全 文 ：枸杞子抑制人前列腺细胞增殖活性成分的提取与分离
刘雪莉t o孙静芸u o李洪玉u o张 亮t o钱伯初t
kt q浙江省医学科学院 药物研究所 o浙江 杭州 vtsstv ~ u q浙江省中医药研究院 o浙江 杭州 vtssszl
≈摘要  目的 }筛选与分离枸杞子中抑制人前列腺细胞增殖的活性成分 ∀方法 }水 !|x h乙醇 !xs h乙醇 !丙酮
与正丁醇等溶剂分别提取 o经硅胶柱色谱和 ׏≤ 分离 ~ ≥ oŒ• ot ‹ ‘ • o˜ ∂ 确定结构 ∀  × × 显色试验测定提取
物的抑制人前列腺癌 °≤v细胞增殖活性 ∀结果 }从枸杞子 xs h乙醇提取物中分得单体化合物莨菪亭 o并证明有显
著的抑制 °≤v细胞增殖活性 ∀结论 }莨菪亭是枸杞子抑制 °≤v细胞增殖的活性成分 ∀
≈关键词  枸杞子 ~莨菪亭 ~人前列腺癌 °≤v细胞
≈中图分类号  • u{w qu ~• u{x ≈文献标识码  … ≈文章编号  tsst2xvsukusssls{2sw{t2sv
前列腺增生是中老年男性的常见病 o随着社会
老龄化的加速与人均寿命的延长 o发病率逐年增加 o
积极寻找抗前列腺增生药物有重要意义 ∀由于前列
腺增生在发病情况 !病因及治疗与前列腺癌有很多
相似之处 o抗前列腺增生药物的体外筛选可用前列
腺癌细胞株进行≈t  ∀近年来从天然产物寻找治疗前
列腺疾病新药受到世界各国的关注 ∀文献报道中药
枸杞子的提取物能抑制睾丸酮所致大鼠前列腺增
生≈u  o然而其抗前列腺增生的活性成分未见报道 ∀
本研究用人前列腺癌 °≤v 细胞体外培养法 o筛选与
分离枸杞子抑制人前列腺细胞增殖的活性成分 ∀
1 材料 !试剂与仪器
枸杞子 Λψχιυ µ βαρβαρυ µ q购自浙江省中医
药研究院中药房 o由徐锡山主任中药师鉴定 ∀
°×≤板用硅胶 Šk青岛海洋化工厂l o含 s qv h
≤  ≤2‘¤制备板kus¦° ≅ us¦°l ∀甲醇k化学纯l o无
水乙醇 !氯仿 !乙醚 !正丁醇k分析纯l ∀四甲基偶氮
唑  × ×k≥¬ª°¤l oƒtu培养基kŠ¬¥¦²l o超级无支原体
新生牛血清购自杭州四季青生物工程材料研究所 ~
二甲基亚砜k⁄ ≥’l上海金山化工厂 ~异丙醇 o进口
分装 ∀人前列腺癌 °≤v 细胞 o购自中国科学院上海
细胞所k美国 „× ≤≤ 提供l ∀
• • ≥2t数字熔点测定仪 o岛津 ˜ ∂2uyx型紫外
分光光度仪 oŽ• ˜Ž∞•2„ 2wss 核磁共振光谱仪 o
ƒ×Œ•2zxs红外光谱仪 o „×2|x 型高分辩质谱仪 ∀
≈收稿日期  usss2sv2s{
≈基金项目  省卫生厅 o省人事厅和省中医局资助课题k|ysz∞ o
|{u{∞l
≥«¨ ¯¯r… uvss ≤ ’u培养箱k美国 ≥«¨ §¯²±公司l o⁄Š2
vsuu „ 型酶联免疫检测仪k华东电子管厂l o≤ ’Œ≤
型生物倒置显微镜k重庆光学仪器厂l ozxw型分光
光度计k上海第二分析仪器厂l o≥≤2t型水平层流净
化工作台k苏州洁净技术研究所l o岛津 ˜ ∂2uyx紫
外分光光度仪 ∀
2 方法与结果
