄rŽ× 组合中 u ow2⁄和 Ž× 的浓
度分别在 u qx ∗ z qx °ª#p t和 s qx ∗ t qs °ª#p tk图 v 同l
进一步比较不同基本培养基对外植体产生愈伤
组织的作用k图 ul o表明  ≥ o‘y o…x适宜子叶形成
愈伤组织 o其中  ≥和 ‘y中子叶可全部诱导出愈
伤组织 o而 ≥‹ 较适宜下胚轴产生愈伤组织 ~‘y o
…x o≥‹ 中愈伤组织生长较快 o优于  ≥ ∀在上述培
养基中 o子叶和下胚轴产生的愈伤组织发育形态各
异 o主要可分为 w种类型k表 tl o它们的发育特征的
差异不仅取决于培养基 o也取决于外植体类型 o其中
¶型愈伤组织只由子叶产生 o·愈伤组织只由下胚
轴产生 ∀将 w种类型愈伤组织分别在 ≥‹ 附加 u qs
°ª#pt u ow2⁄和 s qx °ª#p t …„ 的培养基中培养
均能较好生长 o相互之间无显著差异k Π  s qxl ∀
2 q2 愈伤组织异黄酮含量分析 ‹°≤ 分析表明
怀槐愈伤组织具有合成异黄酮的能力 ∀在  ≥基本
图 u 不同基本培养基对怀槐愈伤组织形成的影响
所有培养基中均添加 u qs °ª#p tu ow2⁄和 s qx °ª#p t…„
表 t 怀槐愈伤组织发育状态的类型及继代培养情况
类型 发育状态 形成的培养条件及外植体起源 生长参数
´ 淡黄色 o松软 !水样状 ‘y中的子叶 o…x中的下胚轴 u qxv
µ 黄色 o疏松 !颗粒状 ‘y ! ≥中的子叶 o ≥中的下胚轴 u q{y
¶ 黄褐色或棕褐色 o质地致密 !颗粒状 ‘y o…x o≥‹ 中的子叶 u q{w
· 表面呈白色絮状 !松软 o内部质地致密 o块状  ≥ o≥‹ 中下胚轴 u qv|
培养基中 o添加 ‘„„ r Ž× ~‘„„ r …„ ~u ow2⁄r …„
组合对下胚轴诱导出的愈伤组织总异黄酮积累影响
不明显 o但由子叶产生的愈伤组织中总异黄酮含量
差异较大 ∀凡含有 ‘„„ 激素组合的  ≥培养基中
子叶愈伤组织总异黄酮含量大于下胚轴愈伤组织总
异黄酮含量 o而 u ow2⁄ r …„组合的  ≥培养基中下
胚轴愈伤组织总异黄酮含量高于子叶愈伤组织总异
黄酮含量 ∀图 v表明 ou ow2⁄ r Ž× 组合的  ≥培养
基中子叶和下胚轴产生的愈伤组织中总异黄酮积累
均很低 o都只有其他 v种激素组合的  ≥培养基中
子叶和下胚轴愈伤组织总异黄酮含量平均值的
tt h ∀
图 w表明 o不同基本培养基中诱导出的愈伤组
图 v 不同激素组合对诱导的愈伤组织异黄酮合成的影响
织积累异黄酮的能力差异显著 ∀在  ≥和 ‘y中下
胚轴产生的愈伤组织中总异黄酮含量高于子叶愈伤
组织中总异黄酮含量 o而 …x和 ≥‹ 中子叶愈伤组织
中总异黄酮含量高于下胚轴愈伤组织中总异黄酮含
量 ∀所有子叶产生的愈伤组织中 o以 ≥‹ 诱导的愈
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伤组织中总异黄酮含量最高 o是异黄酮含量最低的
‘y诱导出的愈伤组织的 u qsx倍 ∀所有下胚轴产生
的愈伤组织中 o以  ≥和 ≥‹ 最适合异黄酮的合成
积累 o约是异黄酮含量最低的 …x诱导出的愈伤组
织的 w qvu倍 ∀图 x表明不同形态发育特征的愈伤
组织积累异黄酮的能力各不相同 o以黄色 !疏松 !颗
粒状的 µ型愈伤组织含量最高 o分别是 ´ o¶ o·愈
