全 文 ：醇混匀 oys ε 保温 ws°¬± ~加入等体积的氯仿异
戊醇kuwΒtl抽提 o轻轻颠倒混匀 otssssµr°¬±离
心 ts°¬± o吸取上清液 o加入 trts体积的 ts h
≤ׄ…溶液 o再加入等体积氯仿2异戊醇kuw }tl
重复抽提 t次 o吸取上清液加入等体积的沉淀
缓冲液≈≤ׄ…t h o×µ¬¶2‹≤tk³‹{ qslxs°°²¯ro
∞⁄ׄ ts°°²¯ro巯基乙醇 t h   o室温下放置
vs°¬±以上 otssssµr°¬±离心 ts°¬± o小心去上
清 o分别用 zs h乙醇和无水乙醇各洗涤 t次 o弃
掉洗液 o挥干 ∀以 wsΛ¯ ×∞溶解后进行 °≤• 扩
增 ∀
212 °≤• 反应 反应体系总体积 xsΛ¯ o中引物
为 t°°²¯ro核 ⁄‘„约 txs±ªoפ´ 酶 v˜ o§‘×°¶
各 s qsx°°²¯r∀扩增程序为沸水预变性 x°¬± o
|w ε wx≥ ozu ε wx≥ ovz ε ys≥ ws个循环 o后延
伸 zu ε x°¬± ∀取 tsΛ¯ 扩增产物于 t qs h琼脂
糖凝胶上用 t ≅ ׄ∞电泳缓冲液电泳 o紫外检
测拍照 ∀
3 结果
实验选择了 |个扩增多态性好的引物对 v
个品种的 ⁄‘„ 分别进行 • „°⁄扩增 o得到清
晰 !稳定的特征条带 t{条k图略l o将迁移率相
同的带均作为同源位点处理 o得到 trs数据k有
计为 t o无计为 sl矩阵 o用 • „°⁄ 分析软件
• „°⁄¬¶·¤±¦¨ °¤¦®¤ª¨ 2∂ µ¨¶¬²± t qsw中 ⁄¬¦¨ 的方
法计算任意两个样品间的遗传距离 o结果显示
牛心栝楼更近似于仁栝楼 o二者的遗传距离ks q
wz{uytl要小于仁栝楼与糖栝楼之间的遗传距
离ks qzsssssl o其中以牛心栝楼与糖栝楼的遗
传距离ks q{wytxwl最大 ∀
4 讨论
411 本实验所用模板 ⁄‘„ 是混合个体取样 o
旨在排除个体差异≈u  ∀
412 重复上述实验 o结果稳定 o空白对照表明
本实验条件无明显污染 ∀
413 本实验结果表明牛心栝楼这一新品种在
遗传表现上更接近于仁栝楼 o这与产地将牛心
栝楼作仁栝楼收购和药用的传统做法≈t 是一致
的 o说明从物种遗传本质出发对从外部形态难
以判断的牛心栝楼的归属问题进行探索是有意
义的 o并为今后此类问题的解决提供了方法 ∀
5 参考文献
t 靳光乾 o刘善新 o杨荣志 o等 q山东栝楼农家品种调查报告 q
中国中药杂志 ot||s qtxktsl }tw
u 孟祥栋 o马红 o张卫华 q利用 • „°⁄技术对葱属品种遗传关
系的分析 q生物多样性 ot||{ oyktl }vz
致谢 调查中得到山东省药材技工学校的靳光乾
同志的帮助 ∀
t||{2sw2u{收稿
薄层扫描法测定苦参中苦参碱的含量
杨梦玉 邬国庆 周富荣 k北京市药品检验所 北京 tsssvxl
摘要 目的 }研究不同产地苦参中苦参碱及总生物碱的含量 ~比较薄层扫描及酸碱滴定两种方法的
测定结果 ∀方法 }薄层扫描法及酸碱滴定法 ∀结果 }苦参碱含量为 s qszzy h ∗ s qustt h ~总生物碱含量
为 u qwz h ∗ u q|y h ∀结论 }异地苦参中苦参碱含量相差较大 ~而总生物碱含量差异不大 ~薄层扫描法结
果准确性好 !重现性好 o所选显色剂使斑点稳定持久 ∀
关键词 苦参 苦参碱 薄层扫描法
苦参为常用中药 o系豆科槐属植物苦参
Σοπηοραφλαϖεσχενσ „¬·q的干燥根 ∀苦参内含苦
参碱 !氧化苦参碱 !槐定碱等≈t ou  ∀苦参碱具抗
肿瘤 !平喘和抑菌作用≈u ov  ∀本品以碘化铋钾试
液及 x h亚硝酸钠试液依次显色后 o斑点清晰 !
