全 文 ：HPLC法测定鼻咽灵片中苦参碱
王 　蔚 3
(广州中一药业有限公司 ,广东 广州 510530)
摘 　要 :目的 　建立用 HPLC 法测定鼻咽灵片中苦参碱的方法。方法 　色谱柱为 Alltech C18 柱 (150 mm ×416
mm , 5μm) ;流动相为乙腈20. 025 mol/ L 硫酸铵溶液 (加入十二烷基硫酸钠 9. 2 g ,0. 05 mol/ L 硫酸溶液 1 mL)
(40 ∶60) ;检测波长为 205 nm ;体积流量为 1. 0 mL/ min ;柱温为 25 ℃;进样量为 5μL 。结果 　苦参碱测定的线性
范围为 0. 165～0. 990μg ,回归方程为 Y = 1 871 . 035 42 X - 9 . 315 854 8 , r = 0. 999 96 ,平均回收率为 97. 10 % ,RSD
为 1. 8 %。结论 　该法结果准确 ,操作简单 ,重现性好 ,可作为鼻咽灵片质量控制的方法。
关键词 :鼻咽灵片 ;苦参碱 ;高效液相色谱
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0721084202
　　鼻咽灵片由山豆根、半枝莲等 10 味药材制成 ,
具有清热解毒 ,软坚散结 ,益气养阴的作用 ,用于胸
膈风热 ,痰火郁结 ,热毒上攻 ,耗气伤津之证。山豆
根为其君药 ,主要含苦参碱与氧化苦参碱等生物碱
类成分 ,但氧化苦参碱不稳定[1 ] 。在本品的制备过
程中 ,由于加热以及处方中其他药味的影响 ,几乎测
不到氧化苦参碱 ,故本实验以苦参碱作为质量标准
评价指标 ,建立鼻咽灵片中苦参碱的高效液相色谱
测定方法。
1 　仪器与试药
　　Agilent1100 系列高效液相色谱仪 (DAD 检测
器 ,自动进样器) ,华南超声波清洗器 (功率 250 W ,
频率 45 Hz) 。
　　苦参碱对照品 (批号 80529804 ,中国药品生物
制品检定所) ,乙腈 (Merck ,色谱纯) ,其他试剂均为
分析纯。鼻咽灵片由广州中一药业有限公司生产。
2 　方法与结果
2. 1 　检测波长的选择 :用 DAD 检测器检测得苦参
碱光谱图 ,结果为末端吸收 ,参考文献报道[2 ] ,故选
择 205 nm 为测定波长。
2. 2 　色谱条件 :色谱柱为 Alltech C18柱 (150 mm ×
4. 6 mm , 5μm) ;流动相为乙腈20. 025 mol/ L 硫酸
铵溶液 (加入十二烷基硫酸钠 9. 2 g ,0. 05 mol/ L 硫
酸溶液 1 mL) (40 ∶60) ;检测波长为 205 nm ;体积
流量为 1. 0 mL/ min ;柱温为 25 ℃;进样量为 5μL 。
理论板数按苦参碱峰计算应不低于 5 000。色谱图
见图 1。
2. 3 　供试品溶液的制备 :取本品 20 片 ,除去包衣 ,
精密称定 ,计算平均片质量 ,研细 ,取约 0. 5 g ,精密
t/ min3 2苦参碱3 2mat rine
图 1 　苦参碱对照品( A) 、鼻咽灵片( B)和阴性样品( C)的
HPLC图谱
Fig. 1 　HPLC Chromatograms of matrine reference
substance ( A) , Biyanling Tablets ( B) ,
and negative sample ( C)
称定 ,置 50 mL 量瓶中 ,加浓氨溶液2甲醇 (1 ∶1) 溶
液 1 mL 润湿 ,放置 30 min ,加氯仿2甲醇 (7 ∶3) 溶
液约 35 mL ,超声提取 30 min ,放冷 ,加氯仿2甲醇
(7 ∶3)溶液至刻度 ,摇匀 ,滤过 ,精密吸取续滤液 25
mL ,过中性氧化铝柱 (100～200 目 ,8 g ,直径 1. 5
cm) ,收集过柱溶液 ,再用 25 mL 氯仿2甲醇 (7 ∶3)
溶液洗脱 ,收集洗脱液 ,合并过柱溶液与洗脱液 ,蒸
干 ,残渣加甲醇使溶解 ,移至 20 mL 量瓶中 ,加甲醇
至刻度 ,摇匀 ,即得。取缺山豆根的阴性样品 0. 5 g ,
同法制成阴性对照溶液。
2. 4 　线性关系考察 :取苦参碱对照品适量 ,精密称
定 ,加甲醇制成 66μg/ mL 溶液。精密吸取苦参碱对
照品溶液 2. 5、5、7. 5、10、12. 5、15μL 注入液相色谱仪
中 ,测定峰面积。以峰面积为纵坐标 ,进样量为横坐