伤组织的 t qtx ot q{{和 v q|z倍 ∀
图 w 不同基本培养基对诱导的愈伤组织
异黄酮合成的影响
图 x 不同发育特征的愈伤组织中总异黄酮的积累
3 讨论
虽然不同培养基及不同激素组合都能诱导怀槐
子叶和下胚轴产生愈伤组织 o但愈伤组织诱导频率
和形成的愈伤组织发育状态依赖于培养基及激素组
合的不同而不同 o并且与外植体的类型紧密相关 o这
是植物愈伤组织诱导中存在的一个普遍现象≈{  ∀
怀槐愈伤组织中异黄酮的积累受诱导培养基种
类与激素组合以及外植体来源的影响 ∀不同的激素
浓度组合可以调节细胞的次生代谢而影响目的组分
的合成 ∀一般情况下低浓度生长素有利于次生物质
的合成 o高浓度生长素抑制次生代谢≈|  ∀在怀槐
中 o高浓度 u ow2⁄r Ž× 组合诱导的愈伤组织中异黄
酮含量远低于其他低浓度生长素r细胞分裂素组合
诱导的愈伤组织中异黄酮含量 o也证明了这种结论 ∀
植物培养细胞次生物质合成和生长具有一定的
负相关性≈|  ∀然而 o怀槐子叶和下胚轴在 ≥‹ 中形
成的愈伤组织生长与在 ‘y o…x中形成的愈伤组织
生长相似 o比在  ≥中形成的愈伤组织生长快 o但异
黄酮积累比  ≥ o‘y o…x中产生的愈伤组织要高出
许多 o说明在怀槐愈伤组织中细胞生长与异黄酮合
成不具有负相关性 o不同类型培养基对诱导出的愈
伤组织合成异黄酮能力影响的不同很大程度上可能
是培养基组成成分不同的结果 ∀
在怀槐的 w种类型的愈伤组织中 o因发育状态
的不同而具有不同的异黄酮合成能力 o表明植物细
胞次生物质合成受到细胞分化程度不同的调节 ∀可
以推测 o不同培养条件下 o由于细胞分化水平的不同
而表现出不同的发育特征必然与不同分化程度的细
胞内代谢差异相关 o有可能涉及到次生代谢途径 o改
变次生物质的合成 ∀
综合愈伤组织诱导 !形态特征以及异黄酮合成
情况 o宜选择子叶或下胚轴于  ≥或 ‘y附加 u ow2⁄
和 …„的培养基进行诱导 o可产生黄色 !疏松颗粒状
的愈伤组织 o为后续的细胞液体悬浮培养及异黄酮
合成代谢的调控研究奠定基础 ∀
≈参考文献 
≈t  刘 娟 o王良信 q一种新的药用植物资源 ) ) ) 怀槐 q中国野生
植物资源 ot||z ot }uu q
≈u  黄文哲 o段金廒 o李正亮 q怀槐的化学成分研究 Œq中国药科大
学学报 ousss ovt }{ q
≈v  王良信 q怀槐化学成分及其生物活性 q国外医学 q植物药分
册 ot||y ott }| q
≈w  °²®∏¶«¤¯²√¤ × ∂ o Ž∏¯ ¶¨« ‘ Œo Š¯ ¥¨®² Œq  ·¨«²§©²µ·«¨
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¼¶·¬¯¥¨ ±¨ ¶²© Μααχκια αµ υρενσισ. ≤«¨ ° ‘¤·≤²°³§ot||u ou{ }
v{x q
≈x  曲香芝 o李景道 o金光洙 o等 q朝鲜槐化学成分的研究 q中草
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杂志 ousst ouy }wsv q
≈{  ∏²° o¬¤± ƒ q≤¤¯ ∏¯¶Œ±§∏¦·¬²± ¤±§ °¯ ¤±·• ª¨¨ ±¨ µ¤·¬²± ©µ²°