2 q1 枸杞子提取物初筛样品的制备
分别用水 !xs h乙醇 !|x h乙醇提取 ~乙醇提取
物再用丙酮提取 o其残渣再用正丁醇提取 o得上述各
提取物k药理筛选结果见表 t oul ∀
2 q2 枸杞子有效成分的提取与分离
枸杞子 s qx ®ªo分别以 y ow倍量的 xs h乙醇回
流提取 u次kt qx ot «l o合并提取液 o减压回收乙醇 o
得流浸膏 uxs ª∀tssª流浸膏 o水饱和正丁醇萃取 x
次 o每次 uss °¯ o减压回收正丁醇 o得稠膏 o以少量甲
醇溶解 o加 us ª硅胶拌匀 o室温挥干 o另取硅胶
ussªo干法上柱kw ¦° ≅ tx ¦°l o氯仿2甲醇ktΒtl洗
脱 ouss °¯ 为 t流分 o收集 x份 o原点用 xs h乙醇洗
脱 o收集 uss °¯ o回收洗脱液 o分别得流分 ´ kw qx
ªl oµky qx ªl o¶kw q|v ªl o·ku qz ªl o∏kx qt ªl o药
理筛选结果 o流份 ´抑制前列腺癌 °≤v 细胞增殖作
用较强 ∀
流份 ´用氯仿2甲醇ktΒtl溶解 o采用 °×≤ 法 o
氯仿2甲醇k|Βtl为展开剂 o展开 o取出晾干 o˜ ∂ kvyx
±°l显亮蓝色荧光 o• φs qz起始 o依次切割 y部分 o分
别用乙醇洗脱 o回收乙醇得 …2tktt qw °ªl o…2ukuu
°ªl o…2vkwy °ªl o…2wktv{ °ªl o…2xktv{ °ªl o…2y
kwws °ªl o药理筛选结果 o…2t抑制前列腺癌 °≤v 细
#t{w#
第 ux卷第 {期
usss年 {月
中 国 中 药 杂 志
≤«¬±¤²∏µ±¤¯ ²© ≤«¬±¨ ¶¨ ¤·¨µ¬¤  §¨¬¦¤
∂ ²¯ qux o‘²q{
㸻qousss
胞增殖作用较强 ∀
2 q3 枸杞子有效成分制备
枸杞子 x ®ªo按 2 q2 提取分离 o得 …2t o甲醇2苯
kxΒtl重结晶 u次 o得淡黄色针晶k ´lws °ª∀
2 q4 ´的结构鉴定
°³usy ε ∀ ˜ ∂ Κk∞·’ ‹l±° }vwv ou|z ouxu o
uuz ∀∞Œ2  ≥ °r½}t|uk  n l otzzk  n p ≤ ‹vl otyw
k  n p ≤ ’l otw|k  n p ≤ ’ p ≤ ‹vl otut ∀t ‹ ‘ •
k≤⁄≤ v¯l∆}z qysk§o€ | qty ot‹l oy quzk§o€ | qxv o
t‹l oy q|uk¶ot‹l oy q{wk¶ot‹l ov q|xk¶ov‹2’≤ ‹vl ∀
Œ• kŽ…µl¦°p t }vvv{k ’ ‹l oty|zk ≤ ’ l otys{ o
txyxk ≤ ≤ l o{yu ∀以上数据与文献≈v 报道一
致 o鉴定为莨菪亭ky2甲氧基2z2羟基香豆素l ∀
2 q5 前列腺癌细胞增殖抑制试验
 × × 显色试验 o按改良的 ²¶°¤±±法进行≈w  o
取对数生长期的细胞 o制备 x ≅ tsw 细胞r °¯ 的细胞
悬液 o将细胞悬液接种于 |y孔细胞培养板中 o每孔
