全 文 ：·1556· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第10期2008年10月
源枯竭的严重境地，野生黄连仅十分稀少地见于陕
西南部、湖北西部和四川东部的一些地区。如果不进
行有效的保护，随着野生黄连分布区域的继续缩小
和资源的大量流失，将导致黄连遗传多样性的进一
步降低，甚至有可能难以找到野生资源。此外，生产
上长期的人为选择加上药材市场的调控，丢失了许
多农家品种资源，造成黄连栽培群体遗传基础狭窄，
基因组差异缩小，降低了居群间的遗传多样性水平。
因此，在黄连遗传多样性保护上，一方面需人为增加
个体间的基因流动，促进基因重组，对物种进行复
壮l另一方面要在广泛调查的基础上大量收集和保
护野生、农家品种的优质种内变异，在适宜地建立田
间种质资源圃，最大限度地对遗传多样性进行保护，
并进行植物形态学、生长发育规律和繁殖生物学的
研究，使种质资源的收集和保护更具有目的性和有
效性。本室利用分子标记技术对黄连栽培种质资源
进行遗传多样性分析，不仅可以对黄连的育种工作
中亲本的配置提供理论依据和指导作用，而且在遗
传多样性恢复和保护中具有重要价值。
致谢：分子生物学实验在西南大学蚕桑学重点
实验室完成。
参考文献：
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黄独带芽茎段增殖和生根的初步研究
洪森荣，尹明华。，赵美娜
(1-饶师范学院生命科学系，江西上饶334001)
摘要：目的对黄独带芽茎段的增殖和生根进行初步的研究。方法采用单因子试验和植物组织培养的方法。结
果 6-BA或KT与NAA组合有利于黄独带芽茎段增殖；蔗糖质量浓度过高将导致黄独带芽茎段愈伤化不利于黄
独带芽茎段增殖l液体培养有利于黄独带芽茎段增殖；在一定范围内NAA质量浓度的增加有利于黄独带芽茎段生
根，但质量浓度太高将会抑制生根。结论 黄独带芽茎段增殖的最佳培养基为MS+KT2mg／L+NAA1mg／L或
MS+6-BA2mg／L+NAA0．5mg／L；黄独带芽茎段再生的最佳蔗糖量为30g／L，最佳培养方式为液体培养，最佳
的生根培养基为MS+NAA2mg／L。
关键词：黄独I带芽茎段；增殖；生根；组织培养
中圈分类号：R282．2 文献标识码：A 文章缩号：0253—2670(2008)10—1556—05
Primarystudyonproliferationandro tingofstemwithabudinDioscoreabulbifera
HONGSen—rong，YINMing—hua，ZHAOMei—na
(DepartmentofLifeScience。ShangraoNormalCo lege，Shangrao334001t China)
Abstract：ObjectiveTos udytheffectsof everalf ctorsnbudproliferationandrootingof
Oioscoreabultnferastemwithabud．MethodsSinglefactortestandplanttissueculturemethodswere
applied．ResultsThecombinationof6一BAorKTandNAAhelpedtheproliferationofstemwithabudin
收稿日期：2008．01—04
基金项目：江西省自然(青年)科学基金资助项目(0630103)I江西上饶师范学院2008--2009年度院级科技资助项目
作者简介：洪森荣，男，江西永新人，硕士，讲师。主要从事生物技术方面的研究．
-通讯作者尹明华

万方数据
中草叠ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第10期2008年10月· 557·
D．bultnfera；highconcentrationsucr seledtocallusgrowthofstemwithabudinD．bulbiferawhich
didn7thelptheproliferationofstemwithabudinD·bultnfera；Liquidculturealsohelpedtheproliferation
ofstemwithabudinD．bulbifera}Inacertainrange，theincreaseofNAAconcentrationhelpedthe
rootingofstemwithabudinD．bultnfera．Butitwillinhibittherootingwithconcentrationinahigher
level．ConclusionThebestproliferationculturemediumofD．bulbifera，sternwithabudiSMS+KT
2mg／L+NAAO．5mg／LorMS+6一BA2mg／L+NAAO．5mg／L；ForproliferationofD．bulbifera
stemwithabud，thebestsucroseconcentrationis30g／Lsucrose，thebestculturemodeisliquidcultureI
