全 文 ：不同精制方法对苦参水提取液中
苦参总生物碱含量的影响
张保献t o逵应坤u o冯青然t o赵小妹t o臧 琛t o聂其霞t o马振山t o王元瑜t
kt q中国中医研究院 中药研究所 o北京 tsszss ~湖南省南阳中医中药学校 o南阳 wzvsssl
≈摘要 目的 }通过对常用新老精制方法进行比较研究 o以优选出苦参水提取液的最佳精制方法 ∀方法 }采用
醇沉 !高速离心2超滤 !大孔树脂吸附和澄清剂澄清等 w种方法对苦参水提取液进行了精制 o并以苦参总生物碱的含
量为指标 o对 w种精制方法进行了比较研究 ∀结果 }w 种方法精制后 o苦参总生物碱含量的高低顺序为 }醇沉法
kts1yt °ª#ªp tl 澄清法kw1ws °ª#ªp tl 超滤法#kv1sx °ª#ªp tl 大孔树脂法ku1tt °ª#ªp tl ∀结论 }醇沉法精
制后苦参总生物碱的含量比其他方法高 u ∗ x倍 o似可作为苦参水提液的精制方法 ∀
≈关键词 苦参 ~苦参总生物碱 ~醇沉法 ~超滤法 ~大孔树脂吸附法 ~澄清法
≈中图分类号 u{v ≈文献标识码
≈文章编号 tsst2xvsukussslts2sysz2sv
中药常以水为溶媒煎煮提取 o其水煎液往往存
在着浸出杂质较多 o体积较大等弱点 o给制剂带来困
难 o通常需要进一步精制 ∀醇沉法是中药水提取液
常用的精制方法 o但其对化学成分影响较大≈t ou o近
年来用大孔树脂吸附法 !超滤法和吸附澄清法等方
法取代醇沉法的研究较多≈v ∗ x ∀为比较各种精制
方法的优劣 o本文选用醇沉法 !超滤法 !大孔树脂吸
附法和澄清剂澄清法对苦参的水煎液进行了精制 o
并以精制后苦参总生物碱的含量为指标 o对 w种精
制方法进行了比较研究 o拟优选出一种较好的苦参
水煎液精制方法 ∀
1 药品 !试剂和仪器
苦参 }购于北京市药材公司 o经本所李先端副研
究员鉴定为豆科植物苦参 Σοπηορα φλαϖεσχενσ ¬·q
的干燥根 ∀
苦参碱对照品k供含量测定用 o中国药品生物制
品检定所 ∀批号 s{sx2|zsvl ∀甲醇k o北京化工
厂l ~冰醋酸k o北京化工厂l ~双蒸水 }自制 ∀
中空纤维超滤器k分子截留量 }u万 !x万 o北京
潞美分离应用技术研究所l ~⁄ tss ≅ v大孔吸附树
脂k安徽省固镇县精细化工厂l ~tst果汁澄清剂k上
海市徐汇区华逊应用生物化学研究所l ∀
2 提取和精制
211 提取工艺
≈收稿日期 t|||2tu2sy
取苦参 x ®ª加水浸泡 t «后煎煮 u次 o第 t次
t1x «o第 u次 t «o加水倍数分别为 us倍 !t{倍 ∀合
并煎液 o滤过 o浓缩至每毫升含 t ª生药 o离心ku xss
µ#°¬±p t ous °¬±l o上清液留用 ∀
212 精制工艺
为全面反映各精制方法对结果的影响 o采用了
每种精制方法各选 u ∗ v个不同精制水平 o每一水平
做 v份平行试验的试验方法制备样品 ∀具体工艺操
作如下 ∀
21211 醇沉法 取上清液 wxs °¯ o均分为 |份 o每
份 xs °¯ o相当于 xs ª生药 o加乙醇至醇浓度分别为
xs h oys h ozs h o每一浓度平行各做 v份 ∀冷藏过
夜 o抽滤 o滤液浓缩并真空干燥成干浸膏 o粉碎后备
用 ∀
21212 超滤法 取上清液 t uss °¯ o均分为 y份 o
每份 uss °¯ o相当于 uss ª生药 o加入等量蒸馏水稀
释后冷藏过夜 o离心ku xss µ#°¬±p t ous °¬±l后再高
速离心kvs sss µ# °¬±p tl o分别超滤 ∀超滤膜分子
截留量分别为 u万 !x万 o每个水平平行各做 v份 o
超滤液浓缩并真空干燥成干浸膏 o粉碎后备用 ∀
21213 大孔树脂吸附法 取上清液 |ss °¯ o均分
为 |份 o每份 tss °¯ o相当于 tss ª生药 o分别离心
ku xss µ#°¬±p t ous °¬±l后倾出上清液 o加适量蒸馏
水返溶沉淀部分 o离心 o合并两次离心液 o加入适量
蒸馏水 o混匀后上树脂柱k生物量 tΒ树脂量 uΒtl ∀
待药液流完后 o加入 t倍生药量蒸馏水冲柱 o待蒸馏
#zsy#
第 ux卷第 ts期
usss年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o²qts
¦·qousss