标 ,得标准曲线 ,拟合回归方程为 Y = 1 871. 035 42
X - 9. 315 854 8 , r = 0. 999 96 ,表明苦参碱在 0. 165～
0. 990μg 与峰面积具有良好的线性关系。
·4801· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 7 期 2009 年 7 月
3 收稿日期 :2008212208　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :王　蔚　E2mail : fzfw03 @yahoo. com. cn
2. 5 　精密度试验 : 取同一供试品溶液 ( 批号
E00053)重复进样 6 次 ,每次 5μL ,分别测定苦参碱
峰面积 ,结果其 RSD 为 0. 8 %。
2. 6 　稳定性试验 : 取同一供试品溶液 ( 批号
E00053) ,分别于 0、2、4、8、16、24 h 测定苦参碱峰面
积 ,结果 RSD 为 1. 6 % ,表明供试品溶液在 24 h 内
基本稳定。
2. 7 　重现性试验 :取批号 E00053 鼻咽灵片样品 6
份 ,制备供试品溶液 ,进样测定 ,结果苦参碱平均质
量分数为 6. 24 mg/ g ,RSD 为 1. 8 %。
2. 8 　加样回收率试验 :取批号 : E00053 样品 5 份 ,
每份约 0. 25 g ,精密称定 ,分别加入 1. 70 mg 苦参
碱对照品 ,制备供试品溶液 ,进样测定 ,计算回收率 ,
结果平均回收率为 97. 1 % ,RSD 为 1. 8 %。
2. 9 　样品测定 :取 3 批鼻咽灵片样品 ,制备供试品
溶液。分别精密吸取供试品溶液和苦参碱对照品溶
液各 5μL ,进样 ,记录色谱图 ,测定峰面积 ,计算 ,结
果见表 1。
3 　讨论
3. 1 　提取方法的考察 :本品细粉加浓氨溶液润湿后 ,
再加三氯甲烷超声提取 ,由于其中含糖类成分较多 ,
表 1 　鼻咽灵片中苦参碱的测定结果 ( n = 2)
Table 1 　Determination of matrine in Biyanling Tables ( n = 2)
批　号 苦参碱/ (mg ·g - 1)
E00053 6. 24
E00054 6. 17
E00055 6. 25
易粘结成团块状 ,考虑到可能会提取不完全 ,经过对
无水乙醇2浓氨溶液 (3 ∶2) 、浓氨溶液润湿后加入硅
藻土、浓氨溶液2甲醇 (1 ∶1)润湿方法的比较 ,最后选
定浓氨溶液2甲醇 (1 ∶1)润湿后 ,再加氯仿超声 ,结果
本品细粉经过提取后仍维持原状 ,效果较好。
3. 2 　色谱条件的考察 :乙腈20. 025 mol/ L 硫酸铵
溶液 (加入十二烷基硫酸钠 0. 6 g ,用硫酸溶液 (1 →
5)调节 p H 2. 7) (35 ∶65) 为流动相[2 ] ,氧化苦参碱
与苦参碱峰不能达到基线分离 ,通过增加十二烷基
硫酸钠的量 ,二者有理想的分离度 ;考虑用酸溶液调
节 p H 值 ,给操作造成麻烦 ,经过对不同 p H 值的试
验 ,最后选定本实验中采用的流动相。
参考文献 :
[ 1 ] 　崔　健 ,耿 惠 ,刘淑杰 ,等. 山豆根在复方中化学成分变化的研
究[J ]1中草药 ,2001 ,32 (7) :61326141
[ 2 ] 　中华人民共和国卫生部药品标准 [ S]1中药成方制剂第 18 册.
19981
《中草药》杂志列中文核心期刊中国医学类第一位
中国医学类核心期刊表
序号 刊 　名 　　 序号 刊 　名 　　
1 　中草药 11 　针刺研究
2 　中国中药杂志 12 　中药新药与临床药理
3 　中国中西医结合杂志 13 　南京中医药大学学报
4 　中国针灸 14 　中国实验药剂学杂志
5 　中成药 15 　辽宁中医杂志
6 　北京中医药大学学报 16 　时珍国医国药
7 　中药材 17 　中医杂志
8 　中国中医基础医学杂志 18 　新中医
9 　中药药理与临床 19 　中国中西医结合急救杂志
10 　中华中医药杂志 20 　中国天然药物
　　　　摘自《中文核心期刊要目总览》2008 年版 (第五版)
·5801·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 7 期 2009 年 7 月