ThebestrootingculturemediumOfD．bulbiferastemwithabudisMS+NAA2mg／L．
Keywords：DioscoreabulbiferaL．；stemwithabud；proliferation；rooting；tissuecul ure
黄独EhoscoreabulbiferaL．为薯蓣科薯蓣属植
物，是世界广布种，在中国主要分布于浙江、江西、福
建等地[1]。黄独的块茎又名黄药子、黄药脂等，性味
苦、平，具有散结消瘿、清热解毒、凉血降火的功效，
主要用于治疗各种甲状腺疾病和多种癌症，对食道
癌、胃癌、直肠癌的近期疗效确切[2]。黄独中的主要
有效成分为薯蓣皂苷、薯蓣毒皂苷、黄药子甲素以及
黄药子乙素等，均具有抗肿瘤的作用，但又都是有毒
的成分，久服易引起蓄积中毒[3]，而黄独中的水溶性
多酚类化合物则可能是止血、抑菌的有效成分[．]。因
此，寻找其中既具有抗肿瘤作用，毒性又小、安全性
好的化合物是今后研究的主要方向，而通过组培来
获取这些药用成分是一条值得探索的途径。本实验
对黄独带芽茎段的增殖和生根进行初步的研究，旨
在为黄独的药用成分提取以及黄独试管苗的工厂化
生产提供方法学参考和理论基础。
l材料与方法
1．1材料：供试黄独材料取自上饶师范学院校园内，
经上饶师范学院生命科学系何长水研究员鉴定，标本
保存于上饶师范学院生命科学系植物组织培养室。
1．2方法：将黄独带芽茎段(O．5～1．5cm)用洗洁
精浸泡0．5h，并用自来水冲洗2．5h。洗干净后在超
净工作台上用70％酒精和0．1％HgCI：分别处理
30S和15min，用无菌水各洗3次后，将茎段分
别接种到再生培养基上。再生培养基以MS为基本
培养基，附加不同质量浓度的2种激素，分别是6一BA
或KT和NAA。培养基的设置为：(1)MS(CK)；
(2)MS+KT2mg／L；(3)MS+KT2 mg／L+
NAA0．1mg／L；(4)MS+KT2mg／L+NAA0．5
mg／LI(5)MS+KT2mg／L+NAA1 mg／L；(6)
MS+KT2mg／L+NAA5mg／L；(7)MS+6一BA
2mg／L+NAA0．1mg／LI(8)MS+6-BA2 rag／
L+NAA0．5mg／L；(9)MS+6一BA2mg／L+
NAA1 mg／L，以上培养基蔗糖为30g／L，冷凝脂均
为7．5g／L，pH值为5．8～6．0。筛选最佳培养基后进
行其他单因子的实验，后续实验所用培养基中蔗糖
设计为30、60g／L，冷凝脂设计为0、7．5g／L，生根培
养基设计为：(1)MS(CK)；(2)MS+NAA0．1mg／
LI(3)MS+NAA0．5mg／L；(4)MS+NAA1rag／
L；(5)MS+NAA2mg／L；(6)MS+NAA5mg／L；
(7)MS+NAA10mg／L，pH值为5．8---6．0。培养条
件均为光照时间：12h／d，培养温度：(25士1)℃，光
强：1000～I400Ix。以上实验均在60d时统计试管
苗的新生芽数、平均根数、平均鲜质量和平均株高。
1．3统计方法：以上实验均为单因子实验，重复3
次，所有数据表示为z士s，实验数据用SPSS13．5软
件的One—WayANOVA分析后，进行t检验，P<
0．05为有统计学差异显著性。
2结果与分析
2．1 植物生长物质对黄独带芽茎段增殖的影响：
由表1可知，KT单独使用时，黄独带芽茎段也能增
殖，但与NAA组合的效果更好，尤其以KT与0．5、
1mg／LNAA组合的效果较好。值得注意的是KT
与NAA组合时，如NAA低于1mg／L则容易发生
茎段切口的愈伤化(图l-A)，但NAA达到5mg／L
时，黄独带芽茎段增殖系数下降，并且出现死亡，
6-BA与NAA组合的效果也较好，尤其以6-BA与
0．5mg／L组合的效果最好，但当NAA达到1mg／L
时，则黄独带芽茎段增殖系数下降；黄独带芽茎段增
殖的最佳培养基为MS+KT2mg／L+NAA1 rag／
L或MS+6一BA2mg／L+NAA1mg／L，其试管苗
的平均株高、平均鲜质量、平均叶片数和繁殖系数与
其他培养基上的试管苗比较均具有显著性差异
(图1一B)。
2．2蔗糖对黄独带芽茎段增殖的影响：由图2可
知，以MS+KT2mg／L+NAA1 mg／L为增殖培
养基(液体培养)，30g／L蔗糖更有利于黄独带芽茎
段的再生，60g／L蔗糖有利于黄独带芽茎段切口的

万方数据
·1558· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第10期2008年10月
囊l 植物生长调节剂对黄独带芽茎段再生的影响
Table1 EffectofplantgrowthregulatoronproliferationofD．bulbiferastemwithabud
。与一表示与对照比较在0．05和0．01水平上的差异性，下同
。and—representsdifferenceatP圈l 黄独带芽茎段切口形成大量愈伤组织(4号培养
基)(A)和檀物生长调节剂对黄独带芽茎段再生的
影响(B，从左到右依次为l～9号培养基)
Fig．1InductionofcallusofD．bulbiferastemwith