tss Λ¯ o置 vz ε 含 x h ≤ ’u !饱和湿度的培养箱中培
养 uw «后加入药物 o每孔 tss Λ¯ o另设空白对照孔和
调零孔 ∀每组设 w复孔 o对照组仅加无血清培养液
tss Λ¯ ∀继续培养 |w «后每孔加  × × tss Λ¯k浓度
为 t ª#p tl o再培养 u «o然后弃去各孔中的液体 o每
孔加 s qsw °²¯#pt的盐酸异丙醇 txs Λ¯ o将孔板于
室温置暗室中保持 vs °¬±后于 xzs ±°处读取吸收
度值 ∀各提取物用无血清的培养液研磨配制 o超声
振荡 ts °¬±使之混匀 o经 s quu Λ¯ 滤膜过滤除菌后
供实验用 ∀按吸收度值算出各组的平均值及标准
差 o将平均值减去本底k无细胞空白对照孔平均值l o
计算细胞增殖抑制率k h l € k细胞对照组吸光度值
p用药组吸光度值lr细胞对照组吸光度值 ≅ tss ∀
用孙瑞元教授的 ‘⁄≥× 程序于计算机计算各提取物
的 Œ≤xs ∀
2 q5 q1 枸杞子水提物与醇提物抑制细胞增殖作用
的动态比较
比较了各提取物对体外培养前列腺癌细胞的抑
制作用k见表 tl o各提取物的浓度均为相当于生药
ts °ª# °¯ p t o抑制率均随着培养时间延长而提高 o其
中以 xs h乙醇提物在培养 zu «时的抑制率达 zs h
为最高 ∀
2 q5 q2 xs h o|x h乙醇提取后各提取物抑制前列腺
癌细胞增殖作用
根据表 t结果 o进一步比较 xs h o|x h乙醇提取
后的丙酮提取物 !正丁醇提物与正丁醇不溶物的抑
制作用k见表 ul ∀由表 u结果可知 o虽然 |x h乙醇
提取后的丙酮提取物k∞2u„l和正丁醇提取物k∞2
u…l的 Œ≤xs与 xs h乙醇提取后的正丁醇提取物k∞2
t…l相似 o但考虑到制药工艺的实用性 o本研究以
xs h乙醇提后的正丁醇提物k∞2t…l作硅胶柱分离 ∀
表 t 各提取物对体外不同培养时间kτr«l
前列腺癌细胞的抑制作用
组别
抑制率
uw w{ zu |y
水提物k • 2tl z qv uy qw xy qu yt qw
水提物k • 2ul vy qz vw q| xw q{ w{ qy
xs h醇提物k∞2tl ux qy vt qv zs qx yy q{
|x h醇提物k∞2ul uz qx uy qs x{ qx ws q{
|x h醇提不溶物k∞2vl uz q{ tu q{ vu qs u qu
表 u xs h o|x h乙醇提后各提取物
抑制前列腺癌细胞增殖作用 °ª# °¯ p t
提取物 Œ≤xs
水提物k • 2tl | qt{
|x h醇不溶物的水提物k • 2ul x qw|
xs h醇提物k∞2tl { qv| ? s qxxk ν € ul
丙酮提取物k∞2t„l s quy ? s qstk ν € ul
正丁醇提物k∞2t…l s qt| ? s qswk ν € vl
正丁醇不溶物k∞2t≤l x qsw ? u qwvk ν € vl
|x h醇提物k∞2ul x qvz
丙酮提取物k∞2u„l s qtz ? s qs|k ν € ul
