全 文 ：·¨¦·¬²± ²©°¤¬½¨ ¯¨ ¤√ ¶¨≈ q ∞¬³…²·o t||xo wy}tt|q
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≈tz  魏丽勤 o王林嵩 o张文玲 o等 q Ν2kt2萘乙酰基 l2Ν2kw2氨替
吡啉基 l硫脲对萝卜中可溶性蛋白含量 !过氧化物酶和超氧
化物歧化酶活性的影响 ≈ q植物生理学通讯 o usstovzkyl}
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≈t{  丁文明 o赵毓橘 q表油菜素内酯对黄瓜子叶过氧化物酶活性
和可溶性蛋白含量的影响 ≈ q植物生理学报 o t||xoutkvl}
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Εφφεχτ οφ ΗΚΛ2w ον αχτιϖε οξψγεν µ εταβολισµ ανδ πηοτοχηεµ ιχαλ
εφφιχιενχψ ιν λιχοριχε λεαφ
ŒŠ¤±ªtou o ⁄˜„‘¬∏2¶«¨ ±ªu o • „‘Š …¤²2°¬±ªu o ‹∞ «²±ª2³¨ ¬u o Œ«¤²2«∏u o ‹ ’˜ ≤«¨ ±ª2°¬±ªv
(t. ϑιλιν ΑγριχυλτυραλΣχιενχε ανδ Τεχηνολογψ Χολλεγε, ϑιλιν tvuts|, Χηινα;
u. Χολλεγε οφ Αγρονοµ ψ ανδ Βιοτεχηνολογψ, Χηινα ΑγριχυλτυραλΥνιϖερσιτψ, Βειϕινγ tsss|w, Χηινα;
v. Βειϕινγ Σηιζηεν Ινστιτυτε οφ ΤραδιτιοναλΧηινεσε Μεδιχινεσ, Βειϕινγ tsuys|, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¶·∏§¼ ·«¨ ©¨©¨¦·¶²©‹Ž2w ²± ³«¼¶¬²¯²ª¬¦¤¯ ¦«¤±ª¨ ¶§∏µ¬±ªªµ²º·« ²©¯¨ ¤√ ¶¨q Μετηοδ : ˜¶¬±ª ¬¯¦²2
µ¬¦¨kΓλψχψρρηιζα υραλενσισl ¤¶°¤·¨µ¬¤¯o ·«¨ ©¨©¨¦·¶²©‹Ž2w ²± ¤¦·¬√¨²¬¼ª¨ ± ° ·¨¤¥²¯¬¶° ¤±§³«²·²¦«¨ °¬¦¤¯ ©¨©¬¦¬¨±¦¼ ¬± ¬¯¦²µ¬¦¨ ¯¨ ¤©
º µ¨¨ §¨ ·¨µ°¬± §¨∏±§¨ µ©¬¨ §¯ ¦²±§¬·¬²±q Ρ εσυλτ ανδ Χονχλυσιον: ׫¨ ¦²±·¨±·¶²©¦«¯²µ²³«¼¯ o¯ ¤¦·¬√¬·¼ ²©≥’⁄ ¤±§ ≤„× ¬±¦µ¨¤¶¨§o
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¬±ª¦²°³¤µ¬±ª·²·«¨ ¦²±·µ²¯q
[ Κεψ ωορδσ] ¬¯¦²µ¬¦¨~ ¯¨ ¤©~ ¤¦·¬√¨²¬¼ª¨ ± ° ·¨¤¥²¯¬¶°~ ³«²·²¦«¨ °¬¦¤¯ ©¨©¬¦¬¨±¦¬¨¶kΦ√ rΦ° l~ ³¯¤±·ªµ²º·«¶∏¥¶·¤±¦¨
≈责任编辑 张宁宁  
