全 文 ：RSD 为 1186 %。
2112 　样品测定 :取 3 批样品 ,制备供试品溶液。分
别精密吸取黄芩苷对照品溶液和供试品溶液各 10
μL ,注入液相色谱仪 ,采用外标法计算黄芩苷的质
量分数 ,结果见表 1。
表 1 　芎菊上清丸中黄芩苷的测定结果( n = 3)
Table 1 Determination of baicaline in Xiongju
Shangqing Pills ( n = 3)
批 号 黄芩苷/ (mg ·g - 1)
20070912 2. 12
20080125 1. 95
20080318 2. 04
3 　讨论
采用 HPL C 法测定黄芩苷的文献报道有多种
流动相[1 ,2 ] ,但对该样品的分离效果均欠佳。黄芩
苷属于黄酮类化合物 ,分子结构中含有多个酚羟基 ,
显一定的酸性 ,故本实验采用了 RP2H PL C 法 ,在流
动相中加入少量磷酸、冰乙酸 ,抑制其离解并改善峰
形。同时分别考察了甲醇2水2冰乙酸 (40 ∶60 ∶1) 、
甲醇2水2冰乙酸 (48 ∶60 ∶1) 、甲醇2水2磷酸 (47 ∶
53 ∶012)流动相体系 ,结果显示流动相为甲醇2水2
冰乙酸 (40 ∶60 ∶1)时 ,色谱峰峰形较好 ,分离度、理
论塔板数、拖尾因子等系统适应性均符合要求。
黄芩苷的提取方法主要有 :煎煮法、超声提取
法、加热回流法、索氏提取法等。实验考察了超声提
取法、加热回流法 ,结果表明超声提取法的提取效果
优于加热回流法。
参考文献 :
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片中黄芩苷的含量 [J ] . 中国实验方剂学杂志 ,2007 ,13 (4) :
13215.
[ 2 ] 　宋英姬. HPLC 法测定消炎片中黄芩苷 [J ] . 中草药 ,2007 ,38
(12) :182921830.
干红葡萄酒中儿茶素、表儿茶素、白藜芦醇和原花青素的测定
王夏青1 ,於洪建2 ,赵余庆3 3
(1. 辽宁中医药大学 ,辽宁 沈阳 　110032 ; 2. 天津市尖峰天然产物研究开发有限公司 ,天津 　300457 ;
3. 沈阳药科大学 ,辽宁 沈阳 　110016)
摘 　要 :目的 　利用 HPL C 法与分光光度法对干红葡萄酒中儿茶素、表儿茶素、白藜芦醇和原花青素分别进行测
定。方法 　儿茶素、表儿茶素和白藜芦醇采用 HPLC 法测定 , Kromasil C18色谱柱 (150 mm ×416 mm) ;流动相采
用甲醇2水梯度洗脱 ;体积流量为 1 mL/ min ;检测波长为 290 nm ;每次进样 10μL 。花青素采用分光光度法测定。
结果 　干红葡萄酒中白藜芦醇、儿茶素和表儿茶素质量浓度分别为 01036 5～01893 9 mg/ L ,0127～70114 mg/ L ,
1104～15132 mg/ L ;原花青素为 01309～31111 mg/ mL 。结论 　干红葡萄酒中儿茶素与表儿茶素的量较高 ,白藜芦
醇的量稍低 ;原花青素的量平均为 211219 mg/ mL 。
关键词 :干红葡萄酒 ;儿茶素 ;表儿茶素 ;白藜芦醇 ;高效液相色谱 ;原花青素 ;紫外分光光度
中图分类号 :R286. 02 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :0253 2670 (2009) 05 0745 03
　　红葡萄酒是用成熟的葡萄为原料 ,经破碎、压榨
后带皮直接发酵酿成的饮料酒。干红葡萄酒含有对
人体有益的维生素、氨基酸以及多酚类化合物等 ,不
仅营养丰富 ,而且具有一定的养生功效。目前对干
红葡萄酒品质评价的方法多数还局限于感官分析和
单一化学成分的鉴定 ,对干红葡萄酒科学的、整体性
的评价方法还处于探索阶段[ 1 ] 。白藜芦醇是一种重
要的植物抗毒素和抗氧化剂 ,葡萄制品如葡萄酒 ,葡
