全 文 ：宁夏枸杞黄酮类化合物HPLC 指纹图谱研究
张自萍1, 廖国玲1, 2, 李弘武1Ξ
(11 宁夏大学 西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室, 宁夏 银川　750021;
21 宁夏医学院 药检系, 宁夏 银川　750004)
摘　要: 目的　建立宁夏枸杞黄酮类化合物高效液相色谱指纹图谱, 为鉴别不同来源的宁夏枸杞提供依据。方法
以 10 个宁夏不同产地的宁夏枸杞主栽品种“宁杞É 号”样品建立枸杞黄酮类化合物指纹图谱共有模式, 采用“中药
色谱指纹图谱相似度评价系统”软件进行数据处理, 对15 个不同来源的枸杞样品进行了分析。结果　本研究建立的
方法重现性较好; 16 个特征峰构成了宁夏枸杞黄酮类化合物色谱指纹图谱的特征; 不同产地、不同品种的枸杞样品
黄酮类化合物组成与量存在差异。结论　所建立的枸杞黄酮类化合物的H PL C 指纹图谱对不同产地、不同品种枸
杞的鉴别具有参考价值。
关键词: 宁夏枸杞; 黄酮类化合物; 高效液相色谱; 指纹图谱; 共有模式; 相似度
中图分类号: R 28217　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2008) 01 0103 03
HPLC F ingerpr in t of f lavono ids from Lycium ba rba rum
ZHAN G Zi2p ing1, L IAO Guo2ling1, 2, L I Hong2w u1
(11 Key L abo rato ry of M in istry of Education fo r P ro tection and U tilizat ion of Specia l B io logical R esources
in W estern, N ingx ia U niversity, Y inchuan 750021, Ch ina; 21 D epartm ent fo r D rug Contro l,
N ingx ia M edical Co llege, Y inchuan 750004, Ch ina)
Abstract: Objective　To estab lish ch rom atograph ic fingerp rin t of f lavono ids from L y cium ba rba rum
by H PL C and dist ingu ish the F ructus L y cii from differen t hab ita ts1M ethods　T he m u tual mode w as estab2
lished depending on ten F ructus L y cii samp les from differen t grow ing areas in N ingx ia1 T he so lf tw are
“Sim ilarity Evaluat ion System fo r Ch rom atograph ic F ingerp rin t of Ch inese M ateria M edica”w as app lied to
analyzing 15 F ructus L y cii samp les from differen t hab ita ts1 Results　T he estab lished ch rom atograph ic fin2
gerp rin t m ethod had good repeatab ility; 16 peak s are characterist ic of H PL C fingerp rin ts of f lavono ids and
flavono ids of F ructus L y cii from differen t hab ita ts w ere qu ite d ifferen t in con ten t and con st ituen t1 Conclu-
s ion　T h is ch rom atograph ic fingerp rin t spectrum of flavono ids cou ld be u sed to dist ingu ish F ructus L y cii
from differen t hab ita ts1