≈收稿日期   ussx2tu2su
≈基金项目   国家中医药管理局重点资助项目 k国中医药科 usst⁄÷ssxl
≈通讯作者   3 王峥涛 oר¯}ksuxl{xv|tuwy
牡丹皮高效液相色谱指纹图谱研究
许舜军 t o李 鹏 u o杨 柳 v o张 勉 t o王峥涛 t3
kt1中国药科大学 生药学研究室 o江苏 南京 utssv{~u1广州市邮电医院 o广东 广州 xtsysv~
v1广东省中医院 中心实验室 o广东 广州 xtstusl
≈摘要   目的 }建立牡丹皮的高效液相色谱指纹图谱 o为科学评价及有效控制其质量提供可靠方法 ∀方法 }利
用 ‹ °≤ 2⁄„⁄o梯度洗脱 o测定了 vs批牡丹皮药材样品 o并应用 ≤ 2 ≥和  ≥2 ≥技术指认指纹图谱中的主要色谱
峰 ∀结果 }vs批牡丹皮样品得到的色谱指纹图谱有 tx个共有峰 o指认了色谱峰的化学归属 o主要特征峰的峰面积
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第 vt卷第 us期
ussy年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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排序依次为 }丹皮酚 五没食子酰葡萄糖 没食子酸甲酯 没食子酰芍药苷 没食子酸 羟基芍药苷 其他色谱
峰 ∀结论 }牡丹皮的指纹图谱特征性及专属性强 o可结合含量测定用于全面控制牡丹皮的质量 ∀
≈关键词   牡丹皮 ~高效液相色谱 ~指纹图谱
≈中图分类号   • u{w1t ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukussylus2tyzz2sw
牡丹皮系毛茛科植物牡丹 Παεονια συφφρυτιχοσα
„±§µ1的干燥根皮 ≈t  ∀其化学成分主要为单萜类 !
丹皮酚类 !鞣质类 !三萜类化合物 ∀目前牡丹皮的质
量评价常以丹皮酚作为定性 !定量的考察指标 ∀很
显然 o这种方法缺乏专属性 ∀中药色谱指纹图谱对
于中药的质量检测和控制具有重要意义 ∀本研究建
立和比较不同品种 !不同产地 !不同规格牡丹皮药材
液相色谱指纹图谱 o可为规范牡丹皮药材的生产 !确
保相关产品内在质量的均一性和稳定性提供全面的
质控手段 ∀
1 材料与仪器
样品来源于牡丹皮主产地和各大药肆 o经广州
市药品检验所谢培山主任药师鉴定 ∀样品来源见表
t∀对照品没食子酸 !芍药苷及丹皮酚均购于中国药
品生物制品检定所 ~乙腈为色谱纯 k美国 ƒ¬¶«¨ µ公
司 l~色谱纯甲酸 k天津精细化工有限公司 l~其余试
剂皆为分析纯 ∀
• ¤·¨µ¶高效液相色谱仪 }• ¤·¨µ¶yss型泵 o||y
型二极管阵列检测器 o  ¬¯¯ ±¨±¬∏° usts工作站 ∀
± ≥ׄ• ÷型质谱仪 k美国 „…Œ公司 lo„ª¬¯¨ ±·ttss
型高效液相色谱 ∀
2 方法与结果
211 色谱条件 色谱柱 }„ª¬¯¨ ±·÷⁄… ≤t{分析柱
kw1y °° ≅ txs °°o x Λ°l~流动相 „为乙腈 o流动
相 …为 s1th甲酸 ~梯度洗脱条件 }s ∗ u °¬± o„2…
kxΒ |xl~u ∗ vs °¬±o kxΒ |xl ∗ ktyΒ{wl~vs ∗ zs
