全 文 ：·926· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月
HPLC法测定紫菀中阿魏酸、槲皮素和山柰酚
田亚平，景秀娟，徐磊，周亚楠，张兰桐。
(河北医科大学药学院药物分析教研室，河北石家庄050017)
摘要：目的建立同时测定紫菀药材中阿魏酸、槲皮素和山柰酚的分析方法。方法色谱柱为DiamonsilTMC，。柱
(250mm×4．6mm，5pm)，柱温为30C，检测波长分别为310、360、365am，进样量20pL，流动相为乙腈一0．05％磷
酸进行梯度洗脱。结果 阿魏酸、槲皮素和山柰酚分别在0．011～0．277、0．004～0．106、0．006～0．126mg／mL呈良
好的线性关系。15批药材中阿魏酸、槲皮素和山柰酚质量分数分别为0．15～1．43、0．09～O．36、0．03～1．12mg／g。
结论本方法操作简便、快速、准确，适用于紫菀药材3种活性成分的定量测定。
关键词：紫菀l阿魏酸；槲皮素；山柰酚；HPLC
中图分类号：R282．6 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)06—0926—03
紫菀为双子叶菊科植物紫菀AstertataricusL．
f．的根及根茎，为我国传统医药中常用中药材，性
味辛、苦、温，归肺经，具有润肺下气、消痰止咳的功
效，可用于痰多喘咳，新久咳嗽，劳嗽咳血等。一般认
为，紫菀中含有的三萜皂苷类成分(紫菀酮、木栓酮、
表木栓醇)为发挥止咳化痰药效的主要物质[1矗]。近
年来人们又发现紫菀具有抗氧化、止痛、免疫调节等
其他生物活性，而这些生物活性则是由黄酮类成分
起作用，如山柰酚、槲皮素具有明显的抗氧化作用，
在抑止溶血、脂质过氧化物反应和免疫调节方面均
有显著作用[3]。紫菀指纹图谱分析中以槲皮素作为
有效成分对色谱峰进行分离，检出10个共有峰作为
定性鉴别，并对槲皮素进行测定[4]。紫菀中阿魏酸的
量较高，阿魏酸具有医疗保健等功能如清除自由基、
抗血栓、抗菌消炎、抑制肿瘤、防治高血压等口]。目前
的研究表明，紫菀抗肿瘤作用也与黄酮和有机酸成
分有很大的相关性，鉴于紫菀新的药用价值，有必要
对该药材的质量进行重新评价，为此笔者首次采用
HPLC法同时测定紫菀药材中3种有效成分的量。
1仪器与试药
1．1 仪器与试剂：Waters1525高效液相色谱仪，
Waters2487检测器(UV)，Empower工作站；
SCQ一200超声波清洗器(上海声谱超声波设备
厂)，SZ一93自动双重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪
器厂)。乙腈为色谱纯(美国迪马公司)，水为二次重
蒸水，其他试剂均为分析纯。阿魏酸对照品(批号
111581—200302)、槲皮素对照品(批号100081—
200406)、山柰酚对照品(批号11086—200405)、紫菀
对照药材(批号120956—200504)均由中国药品生物
制品检定所提供。
本研究收集了15个不同产地、不同采收期的紫
菀药材样品，晾干。所有采集药品经河北医科大学生
药教研室赵丁教授鉴定，均为合格药材。将样品切成
小段，置烘箱内，于40C烘干8h，取出，用粉碎机粉
碎，过3号筛，置干燥器中，备用。
2方法与结果
2．1色谱条件的选择：采用C。。色谱柱(250mm×
4．6mm，5弘m)对流动相的组成、配比、体积流量等
因素进行分析，对检测波长进行选择，确定最佳色谱
条件。
2．1．1 流动相系统的选择：吸取供试品溶液20肛L
进样，分别以甲醇一水、乙腈一水、乙腈一0．05％甲酸、
乙腈一0．05％磷酸溶液等不同浓度、不同比例的流动
相系统进行等度和梯度洗脱实验，比较不同洗脱条
件下的色谱图，选择分离效果好，时间尽可能短的最
佳色谱条件，最终确定以乙腈一0．05％磷酸溶液进行
梯度洗脱，见表1。
衷1流动相梯度洗脱程序
Table1 Gradientelutionprocessofmobilephase
时问／rain体积流量／(mL·rain-1)乙腈／％0．05％磷酸／％
23
50
65
100
100
100
23
77
50
35
0
0
0
77
2．1．2检测波长的选择：吸取对照品溶液20pL，注
收稿日期：2007—11—12
作者简介：田亚平(1983一)，河北保定人，女。硕士研究生，从事中药质量控制与药代动力学研究。
*通讯作者张兰桐Tel：(0311)86266419E—mail：zhanglantong@263．net
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月·927·
入HPLC—PDA色谱仪，按选定的色谱条件进行分