正丁醇提物k∞2u…l s qt{ ? s qsyk ν € ul
正丁醇不溶物k∞2u≤l { qu| ? y q|tk ν € ul
2 q5 q3 莨菪亭抑制前列腺癌细胞增殖作用
枸杞子活性成分莨菪亭有显著的抑制人前列腺
癌 °≤v 细胞增殖作用 o经 v 次试验测得其 Œ≤xs为
ktxz qsw ? ux qwxl Λª# °¯ p t ∀
3 讨论
中药枸杞子是中医用作滋补肝肾的要药 o对其
有效成分及调整免疫 !护肝等药理作用的研究甚多 o
近年来报告枸杞子所含的莨菪亭对体外培养胃腺癌
k  Ž2tl !宫颈癌k‹¨¯¤l !黑色素瘤k…tyƒtsl细胞有抑
制作用≈x  ∀本研究用人前列腺癌 °≤v细胞体外培养
增殖抑制试验为导向 o系统比较了枸杞子用水 !xs h
乙醇 !|x h 乙醇 !丙酮和正丁醇等溶剂提取物的
Œ≤xs o以 xs h乙醇提取物继续经硅胶柱色谱和 ׏≤
分离 o得到单体化合物莨菪亭 o并证明有显著的抑制
°≤v细胞增殖活性 o该结果为开发以枸杞子有效成
分为治疗前列腺疾病的新药提供了依据k莨菪亭的
药理作用研究结果将另文报告l ∀
#u{w#
第 ux卷第 {期
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中 国 中 药 杂 志
≤«¬±¤²∏µ±¤¯ ²© ≤«¬±¨ ¶¨ ¤·¨µ¬¤  §¨¬¦¤
∂ ²¯ qux o‘²q{
㸻qousss
≈参考文献 
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°²¯¯¨ ± ∞¬·µ¤¦·o≤ µ¨±¬·¬± ×2ys o¬± ·«¨ • ª¨∏¯¤·¬²± ²© °µ²¶·¤·¨ ≤¨¯ 2¯
ªµ²º·«q…µ ˜µ²¯ ot||s oyy }v|v q
≈u  山原条二 o河原有三 q前列腺肥大症治疗剂 q公开特许公报 o
t||u owkt ∗ vl }ty|xv q
≈v  李春生 o杜桂芝 o赵全成 o等 q枸杞子化学成分的研究 q中国中
药杂志 ot||s otxkvl }wv q
≈w  ¬∏ ÷∏¨ 2¯¬o≤«¨ ± Ž¤¬o≠¨ ≠¬2°¬±ªo¨·¤¯ qŠ¯ ∏·¤·«¬²±¨ „±·¤ª²±¬½¨ §
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©µ²° ˜°¥¨¯¯¬©¨ µ¤¨ °¯ ¤±·¶q∏ q„ ‘¨ º ƒ∏µ¤±²¦²∏°¤µ¬± ¤±§ ƒ¤¯2
¦¤µ¬±§¬²¯ ƒ∏µ¤±²¦²∏°¤µ¬± ∞·«¨µ¶ ©µ²° ·«¨ • ²²·²© Ανγελιχα
ϕαπονιχα q≤«¨ ° °«¤µ° …∏¯¯ot||| owzktl }|y q
Εξτραχτιον ανδ Ισολατιον οφ Αχτιϖε Χοµ πονεντ φορ Ινηιβιτινγ ΠΧv Χελλ Προλιφερατιον
ιν ςιτρο φροµ τηε Φρυιτ οφ Λψχιυµ βαρβαρυµ Λ .