°¬± oktyΒ {wl ∗ kvvΒyzl~zs ∗ {s °¬± okvvΒ
yzl ∗ k{sΒusl~流速 s1{ °# °¬±pt ~紫外光谱采
集范围 t|s ∗ wss ±°~检测波长 uxw ±°~柱温 vs ε ~
进样量 us ˏ∀以丹皮酚峰计算 o理论板数为
v| vwt∀
212 ≤ 2 ≥条件 ∞≥Œ源 ~源电压 p w1s ®∂ ~负离
子检测 ~雾化气 kŠ„≥tlwxo帘气 k≤˜• luso去簇电
势 k⁄°l p us ∂ o聚焦电势 kƒ°l p {s ∂ o去簇电势 u
k⁄°ul pus ∂ ∀ גƒ扫描质量范围 µ / ζ tss ∗ zss∀
213 对照品溶液的制备 取丹皮酚 !芍药苷和没食
子酸对照品各约 tt °ªo精密称定 o分别置于 ux °
量瓶中 o加甲醇溶解并稀释至刻度 o摇匀 o即得 ∀
214 供试品溶液的制备 取牡丹皮药材粉末 kws
目 l约 u ªo精密称定 o加 xsh甲醇 us °浸泡 s1x
«o水浴回流 v次 kuso uso ts °lo每次 s1x «o滤
过 o合并滤液于 xs °量瓶中 o加 xsh甲醇至刻度 o
摇匀 o过 s1uu Λ°微孔滤膜 o即得 ∀
表 t 牡丹皮样品来源
‘²q商品名 样品来源 收集日期
t
u
v
w
x
y
z
{
|
ts
tt
tu
tv
tw
tx
ty
tz
t{
t|
us
ut
uu
uv
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u|
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牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
滇丹皮
滇丹皮
牡丹皮
牡丹皮
牡丹皮
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215 精密度与重复性 取药材样品 o按供试品溶液
制备方法进行制备 o连续进样 x次 o检测指纹图谱 ∀
结果表明 o测得各共有峰相对峰面积的 • ≥⁄小于
xh o表明进样的精密度良好 ∀取同一牡丹皮药材样
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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品 x份 o按供试品溶液制备方法制备 o检测指纹图
谱 ∀结果表明 o各共有峰相对峰面积的 • ≥⁄小于
xh o表明其重复性试验较好 o符合指纹图谱要求 ∀
216 样品稳定性考察 取药材样品 o按供试品溶液
制备方法进行制备 o分别在 souowo{ouwow{ «检测
指纹图谱 o测得各共有峰相对峰面积的 • ≥⁄小于
xh o表明样品溶液在 w{ «内稳定 ∀
217 指纹图谱共有模式及各项技术参数 构建牡
丹皮药材共有模式所采用的参数如下 o特征峰筛选
使用中位数法 o特征峰值计算采用了数学均数 o以获
得该类样本较稳健的特征 ∀确定 tx个色谱峰为共
有指纹峰 ∀在共有指纹峰中 o丹皮酚 ktx号峰 l的峰
面积大于总峰面积的 tsh o故以 tx号峰为参照峰 o
计算其余各共有峰相对保留时间和峰面积 ∀牡丹皮
‹°≤指纹图谱共有模式见图 t∀综合所有样本指