萄汁中都存在 ,其中以干红葡萄酒中的量最高。白
藜芦醇具有调血脂 ,抑制血小板 ,改善非酒精性脂肪
肝及抑制脂肪氧化酶活性的作用 ,并可通过保护细
胞线粒体中 DNA 免遭化学损害而发挥延缓衰老功
效[2～4 ] 。儿茶素、表儿茶素是茶多酚的主要成分。
现代药理研究表明 ,儿茶素具有抗氧化、防辐射、护
肤美容、减缓香烟毒害等多种功效[ 5 ] 。原花青素是
葡萄籽提取物的主要活性成分 ,由单体 (儿茶素、表
儿茶素)和基于此单体的聚合物组成 ,其中生物活性
最强的部分是低聚体 (二、四聚体)原花青素[6 ] ,是评
价葡萄籽提取物和葡萄制品质量的重要指标。本研
究对干红葡萄酒中儿茶素、表儿茶素、白藜芦醇和原
·547·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
3 收稿日期 :2008210214　　　3 通讯作者　赵余庆
花青素进行了测定 ,以期为科学地评价干红葡萄酒
的品质提供有效的参考。
1 　仪器与试剂
高效液相色谱仪 (knauer 德国) ,UV —2800A H
紫外可见分光光度计 (上海尤尼可) ,Sartorius 电子
天平 (北京 赛多利斯) 。
原花青素、白藜芦醇对照品 (质量分数均为
98 %)由天津市尖峰天然产物研究开发有限公司提
供 ,儿茶素 (批号 8782200102) 、表儿茶素对照品 (批
号 8772200001) 由中国药品生物制品检定所提供。
甲醇为色谱纯、双重蒸馏水。干红葡萄酒的来源
见表 1。
表 1 　干红葡萄酒的来源和产地
Table 1 　Resources of Chinese red wine
批 号 样 品 厂家或者产地
长城 1997 华夏长城系列干红葡萄
　酒 1997 年
中粮酒业有限公司出品
　昌黎产区 华夏葡园
长城 1998 长城解百纳干红葡萄酒
　1998 年
昌黎产区 华馨葡萄酿酒
　有限公司酿造
长城 1999 长城葡萄海岸系列解百
　纳干红葡萄酒 1999 年
中粮长城葡萄酒 (烟台)
　有限公司
长城 2000 长城葡萄酒特制高级解
　百纳干红 2000 年
中粮酒业有限公司沙城
　产区
长城 2001 长城干红葡萄酒解百纳
　特制 2001 年
中粮酒业有限公司沙城
　产区
长城 2002 长城葡萄酒特制解百纳
　干红 2002 年
中粮酒业有限公司沙城
　产区
王朝 王朝解百纳干红
　2005 年
天津中法合营王朝葡萄
　酿酒有限公司
张裕 2003 张裕解百纳干红葡萄酒
　2003 年
烟台张裕葡萄酿酒有限
　公司
张裕 2001 张裕解百纳干红葡萄酒
　2001 年
烟台张裕葡萄酿酒有限
　公司
长城 长城干红葡萄酒
　神州风情
中粮酒业有限公司
通化
通化牌高级红葡萄酒 通化葡萄酒股份有限公司
五女山冰红 五女山野生山葡萄酒
　2007 年
辽宁五女山米兰酒业有
　限公司
2 　方法与结果
211 　白藜芦醇、儿茶素、表儿茶素的测定
21111 　色谱条件 : Kromasil C18色谱柱 (150 mm ×
416 mm) ;流动相采用甲醇 ( A)2水 (B) 梯度洗脱 ,
0～8 min ,20 %A ,8～12 min ,60 %A ,12～30min ,
100 %A ;体积流量为 1 mL/ min ;检测波长为 290
nm ;每次进样 10μL 。
21112 　标准曲线的制备 :准确称取白藜芦醇对照品
0102 mg , 儿茶素对照品 2 mg ,表儿茶素对照品 2
mg 置于 10 mL 量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,即得。
精密吸取适量混合对照品溶液 ,进样测定峰面积值。
以进样量为横坐标 ,峰面积为纵坐标 ,绘制标准曲
线 ,进行线性回归。白藜芦醇 : Y = 36 755 123174
X + 1 202158 , r = 01999 8 , 表明白藜芦醇在
