全 文 ：2 6 重现性试验: 取同一批宽肠理气汤 (批号
20080506)样品,按供试品溶液的制备方法平行制备
6份供试品溶液, 注入液相色谱仪,记录峰面积。结
果样品中松果菊苷平均质量浓度为 65083 1 g/ mL,
RSD 为 1 11%; 毛蕊花糖苷平均质量浓度为
23 098 8 g / mL, RSD为 1 52%。
2 7 稳定性试验: 取同一宽肠理气汤 ( 批号
20080506)制得的供试品溶液, 分别在 0、2、4、8、12
h进样,记录峰面积,结果在本实验条件下松果菊苷
和毛蕊花糖苷在 12 h内稳定,松果菊苷与毛蕊花糖
苷峰面积值的 RSD分别为 1 53%、1 65%。
2 8 加样回收率试验: 取批号 20080506 宽肠理气
汤样品, 精密量取 25 mL, 置 50 mL 量瓶中, 共 6
份,分别精密加入 0 161 8 mg/ mL 松果菊苷对照品
溶液 10 mL 及 0 11 mg/ mL 毛蕊花糖苷对照品溶
液 5 mL,制备供试品溶液, 测定, 计算回收率,结果
松果菊苷平均回收率为 98 78% , RSD为 0 9% ;毛
蕊花糖苷平均回收率为 99 39%, RSD为 1 75%。
2 9 样品的测定:取 3个批号的宽肠理气汤水煎液
各 2份,按供试品溶液制备方法操作,以平均峰面积
计算松果菊苷和毛蕊花糖苷的质量浓度, 结果见表
1, 图谱见图 1。
表 1 宽肠理气汤中松果菊苷和毛蕊花糖苷的测定结果
( n= 2)
Table 1 Determination of echinacoside and verbascoside
in Kuanchang Liqi Decoction ( n= 2)
批 号 松果菊苷/ (g mL- 1 ) 毛蕊花糖苷/ (g mL- 1)
20080506 65 039 1 23 271 6
20080507 65 295 9 22 980 2
20080508 65 073 9 22 983 1
t / min
1松果菊苷 2毛蕊花糖苷
1echin acos ide 2 verbascoside
图 1 对照品(A)、宽肠理气汤( B)、缺肉苁蓉的阴性样品( C)的 HPLC图谱
Fig 1 HPLC Chromatograms of reference substances ( A) , Kuanchang Liqi Decoction (B) ,
and negative sample without Cistanches Herba ( C)
3 讨论
本实验利用 HPLC 法测定宽肠理气汤中松果
菊苷和毛蕊花糖苷,该法灵敏度高、重现性好、结果
准确、方便易行,适用于宽肠理气汤中松果菊苷及毛
蕊花糖苷的测定。
参考文献:
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析[ J] 中草药, 2004, 35( 6) : 676
HPLC法测定复方儿茶止泻膜剂中儿茶素、表儿茶素和没食子酸
赵新峰, 毛 莹,高 明*
收稿日期: 20100602
基金项目:大连市科技局资助项目( 2008E11SF171)
作者简介:赵新峰,男,山东人,药物分析学博士,主要从事药品质量控制研究。
T el : ( 0411) 87403735 Email: zhaoxinfengw y@ 126 com
* 通讯作者 高 明 T el: ( 0411) 87402361 Email: gm 056@ 126 com
(大连大学医学院, 辽宁 大连 116622)
摘 要:目的 建立 H PLC 法同时测定复方儿茶止泻膜剂中儿茶素、表儿茶素和没食子酸 3 个成分的方法。方法
色谱柱为Hyper sil ODS( 250 mm 4 6 mm, 5m) , 流动相为乙腈50 mmol/ L 磷酸二氢钾( 8! 92) ,体积流量为 1 0
1995中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
mL/ min,检测波长 280 nm,柱温为 30 ∀ 。结果 3 个成分分离良好, 儿茶素、表儿茶素和没食子酸的平均回收率
分别为 97 5%、98 4%、102 3%。结论 本法方便、准确、重现性好, 可以作为复方儿茶止泻膜剂质量控制的方法。
关键词:复方儿茶止泻膜剂; 儿茶素;表儿茶素; 没食子酸;高效液相色谱
中图分类号: R286 02 文献标识码: B 文章编号: 0253 2670( 2010) 12 1995 03