纹图谱的规律来看 o牡丹皮指纹图谱主要特征峰的
峰面积排序依次为 }丹皮酚 五没食子酰葡萄糖 
没食子酸甲酯 没食子酰芍药苷 没食子酸 羟基
芍药苷 其他色谱峰 ∀经过对指纹图谱直观观察比
较可以认为 ouz批样本的指纹图谱特征在色谱峰比
例和峰面积等两方面均较为稳定 o样本间波动较小 ∀
v个离群样本中 o滇丹皮 kuy号与 uz号 l因其基源
不同而差异较大 ou号样品差异来源于难以检测到
丹皮酚 ∀
图 t 牡丹皮 ‹ °≤指纹图谱共有模式图 kuxw ±°l
218 主要色谱峰的鉴定和辨认 参照对照品丹皮
酚 !芍药苷和没食子酸的色谱行为及紫外光谱 o样品
指纹图谱中 t号 !y号和 tx号特征峰分别鉴定为没
食子酸 !芍药苷和丹皮酚 ∀结合文献 ≈u2ts o依据
גƒ总离子流图及二级子离子扫描图 o其余 tu个特
征峰得到确认 o其中 u号峰为 °∏§¤±²¶¬§¨ … k≈  2
‹  p µ / ζwyvlov号峰为 ³2«¼§µ²¬¼¥¨ ±½²¬¦¤¦¬§k≈ 2
‹  p µ / ζ tvzlow号峰为 ° ·¨«¼¯ ª¤¯ ¤¯·¨ k≈  2‹  p
µ / ζ t{vlox号峰为 ²¬¼³¤¨ ²±¬©¯²µ¬± k≈  2‹  p µ / ζ
w|xloz号峰为 ª¤¯ ²¯¼¯ ²¬¼³¤¨ ²±¬©¯²µ¬± k≈ 2‹  p µ / ζ
ywzlo {号峰为 ª¤¯ ²¯¼¯ ³¤¨ ²±¬©¯²µ¬± k≈  2‹  p µ / ζ
yvtlo |号峰为 ³¨ ±·¤ª¤¯ ²¯¼¯ ª¯∏¦²¶¨ k≈ 2‹  p µ / ζ
|v|lots号峰为 °∏§¤±³¬²¶¬§¨ ‹ k≈  2‹  p µ / ζ
ytxlott号峰为 «¨ ¬¤ª¤¯ ²¯¼¯ ª¯∏¦²¶¨ k≈ 2u‹  u p µ / ζ
xwxlotu号峰为 ¥¨ ±½²¼¯ ²¬¼³¤¨ ²±¬©¯²µ¬± k≈ 2‹  p µ /
ζ x||lotv号峰为 °∏§¤±³¬²¶¬§¨ ≤ k≈  2‹  p µ / ζ
x||lotw号峰为 ¥¨ ±½²¼¯ ³¤¨ ²±¬©¯²µ¬± k≈  2‹  p µ / ζ
x{vl∀
3 讨论
311 流动相及洗脱方式的考察和优化 分别以甲
醇 2水 !甲醇 2水 k含甲酸 l !乙腈 2水 !乙腈 2水 k含甲
酸 l !甲醇 2乙腈 2水 !甲醇 2乙腈 2水 k含甲酸 l等溶剂
系统进行洗脱 o结果以乙腈 2s1th甲酸为流动相得
到的色谱峰分离度 !峰形均较好 o且保留时间稳定 ∀
为确保色谱峰的保留时间 !峰形及分离度稳定 o每次
进样前色谱柱以流动相起始浓度平衡 ts °¬±∀
312 检测波长的选择 在 t|s ∗ wss ±°各波长的
色谱图中 o以丹皮酚的最大吸收波长 uzs ±°为检测
波长时 o色谱峰相对较少 ~uvs ±°为检测波长时 o色
谱图有明显的基线漂移 ~而以 uxw ±°为检测波长记
录的色谱图基线平稳 !色谱峰数目较多且分离度良
好 o兼顾了丹皮酚类和芍药苷类两类主要成分 ∀故
检测波长确定为 uxw ±°∀
313 色谱柱的考察和优化 试验中尝试了 x种色
谱柱 }美国 ׫¨ µ°² ‹¼³¨ µ¶¬¯ ’⁄≥ kw1y °° ≅ uxs
°°o x Λ°lo瑞典 Žµ²°¤¶¬¯’⁄≥ kw1y °° ≅ uxs °°o