01001～01012μg 与峰面积线性关系良好。表儿茶
素 : Y = 2 279 883197 X - 54 747142 , r = 01999 7 ,
表明表儿茶素在 011～112μg 与峰面积线性关系良
好。儿茶素 : Y = 2570 206155 X - 162 742152 , r =
01999 8 ,表明儿茶素在 012～114μg 与峰面积线性
关系良好。
21113 　精密度试验 :精密称取王朝酒样 10μL ,连
续进样 5 次 ,测定色谱峰面积 ,计算 ,结果显示白藜
芦醇、儿茶素和表儿茶素峰面积的 RSD 分别为
119 %、018 %、014 %。
21114 　重现性试验 :精密称取王朝酒样共 5 份 ,各
进样 10μL ,测定色谱峰面积 ,计算 ,结果显示白藜
芦醇、儿茶素和表儿茶素峰面积的 RSD 分别为
117 %、111 %、012 %。
21115 　稳定性试验 :分别在 0、4、8、12、24 h 精密吸
取王朝酒样 10μL 进样 ,测定色谱峰面积 ,结果白藜
芦醇、儿茶素和表儿茶素峰面积的 RSD 分别为
016 %、116 %、019 %。表明在 24 h 内供试品溶液
稳定。
21116 　回收率试验 :精取王朝酒样 ,共 5 份 ,分别加
入 0105 mg 白藜芦醇、儿茶素和表儿茶素对照品 ,
分别精密吸取 l0μL 进样 ,测定 ,结果平均回收率分
别为为 10017 %、9916 %、100197 % , RSD 分别为
116 %、1108 %、018 %。
21117 　样品测定 :取酒样经 0122μm 滤膜超滤 ,备
用。取对照品和供试品溶液进样测定 ,色谱图见图
1。定量方法采用外标法 ,结果见表 2。可见儿茶素
的量以王朝最高 (01701 4 mg/ L) ,五女山冰红次之
(01224 2 mg/ L) ,通化最低 (01002 7 mg/ L ) 。表儿
茶素的量以长城 2000 最高 (01153 2 mg/ L ) ,王朝
次之 (01038 6 mg/ L) ,长城 1997 最低 (01010 4 mg/
L) 。白藜芦醇的量以长城最高 (01893 9 mg/ L) ,王
朝次之 (01634 1 mg/ L) ,通化最低 (01036 5 mg/ L) 。
212 　原花青素的测定
21211 　标准曲线的绘制 :准确称取原花青素对照品
适量 ,加 95 %乙醇制成 01051、0117、01255、0134、
01425、0189 mg/ mL 溶液 ,取 3 mL 置 25 mL 具塞
试管中 ,分别加入 012 mL 2 % N H4 Fe (SO4 ) 2 [2 mg
·647· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
　12儿茶素　22表儿茶素　32白藜芦醇
12catchin 　22epicatchin 　32t rans - resverat rol
图 1 　对照品( A)和王朝葡萄酒( B)的 HPLC图谱
Fig. 1 　HPLC Chromatograms of reference substances ( A)
and Chinese red wine ( B)
N H4 Fe (SO4 ) 2 用 1 mol/ L 盐酸定容到 100 mL ]与
6 mL 盐酸正丁醇溶液 (95 mL 正丁醇加 5 mL 浓盐
酸) ,摇匀 ,置 95 ℃水浴反应 40 min ,取出 ,立即冷
却 ,待用。在 546 nm[7 ]测定吸光度值。以吸光度对
质量浓度进行回归 ,得原花青素标准曲线方程 Y =
41075 3 X + 01137 1 , r = 01999 8 ,结果表明原花青
素在 01051～0189 mg 与吸光度的线性关系良好。
21212 　供试品溶液的制备 :精取酒样 5 mL ,置于