复方儿茶止泻膜剂是由儿茶、黄柏、五倍子和木
香 4味中药制成的中药复方制剂, 具有清热燥湿、涩
肠止泻之功效[ 12] ,对小儿湿热腹泻有较好的治疗效
果,临床常用于治疗婴幼儿湿热腹泻。儿茶素和表
儿茶素为君药儿茶的主要有效成分,常见测定方法
有高效液相色谱法[ 3] 和毛细管电泳法 [ 4]。没食子酸
为五倍子的主要有效成分, 常见测定方法为高效液
相色谱法[ 56] 。为了加强制剂的质量控制, 保证用药
安全有效,本实验建立了 H PLC法同时测定复方儿
茶止泻膜剂中儿茶素、表儿茶素和没食子酸 3 种成
分的方法,可以更加全面有效地控制该制剂的质量。
1 仪器与试药
Hitachi L # 2130高效液相色谱仪(日本Hitachi公
司) ; KH2200DB型数控超声波清洗器(昆山市禾创
超声仪器有限公司) ; BS 224 S 型电子天平(赛多利
斯科学仪器有限公司)。
儿茶为豆科植物儿茶 Acacia catechu ( L f )
Willd 的去皮枝、干的干燥煎膏, 黄柏为芸香科植
物黄皮树 Phellodendron chinense Schneid 的干燥
树皮,五倍子为漆树科植物盐肤木 Rhus chinensis
Mill、青麸杨 Rhus potanini i Max im 叶上的虫瘿,
主要由五倍子蚜寄生而形成, 木香为为菊科植物木
香 Auck landia lap pa Decne 的干燥根。以上药材
购于大连市保健大药房, 由本校中药鉴定教研室高
松教授鉴定。儿茶素(批号 877200001)、表儿茶素
(批号 110878200102)和没食子酸 (批号 110831
200302)对照品由中国药品生物制品检定所提供, 复
方儿茶止泻膜剂( 0 25 g /片)由大连大学中医中药
实验室制备。乙腈(美国 T edia公司,色谱纯) ;甲醇
为分析纯,山东禹王实业有限公司; 水为超纯水; 其
余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2 1 色谱条件及系统适应性试验: 色谱柱为 Hy
persil ODS ( 250 mm 4 6 mm , 5 m, Thermo 公
司) , 流动相为乙腈50 mmo l/ L 磷酸二氢钾 ( 8 !
92) ,体积流量为 1 0 mL/ min, 检测波长 280 nm,柱
温为30 ∀ 。理论板数以儿茶素、表儿茶素和没食子
酸分别计算, 均不低于 5 000; 拖尾因子分别为
1 08、1 09、1 02; 儿茶素、表儿茶素和没食子酸及与
其他组分的分离度均大于 1 5。
2 2 供试品溶液的制备:精密称取复方儿茶止泻膜
剂约0 25 g,置 100 mL 量瓶中,加 50%甲醇超声提
取 2次,每次 30 m in, 合并提取液,滤过。将滤液减
压浓缩,用 50%甲醇定容至 100 mL,定容后用 0 45
m 微孔滤膜滤过,即得。
2 3 对照品溶液的制备:分别精密称取儿茶素对照
品 13 1 mg、表儿茶素对照品 12 8 mg、没食子酸对
照品 10 3 mg ,置于 50 mL 量瓶中,加 50 %甲醇溶
解并稀释至刻度, 摇匀,经 0 45 m 滤膜滤过,作为
对照品溶液。
2 4 阴性供试品溶液的制备:儿茶素和表儿茶素来
源于儿茶,没食子酸来源于五倍子,按复方儿茶止泻
膜剂的生产工艺制备缺儿茶和五倍子的阴性制剂,
并按照供试品的制备方法制备各阴性供试品溶液。
2 5 方法学考察
2 5 1 空白干扰试验: 取阴性供试品溶液测定,
HPLC 图谱见图 1, 结果表明阴性制剂对所测成分
无干扰。
t / min
1没食子酸 2儿茶素 3表儿茶素
1gallic acid 2 catechin 3epicatechin
图 1 对照品(A)、复方儿茶止泻膜剂( B)、缺儿茶阴性对照( C)和缺五倍子阴性对照( D)的 HPLC图
Fig 1 HPLCChromatograms of reference substances ( A) , Compound Ercha Antidiarrheal Membranes ( B) ,
negative sample without Catechu ( C) , and negative sample without Chinensis Galla ( D)
1996 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
2 5 2 线性关系考察:取对照品溶液, 依次进样 2、
4、6、8、10、15 L。按上述色谱条件进行 HPLC 分
