全 文 ：中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月·917·
基于指标成分和HPLC指纹图谱检测的决明子化学品质评价研究
王晶彬h2，周 旭1，胡志方2，任永申1，肖小河¨
(1．中国人民解放军第302医院全军中药研究所，北京100039，2．江西中医学院，江西南昌330004)
擅要：目的 客观评价决明子内在质量差异。方法采用HPLC方法测定大黄酚的量；采用梯度洗脱法建立
HPLC指纹图谱；指纹图谱色谱条件：c。8柱(250mm×4．6mm，5um)，流动相为乙腈和1％醋酸，检测波长为254
nm。柱温为室温，体积流量为1mL／min；利用中药色谱指纹图谱相似度评价软件对不同产地决明子指纹图谱进行
相似度分析；以大黄酚的量和指纹图谱相似度为指标，运用SAS软件进行聚类分析。结果建立的指纹图谱精密
度、重现性、稳定性好，不同产地决明子的大黄酚的量及化学指纹图谱不尽相同，化学成分差异与产地相关，大黄酚
质量分数为0．037％tO．170％，指纹图谱相似度范围为0．864～0．962。结论综合指标成分定量测定及化学指纹
图谱分析方法，能较全面地表征不同产地决明子的内在成分差异，可为决明子内在质量控制提供参考。
关键词：决明子；大黄酚；定量测定；指纹图谱
中图分类号：R28z7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)06-0917一03
QualityevaluationofSemenCassiaebybothindicatedcomponent
determinationandHPLCfingerprint
WANGJing—binl”，ZHOUXul，HUZhi—fan92，RENYong—shenl，XIAOXiao-hel·
(1．PLAInstituteofChineseMateriaMedica，’302HospitalofPLA，Beijing100039，China；2．JiangxiCollege
ofTraditionalChineseMedicine，Nanchang330004，China)
Abstract：ObjectiveToevaluatethequalityofSemenCassiaefromdifferenthabitatsobjectively．
MethodsTodeterminethecontentofchryso-phanicaccordingtoChPandestablishHPLCfingerprints
withthegradientelutions lventcomposedofacetonitrileand1％HAC．AC18column(250m×4．6mm，
5um)wasused，flowrate：1mL／min，detectingwavelength：254nm，andthecolumntemperature：room
temperature．TheclusteringanalysiswascarriedoutbySASsoftwareccordingtothecontentof
chrysophanicandsimilarityofHPLCfingerprintsobtainedbythesoftwareofsimilarityanalysis．Results
ThestablishedHPLCfingerprinthasdesirableprecision，reproducibility，andsta ．Thecontentof
chrysophanicandHPLCfingerprintsofSemenCassiaefromvarioushabitatsredifferent，whichdiffers
fromthehabitats．Thecont ntrangeofchrysophanicinSemenCassiaes0．037％一0．170％andthe
similarityis0．864—0．962．ConclusionThemethodin icatesthdifferenceofthchemicalcomponentin
SemenCassiaefromvarioushabitatsandcanbeusedasaqualitycontrolmethodf rSemenCassiae．
Keywords：SemenCassiae；chrysophanic；quantitativedetermination；HPLCf ngerprints
决明子为豆科植物决明CassiaoblusifoliaL．或
小决明C．toraL．的干燥成熟种子，甘、苦、咸、微
寒，归肝、肾、大肠经，具有清肝明目、润肠通便的功
效[1]。现代药理研究发现决明子具有降血压[2]、降血
脂[33等作用，其主要有效成分是葸醌类成分。《中国
药典>>2005年版以大黄酚作为决明子化学质量控制
的指标，不能全面反映不同产地决明子化学质量的
差异，HPLC指纹图谱是一种表征中药整体成分特
征的分析方法，而对决明子指纹图谱研究报道较少
见。笔者建立了决明子HPLC指纹图谱分析方法，并
综合指标成分定量测定方法用于评价决明子内在质
量差异性，为不同产地决明子的鉴别提供技术支持。
1仪器与试剂
Agilent1100高效液相色谱仪(美国)，DAD检
测器，电子天平(梅特勒一托利多仪器有限公司)。大
黄酚对照品购于中国药品生物制品检定所(批号：
收稿日期：2007—09—14
基金项目：全军医药卫生科研项目(2006232003)