析，得到不同波长下的三维色谱图，对图谱进行比较
分析，使各个成分均在最大波长处测定，最终确定波
长梯度为5min--,-310nm、14．9min-}360am和16
min--’365am。
2．1．3柱温的选择：取紫菀粉末适量制备供试品溶
液，吸取20弘L注入液相色谱仪，分别于25、30、35、
40℃条件下按上述色谱条件进行色谱分析，记录色
谱图，比较图谱，选择合适的柱温为30℃。
2．2供试品溶液制备：本实验比较了水浴回流、索
氏提取、超声提取的提取效果，发现超声的提取率和
另外两种提取方法相近，但鉴于超声提取简单方便，
最终选定超声提取方法。同时还通过正交设计考察
了不同提取时间、提取溶剂及溶剂倍数的提取效果
差异。结果表明，以80％甲醇为提取溶剂，加入20倍
量溶剂，超声提取20min时，提取率可达最优效果，
且方法稳定，重现性好。
取8号样品粉末(过3号筛)约1．0g，精密称定，
精密加入80％甲醇20mL，摇匀，称定质量，超声提
取20min，取出，放冷，用80％甲醇补足质量，摇匀，
滤过后高速离心，即得供试品溶液。
2．3对照品溶液的制备：取阿魏酸、槲皮素和山柰
酚对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释成每
1 mL中含0．055、0．021、0．032mg的溶液，作为对
照品溶液。
2．4系统适用性试验：吸取供试品溶液20弘L，注入
HPLC色谱仪，记录色谱图，在选定色谱条件下阿魏
酸、槲皮素和山柰酚的理论板数分别为4176、
33367和67548，与其他色谱峰的分离度均大于
1．5。见图1。
2．5线性及线性范围：精密称取阿魏酸、槲皮素和
B
J山．j
3
2 J
【．-‘． 1 I
t／rain
1一阿魏酸2一槲皮索3一山柰酚
1一ferulicacid2-quercetin3-kaemferol
圈l 对照品混合物(A)和紫菀药材
提取物(B)的HPLC图谱
Fig．1HPLCChromatogramsreference
mixtureof ferencemixture(A)
andRadixAsterisextract(B)
山柰酚对照品适量，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并
稀释至刻度，摇匀，配制成质量浓度分别为o．277、
0．106、0．126mg／mL的溶液，作为对照品储备液；
分别精密吸取0．4、1、2、5、10mL，置10mL量瓶中，
加甲醇至刻度，摇匀。吸取上述系列溶液及储备液各
20肛L注入液相色谱仪，测定，记录峰面积。以峰面
积为纵坐标质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，经回
归处理得回归方程：阿魏酸y一8×107X+206281，
，．=0．9997，在0．011～0．277mg／mL呈良好的线
性关系。槲皮素Y一8×107X一36188，，．=0．999，
在0．004～0．106mg／mL呈良好的线性关系。山柰
酚Y=6×107X-4-22901，，-=0．9999，在0．006～
0．126mg／mL呈良好的线性关系。
2．6精密度试验：取紫菀药材8号样品，粉碎，过3
号筛，取约1．0g精密称定，制备供试品溶液，吸取
供试品溶液20pL，注入液相色谱仪，重复进样6次，
记录峰面积，阿魏酸、槲皮素和山柰酚质量分数的
RSD分别为0．27％、0．08％和0．11％(咒=6)，表示
该方法精密度良好。
2．7 稳定性试验：制备供试品溶液，分别于0、2、4、
6、8、10、12、24h吸取供试品溶液20肛L，进样分析
并记录峰面积，阿魏酸、槲皮素和山柰酚的峰面积
RSD分别为0．35％、0．07％和0．17％，表明样品溶
液在24h内稳定。
2．8重现性试验：平行操作制备供试品溶液6份，吸
取供试品溶液各20pL，注入液相色谱仪，记录峰面
积，阿魏酸、槲皮素和山柰酚质量分数的RSD分别为
2．28％、0．88％和1．oo％，表示该方法重现性良好。
2．9回收率试验：取紫菀药材8号样品约0．5g，共6
份，精密称定，分别精密量取阿魏酸、槲皮素和山柰
酚对照品0．405、0．059、0．143mg(约相当于1．00g
紫菀药材含阿魏酸、槲皮素和山柰酚的50％)，依次
加入上述6份药材中，制备供试品溶液，吸取上述溶
液各20肛L，注入液相色谱仪进行分析并记录峰面
积，阿魏酸、槲皮素和山柰酚的平均回收率分别为
104．o％、104．5％、100．1oA，RSD分别为2．17％、
1．69％、1．80％(规一6)。
2．10样品测定：取不同来源紫菀药材粉末(过三号
筛)各约1．0g，精密称定，制备供试品溶液，吸取各
溶液20弘L，注入液相色谱仪进行分析记录峰面积并
