全 文 ：脂的吸附能力产生一定影响 o这种影响因盐的种类
和用量不同而不同 ∀当氯化钾的浓度为 x h ∗ tx h
时 o小檗碱的比上柱量降低 ∀当加入高浓度氯化钾
和氯化钠时 o其比上柱量增加 o且氯化钠浓度的变化
与滤液中小檗碱浓度变化满足一定的数学规律 ∀
315 温度对吸附纯化效果的影响
取黄连水提液分别加入等量 ⁄ysx型树脂 o在
us ovs ows oxs oys ozs ε 下 o用康氏振荡器振荡 t «o
立即过滤 o测量滤液中小檗碱的浓度并推算树脂的
比上柱量 o结果分别为 y qus ox qwx ox qws ow qyx ow qxs o
w q{s °ª#ªp t ∀
由上述结果可知 o温度也是影响吸附纯化效果
的重要因素 o温度升高 o树脂比上柱量下降 o尤其超
过 xs ε 后 o比上柱量仅为 us ε 时的 zs h左右 o说明
中药成分在树脂上的吸附为一放热过程 o低温有利
于提高中药成分的比上柱量 o但在室温范围内kus ∗
ws ε l温度对比吸附量影响较小 ∀
4 讨论
411 本文为应用基础研究 o为了更准确地评价上柱
前后成分变化 o作者设计了相应的吸附洗脱特性参
数 o包括比上柱量 !比吸附量和比洗脱量 v个参数 ∀
v个参数之间的变化反映出药物在吸附前 !吸附后 !
解吸附后三过程中的量变关系 ∀同时 ov个参数均以
单位质量干树脂计 o可以提高评价指标的准确性与
科学性 o亦便于估算树脂的用量 o利于工业化生产 ∀
412 据有关文献报道 o在某些发酵液中加入少量氯
化钠可以提高抗生素≈v o中药成分在树脂上的比上
柱量随盐溶液变化的情况未见报道 o本文研究结果
表明 o不同浓度的氯化钠和高浓度的氯化钾可以提
高指标成分的比上柱量 ~低浓度的氯化钾则会降低
其比上柱量 ∀增加盐溶液的浓度 o可以提高有效成
分的保留率 o而且盐溶液的浓度与残液中小檗碱的
浓度满足一定的数学关系 o这些发现有利于制剂工
艺改进 o值得进一步研究 ∀
413 树脂的吸附为一物理化学过程 o中药成分吸附
在树脂表面 o通常伴随着熵变 !焓变和 ¬¥¥¶自由能
改变 o从而导致整个体系表面自由能下降 o为一放热
过程 o所以升高温度会造成比上柱量降低 o这一结果
与相关报道相似≈z ∀
414 据报道 o影响大孔吸附树脂吸附纯化效果的因
素多为树脂的种类 !中药药液与树脂用量的比例
等≈w o这在本研究中也得到了证实 ∀此外 o中药药液
的浓度 !药液中盐的种类和用量 !外环境的温度同样
影响树脂的吸附能力 o控制好这些因素 o有利于纯化
工艺的改进和完善 o提高树脂的利用率 o值得进一步
研究 ∀
≈参考文献
≈t ¥µ¤°¶q±§∞±ª ≤«¨ ° °µ²§ ¶¨ ⁄¨ √ ot|zx ottwkul }|| q
≈u 李 霞 o李荣芷 o王 序 o等 1 大孔吸附树脂对亲水性酚类衍生
物吸附作用的研究 1 北京医科大学学报 ot|{{ ouskyl }wwz1
≈v 顾觉奋 o任爱华 1 2tsv大孔吸附树脂提取螺旋霉素的研究 1
中国抗生素杂志 ot||t otykul }|{1
≈w 金继曙 o郁达虎 o种明才 1 用大孔吸附树脂分离白芍药总甙 1
中国中药杂志 ot||w ot|ktl }vt1
≈x 中国药典 1 一部 1t||s1
≈y 朱 浩 o侯世祥 o孙毅毅 1 大孔吸附树脂吸附纯化不同中药有
效部位特性研究 1 中国中药杂志 ot||{ ouvktsl }ysz1
≈z 赵凤生 o邬行彦 1 一种新型的弱碱大孔型阴离子交换树脂吸着
链霉素的静力学和动力学 1 医药工业 ot|{v okyl }|w1
≈责任编辑 李 禾
正交设计2重复试验法优选当归芍药散的提取工艺
汤明辉 o寇俊萍 o朱丹妮 o严永清