Key words: L y cium ba rba rum L 1; f lavono ids; H PL C; fingerp rin t; m u tual mode; sim ilarity
　　宁夏枸杞L y cium ba rba rum L 1 是我国传统名
贵药材, 具有增强免疫力、抗氧化、抗肿瘤等多方面
的药理作用, 集中种植在宁夏、新疆、河北、内蒙等地
区, 以宁夏所产枸杞最为道地[1 ]。然而, 如何有效鉴
别、评价道地宁夏枸杞尚缺乏科学合理的方法。色谱
指纹图谱技术在中药质量控制方面的应用[2, 3 ] , 为枸
杞鉴定开辟了新思路。梁逸曾等[4 ]采用H PL C 法对3
个枸杞子样品的甜菜碱、类胡萝卜素提取液进行了
指纹图谱研究。黄酮类化合物是枸杞中主要的抗氧
化活性成分之一[5 ] , 张颖等[6 ]研究表明不同产地枸
杞黄酮的量有显著差异。本实验以10 个宁夏不同产
地的宁夏枸杞主栽品种“宁杞É 号”建立枸杞黄酮类
化合物指纹图谱共有模式, 探讨枸杞黄酮类化合物
色谱指纹图谱用于不同产地、不同品种枸杞鉴定的
可行性。
1　仪器和试剂
主要仪器有CBM —20A 高效液相色谱仪(日本岛
津公司) , SPD—20A 检测器, L C2So lu t ion 色谱工作
站, M illi2Q A 10 型纯水仪 (M ILL IPOR E ) , KQ —
500B 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。主
·301·中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 1 期 2008 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2007203226
基金项目: 教育部科学技术项目 (204148) ; 宁夏大学自然科学基金项目; 宁夏自然基金重大项目 (2003ZD 01)
作者简介: 张自萍 (1970—) , 女, 博士, 宁夏大学副教授, 硕士生导师, 主要从事天然产物研究。
T el: (0951) 2062813　E2m ail: zip ingzhang@ 163. com
要试剂中甲醇、乙腈为进口色谱纯, 其他均为分析纯。
绿原酸、芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所。
本研究以宁夏、新疆、内蒙古、河北等宁夏枸杞
主产区大面积种植的优质品种“宁杞É 号”2005 年
夏季盛果期果实及参比品种“大麻叶”和“宁杞Ê 号”
同期的果实为材料, 为尽可能减小田间管理水平对
枸杞品质的影响, 在采样时尽量选择枸杞树龄、植株
密度、水肥条件、枝条修剪水平和成熟度一致的样
品, 枸杞样品由宁夏农科院枸杞研究所采集, 经宁夏
枸杞工程研究中心枸杞研究所安巍高级工程师鉴
定。枸杞样品来源见表1。
表 1　枸杞样品来源
Table 1　Or ig in s of samples
样品号 来　源 样品号 来　源
1 宁夏银川南梁农场 9 宁夏同心河西镇
2 宁夏银川枸杞研究所 10 宁夏中宁舟塔乡
3 宁夏中宁恩和乡 11 新疆精河县托里乡
4 宁夏中卫镇锣乡 12 内蒙杭锦后旗沙海乡
5 宁夏固原黑城乡 13 河北巨鹿县
6 宁夏惠农路家营 14 大麻叶
7 宁夏同心清水河 15 宁杞Ê 号
8 宁夏银川园林场
2　方法和结果
211　色谱分析条件: 通过对波长、流动相、体积流
量、洗脱方式的优化确定了枸杞黄酮类化合物的色
谱分析条件为岛津V P2OD S (250 mm ×4. 6 mm , 5Λm ) 色谱柱; 流动相A : 乙腈2水2醋酸 (5∶94. 5∶
0. 5) ; 流动相B: 乙腈2水2醋酸 (70∶29. 5∶0. 5) ; 梯
度洗脱; 体积流量0. 5 mL öm in; 检测波长342 nm ; 柱
温30 ℃; 进样量5 ΛL。
212　样品溶液制备
21211　对照品溶液的制备: 精密称取绿原酸、芦丁
对照品适量于10 mL 量瓶中, 少量甲醇溶解, 50% 乙
醇定容, 分别制成 0. 2 m gömL 的绿原酸、芦丁对照
品贮备液, 对照品溶液由此稀释得到。
21212　供试品溶液的制备: 精密称取过 16 目筛的
枸杞颗粒 2. 000 g, 石油醚回流脱脂, 残渣中加入