x Λ°lo日本资生堂 ≤¤³¦¨¯¯ ³¤® ≤t{  Š kw1y °° ≅
uxs °°o x Λ°lo美国 „ª¬¯¨ ±·÷⁄… ≤{ kw1y °° ≅ txs
°°o x Λ°lo美国 „ª¬¯¨ ±·≥… ≤t{ kw1y °° ≅ txs °°o
x Λ°lo这些产品均不能使牡丹皮各色谱峰得到较
好的分离 o美国 „ª¬¯¨ ±·÷⁄… ≤t{ kw1y °° ≅ txs °°o
x Λ°l色谱柱 o使各色谱峰分布均匀 o分离度好 !柱
效高 o因此试验最终选用 „ª¬¯¨ ±·÷⁄… ≤t{色谱柱 ∀
试验还考察了不同批次的 u根 „ª¬¯¨ ±·÷⁄… ≤t{色谱
柱 k²·‘²1 …sxsxvo °¤µ·‘²1 ||v|yz2|suo ≥ µ¨¬¤¯
‘²1 ˜≥Ž‹stuyt{ 和 ²·‘²1 …swsvyo °¤µ·‘²1
||v|yz2|suo ≥ µ¨¬¤¯ ‘²1 ˜≥Ž‹ssx|{vl的重现性 o结
果表明同一样品在 u根 „ª¬¯¨ ±·÷⁄… ≤t{谱柱上的色
谱行为有较好的一致性 ∀
取道地药材凤丹皮样品 o建立了牡丹皮对照用
指纹图谱 k共有模式 lo以指纹图谱共有模式为标
准 o对商品药材进行了质量评价 ∀大多数药材样品
所含成分基本一致 o但各成分比例不尽相同 ∀在所
收集的样品中 o绝大部分与牡丹皮 ‹°≤指纹图谱
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共有模式的相似度较高 o这说明牡丹皮品质较稳定 ∀
但滇丹皮 k来源于 Π1 δελαϖαψιl与共有模式差异较
大 ∀滇丹皮从化学成分的种类 !含量及含量比例上
与牡丹皮有本质的区别 ∀滇丹皮与共有模式的比较
见图 u∀综合指纹图谱分析表明 o对牡丹皮药材而
言 o植物的遗传特征是决定群体相似性的主要因素 o
环境等外界因素所产生的影响相对次要 ∀
图 u 滇丹皮与丹皮共有模式图谱的比较
≈参考文献  
≈t  中国药典 ≈≥ 1一部 1 ussx} tzu1
≈u  פ®¨ ¦«¬ o פ±¤®¤≠ 1 „±·¬√¬µ¤¯ ¶∏¥¶·¤±¦¨¶©µ²° ·«¨ µ²²·²©Παε2
ονια σπεχιεσ≈ 1° ¤¯±·¤ §¨o t|{uo wx kwl} uxu1
≈v  ¬± ‹ ≤o ⁄¬±ª‹ ≠ o • ∏≠ ≤1 ׺²±²√¨¯ ¦²°³²∏±§¶©µ²° Παεο2
νια συφφρυτιχοσα≈ 1 ‘¤·°µ²§o t||{o yt} vwv1
≈w  ⁄¬±ª‹ ≠ o • ∏ ≠ ≤o ¬± ‹ ≤o ·¨¤¯1 Š ¼¯¦²¶¬§¨ ¶©µ²° Παεονια
συφφρυτιχοσα≈ 1 ≤ «¨ ° °«¤µ° …∏¯ o¯ t|||o wz kxl} yxu1
≈x   ¤≠ …o • ∏ ⁄ Šo ¬∏Ž1 °¤¨ ²±¬√¤¼¬±o ¤ ± º¨ °²±²·¨µ³¨ ±¨
ª¯¼¦²¶¬§¨ ©µ²° Παεονια δελαϖαψι≈ 1 ≤«¬± ≤«¨ ° ¨·o t|||o ts
k|l} zzt1
≈y  Ž¤± §¨¤ o Œ¬·¤®¤≠ o ≥«¬¥¤·¤≥1 ׫¨ ¤¥¶²¯∏·¨ ¶·µ∏¦·∏µ¨¶²©³¤¨ 2
²±¬©¯²µ¬±o ¤¯¥¬©¯²µ¬±o ²¬¼³¤¨ ²±¬©¯²µ¬± ¤±§ ¥¨ ±½²¼¯ ³¤¨ ²±¬©¯²µ¬± ¬¶²2