k中国药科大学 中药学院 o江苏 南京 utssv{l
≈摘要 目的 }筛选抗老年性痴呆药2当归芍药散的提取工艺参数 ∀方法 }以蒎烷单萜苷2芍药苷为指标成分 o
以 °≤ 法为含量测定方法 o以芍药苷提取率为评价标准 o采用正交设计2重复试验法 o优化选择提取工艺 ∀结果 }
≈收稿日期 usss2sw2ux
≈基金项目 国家新药基金资助项目k|y2|st2sx2v{l
#{yy#
第 ux卷第 tt期
usss年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o²qtt
²√ qousss
提取次数与提取时间对方中芍药苷的提取率有显著性影响 ∀结论 }当归芍药散最佳提取工艺条件为加水 {倍 o浸
泡 ws °¬± o提取 u次 o每次 t «∀
≈关键词 当归芍药散 ~芍药苷 ~正交设计 ~重复试验 ~高效液相色谱法
≈中图分类号 u{v qy ≈文献标识码
≈文章编号 tsst2xvsukusssltt2yy{2sw
作为一种慢性进行性精神衰退性疾病 o老年性
痴呆已引起当今社会医药学界的强烈关注≈t o但是
到目前为止 o尚无疗效确切 !毒副作用小的治疗方法
和药物问世 ∀为此 o我们在文献研读的基础上 o结合
药效学试验 o从疗效好 !副作用小 !能长期服用的中
药复方中选择了当归芍药散进行抗老呆的实验研
究 o并取得明显进展 ∀
当归芍药散由当归 !白芍 !川芎 !茯苓 !白术 !泽
泻 y味中药组成 ∀本文从加溶媒量 !浸泡时间 !提取
时间 !提取次数等因素入手 o以芍药苷提取率为考察
指标 o对当归芍药散的提取工艺进行正交优化试验 ∀
由于正交表 |kvwl各列均被因素排满 o表中未留下
空白列 o也无历史资料提供经验误差 o为避免增加试
验次数 o不使用要更大的正交表 o故作重复试验 o估
算试验误差 o进行方差分析 o以确定各因素的显著性
水平 o从而得出当归芍药散的最佳工艺参数 ∀
1 仪器 !药材与试剂
全自动电光分析天平 k上海天平仪器厂l o
≤ ±uxs超声波清洗器k上海必能信超声有限公司l o
日本岛津 ≤2ts× 高效液相色谱仪k配 ≥°⁄2ts
紫外可见检测器 o≤2 y 数据处理机l o⁄• 套式
电热器k江苏南通荣源联合电器厂l ∀
甲醇k色谱纯l购自淮阴精细化工研究所 o重蒸
水自制 o其他试剂k分析纯l购自南京化学试剂厂 ∀
药材购自南京市药材公司 o经中国药科大学王
强教授鉴定 o当归为 Ανγελιχα σινενσισ k ¬¯√ ql ⁄¬¨ ¶¯
的干燥根 o白芍为 Παενια λαχτιφλορα °¤¯¯q的干燥根 o
川芎为 Λιγυστιχυ µ χηυανξιονγ ²µ·q的干燥根茎 o
茯苓为 Πορια χοχοσ k≥¦«º ql • ²¯©的干燥菌核 o白术
为 Ατραχτψλοδεσ µ αχροχεπηαλα ²¬§½q的干燥根茎 o
泽泻为 Αλισµ α οριενταλισ k≥¤° ql ∏½¨ ³q的干燥块
茎 ∀
2 实验方法与结果
211 提取溶剂的选择
根据指标成分芍药苷的理化性质 o分别以水和
xs h乙醇为提取溶媒 o在同等条件下考察了两种提
取物的药效和指标成分提取率 ∀
小鼠避暗试验显示 o在相同给药剂量下k折合生
药量l o两种提取物均有较好的改善记忆障碍作用 o
它们在统计学上无显著性差异 o其中水提物的趋势
更好 ∀从芍药苷提取率看 o水为s qwu h o稀醇为
s qwv h o经 τ检验 o两者在显著性水平 Α s qsx下 o
测定结果一致 ∀
根据以上对比试验 o并考虑到能耗 !成本 !安全
性等方面的因素 o最后确定水为提取溶剂 ∀
212 挥发油的提取