计算质量分数，结果见表2(n=3)。
不同来源的紫菀药材中有效成分的量差别较
大，从总体结果看所测3种有效成分中山柰酚的量
较高，平均质量分数为1．18mg／g，为阿魏酸平均量
万方数据
·928· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月
表2 15批紫菀药材中3种活性成分的量
Table2 Contentsof hreeactiveingredients
in15batchesofRadixAsteris
的2．5倍、槲皮素平均量的5倍，但具体到不同来源
的紫菀药材，也并非全部与总体一致，如河北乐仁堂
的紫菀药材中则是阿魏酸的量偏高，山柰酚次之，槲
皮素的量最低；另一方面，不同产地紫菀药材中各有
效成分的量变化差异较大，阿魏酸、槲皮素和山柰酚
的平均质量分数分别为0．15～1．43、0．09～0．36、
0．03～1．12mg／g，尤其是山柰酚的量变化差异最
为显著，同一产地的药材因采收时间不同，药材中的
成分也会发生变化，但变化不大，因此地域性对于紫
菀药材的影响更大一些，如河北安国药材因地域差
别不大各成分的量仅略有差别，江西、四川省的紫菀
药材中各成分的量差异显著，对药材质量会有一定
的影响，因此同时测定以上3种活性成分可以更好
地控制紫菀药材质量。
3讨论
3．1本实验采用HPLC法同时测定紫菀药材中的
阿魏酸、槲皮素和山柰酚，可以更好地控制药材质
量，如四川紫菀中阿魏酸的量较高，但另外2种活性
成分的量却很低，如果单一由一种活性物质难以保
证药材质量，3种活性成分同时测定则可以更好地
对紫菀药材进行质量控制，且实验方法准确可靠，灵
敏度高、重现性好。实验所测紫菀药材中3种活性成
分阿魏酸、槲皮素和山柰酚均为紫菀中的活性成分，
量较高，适于对紫菀药材极性成分进行质量控制；而
紫菀中弱极性部分如紫菀酮、表木栓醇、木栓酮等，
因不能提取完全，需另选提取方法以达完全提取才
能进行测定。
3．2选用多种提取方法对紫菀药材进行提取，验证
了不同酸(盐酸、硫酸及甲酸)及其不同质量浓度对实
验结果的影响，实验中发现紫菀药材中芦丁的量微
小，故加酸并不能使芦丁水解得到更多的槲皮素；本
实验还比较了不同时间对各物质的影响，发现阿魏酸
和槲皮素发生降解，提取时间过长会使两者的量降
低。
3．3通过对各对照品储备液在200-400rim进行
紫外扫描，得出各自的紫外吸收曲线，根据相应的出
峰时间确定波长梯度，使3种活性成分均在最大吸
收波长处测定，使测定结果更加灵敏、准确。
3．4 比较紫菀供试品溶液和对照品储备液的
HPLC—PDA图谱，3种活性成分出峰时间一致，且
紫外扫描图谱相同，由此可以判断紫菀药材和对照
品的HPLC图谱上各个对应的峰为同一物质，而不
是单一的由出峰时间进行判断。
参考文献：
[1]中国药典Is]．一部．2005．
[2]卢艳花，戴岳，王峥涛，等．紫菀祛痰镇咳作用及其有效
部位和有效成分[J]．中草药，1999，30(5)：360—362．
[3]NgTB，LiuF，LuYH，eta1．Antioxidantactivi yof
compoundsfromthemedicinalherbAstertataricusI-J]．Comp
BiochemPhysPartC：ToxicolPharmacol，2003，136(2)：
109—115．
[4]周军辉，伍蔚萍，谢子民，等．紫菀药材的高效液相色谱指
纹图谱与定量分析EJ]．中药材，2004，27(8)：562—565．
[5]欧仕益．阿魏酸的功能和应用EJ]．广州食品工业科技，
2002．18(4)：50一53．
万方数据
HPLC法测定紫菀中阿魏酸、槲皮素和山柰酚
作者： 田亚平， 景秀娟， 徐磊， 周亚楠， 张兰桐
作者单位： 河北医科大学药学院,药物分析教研室,河北,石家庄,050017
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(6)
被引用次数： 2次

参考文献(5条)
1.中华人民共和国药典(一部) 2005
2.卢艳花;戴岳;王峥涛 紫菀祛痰镇咳作用及其有效部位和有效成分[期刊论文]-中草药 1999(05)
3.Ng T B;Liu F;Lu Y H Antioxidant activity of compounds from the medicinal herb Aster tataricus[外文
期刊] 2003(02)
4.周军辉;伍蔚萍;谢子民 紫菀药材的高效液相色谱指纹图谱与定量分析[期刊论文]-中药材 2004(08)
5.欧仕益 阿魏酸的功能和应用[期刊论文]-广州食品工业科技 2002(04)

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