水流完后 o用 w倍生药量的不同浓度乙醇洗脱 ∀乙
醇浓度分别为 xs h oys h ozs h o每一浓度平行各做
v份 ∀洗脱液回收乙醇 o浓缩并真空干燥成干浸膏 o
粉碎后备用 ∀
2 q2 q4 吸附澄清法 取上清液 |ss °¯ o均分为 |
份 o每份 tss °¯ o相当于 tssª生药 o分别离心
ku xss µ#°¬±p t ous °¬±l后 o倾出上清液 o加适量蒸
馏水返溶沉淀部分 o离心 o合并两次离心液 o置水浴
上加热 o加入 x h的 tst 果汁澄清剂溶液 o加入量分
别为药液体积的 vs h ows h oxs h o每一水平各做 v
个平行实验 o搅拌 tx °¬±o溶液放冷后冷藏 tu «o离
心 o取上清液浓缩并真空干燥成干浸膏 o粉碎后备
用 ∀
3 苦参碱的含量测定与结果分析
311 苦参碱的含量测定
参照5中国药典6一部 tzy页苦参项下方法测
定 ∀
取上述提取物干粉k过 ws目筛l约 s1x ªo精密
称定 o置具塞锥形瓶中 o精密加入氯仿 ux °¯ o浓氨
试液 s1v °¯ o称定重量 o摇匀 o室温放置过夜kty «
以上l o再称定重量 o补足损失的溶剂量 o振摇后放
置 o用滤纸滤过 ∀精密量取续滤液 ts °¯ o置水浴蒸
干 o残渣加乙醚 x °¯ 放置 ∀精密加硫酸滴定液
ks1st °²¯#ptlts °¯ o摇匀 o置水浴上加热使残渣
完全溶解并除尽乙醚 o放冷 ∀加新沸后放冷的蒸馏
水 tx °¯ 与甲基红指示液 u滴 o用氢氧化钠滴定液
ks1su °²¯#ptl滴定至黄色 o即得 ∀每 t °¯ 的硫酸
滴定液ks1st °²¯#p tl相当于 w1|yz °ª的苦参碱
k≤tx uwul ∀
312 结果与分析
按提取和精制方法项下方法精制后的样品 o浓
缩干燥后其出膏率分别见表 t ∀
表 t w种精制方法精制后出膏率 h
序号 醇沉法 大孔树脂 澄清剂法 超滤法
t tx1{s v1y| tz1ws tu1ss
u tx1ss v1|u tz1ws tu1xs
v tx1ws v1|w tz1ws tu1ys
w tw1ss v1yw ty1zs tu1zx
x tw1us v1|u ty1{s tu1ys
y tv1{s v1zv tz1ss tu1ux
z tu1ws w1ty tz1ts
{ tu1us w1tw tz1us
| tu1ws w1uw ty1|s
ξ ? Σ∆ tv1|t ? t1vx v1|v ? s1uu tz1ts ? s1uz tu1yu ? s1ws
由表 t可知 o以澄清剂法出膏率最高ktz1t h l o
醇沉法和超滤法的出膏率居中k分别为 tv1|t h和
tu1yu h l o大孔树脂法精制的出膏率最低kv1|v h l ∀
根据上述苦参碱含量测定方法测定各精制样品
苦参碱的含量 o并换算成相当于苦参生药中苦参碱
的含量 o结果见表 u ∀
表 u w种精制方法精制后苦参碱含量测定结果 °ª#ªp t
序号 醇沉法 大孔树脂法 澄清剂法 超滤法
t |1yt t1yx x1yu u1y{
u tu1w{ t1|s w1zx u1|x
v |1vz t1{t x1yu u1|z
w |1sw u1uy v1zv v1wu
x |1{z t1z| v1zy u1{u
y {1|t t1zw v1{s v1wy
z tu1yv u1x{ w1sv
{ ts1|t u1zu w1w|
| tu1yv u1xv v1z{
ξ ? Σ∆ ts1yt ? t1x| u1tt ? s1wt w1ws ? s1z{ v1sx ? s1vu
鉴于表 u中的数据为各精制方法三水平 !每水
平 v个平行实验的精制结果k超滤法为二水平 v个
平行实验l o在某种程度上可代表该精制方法精制苦
参水提液的总体水平 o对上述 w组数据进行方差分
析 o以说明各方法间有无显著性差异 ∀
经计算 oΣΕ uy1|u oΣΑ v{u1w| ∀
方差分析结果见表 v ∀
表 v 方差分析表
方差来源 离差平方和 自由度 均方差 Φ 显著性
组间 v{u1w| v tuz1xs tvz1v| Π s1st
组内 uy1|u u| s1|v
注 }Φt p s1stkv ou|l w1xw
以上结果表明 o各精制方法间有极显著性差异 ∀
为了说明两两方法间有无差异 o我们又对 w种
方法进行了两两间多重比较k Σ法) ∀
查多重比较 Σ表可知 : Σt p s1sx(v ,u|) u1|z ∀