处方中当归 !川芎 !白术 v味药材均含挥发油 o
考虑到挥发油亦为中药活性成分 o为防止水煎过程
中挥发性组分的挥散逸失 o先以水蒸气蒸馏法收集
挥发油 ∀实验结果表明 o加水 ts倍 o浸泡 t «o再加
热回流提取 y «o挥发油基本提尽 o挥发油收率为每
tsss ª生药 t qz °¯ 左右 ∀
213 提取工艺筛选
按处方比例 o称取各药味k共 utx ªl ∀含挥发性
成分的 v味中药加适量水浸泡 o水蒸气蒸馏 y «至
挥发油提尽 o药液滤过 o滤液另器收集 ∀药渣与其余
v味 o以 |kvwl正交表安排实验 ∀考察因素及水平
见表 t ∀
表 t 工艺优选因素水平表
水平
Α
加水量
/倍
Β
提取时间
r«
Χ
提取
次数
∆
浸泡时间
r°¬±
t ts t qx t ws
u { s qx u ys
v y t1s v us
试验时 o先加规定量的水将药材浸泡一定时间 o
然后加热至沸腾并保持微沸 o提取时间从沸腾开始
时记 ∀提取结束后 o合并各滤液 o减压浓缩 o真空干
燥 o记录干浸膏重量 o计算干浸膏得率 o并测定芍药
苷含量 ∀每项试验平行重复 t次 ∀
214 高效液相色谱条件≈u
干浸膏含量测定采用高效液相色谱法 o以代表
性成分芍药苷为定量指标 ∀色谱条件为 }色谱柱
≥«¬°2³¤¦® ≤≤2⁄≥ ky °° ¬§ ≅ txs °°l o预柱
≠ • ≤t{ kw qy °° ¬§≅ vs °°l o流动相 ≤ v 2
#|yy#
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ukvsΒzsl o流速 t °¯ #°¬±p t o柱温 vs ε o检测波
长 uvs ±° o纸速 u °°#°¬±p t ∀
215 样品溶液的制备
精密称取干浸膏细粉 s qt ªo加 xs h 乙醇 ws
°¯ o超声提取 tx °¬±o静置 o滤过 ∀残渣续用 xs h乙
醇 us °¯ o超声提取 ts °¬±o静置 o滤过 ∀滤液合并 o
定量转移至 tss °¯ 容量瓶中 o用 xs h乙醇稀释至刻
度 o摇匀 o备用 ∀
216 样品含量测定
精密吸取样品溶液 us Λ¯ o注入液相色谱仪 o按
上述色谱条件测定 o芍药苷对照品溶液随行进样 o指
标成分出峰时间在 tx °¬±左右 o样品液分离效果良
好 o主峰前后无杂质干扰k见图 tl ∀记录各样品液
峰面积积分值 o用外标法计算干膏中指标成分含量 ∀
根据干浸膏得率计算全方芍药苷的提取率 o见表 u ∀
3 数据处理与方差分析≈v
根据上述提取率试验数据 o分别计算各因素的
离差平方和及第 u 类离差 ∀因为本实验为重复试
验 o并且正交表中无空白列 o故直接以第 u类离差作
为误差估计值k即 ΣΕ ΣΕu s qvxwl来检验各因素
的显著性 ∀方差分析表如表 v ∀
图 t 当归芍药散 °≤ 图谱
1 对照品
1 样品 ≤1 阴性对照 ¤1 芍药苷
表 u 正交试验 |kvwl计算表
q
提取率r ϕ
ψικ Ψι
结果
r h
t v q|vw v qvzx z qvs|
u w qxsz w qys| | qtty
v w qxzy w qtvv { qzs|
w w qwxu w qvzz { q{u|
x v qyxs v q|zz z qyuz
y v q|ss v qztt z qytt
z w qt{{ w qtyt { qvw|
{ u qwty u qx|v x qss|
| w qzyz w qyzu | qwv|
表 v 方差分析表
方差来源 离差平方和 自由度 均方和 Φ 显著性
Α s qwxy u s quu{ x q{s
Β t qv|z u s qy|{ tz q{s Φt p s qstku o|l { qsu