作者简介：王晶彬(1982--)，男，福建省泉州市人，江西中医学院2005级硕士研究生，主要从事中药制荆与质量分析研究。
*通讯作者 肖小河Tel：(010)66933322E—mail：pharmacy302@126．com
万方数据
·918· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月
110796—200513)，乙腈、甲醇为色谱纯，无水乙醇、醋
酸乙酯为分析纯，水为娃哈哈纯净水。
2方法与结果
2．1 材料：决明子样品共10批，分别购自北京市各
药材公司，并由解放军302医院全军中药研究所肖
小河研究员鉴定为豆科植物决明C．oblusifoliaL．
的干燥成熟种子。其来源见表1。
表1决明子样品来源
Table1 SourcesofSemenCassiaes mples
2．2’对照品溶液制备：精密称取大黄酚对照品适量，
加无水乙醇一醋酸乙酯(2：1)制成19,ug／mL的溶液。
2．3供试品溶液制备：取干燥药材粉末(过三号筛)
约0．5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇
50mL，称定质量，加热回流30min，放冷，再称定质
量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过。取续滤液25
mL，蒸干，加10％盐酸溶液30mL，置水浴中加热水
解1h，立即冷却，用三氯甲烷振摇提取4次，每次30
mL，合并三氯甲烷，回收溶剂至干，残渣用无水乙醇
一醋酸乙酯(2：1)溶解，转移至10mL量瓶中，并稀
释至刻度，摇匀，0．45,um滤膜滤过，取续滤液测定。
2．4大黄酚的测定
2．4．1 色谱条件⋯：KromasilC18(250mm×4．6
mm，5弘m)；流动相为甲醇一0．1％磷酸溶液(85：
15)；检测波长为254nm；体积流量：1mL／min；温度
为室温。理论板数按大黄酚峰计算应不低于3000。
2．4．2线性关系考察：精密吸取对照品溶液2、4、8、
10、15、20肛L，注入液相色谱仪，按上述色谱条件
进行分析，记录色谱图。以峰面积为纵坐标，大黄酚
的质量为横坐标，进行线性回归。结果大黄酚在
0．038～0．38pg线性关系良好，回归方程：Y=
4 969．4X一9．0132，R2—0．9996。
2．4．3测定方法：精密吸取对照品溶液与供试品溶
液各10pL，注入液相色谱仪，按上述的色谱条件进
行分析，记录色谱图，根据大黄酚的峰面积，利用外
标一点法计算样品中大黄酚的量，S一5的HPLC图
谱作为示范图谱，见图1。
0 5 10 15 20 25
t／min
图1决明子样品(A)和大黄酚对照品(B)色谱图
Fig．1HPLCChromatogramofSemenCassiae(A)
andchrysophanolreferencesubstance(B)
2．4．4测定结果：按供试品制备的方法制备10批
药材的样品液，每一批平行制备3份，依定量测定的
色谱条件进行分析，测定大黄酚的量，结果见表2。不
同产地的决明子中大黄酚的量存在较大差异。
表2决明子药材中大黄酚的测定结果(；士f，厅=3)
Table2 Contentofchrysophanolintenbatches
ofSemenCassiae(；±s，n=3)
批次 大黄酚／％ 批次 大黄酚／％
S一1 0．128士0．00169 S一6 0．088土0．00121
S—f 0．125士0．00224 S一7 0．077士0．00144
S一3 0．J70士0．00395 S一8 0．142士0．00321
S一4 0．130士0．00176 S一9 0．039土0．00111
S一5 0．082土0．00155 S一10 0．037士0．0011
2．5决明子指纹图谱
2．5．1 色谱条件：KromasilC18(250mm×4．6
mm，5弘m)；流动相为A(乙腈)一B(1％醋酸)，梯度洗
脱，分析时间75min；o～15minB从79％～69％，
15～20minB从69％变化到61％，20～32minB从
61％变化到71％，32--一40minB从71％变化到70％，
40-45minB从70％变化到60％，45～65minB从
60％变化到40％，65-70minB从40％变化到50％；
柱温为室温；体积流量：1mL／min；检测波长为
254nm。
2．5．2指纹图谱的建立：精密吸取对照品溶液与供
试品溶液各10pL，注入液相色谱仪，按指纹图谱的
色谱条件进行指纹图谱分析，记录色谱图，结果显
示，不同产地决明子含有的组分基本一致，10批样
品共有13个共有峰，大黄酚的峰位以S表示，以S一5
的HPLC指纹图谱作为示范图谱，见图2。
2．5．3精密度试验：取任一供试品溶液，按指纹图
谱的色谱条件，等量重复进样6次，以大黄酚的保留
时间和峰面积为参照，根据样品共有峰的相对保留
时间和相对峰面积，计算RSD。结果显示，各共有峰
的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3％，
因此决明子药材指纹图谱精密度试验符合要求[|]。
2．5．4稳定性试验：取任一供试品溶液，分别于配
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月·919·
0 10 20 30 40 50 60 70
t／min
图2决明子HPLC指纹图谱
Fig．2HPLCFingerprintofSemenCassiae
制后0、4、8、12、16、24h进样测定，以大黄酚的保留