¤¯·¨§©µ²° ≤«¬± ¶¨¨ ³¤¨ ²±¼ µ²²·≈   1 × ·¨µ¤«¨ §µ²±o t|zuo u{}
wvs|1
≈z   ¤¶¤¼∏®¬≠ o ∞°¬®²˜o „·¶∏«¬µ²Žo ·¨¤¯1 Š¤¯ ²¯¼¯ 2²¬¼³¤¨ ²±¬©¯²µ2
¬±o ¶∏©©µ∏·¬¦²¶¬§¨ ¶„o …o ≤o ¤±§⁄o ©¬√¨± º¨ ¤±·¬²¬¬§¤·¬√¨ª¯¼¦²2
¶¬§¨ ¶o ¤±§ ¶∏©©µ∏·¬¦²¶¬§¨ ∞o ¤ ³¤¨ ²±²¯ ª¯¼¦²¶¬§¨ o ©µ²° ≤«¬± ¶¨¨
 ²∏·¤± ≤²µ·¨¬≈ 1 ≤«¨ ° °«¤µ° …∏¯ o¯ t||uo ws k{l} uuw{1
≈{  ‘¬¶«¬½¤º¤ o ≠ ¤°¤ª¬¶«¬×o ‘²±¤®¤Šo ·¨¤¯1 Œ¶²¯¤·¬²± ¤±§¦«¤µ2
¤¦·¨µ¬½¤·¬²± ²©ª¤¯ ²¯¼¯ ª¯∏¦²¶¨¶©µ²° °¤¨ ²±¬¤¨ • ¤§¬¬¤±§·«¨ ¬µ¨ ©©¨¦·
²± ∏µ¨¤2±¬·µ²ª¨ ± ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ¬± µ¤·¶¨µ∏° ≈   1 ≤ «¨ ° °«¤µ°
…∏¯ o¯ t|{vo vt k{l} ux|v1
≈|  ¬± ‹ ≤o ⁄¬±ª ‹ ≠ o • ∏ × ≥o ·¨¤¯1  ²±²·¨µ³¨ ±¨ ª¯¼¦²¶¬§¨ ¶
©µ²° Παεονια συφφρυτιχοσα≈ 1 °«¼·²¦«¨ °¬¶·µ¼o t||yo ws ktl}
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≈ts  Ž¬·¤ª¤º¤ Œo ≠ ²¶«¬®¤º¤  o ׶∏±¤ª¤ Žo ·¨¤¯1 ≤²°³²∏±§¶²©
 ²∏·¤± ≤²µ·¨¬≈ 1 ≥«²¼¤®∏ª¤®∏¤¶¶«¬o t|z|o vv} tzt1
Στυδιεσ ον ΗΠΛΧ φινγερπριντ οφ Χορτεξ Μουταν
÷˜ ≥«∏±2­∏±t o Œ° ±¨ªu o ≠ „‘Š ¬∏v o ‹ „‘Š  ¬¤±t o • „‘Š «¨ ±ª2·¤²t
(t1 ∆επαρτµ εντ οφ Πηαρµ αχογνοσψ, Χηινα Πηαρµ αχευτιχαλΥνιϖερσιτψ, Νανϕινγ utssv{, Χηινα;
u1 Γυανγζηου Ποστ ανδ Τελεγραπη Ηοσπιταλ, Γυανγζηου xtsyvs, Χηινα;
v1 Σεχονδ Αφφιλιατεδ Ηοσπιταλ, Γυανγζηου Υνιϖερσιτψ οφ ΤραδιτιοναλΧηινεσε Μεδιχινε, Γυανγζηου xtstus, Χηινα)
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第 vt卷第 us期
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中 国 中 药 杂 志
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