Χ w qzw| u u qvzw ys qws Φt p s qsstku o|l ty qv|
∆ s qxy{ u s qu{w z quv
误差 s qvxw | s qsv|v
总和 z qzz{ tz
由方差分析可知 o因素 Χ与 Β为有极显著意义
的因素 oΧ, Β应取提取率高的水平 o按表 u的 Κ值 o
Χ取 Χu , Β取 Βv ;因素 Β和 Α按实际结果并考虑到
药材的润湿 !吸水与能耗 , ∆ 取 ∆t , Α取 Αu ∀故当
归芍药散的最佳提取工艺为 Αu Βv Χu ∆t o即加水 {
倍 o浸泡 ws °¬±o提取 u次 o每次 t «∀
4 工艺验证
工艺筛选完成后 o按上述条件与方法 o对最佳提
取工艺进行验证 o芍药苷提取率分别为 s qxtw h
k ΡΣ∆ t qut h l os qxux h k ΡΣ∆ t qsv h l ∀试验结果
表明 o采用该工艺指标成分平均提取率为 s qxu h o高
于正交试验中的全部 |个试验k其中最高提取率为
s qw{ h l o从而证明了该工艺的合理性 ∀
5 讨论
511 当归芍药散为传统古方 o化学研究甚少 o其治
疗老年性痴呆的有效成分暂未明确 ∀故选择了处方
中的芍药苷为指标成分 o并以该成分的提取率作为
工艺优选的依据 ∀
512 |kvwl计算表中 o第¬号试验重复两次数据的
和 Ψ¬ ψ¬t n ψ¬u o第 ϕ列的离差平方和 Σϕ ( Κtϕu n
Κuϕu n Κvϕu)/ (u ≅ v) p ΧΤ ,第 u类离差 ΣΕu ΣΤ p
ΣΤt ,其自由度 φΕu |(u p t) | ,而 ΣΤ ρ
|
ι t
(ψιtu n
ψιuu) p ΧΤ , ΣΤt t/ u ρ
|
ι t
Ψιu p ΧΤ ∀
513 在因素水平相同的情况下 o正交设计2重复试
验既避免了使用更大的正交表 o又提高了试验的精
确度 ∀通过重复试验 o可较好地消除操作误差 !方法
#szy#
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∂ ²¯ qux o²qtt
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误差等对试验结果的影响 o使方差分析更准确 o使结
论更可靠 ∀
≈参考文献
≈t 张志军 o黄 欣 1 中医药治疗老年性痴呆的近况 q国外医学 q中
医中药分册 ot||w otykwl }t1
≈u 吴洪兰 o鲁 静 o王宝琴 1 高效液相色谱法测定心舒安中芍药
甙的含量 q药物分析杂志 ot||y otyktl }ws1
≈v 倪永兴 o丁 峻 o韩可勤 o等 1 药学应用数理统计 1 北京 }军事
谊文出版社 ot||w1twx1
≈责任编辑 李 禾
高效液相色谱法测定救必应及其制剂中丁香苷的含量
林 彤 o梁广华
k广州市药品检验所 o广东 广州 xtstysl
≈摘要 目的 }建立救必应及其制剂中丁香苷的含量测定方法 ∀方法 }采用岛津 ≥«¬°2³¤¦® ≤≤2⁄≥柱 o乙腈2
水ktΒ|l为流动相 o检测波长 uyx ±° ∀结果 }平均回收率为 |{ qy h oΡΣ∆为 v qx h k ν xl ∀结论 }方法简便 o结果准
确 o可用于救必应及其制剂的质量控制 ∀
≈关键词 救必应 ~丁香苷 ~高效液相色谱
≈中图分类号 u{v qy ~ u{w qu ≈文献标识码
≈文章编号 tsst2xvsukusssltt2yzt2su
救必应为冬青科冬青属植物铁冬青 Ιλεξ ροτυν2
δα ׫∏±¥q的干燥树皮 o多产于海南 !江浙 !两广等
地 o为华南地区常用中草药 o有泻火解毒 !清热利湿 !