时间和峰面积为参照，根据不同时间指纹图谱的共
有峰的相对峰面积和相对保留时间，计算RSD。结果
显示。各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的
RSD均小于3％，因此决明子药材指纹图谱稳定性
试验符合要求。
2．5．5 重现性试验：同一批决明子药材分别称取6
份。制备供试品溶液，分别进样，以大黄酚的保留时
间和峰面积为参照，根据各共有峰的相对保留时间
和相对峰面积结果，计算RSD。结果显示，各共有峰
的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3％，
因此决明子药材指纹图谱重现性试验符合要求。
2．5．6相似度测定：采用中药色谱指纹图谱相似度
评价系统对10批药材进行相似度分析，结果见表3。
裹3 10批决明子药材指纹图谱与参照图谱的相似度
Table3 Similarityoffingerprintsintenbatches
ofSemenCassiace
批次 相似度 批次 相似度
S一1 o．956 S一6 0．874
S-2 0．962 S一7 0．864
S一3 O．914 S-8 0．922
S-4 0．958 S一9 0．915
S一5 0．875 S一10 0．917
不同产地、批次的决明子的相似度大小存在差
异，说明不同产地的决明子化学质量存在差异。
2．6聚类分析：以10批决明子样品的相似度和大
黄酚的量为聚类指标，采用SAS软件对10批样品进
行聚类，结果共聚为3类，S一1、S一2、S一4、S一3、S一8归
为一类(I类)，S一5、S一6、S一7归为一类(I类)，S一9、
S一10归为一类(Ⅲ类)，m类大黄酚的量低于《中国
药典》要求，I、l类大黄酚的量符合《中国药典》要
求。结果基本将不同产地决明子分开，不同产地的决
明子中大黄酚的量存在差异，其中广西产决明子中
大黄酚的量偏低；不同产地决明子整体化学成分特
征存在差异，同一产区决明子化学质量比较稳定，表
明化学指纹图谱能将不同产区的决明子相区分，有
助于评价不同产地决明子化学质量差异，为道地药
材化学质量控制提供借鉴；安徽产(I)与广西产
(I)决明子相似系数较接近，而1、I与I的相似系
数相差较大，这与决明子南北地域性差异相符；I、
1类的量符合《中国药典》要求，整体成分存在较大
差异，综合大黄酚的量及化学指纹图谱的分析方法
可更灵敏地表征决明子的整体成分差异，为决明子
的质量控制提供参考及商品规格划分依据的定量化
提供借鉴。结果见图3。
蒌s-2s-3s8兰三=二卜-_————J 一．一一————————————————]．-------·---—--------------------·—_J
要s-7三)————]铀—1—————_J ． 一J
圈3用大黄酚的量和相似度系数进行聚类分析的树状圈
Fig．3Dendrogramofclusteranalysisaccording
tobothcontentsofchrysophanoland
similarityoffingerprints
3讨论
3．1 建立不同产地决明子HPLC指纹图谱及大黄
酚的量分析表明，不同产地的决明子不仅在大黄酚
的量上存在差异，在其他成分量亦存在较大差异，进
一步表明决明子的化学质量的产地特异性，为保证
药材质量的一致性从而维持临床疗效的稳定，应固
定药材的产地及采收时间。综合指标成分定量测定
及化学指纹图谱分析方法，实现定量控制与模糊表
征的统一，不同以化学药质控模式为核心的中药质
量评价与控制模式的现状，可作为决明子的质量评
价与控制的新方法，既能评价药材质量，又能有效地
辨别不同产区药材，对于决明子药材的质量控制及
其制剂的稳定、安全具有重要意义。
3．2色谱条件优化时考察了不同的流动相系统：甲
醇一水、乙腈一水、乙腈一1％醋酸，结果乙腈一1％醋酸系
统显示的图谱峰形好、基线平稳、分离度好，因此选
定该系统为决明子药材指纹图谱检测的流动相。
3．3本试验采用二极管阵列检测器进行全波长扫
描，结果表明，在254nm峰数及响应值均较理想，因
此选择254am为检测波长。
参考文献：
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万方数据
基于指标成分和HPLC指纹图谱检测的决明子化学品质评价研
究
作者： 王晶彬， 周旭， 胡志方， 任永申， 肖小河， WANG Jing-bin， ZHOU Xu， HU Zhi-fang
， REN Yong-shen， XIAO Xiao-he
作者单位： 王晶彬,WANG Jing-bin(中国人民解放军第302医院,全军中药研究所,北京,100039;江西中医
学院,江西,南昌,330004)， 周旭,任永申,肖小河,ZHOU Xu,REN Yong-shen,XIAO Xiao-
he(中国人民解放军第302医院,全军中药研究所,北京,100039)， 胡志方,HU Zhi-fang(江西
中医学院,江西,南昌,330004)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(6)
被引用次数： 1次

参考文献(4条)
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引证文献(1条)
1.李亚杰.覃大吉.杨永康.龙澜.向极钎 道地药材的品质评价现状[期刊论文]-湖北民族学院学报（自然科学版）
2010(4)


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