80% 乙醇 30 mL , 60 ℃超声提取两次, 每次 30 m in,
滤过, 合并滤液, 减压浓缩, 浓缩液经H PD 2600 型大
孔树脂, 蒸馏水洗脱除去水溶性杂质后, 50% 乙醇洗
脱, 收集乙醇洗脱液为供试品溶液。
213　精密度试验: 取 1# 样品的供试品溶液, 连续进
样5 次, 记录色谱图, 其共有峰相对保留时间R SD <
0. 2% , 相对峰面积R SD 为0. 5%～ 3. 0% , 表明仪器
精密度良好。
214　稳定性试验: 取 1# 样品的供试品溶液, 分别在
0、2、4、8、12 h 进样, 记录色谱图, 其共有峰相对保
留时间R SD < 0. 2% , 相对峰面积R SD 为 111%～
218% , 表明供试品在12 h 内稳定。
215　重现性试验: 制备 5 份 1# 样品的供试品溶液,
进样并记录色谱图, 其共有峰相对保留时间R SD <
0. 7% , 相对峰面积R SD 为1. 6%～ 4. 3% , 符合指纹
图谱要求, 表明方法重现性良好。
216　枸杞黄酮类化合物指纹图谱: 对 15 个枸杞样
品进行H PL C 分析, 所有组分均在 55 m in 内洗脱出
柱, 1～ 12 号样品存在16 个共有特征峰 (占总峰面积
的90% 以上) , 典型色谱图见图1。对照品绿原酸保留
时间为29. 94 m in, 芦丁为46. 37 m in, 与供试品16 个
共有特征峰中的12 号和16 号峰保留时间一致, 确定
12 号和16 号峰分别为绿原酸和芦丁。选择16 号峰
为内参照峰。
217　数据处理: 使用国家药典委员会“中药色谱指
纹图谱相似度评价系统”软件进行数据处理。以宁夏
不同产地的10 个“宁杞É 号”样品色谱图为基础, 计
算机辅助计算得到宁夏枸杞黄酮类化合物色谱特征
的对照指纹图谱即共有模式, 以此模式为基准, 以夹
角余弦和相关系数作为测度, 计算每个样品色谱图
与之比较的相似度, 结果见表2。
图 1　3 号样品色谱图
F ig. 1　Chromatogram of sample No13
表 2　15 个枸杞样品相似度评价结果
Table 2　Sim ilar ity of 15 samples of F ructus Lycii
样品号 夹角余弦 相关系数 样品号 夹角余弦 相关系数
1 0. 98 0. 97 9 0. 97 0. 96
2 0. 96 0. 92 10 0. 98 0. 95
3 0. 99 0. 97 11 0. 98 0. 95
4 0. 92 0. 89 12 0. 90 0. 79
5 0. 98 0. 96 13 0. 84 0. 60
6 0. 98 0. 95 14 0. 82 0. 82
7 0. 97 0. 91 15 0. 82 0. 79
8 0. 98 0. 94
3　讨论
311　流动相的选择: 本实验过程中, 选择了甲醇2
0. 4% 磷酸水溶液和乙腈20. 5% 醋酸两种流动相体
系, 进行梯度洗脱试验 (0～ 14 m in, 100%～ 86%A ;
14～ 40 m in, 86%～ 70%A ; 40～ 55 m in, 70%～ 0%
A )。结果表明: 乙腈20. 5% 醋酸为流动相梯度洗脱,
在55 m in 内能对组分进行很好地分离。
·401· 中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 1 期 2008 年 1 月
312　检测波长选择: 本实验在200～ 700 nm 进行波
长扫描, 经筛选后比较了样品在 256、286、320、342、
370 nm 的色谱图, 发现342 nm 处色谱峰信息丰富,
各峰分离情况良好, 各组分均有较大吸收, 最后确定
色谱分析波长为342 nm。
313　样品指纹图谱分析: 从各样品色谱图可以看
出, 15 个样品的色谱峰都有以 11 号峰为分界线, 呈
左侧峰密集右侧峰稀疏的分布特征。“宁杞É 号”样
品中, 河北样品有12 个共有峰 (缺少10、13、14、15 号
峰) ;“大麻叶”品种有 13 个共有峰 (缺少 4、8、13 号
峰) ;“宁杞Ê 号”品种有 14 个共有峰 (缺少 3、4 号
峰)。值得一提的是河北样品2 号色谱峰为所有样品
中最高, 并且40 m in 处出现了一个在其他样品中极
低或无的色谱峰, 可认为该色谱峰是河北样品特有
的特征峰。从芦丁和绿原酸色谱峰面积来看:“宁杞É 号”样品中宁夏固原黑城乡、宁夏中宁恩和乡、宁