行气止痛 !凉血止血功能 o民间主要用于咽喉肿痛 !
急性胃肠炎 !风湿骨痛 o外用治跌打损伤 !外伤出血
等≈t ∀对救必应的化学成分已有颇多的研究≈u ∗ z o
但均未从定量的角度来控制其质量 ∀本文将丁香苷
含量作为救必应及其制剂质量考察的依据 o采用高
效液相色谱法测定其含量 o方法简单 o干扰少 o测定
结果准确 o较好地反映救必应及其制剂的内在质量 ∀
1 仪器及试药
≤2ts⁄高效液相色谱仪k岛津l o≥«¬°2³¤¦®
≤≤2⁄≥色谱柱ky qs °° ¬§≅ txs °° oxΛ°l o≤2
w数据处理器 ∀柱层析用聚酰胺ktys目l ∀救必
应 Ι . ροτυνδα的干燥树皮 ∀腹可安片k广州众胜制
药厂l ∀丁香苷对照品k¶¼µ¬±ª¬±o本所制备 o经液相
色谱法归一化法测定其含量为 |{ q{ h l ∀所用试剂
均为分析纯 ∀
2 方法与结果
211 对照品溶液的制备 精密称取已恒重干燥的
丁香苷对照品适量 o加水溶解成每 t °¯ 含 us Λª的
溶液 o作为对照品溶液 ∀
≈收稿日期 t|||2tt2uy
212 救必应药材供试溶液的制备 精密称取药材
粉末 t ªo加入乙醇 xs °¯ o置水浴中加热回流 u次 o
每次 vs °¬±o取出 o滤过 o合并两次滤液 o滤渣用乙醇
tx °¯ 洗涤 o合并滤液和洗液 o挥干 o残渣加水适量溶
解 o移入 tss °¯ 量瓶中 o加水稀释至刻度 o摇匀 ∀精
密吸取 us °¯ o置已处理好的聚酰胺柱kvs ¦° ≅ u
¦° ots ªl上 o用水洗涤并收集洗脱液置 uss °¯ 量瓶
中至刻度 o摇匀 o用微孔滤膜过滤 o滤液作为供试品
溶液 ∀
213 腹可安供试溶液的制备 取本品 o除去包衣 o
研细 o精密称取 t qs ªo加入乙醇 xs °¯ o置水浴中加
热回流 u次 o每次 vs °¬±o取出 o滤过 o合并两次滤
液 o滤渣用乙醇 tx °¯ 洗涤 o合并滤液和洗液 o挥干 o
残渣加水 ts °¯ 溶解 o移入已处理好的聚酰胺柱kvs
¦° ≅ u ¦° ots ªl上 o用水洗涤并收集洗脱液置 uss
°¯ 量瓶中至刻度 o摇匀 o用微孔滤膜过滤 o滤液作为
供试品溶液 ∀
214 色谱条件 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 o
乙腈2水ktΒ|l为流动相 o流速 t qs °¯ #°¬±p t o检测波
长 uyx ±° o进样量 us Λ¯ ∀理论塔板数按丁香苷峰计
算暂定为不低于 v sss ∀
215 标准曲线的制备 精密称取丁香苷对照品 o加
水溶解并制成每 t °¯ 含 y| Λª的溶液 o摇匀 ∀精密
吸取溶液 t qs ou qs ov qs ow qs ox qs °¯ o分别置 ts °¯
#tzy#
第 ux卷第 tt期
usss年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o²qtt
²√ qousss