全 文 ：本品中毛蕊花糖苷时发现有比较大的干扰。试验了
甲醇2乙腈21 %乙酸 (13 ∶10 ∶77 ,11 ∶9 ∶80 ,15 ∶
10 ∶75) 、甲醇2011 %甲酸 (28 ∶72 ,35 ∶65) 流动相 ,
以及 Kromasil2C18 (250 mm ×416 mm ,5μm)和 Ul2
timate2C18 (250 mm ×416 mm ,5μm) 色谱柱 ,结果
均不能使干扰峰与毛蕊花糖苷的峰分开。而检测松
果菊苷时没有发现明显干扰峰。所以选择松果菊苷
作为测定成分。
　　松果菊苷对照品试过用甲醇溶解 ,注入色谱仪
后 ,在其色谱峰前会有一个大包峰且峰面积与进样量
不呈线性。改用流动相溶解后 ,一切正常。松果菊苷
和毛蕊花糖苷同为苯乙醇苷类化合物 ,有文献报道毛
蕊花糖苷在甲醇中不稳定而在微酸性溶液中能保持
稳定[1 ] 。试验结果表明 ,松果菊苷也有相同性质。
　　有文献报道检测松果菊苷用波长 330 nm[2 ] ,但
是经试验发现 ,其最大吸收波长在 334 nm。并且使
用 334 nm 检测本品时 ,并没有发现明显干扰峰。
参考文献 :
[1 ] 　陈发奎1 常用中草药有效成分含量测定[ M ]1 北京 :人民卫生
出版社 ,19971
[ 2 ] 　中国药典[ S]1 一部1 20051
RP2HPLC法测定散风止痛丸中欧前胡素
王 　蔚 3
(广州中一药业有限公司 ,广东 广州 　510130)
摘 　要 :目的 　建立散风止痛丸中欧前胡素的 HPLC 测定方法。方法 　色谱柱为 Agilent Zorbax SB C18 柱
(150 mm ×416 mm , 5μm) ;流动相为乙腈2水 (52 ∶48) ;检测波长为 250 nm ;体积流量为 110 mL/ min ;柱温为室
温 ;进样量为 10μL 。结果 　欧前胡素在 11648～261368μg/ mL 与其峰面积呈良好的线性关系 ,平均加样回收率为
9811 % ,RSD 为 116 %( n = 6) 。结论 　该方法灵敏、准确、快速、专属性强 ,可用于散风止痛丸中欧前胡素的测定。
关键词 :散风止痛丸 ;欧前胡素 ;高效液相色谱
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0821252202
　　散风止痛丸由制白附子、白芷、白术、茯苓、益母
草、甘草等组成 ,具有祛湿通窍、活血消肿之功效 ,用
于头痛、疮疡肿痛等。白芷为散风止痛丸中主药之
一 ,其主要成分为香豆素类。故本实验以欧前胡素
作为质量标准评价指标 ,建立散风止痛丸中欧前胡
素的高效液相色谱测定方法。
1 　仪器与试药
　　Agilent1100 系列高效液相色谱仪 (DAD 检测
器 ,自动进样器) ,华南超声波清洗器 (功率 250 W ,
频率 45 Hz) 。
　　欧前胡素对照品 (批号 1108262200511 ,中国药
品生物制品检定所) ,乙腈 ( Merck ,色谱纯) ;甲醇、
丙酮等均为分析纯 ;纯化水。散风止痛丸由本公司
提供。
2 　方法与结果
211 　检测波长的选择 :用 DAD 检测器检测得到欧前
胡素光谱图 ,在约 220、250、300 nm 处有吸收。如选
择 220 nm ,因波长较短 ,干扰较大 ;如选择 300 nm ,则
响应值较小 ,故选择 250 nm 为测定波长。
212 　流动相的选择 :参照《中国药典》2005 年版一
部白芷项下测定方法中所用流动相时 ,欧前胡素的
色谱峰有杂质峰干扰。经过对流动相比例的比较 ,
确定以乙腈2水 (52 ∶48) 为流动相。结果供试品溶
液中欧前胡素峰可以达到基线分离 ,峰形对称 ,保留
时间适中 (81676 min) ,分离度大于 115 ,理论板数
为 13 531。
213 　色谱条件[1 ,2 ] :色谱柱为 Agilent Zorbax SB
C18柱 (150 mm ×416 mm , 5μm) ;流动相为乙腈2水
(52 ∶48) ;检测波长为 250 nm ; 体积流量为 110
mL/ min ;柱温为室温 ;进样量为 10μL 。理论板数
按欧前胡素峰计算应不低于 3 000。色谱图见图 1。
214 　峰质量分数的检查 :分别精密吸取欧前胡素对
照品溶液和供试品溶液各 10μL ,测定 ,并用二极管
阵列检测器 (DAD) 在 220～400 nm 波长扫描 ,检查
峰的质量分数。结果供试品溶液中被测峰的质量分
数因子比阈值 9701000 大 ,表明该峰为纯物质峰。
·2521· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 8 期 2009 年 8 月