Œ˜ ÷∏¨ 2¯¬t o≥˜‘¬±ª2¼∏±u oŒ ‹²±ª2¼∏u o ‹ „‘Š ¬¤±ªt o ±Œ„‘…²2¦«∏t
kt qŒ±¶·¬·∏·¨ ²© ¤·¨µ¬¤  §¨¬¦¤o«¨­¬¤±ª „¦¤§¨ °¼ ²©  §¨¬¦¤¯ ≥¦¬¨±¦¨¶t o‹¤±ª½«²∏ vtsstv o«¨­¬¤±ªo≤«¬±¤~
u q«¨­¬¤±ª „¦¤§¨ °¼ ²© ×µ¤§¬·¬²±¤¯ ≤«¬±¨ ¶¨  §¨¬¦¬±¨ u o‹¤±ª½«²∏ vtsssz o«¨­¬¤±ªo≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε:ײ ¬¨·µ¤¦·¤±§¬¶²¯¤·¨·«¨ ¤¦·¬√¨¦²°³²±¨ ±·¬±«¬¥¬·¬±ª°≤v ¦¨¯¯ ³µ²¯¬©¨µ¤·¬²±¬± √¬·µ²
©µ²° ·«¨ ©µ∏¬·²© Λψχιυ µ βαρβαρυ µ qΜετηοδ :׫¨ ¤¦·¬√¨¦²°³²±¨ ±·¶²©·«¨ ©µ∏¬·²© Λ . βαρβαρυ µ º µ¨¨ ¬¨·µ¤¦·2
§¨¥¼ º¤·¨µo|x h ·¨«¤±²¯ oxs h ·¨«¤±²¯ µ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ q ׫¨ ± o ·¨«¤±²¯ ¬¨·µ¤¦·º¤¶ ¬¨·µ¤¦·¨§ º¬·«¤¦¨·²±¨ ¤±§ ν2
¥∏·¤±²¯ ¤±§¬¶²¯¤·¨§¥¼ ≥¬’u ¦²¯∏°±¤±§³∏µ¬©¬¨§¥¼ ׏≤ ·²²¥·¤¬±·«¨ ¤¦·¬√¨¦²°³²±¨ ±·q׫¨ ¦«¨ °¬¦¤¯ ¶·µ∏¦·∏µ¨
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¤¯¯ ¬¨·µ¤¦·¶¬¶²¯¤·¨§©µ²° ·«¨ ©µ∏¬·²© Λ . βαρβαρυ µ ¬¶¶¦²³²¯ ·¨¬±qΧονχλυσιον :≥¦²³²¯ ·¨¬±¬¶·«¨ ¤¦·¬√¨¦²°³²±¨ ±·
²©·«¨ ©µ∏¬·²© Λ . βαρβαρυ µ ©²µ¬±«¬¥¬·¬±ª °≤v ¦¨¯¯ ³µ²¯¬©¨µ¤·¬²±q
[ Κεψ ωορδσ] ©µ∏¬·²© Λψχιυ µ βαρβαρυ µ ~¶¦²³²¯ ·¨¬±~°≤v ¦¨¯¯
≈责任编辑 徐美珍 
书 讯
5分子生药学6一书 o由北京医科大学出版社出版 ∀本书主要介绍分子生药学的理论 !研究方法 !研究领域及其研究进展 ∀
全书分三篇 }第 t篇系统论述了分子生药学作为一门新学科应具备的理论基础 o包括其产生的背景 !概念 !研究内容及与相关
学科的关系等 ∀第 u篇介绍了分子生药学所用的研究方法和技术 ∀着重讨论每种方法在实际应用中应注意的问题 ∀第 v篇
主要论述分子生药学的研究领域和取得的进展 ∀重点论述了分子生药学在药用植物资源 !生药鉴定 !有效成分的基因调控和
生产等若干重要领域所取得的成果和涉及的理论知识 ∀
本书是第一部系统论述分子生药学这门新科学的专著 ∀在内容和写作上体现/求实0 !/创新0的宗旨 ∀在阐述理论和预示
发展时 o有着实际工作的基础 ∀对生药学的研究具有启发性 ∀在内容的安排上注重科学性 !先进性 !系统性和条理性 ∀该书可
作为医药院校生药专业 !中药专业的本科生 !研究生及教师的教学用书 o也可供有关科研人员科研时参考 ∀
该书由黄璐琦博士主编 o马小军 !王康正 !王敏 !肖小河 !邱德有 !高文远 !曹春雨等编委共同编写 ∀肖培根 !王永炎两院士
作序 ∀全书为 ty开本 ovzx页 oyt|千字 o定价每册 xy qss 元k另加邮费 y元l ∀欲购者请与5中国中药杂志6程志铭同志联系 ∀
地址 }北京东直门内北新仓 t{号 ~邮编 }tsszss ∀
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中 国 中 药 杂 志
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