析,以峰面积对进样量进行回归, 得儿茶素、表儿茶
素和没食子酸线性回归方程及线性范围分别为Y=
192 718X - 98 059 ( r 2 = 0 991 3) , 0 52~ 3 9 g;
Y= 14 534 X- 2 1491 ( r2= 0996 2) , 048~ 3 6 g;
Y= 349 708 X- 23 043 ( r
2
= 0998 1) , 04~ 3 g。
2 5 3 精密度试验:取对照品溶液各 10 L, 按给
定色谱条件重复进样 6次,儿茶素、表儿茶素和没食
子酸的峰面积 RSD分别为 1 6%、1 8%、1 4%。
2 5 4 重现性试验: 取同一批次的样品 ( 批号
20090316) 6份, 按供试品溶液的制备方法制备, 在
所选色谱条件下测定,结果儿茶素、表儿茶素和没食
子酸质量分数的 RSD分别为 2 3%、1 7%、2 2%。
2 5 5 稳定性试验: 将批号 20090316 同一份样品
制备供试品溶液, 分别在 1、2、4、8、12、16 h进样 10
L, 测定其峰面积, 结果儿茶素、表儿茶素和没食子
酸的 RSD值分别为 1 6%、2 0%、2 2%。
2 5 6 加样回收率试验: 精密称取批号 20090316
复方儿茶止泻膜剂约 0 12 g ,共 6份, 精密称定, 分
别加入儿茶素、表儿茶素和没食子酸对照品 1 57、
1 54、1 24 mg, 按供试品溶液制备方法处理并测
定,计算回收率,结果儿茶素平均回收率为 97 5% ,
RSD为 1 5%; 表儿茶素平均回收率为 98 4% ,
RSD为 1 3%; 没食子酸平均回收率为 102 3% ,
RSD为 0 7%。
2 6 样品测定:取 3 批复方儿茶止泻膜剂, 按供试
品溶液的制备方法制备, 每批取 3份,依给定色谱条
件测定,外标法计算,结果见表 1。
3 讨论
儿茶素、表儿茶素易溶于水和醇,根据其溶解性
分别以水、甲醇水( 1! 1)、甲醇为提取溶剂进行试
表 1 复方儿茶止泻膜剂中儿茶素、表儿茶素和没食子酸的
测定结果( n= 3)
Table 1 Determination of catechin, epicatechin,
and gallic acid in Compound Ercha
Antidiarrheal Membranes ( n= 3)
批 号
儿茶素
质量分数/
( mg g- 1)
RSD/
%
表儿茶素
质量分数/
( mg g - 1)
RSD/
%
没食子酸
质量分数/
( mg g - 1)
RSD/
%
20090316 12 3 2 4 12 2 2 6 9 6 2 5
20090401 11 6 1 9 11 8 2 2 9 4 2 0
20090412 12 0 2 1 11 6 1 6 9 3 2 8
验,测得质量分数在甲醇水( 1 ! 1)中最高, 而且以
水为提取溶剂很难滤过,以甲醇为溶剂提取率较低,
因此选择甲醇水( 1 ! 1)为提取溶剂。又考察了超
声提取 15、30、45 m in 对提取率的影响, 结果表明,
超声提取 30 m in 质量分数达最高,超声提取30 min
以上,儿茶素和表儿茶素质量分数反而降低,可能因
为儿茶素和表儿茶素属于可缩合鞣质, 长期高温状
态下在方中不稳定, 可能脱水缩合形成大分子化合
物鞣红。
色谱系统曾考察以不同比例甲醇磷酸盐为流动
相,但儿茶素和表儿茶素峰形不对称,且与邻近峰分
离不好。后尝试多种溶剂系统,最终确定以乙腈50
mmol/ L 磷酸二氢钾为流动相得到满意分离结果。
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HPLC法测定地黄及含地黄成药中寡糖
邱建国, 张汝学,贾正平* ,李茂星,王娅娣,樊鹏程
收稿日期: 20100210
基金项目:国家自然科学基金资助项目( 30672643, 30472186, 30772773)
* 通讯作者 贾正平 T el: ( 0931) 8994652 Email: jiazp166@ sina com
(兰州军区兰州总医院 药材科,甘肃 兰州 730050)
摘 要:目的 考察不同产地、不同中成药中生地黄、熟地黄所含地黄寡糖。方法 采用 NH 2硅胶色谱柱分离, 示
差折光检测器检测,高效液相色谱法测定地黄寡糖。结果 产地不同,生地黄、熟地黄中的地黄寡糖成分、量不同;
1997中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月