3 收稿日期 :2009202231　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :王　蔚　E2mail : fzfw03 @yahoo1com1cn
t/ min3 2欧前胡素3 2imperatorin
图 1 　欧前胡素对照品( A) 、散风止痛丸( B)和阴性样
品( C)的 HPLC色谱图
Fig11 　HPLC Chromatograms of imperatorin reference
substance ( A) , Sanfeng Zhitong Pill ( B) , and
negative sample ( C)
215 　供试品溶液的制备 :取本品 115 g ,研细 ,精密
称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加入甲醇 25 mL ,称定
质量 ,超声处理 (功率 250 W ,频率 45 k Hz) 1 h ,放冷 ,
再称定质量 ,用甲醇补足减失的质量 ,摇匀 ,滤过。精
密量取续滤液 5 mL ,加于中性氧化铝柱 (100～200
目 ,5 g ,内径 9 mm)上 ,用丙酮 10 mL 洗脱 ,收集流
出液与洗脱液 ,室温挥发至约 1 mL ,加甲醇转移至
5 mL 量瓶中 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,即得。
216 　线性关系考察 :精密吸取 8214μg/ mL 欧前胡
素对照品溶液 1、1、2、4、6、8 mL ,分别置 50、25、25、
25、25、25 mL 量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,滤过。
精密吸取溶液各10μL ,注入液相色谱仪 ,测定。以
质量浓度为横坐标 ,测得的峰面积为纵坐标 ,绘制标准
曲线 ,得回归方程A = 485081 68845 C + 21 2133836 ,
r = 01999 97。结果表明 , 欧前胡素在 11648 ～
261368μg/ mL与其峰面积呈良好的线性关系。
217 　精密度试验 :取同一供试品溶液 (批号 08041)
重复进样 6 次 ,每次 5μL ,分别测定欧前胡素峰面
积 ,结果其 RSD 为 113 %。
218 　稳定性试验 : 取同一供试品溶液 (批号
08041) ,分别于 0、2、4、8、16、24 h 测定欧前胡素峰
面积 ,结果 RSD 为 016 %。结果表明供试品溶液在
24 h 内基本稳定。
219 　重现性试验 :取批号 08041 散风止痛丸样品 6
份 ,制备供试品溶液 ,进样测定 ,结果欧前胡素含平
均质量分数为 01068 mg/ g ,RSD 为 018 %。
2110 　加样回收率试验 :取批号 08041 散风止痛丸样
品 (含欧前胡素 01068 mg/ g) 6 份 ,取样约 0175 g ,分
别精密加入 5110μg/ mL 欧前胡素对照品溶液 110
mL ,制备供试品溶液 ,进样测定 ,计算欧前胡素的回
收率 ,结果平均回收率为 9811 % ,RSD 为 116 %。
2111 　样品测定 :取 3 批散风止痛丸样品 ,制备供试
品溶液。分别精密吸取供试品溶液和欧前胡素对照
品溶液各 10μL ,进样 ,记录色谱图 ,测定峰面积 ,计
算 ,结果见表 1。
表 1 　散风止痛丸中欧前胡素的测定结果( n = 2)
Table 1 　Determination of imperatorin in Sanfeng
Zhitong Pill ( n = 2)
批　号 欧前胡素/ (mg ·g - 1)
08041 01 068
08082 01 072
07021 01 069
3 　讨论
　　在供试品溶液制备时 ,发现洗脱液完全挥干后
再加甲醇溶解并定容 ,欧前胡素明显降低 ,可能因欧
前胡素属香豆素类成分 ,有挥发性 ,所以规定洗脱液
挥发至约 1 mL ,以阻止其挥发。
参考文献 :
[ 1 ] 　王洪志 ,李惠芬 ,周　静 ,等1 HPLC 法测定元胡止痛片中欧前
胡素和异欧前胡素[J ]中草药 ,2007 ,38 (7) :1018210191
[ 2 ] 　张　何 ,史公良 ,张景云 ,等1 鼻通喷雾剂的质量标准研究[J ]1
中草药 ,2007 ,38 (10) :1495214971
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