25 mL 量瓶中 ,用 95 %乙醇稀释至刻度。取 3 mL
稀释的酒样于 25 mL 具塞试管中 ,按照标准曲线的
绘制项下方法处理 ,即得。
21213 　精密度试验 :精密称取稀释后的酒样 3 mL ,
连续测定 5 次吸光度值。结果显示原花青素吸光度
值的 RSD 为 0. 05 %。
21214 　重现性试验 :精密称取酒样共 5 份 ,制备供
试品溶液 ,测定吸光度。结果原花青素吸光度的
RSD 为 012 %。
21215 　稳定性试验 :分别在 0、4、8、12、24 h 精密吸
取稀释后的酒样 ,测定吸光度。结果原花青素吸光
度的 RSD 为 015 %。表明在 24 h 内供试品溶液
稳定。
21216 　回收率试验 :取酒样 5 份 ,分别加入 1 mg 原
花青素对照品 ,制备供试品溶液 ,测定 ,结果平均回
收率为 101131 % ,RSD 为 217 %。
21217 　样品测定 :取各样品 ,制备供试品溶液 ,进样
测定 ,将结果带入原花青素标准曲线方程 ,计算 ,结
果见表 2。由测定结果可以看出 ,长城 1999 年解百
那干红葡萄酒中原花青素的量最高 ,长城 2000 年解
百那干红葡萄酒中的量次之 ,长城 1998 年解百纳干
红葡萄酒中原花青素的量最低。
3 　讨论
干红葡萄酒中所含儿茶素、表儿茶素和白藜芦
醇 3 种酚类物质以儿茶素与表儿茶素的量较高 ,分
　 表 2 　干红葡萄酒中儿茶素、表儿茶素、白藜芦醇
和原花青素的测定结果
Table 2 　Determination of catechin , epicatechin , resveratrol ,
and procyanidine in Chinese red wine
样 品
儿茶素/
(mg ·L - 1)
表儿茶素/
(mg ·L - 1)
白藜芦醇/
(mg ·L - 1)
原花青素/
(mg ·L - 1)
长城 1997 12. 00 1. 04 0. 238 9 2. 332
长城 1998 未测到 未测到 0. 198 0 0. 309
长城 1999 10. 06 1. 56 0. 605 0 3. 111
长城 2000 13. 14 15. 32 0. 441 1 2. 829
长城 2001 11. 46 2. 70 0. 448 1 2. 476
长城 2002 12. 31 1. 75 0. 416 0 2. 502
王朝 70. 14 3. 86 0. 634 1 2. 807
张裕 2003 14. 04 3. 44 0. 618 1 2. 487
张裕 2001 10. 35 2. 67 0. 554 8 2. 357
长城 3. 96 未测到 0. 893 9 1. 657
通化 0. 27 未测到 0. 036 5 0. 734
五女山冰红 22. 42 2. 97 0. 507 6 1. 862
别平均为 16137 7、31923 mg/ L ,白藜芦醇的量较
低 ,平均为 01466 mg/ L 。其量多少基本与价格成正
比。国外报道显示 ,干红葡萄酒中 3 种酚类物质中
儿茶素的水平最高[ 8 ] ,与本研究结果相同 ,表明中国
产干红葡萄酒品质与国外干红葡萄酒品质相近。
近年来 ,干红葡萄酒的保健作用越来越被人们
所重视。本研究采用 H PL C 法对干红葡萄酒中活
性成分白藜芦醇、儿茶素与表儿茶素进行了比较分
析 ,发现白藜芦醇在中国干红葡萄酒中普遍存在 ,充
分说明了中国干红葡萄酒的品质 ,初步证明干红葡
萄酒的预防心血管疾病、防治动脉粥样硬化等功效
与此有关 ,也为人们饮用干红葡萄酒对人体的有益
作用提供了理论依据。
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·747·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月