则 : Τtu Τtv Τuv t1vx ; Τtw Τuw Τvw
t1xt ∀
分别以 t1vx或 t1xt为公共尺度 o对 w种方法
的均值差进行比较 o结果见表 w ∀
表 w 两两间多重比较表
均值差 ξu ξv ξw
ξt {1xst) y1utt) z1xyt)
ξu u1u|t) s1|w
ξv t1vx
注 }tl表示二者间有显著性差异
#{sy#
第 ux卷第 ts期
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o²qts
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由表 w可知 }醇沉法与树脂法有显著性差异 ~醇
沉法与澄清法有显著性差异 ~醇沉法与超滤法有显
著性差异 ~树脂法与澄清法有显著性差异 ~树脂法与
超滤法间无明显差异 ~澄清法与超滤法间无明显差
异 ∀
以上结果表明 ow种方法对苦参水提液的精制
以苦参中苦参碱为指标 o以醇沉法精制苦参碱含量
最高 o与其他各法有显著性差异 ∀
4 讨论
以醇沉法精制后苦参碱含量是其他方法的 u ∗
x倍 o与各法间均有显著性差异 o而且出膏率在 w种
方法中亦适中 ∀故综合比较 o苦参的水提取液以醇
沉法精制较好 ∀
澄清法出膏率最高 ∀主要是由于澄清剂亦为水
溶性 o在溶液中有残留 ~而且澄清后溶液 ³ 值较
低 o达 ³w左右 o可能是由于澄清剂中残留的酸所
致 ∀
超滤法精制后苦参碱的含量较低 o可能是由于
大分子杂质如蛋白质 !淀粉等对苦参碱具有吸附作
用 o超滤除去大分子杂质的同时 o由于其对苦参碱的
吸附 !包埋等作用而一同除去 o这在我们超滤含黄酮
苷类成分的药物如淫羊藿等时得到证实 ∀
大孔树脂法精制出膏率最低 o为降低服用量的
较好方法 ∀本实验中用大孔树脂精制苦参碱水提液
造成苦参碱的含量最低k与其他方法比较l o主要是
由于大孔树脂的极性差异较大 o对具体成分应选用
对应极性合适的大孔树脂 o选择适宜的洗脱溶媒和
洗脱顺序 o才能获得良好的精制效果 ∀而本实验主
要是比较性实验 o未对苦参碱作定向性精制 o只从宏
观上比较各总体的优劣 o故造成精制后苦参碱的含
量较低 ∀
≈参考文献
≈t 韩桂茹 o徐韧柳 o冯 丽 o等 q水提醇沉对中药各类有效成分的
影响 q中国中药杂志 ot||v ot{kxl }u{y q
≈u 邓志国 q醇沉法影响有效成分含量述要 q川药校刊 ot||t okvl }
w{ q
≈v 全山丛 o钱 俊 o王金证 o等 q超滤法和水醇法制备补骨脂注射
液的实验比较研究 q中成药 ot||s otuktl }v q
≈w 杜成安 o严襄陵 o方剑文 o等 q吸附澄清法在中药水提取液澄清
中的应用研究 q中成药 ot||v otxkttl }u q
≈x 中国医学科学院药物研究所植化室 q大孔树脂在中草药化学
成分提取分离中的应用 q中草药 ot|{s ottkvl }tv{ q
≈责任编辑 李 禾
高效液相色谱法
测定胰复康胶囊中黄芪甲苷含量
郭洪祝t o刘晓峰t o于 u o果德安t o郑俊华t
kt1 北京医科大学 药学院 生药学生物技术研究室 o北京 tsss{v ~
u1 北京同仁堂 制药三厂 o北京 tsuus|l
≈摘要 目的 }对复方制剂胰复康胶囊中黄芪甲苷进行含量测定 ∀方法 }采用 °≤ 法测定了制剂中黄芪甲
苷的含量 ∀结果和结论 }制剂中黄芪甲苷的含量平均为 s1swwv °ªr粒 ∀ °≤ 法可以用于复方制剂中黄芪甲苷的
含量测定 ∀
≈关键词 胰复康胶囊 ~黄芪甲苷 ~高效液相色谱
≈中图分类号 u{v ~ |ww qx ≈文献标识码
≈文章编号 tsst2xvsukussslts2sys|2sv
常用中药黄芪为中医临床补气良药 o所含成分
以皂苷和多糖为主 o目前 o5中国药典6中黄芪的质量
标准是以黄芪甲苷作为对照品 o采用薄层色谱扫描
≈收稿日期 t|||2tu2vs
法进行含量测定≈t o该方法在其他含有皂苷类成分
的中药存在时 o常由于薄层色谱干扰严重 o分离度下
降 o而难以应用 ∀ °≤ 法具有快速 !高效 !准确的
优势 o针对黄芪药材及其复方制剂中黄芪甲甙的
#|sy#
第 ux卷第 ts期
usss年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o²qts
¦·qousss