abud(No．4medium)(A)；Effectofplant
growthregulatoronproliferationofD．bul—
biferastemwithabud(1efttoright：
No．1—9media)(B)
蔗糖／(g。L-1)
圈2蔗糖对黄独带芽茎段再生的影响
Fig．2Effectofsucrosenproliferation
ofD．bulbiferastemwithabud
愈伤化，在光照培养条件下，30g／L蔗糖使试管苗
的平均株高、平均鲜质量、平均叶片数和繁殖系数与
60g／L蔗糖培养的试管苗相比较具有显著性差异
(图3)。
2．3培养方式对黄独带芽茎段再生的影响：由图4
可知，以MS+KT2mg／L+NAA1 mg／L为增殖
培养基，培养方式对黄独带芽茎段的再生也有影响，
其中最佳的培养方式为液体培养(琼脂为0g／L)。在
无冷凝脂的条件下，其试管苗的平均株高、平均鲜质
图3蔗糖对黄独带芽茎段再生的影响
(A为60g／L蔗糖，B为30g／L蔗糖)
Fig．3EffectofsucrosenproliferationofD．
bulbiferastemwithabudF60g／L
sucrose(A)，30g／Lsucrose(B)]
图4琼脂对黄独带芽茎段再生的影响
Fig．4Effectofagnronproliferation
ofD．bulbiferastemwithabud
量、平均叶片数和繁殖系数与其他质量浓度下的试
管苗相比较具有显著性差异(图5)，这可能与液体培
养有利于茎段切口代谢次生产物的扩散而不会累积
在茎段周围影响带芽茎段的增殖有关。
2．4 NAA对黄独带芽茎段生根的影响：NAA对
黄独带芽茎段的生根有显著影响，随着NAA质量
浓度增加，生根数也不断增加，但NAA质量浓度过
大时，将抑制植株生长，由表2可知，黄独带芽茎段
生根的NAA以2mg／L为好。在此质量浓度下，其试
管苗的平均株高、平均鲜质量、平均叶片数和繁殖系
数与不加NAA的试管苗相比较均具有显著性差异
(图6)。

万方数据
中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第10期2008年10月· 559·
田5琼脂对黄独带芽茎段再生的影响
(左为液体培养，右为固体培养)
Fig．5EffectofagaronproliferationofD．
bulbiferastemwithabud[1iquidculture
(1eft)andsoliculture(right)]
3讨论
带芽茎段有较强的分生能力，是最理想的外植
体，采用带芽茎段离体培养，直接萌发出芽，未经过
愈伤组织阶段，有利于保持该品种遗传性状稳定[5]。
激素对带芽茎段的再生起着至关重要的作用，不同
激素、不同质量浓度对带芽茎段的再生有很大影响，
而组织培养高频植株再生技术的难点和关键就是控
制各种激素在培养基中的质量浓度[6]。在植物组织
培养中，使用最多的激素是细胞分裂素类和生长素
类，控制两者的质量浓度，可以控制芽或根的分化，
细胞分裂素／生长素的比值大时有利于芽的形成，比
值小时则有利于生根[6]。本实验表明，一定质量浓度
裹2 NAA对黄独带芽茎段生根的影响
Table2 EffectofNAAonrootingofD．bulbiferastemwithabud
图6 NAA对黄独带芽茎段生根的影响(从左刭
右依次为O、0．1、0．5、l、2、5、10mg／L)
Fig．6EffectofNAAonrootingofD．bulbifera
stemwithabud(1efttoright：0，0．1，
0．5，1．2t5，and10mg／LNAA)
的6一BA或KT与适宜质量浓度NAA组合的培养
基，增殖系数高，反之，则增殖系数低。本实验的预试
验表明，IBA、IAA对黄独带芽茎段生根的影响与
NAA比较无显著差异性，并且由于IBA和IAA在
高温灭菌中容易分解，因此在正式实验中，笔者只用
NAA来进行黄独带芽茎段生根的研究，结果表明，
NAA能够促进黄独带芽茎段生根，NAA越大，生
根效果越显著，但过高质量浓度NAA抑制植株生
长，本实验结果与任华等[7]在玫瑰天竺葵上的研究
结果一致。
常规组织培养中，培养过程是在人为添加碳源
的环境条件下进行的。糖对试管苗芽的作用，主要为
其生长提供碳源和调节渗透势[8]。一定程度范围内
的糖质量浓度提高对生姜芽增殖都有明显的促进作
用，但质量浓度太高则会导致植株生长不健壮，叶片
发黄，并且对继代与生根都有抑制作用。在本实验的
预试验中，发现20、30、40mg／L蔗糖对黄独带芽茎
段增殖无显著差异性，并且50、60mg／L蔗糖对黄独
带芽茎段增殖也无显著差异性，因此在正式实验中
蔗糖设置为30、60mg／L，结果发现适宜的蔗糖质量
浓度对带芽茎段增殖有促进作用，但过高的蔗糖质
量浓度培养会抑制试管芽苗的生长，并且导致茎段
伤口愈伤化。
本实验表明，培养基中不添加琼脂有助于带芽
茎段增殖，繁殖系数高。而添加了琼脂，培养基硬化，
影响了养分的吸收，导致试管苗生长减慢，芽增殖减
少，增殖系数降低。因此，采取固体培养方式或液体
培养方式主要取决于植物种类。