夏银川南梁农场以及新疆样品中芦丁和绿原酸峰面
积均较高, 内蒙和河北与宁夏其他地区“宁杞É 号”
枸杞样品中芦丁和绿原酸峰面积相差不大;“大麻
叶”和“宁杞Ê 号”枸杞品种中芦丁和绿原酸峰面积
较低; 说明不同产地、不同品种枸杞黄酮类化合物指
纹图谱共有峰的相对保留时间基本一致, 相对峰面
积存在显著的差异。
314　枸杞样品相似度比较分析: 对相似度计算结果
(表2)分析可知, 样品余弦夹角和相关系数计算结果
基本一致。以10 个宁夏不同产地的“宁杞É 号”样品
建立的共有模式为对照指纹图谱, 与15 个样品进行
比较,“宁杞É 号”样品中, 宁夏不同产地的枸杞样品
间有较好的相关性, 但也存在差别, 宁夏中卫样品与
共有模式的相关性略低; 新疆样品与共有模式的相
关性较好; 内蒙样品和河北样品与共有模式相关性
较低。此外,“大麻叶”和“宁杞Ê 号”与“宁杞É 号”品
种间的相关性低。说明不同产地、不同品种间枸杞黄
酮类化合物的组成存在差异, 也表明不同的气候条
件和生长条件导致了相同品种在不同产地产生了化
学成分上的差异。
枸杞子具有多种药理作用, 所含有效成分很多,
仅从某一类成分来评价不同产地、不同品种枸杞的
质量不够全面。但所建立的的宁夏枸杞黄酮类化合
物H PL C 指纹图谱能为不同产地、不同品种枸杞的
鉴定提供一定的参考, 也为进一步研究宁夏枸杞的
道地性奠定了基础。
参考文献:
[ 1 ]　白寿宁1 宁夏枸杞研究 [M ]1 银川: 宁夏人民出版社, 19981
[ 2 ]　谢培山1 中药制剂色谱指纹图谱鉴别 [J ]1 中成药, 2000, 22
(6) : 39123941
[ 3 ]　周玉新1 中药指纹图谱研究技术 [M ]1 北京: 化学工业出版
社, 20021
[ 4 ]　卢红梅, 梁逸曾1 枸杞的高效液相色谱指纹图谱 [J ]1 中南大
学学报: 自然科学版, 2005, 36 (2) : 24822521
[ 5 ]　黄元庆, 鲁建华, 沈　泳, 等1 枸杞总黄酮类化合物抗脂质过
氧化研究 [J ]1 卫生研究, 1999, 28 (2) : 11521161
[ 6 ]　张　颖, 张立睦, 周红英, 等1 不同产地枸杞子中黄酮含量的
测定 [J ]1 中国中医药科技, 2004, 11 (2) : 10221031
天山雪莲HPLC 指纹图谱研究
欧　元1, 2, 袁晓凡13 , 徐春明1, 2, 赵　兵1, 王晓东1, 王玉春1Ξ
(11 中国科学院过程工程研究所 生化工程国家重点实验室, 北京　100080; 21 中国科学院研究生院, 北京　100049)
摘　要: 目的　建立天山雪莲药材的H PL C 指纹图谱, 为雪莲药材的快速质量控制提供依据。方法　以绿原酸、紫
丁香苷、芦丁、木犀草素、芹菜素5 种对照品为对照, 采用H PL C 法, 测定了10 批次不同产地天山雪莲的色谱图, 确立
参照指纹图谱。色谱条件: 色谱柱D iamonsilTM C18 (250 mm ×4. 6 mm , 5 Λm ) , 甲醇2水 (0. 8% 醋酸, 0. 2% 三乙胺, pH
3. 5～ 4. 0)线性梯度洗脱, 柱温30 ℃, 检测波长270 nm , 记录时间30 m in, 体积流量1. 0 mL öm in。结果　标示出天山
雪莲的 13 个特征指纹峰。结论　该方法准确、重现性好, 为天山雪莲的指纹图谱质量控制提供了参考。
关键词: 天山雪莲; 指纹图谱; H PL C; 相似度
中图分类号: R 28217　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2008) 01 0105 04
·501·中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 1 期 2008 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2007204212
基金项目: 国家自然科学基金项目 (20506027) ; 中国科学院西部行动高新技术项目 (KGCX22SW 2506)
作者简介: 欧　元 (1982—) , 女, 河北石家庄市人, 硕士研究生, 主要研究方向为中药指纹图谱。3 通讯作者　袁晓凡　T el: (010) 62574372　E2m ail: yuanxf99@yahoo. com