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Χαλλυσ Φορµ ατιον ανδ ΙτσΙσοφλαϖονοιδ Αχχυµ υλατιον ιν Μααχκια αµ υρενσισ
˜’ ¬¤±2³¬±ªo • ˜ ¬2©∏oŒ„‘Š ≥«¤²2·²±ª
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∏¯¶©²µ°¤·¬²± ¤µ¨ µ¨©¯ ¦¨·¨§¬± ¥²·«§¨ √¨¯²³° ±¨·¤¯ ¼¯ °²µ³«²¯²ª¬¦¤¯ ¦«¤µ¤¦·¨µ¶¤±§¬¶²©¯¤√²±²¬§¤¦¦∏°∏¯¤·¬²± ²©¦¤¯ ¬¯q ≠¨¯ ²¯º o©µ¬¤¥¯¨¦¤¯2
∏¯¶¬±§∏¦¨§©µ²° ¦²·¼¯ §¨²±¤µ¼ ¤±§«¼³²¦²·¼¯ ¬¨³¯¤±·¶¬±  ≥ ²µ‘y ° §¨¬∏° ¶∏³³¯¨° ±¨·¨§ º¬·« u ow2⁄ ¤±§ …„ ¬¨«¬¥¬··«¨ ²³·¬°∏°
ªµ²º·«¤±§¬¶²©¯¤√²±²¬§³µ²§∏¦·¬²±q
[ Κεψ ωορδσ] Μααχκια αµ υρενσισ~¦¤¯ ∏¯¶©²µ°¤·¬²± ~ °²µ³«²¯²ª¬¦¤¯ ¦«¤µ¤¦·¨µ~¬¶²©¯¤√²±¨
≈责任编辑 袁桂京 
葛根药材 ‹°≤ 指纹图谱研究
何春年t o李 敏u o曹志高v o郭红英v o王春兰t o余世春u
kt q中国医学科学院 中国协和医科大学 药用植物研究所 o北京 tsss|w ~
u q安徽安泰医药生物技术有限公司 o安徽 合肥 uvss{{ ~
v q安徽大东方药业有限公司 o安徽 合肥 uvss{{ l
≈摘要  目的 }对不同来源的葛根药材指纹图谱比较研究 ∀方法 }应用 • °2‹°≤ 法 !Žµ²°¤¶¬¯ ≤t{分析柱 !乙
腈2水二元梯度洗脱 o流速为 t qs °#°¬±p t o检测波长 uxs ±° ∀结果与结论 }不同来源的葛根药材所含黄酮类成分
均得到很好的分离 o该法可用于鉴别葛根的品种 o并为葛根注射液及含葛根药材的中药复方注射液指纹图谱研究
奠定基础 ∀
≈关键词  葛根 ~指纹图谱 ~高效液相色谱 ~梯度洗脱
≈中图分类号  • u{u qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvltu2ttws2sx
豆科植物葛根包括野葛 Πυεραριαλοβατα
kŒº¬¯§ql ’«º¬与甘藤葛 Π. τηοµσονιι …¨ ±·«qo均收
≈收稿日期  ussu2s|2us
≈通讯作者  何春年 ר¯ }kstslyu{||zvw ∞2°¤¬¯}¦«∏±±¬¤±«¨
ƒ tyv q¦²°
载于5中国药典6各版 o广泛应用于临床 ∀目前尚未
见文献报道有关葛根药材及其制剂的指纹图谱研
究 ∀按照国家药品监督管理局关于/中药注射剂指
纹图谱研究的技术要求k暂行l0的通知 ≈t  o作者参
照相关文献≈u2x  o对不同产地的葛根药材进行了指
纹图谱研究 ∀
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第 u{卷第 tu期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ oŒ¶¶∏¨ tu
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