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小叶黑柴胡药材的HPLC指纹图谱研究
刘部湖1’2，蔡光明¨，朱海升1，黄鹤慧1，周伟1’2，熊晗辉1’2
(1．解放军302医院全军中药研究所，北京100039I2．湖南中医药大学药学院．湖南长沙410004)
擒要：目的建立小叶黑柴胡药材的HPLC指纹图谱。方法以KromasilC。s为色谱柱，流动相为乙腈一水梯度洗
脱，体积流量1．0mL／min，检测波长260nnl。结果建立了小叶黑柴胡药材的HPLC指纹图谱，确定了14个共有
峰，共有峰相对保留时间的RSD为0．02％～1．49％，相对峰面积的RSD为6．12％～58．75％，10批样品的相似度均
大于0．9。结论本方法简单可靠，可用于小叶黑柴胡药材的质量控制。
关键词：小叶黑柴胡I高效液相色谱法l指纹图谱；相似度评价
中圈分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)10—1560—03
HPLCFingerprintofBupleurumsmithiivar．parvifolia
LIUE—hul”，CAIGuang—min91，ZHUHai—shen91，HUANGHe—huil，ZHOUWeil”，XIONGHan—huil’2
(1．302HospitalofPLA＆PLAInstituteofChineseMateriaMedica，Beijing100039，ChinaI2．SchoolfPharmacy，
HunanUniversityofTradilionalChineseMedicine，Changsha410004，China)
Abstract：ObjectiveToestablishtheHPLCfingerprintofBupleurumsmithiivar．parvifolia．
MethodsKromasilC18columnwasused，withacetonitrileandwaterasthemobilephaseingradient
mode，theflowratewas1．0mL／min。andthedetectionwavelengthwas260nm．ResultsTheHPLC
fingerprintofB．smithiivar．parvifoliawasest blishedl T rew re14commonpeaksinthefingerprint
oftensamples．TheRSDoftherelativerelentionmeofthecommonpeakswas0．02％一1．49％andthe
RSDoftherelativepeakareawas6．12％一58．75％．Thesimilarityoftenbatchesofsampleswasover
0．9．ConclusionThemethodissimple，reliable，andcanbeuseforthequalitycontrolofB．smithii
var．parvifolia．
Keywords：BupleurumsmithiiWolffvar．parvifoliaShanetY．Li；HPLC；fingerprintl similarity
evaluation
小叶黑柴胡BupleurumsmithiiWolffvar．
parvifoliaShanetY．Li主要分布于我国的青海、
宁夏、西藏等地，并作柴胡药用，在青海为商品柴胡
的主流品种，具有解热、抗炎、镇痛、保肝和增强免疫
的作用[1]，入药部位主要为干燥地上部分，其化学成
分主要包括黄酮及其苷类(如槲皮素、芦丁等)、木脂
素类、香豆素类、少量皂苷类等。由于受气候、生态环
境的影响，不同生长地区的小叶黑柴胡药材中所含
，的成分差别较大，如果只针对其中某个特定有效成
分或指标成分进行定性、定量分析，不能够有效的控
。
制药材质量。为进一步开发利用小叶黑柴胡这一丰
富资源，笔者采用高效液相色谱法建立了小叶黑柴
胡药材的指纹图谱，并对10批小叶黑柴胡药材进行
了相似度评价，为药材的质量控制提供了更为科学
有效的方法。
1仪器与试剂
HPll00高效液相色谱仪、四元泵、二极管阵列
检测器、HP色谱工作站(美国安捷伦公司)，KQ一
收稿日期：2008·01·02
作者简介：刘鄄湖(1981一)．男。湖南娄底人．硬士研究生，主要从事中药新药研究与开发工作．Tel，(010)66933324
E—mail：shenqian01@163．corn
·通讯作者蔡光明Tel；(010)66933323E—maillcgml004@rip．sina．corn

万方数据
黄独带芽茎段增殖和生根的初步研究
作者： 洪森荣， 尹明华， 赵美娜， HONG Sen-rong， YIN Ming-hua， ZHAO Mei-na
作者单位： 上饶师范学院生命科学系,江西,上饶,334001
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(10)
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200810036.aspx