稳定性强 ∀采用薄层扫描法测定了 ts批样品
中苦参碱的含量 o并与5中国药典6酸碱滴定法
测定苦参总碱含量结果进行比较 o结果不同产
#zvv# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 y期
地苦参中苦参总碱的含量差异不大 o而苦参碱
含量存在较大差异 ∀为评价苦参质量及提高检
测方法提供了依据 ∀
1 仪器与试药
≤≥2|sss型双波长薄层扫描仪 }日本岛津 ~
定量毛细管 ~美国 ⁄µ¤±°²±§公司 ~硅胶 Š薄层
板 }烟台化工研究所 ~苦参碱对照品 }中国药品
生物制品检定所 o纯度为 |{ qv h ∀所用试剂均
为分析纯 ∀
生药样品 }苦参生药 ts件 o经北京市药品
检验所中药室周富荣教授鉴定为豆科植物苦参
Σοπηορα φλαϖεσχενσ „¬·q的根 ∀见表 t ∀
表 t 不同产地苦参中苦参碱含量
测定及两种测定法比较 h
编号 来源
苦参碱含量
薄层扫描法 酸碱滴定法
t 云南 o昆明 s qustt u q|y
u 河北 o赤城 s qt{st u qzv
v 北京 s qusts v qtw
w 河北 o秦皇岛 s qtwsx u q{|
x 河北 o青龙镇 s qszzy u qxu
y 河北 o张家口 s qsz{s u qzt
z 河北 o怀安 s qs{{u u qux
{ 湖北 o安华 s qt{tz u qy{
| 山西 o阳泉 s qtzww u q|s
ts 湖南 o长沙 s qs{tx u qwz
2 方法与结果
211 薄层条件 }硅胶 Š板 o板厚 s qv°° ~苯2丙
酮2醋酸乙酯2浓氨试液kuΒvΒwΒs qul展开 o碘化
铋钾试液显色后 o再喷 x h亚硝酸钠试液少量 o
覆盖一块同等大小的玻璃板 o周围用胶布封严 o
放置 u«后测定 ∀
212 扫描条件 }经光谱扫描后确定 o苦参碱 Κ¶
€w{s±° oΚ• € yxs±° o线性参数 ≥÷ € z oϖ Ψ €
s qt°° o狭缝 € u qs°° ≅ u qs°° o反射法锯齿形
扫描 o背景校正 ∀
213 标准曲线制备 }精密吸取苦参碱对照品溶
液ks qxss°ªr°¯ lt ou ov ow oxΛ¯ o分别点于同一硅
胶 Š薄层板上 o依法展开 !显色并扫描 o测定各
斑点面积 ∀回归方程为 Ψ € uz{|t qs{ n
vx|xy| qvx Ξ oρ€ s q|||x ∀苦参碱在 s qxss ∗ u q
xssΛª线性关系良好 ∀
214 精密度与稳定性 }在同一硅胶 Š 薄层板
上 o分别点对照品溶液 o依法测定 ∀结果 ΡΣ∆ €
t qvs h k ν € xl o每隔 vs°¬± o测定峰面积 o结果
在 w«内稳定 ∀
215 回收率测定 }精密称取已知含量的苦参
tªo分别精密加入苦参碱对照品溶液ktz q||°ª
ψts°¯ lt°¯ o依法操作 o扫描测定 o结果平均回
收率为 |z q|{ h oΡΣ∆为 t qyz h ∀
2 q6 样品测定 }取苦参粉末 uªo精密称定 o置具
塞锥形瓶中 o精密加氯仿 xs°¯ o浓氨试液 t°¯ o
密塞 o时时振摇 o放置 uw«后 o滤过 o精密量取续
滤液 ux°¯ o置蒸发皿中 o蒸干 o残渣加无水乙醇
使溶解 o定量转移至 x°¯ 量瓶中 o稀释至刻度 o
摇匀 o吸取 v ∗ tsΛ¯ k视含量高低而定l o对照品
溶液 u owΛ¯ o分别点于同一硅胶 Š薄层板上 o依
法测定 o外标二点法计算含量 o见表 t ∀
217 酸碱滴定法测定苦参总碱 }以5中国药典6
苦参项下酸碱滴定法对 ts批样品进行测定 o并
将结果与本方法结果进行比较 o见表 t ∀
3 讨论
311 经与稀碘化铋钾试液 !改良碘化铋钾试
液 o碘2碘化钾试液与改良碘化铋钾试液ktΒtl
等显色剂比较 o选择本文显色剂 o可使斑点显色
充分 !无空心 o放置 u«后测定 o使斑点颜色更均
匀 o稳定性显著提高 ∀
312 结果表明 o不同产地苦参中苦参碱含量存
在较大差异 o故此可作为评价苦参的质量 o而苦
参总生物碱的含量差异却不大 o故评价质量时
应作多种生物碱的比较和选择 o在临床用药上 o
则可视各生物碱含量及其药理作用而取舍 ∀
4 参考文献
t 江苏新医学院 1 中药大辞典 1 上海 }上海人民卫生出版社 o
t|{x qtu{v
u 阴健 o郭力弓 1 中药现代研究与临床应用 1 北京 }学苑出版
社 ot||w qwuw
v 李丹 o王平全 o张楠森 o等 q苦参碱类生物碱的研究进展及临
床应用 1 中草药 ot||y ouzkxl }vs{
t||{2sz2u|收稿
#{vv# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 y期