全 文 ：道的 CCI[ 8] 模型特点相吻合。本实验采用该模型进
行 GV 对神经病理性疼痛的镇痛作用研究, 结果表
明, GV 具有抗神经病理性疼痛所致的热痛敏作用。
综上所述, GV 具有显著对抗小鼠神经病理性
疼痛作用与炎性疼痛作用。GV 的结构与钩吻素
甲、N甲基钩吻素甲极为相似, 因此推测 GV 的半
数致死量可能与钩吻素甲、N甲基钩吻素甲相近
(钩吻素甲和 N甲基钩吻素甲对小鼠的 LD50分别
为 56 2、63 1 mg/ kg[ 10] )。但本实验研究表明, GV
抗炎性疼痛第二相痛反应与抗神经病理性痛反应的
ED 50分别为 4 59、3 84 mg/ kg ,提示 GV 用于治疗
慢性疼痛的治疗指数远大于钩吻总生物碱, 安全性
强,具有开发应用前景。其作用机制有待于进一步
研究。
参考文献:
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社, 2003
苦参碱对小鼠 Lewis 肺癌的影响
郭 斌1 ,申洪波2 , 李 智3
收稿日期: 20100409
基金项目:辽宁省科技厅第二批药物源头创新研究课题 ( 2006226031217)
作者简介:郭 斌( 1969 ) ,男,辽宁锦州人,副主任药师,博士,硕士生导师,辽宁医学院附属第一医院药学部主任,主要从事药用资源
开发和筛选研究,已发表论文 5篇。Tel: ( 0416) 4197079 Email : jygu obin@ 126. com
( 1 辽宁医学院附属第一医院, 辽宁 锦州 121000; 2 辽宁医学院附属第二医院,辽宁 锦州 121000;
3 中国医科大学 天然药物研究室, 辽宁 沈阳 110001)
摘 要:目的 研究苦参碱对小鼠 Lew is 肺癌的作用,并初步探讨其作用机制。方法 建立小鼠 Lew is 肺癌模型,
实验分为模型组、不同剂量苦参碱组、环磷酰胺组,计算原发瘤抑制率及肺转移灶数;采用 West ern blott ing 检测原
发瘤组织基质金属蛋白酶 ( MM P2、MMP9) 蛋白表达。结果 苦参碱各剂量组小鼠原发瘤抑制率、肺转移灶数
与模型组比较差异显著 (P < 0 05、0 01) ; 与模型组比较,苦参碱各剂量组 MMP2、MMP9 蛋白表达水平显著降
低 ( P< 0 01)。结论 苦参碱明显抑制小鼠 Lew is 肺癌原发瘤的生长和转移, 可能与其抑制肿瘤组织 MM P2 和
MMP9 蛋白表达有关。
关键词:苦参碱; Lew is 肺癌; M MP2; MM P9
中图分类号: R286 91; R979 1 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2010) 12 2037 03
苦参碱 ( matrine) 是从苦豆子中提取的一种生
物碱。多年来的研究证明, 苦参碱具有广泛的药理
学作用,除了具有抗心律失常、抗炎、抗病毒等作用
外,体内外的抗肿瘤活性受到极大关注[ 14] 。研究表
明,苦参碱能抑制人肺癌 SPCA1 细胞的生长和人
肺癌 A549 细胞的增殖, 抑制作用呈浓度依赖
性[ 57] ,但仅局限于体外研究。本实验研究了苦参碱
对小鼠 Lew is 肺癌的抑制作用, 进一步研究其对
Lew is 肺癌原发瘤组织基质金属蛋白酶 2 ( M atrix
metalloproteinases 2, MMP2) 和基质金属蛋白酶
9 ( MMP9) 蛋白表达的影响,以探讨苦参碱对实体
瘤的抑制作用,并初步揭示其体内抗癌作用的分子
机制,为苦参碱应用于肺癌临床治疗提供实验基础
及理论依据。
1 材料
1 1 试药: 苦参碱 (自制,质量分数 98 3%) ;环磷
2037 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
酰胺 ( CT X) , 江苏恒瑞医药公司, 批号 07041721;
兔抗鼠 MMP2、MMP9 单克隆抗体, 羊抗兔 IgG,
购自武汉博士德生物工程有限公司; 显色剂, Sigma
公司。
1 2 动物与瘤株: C57BL/ 6J 小鼠, 清洁级, 体质量
18~ 22 g,由中国医学科学院实验动物研究所提供,
动物合格证号 SCXK (京) 20040001; 瘤株: 小鼠
Lew is 肺癌细胞株, 由中国医学科学院药物研究所
提供。
1 3 仪器: PVDF 膜, M illipore 公司; 滤纸, What
man 公司; 电泳仪,美国 EC 公司。
2 方法
2 1 小鼠 Lew is 肺癌模型制备及分组: 将接种
Lew is 肺癌 10~ 14 d 的 C57BL/ 6J 荷瘤小鼠,脱颈
椎处死,无菌冰浴条件下剥离瘤组织,选取生长良好
的肿块,按肿瘤组织与生理盐水 1! 3 比例匀浆, 筛
网滤过,调细胞数为 1 ∀ 107。另取 50 只小鼠,雌雄
各半,随机分为 5组: 模型组, 苦参碱高、中、低剂量
( 150、100、50 mg / kg ) 组, 环磷酰胺 ( 20 mg / kg )
组。各组小鼠于右腋皮下接种肿瘤匀浆液, 0 2
mL/只, 接种后第 2天开始 ip 给药,隔日给药 1次,
连续 21 d。末次给药 24 h 后脱颈椎处死各组小鼠,
取右腋皮下肿块,并称质量, 计算抑瘤率[抑瘤率=
(模型组平均瘤质量- 给药组平均瘤质量) /模型组
平均瘤质量∀ 100% ]。完整取出双肺, 苦味酸固定,
解剖显微镜下计数双肺表面的转移灶数。
2 2 Western blot t ing 检测 Lew is 肺癌组织
MMP2和 MMP9蛋白的表达:将各组 Lew is肺癌
原发瘤组织粉碎研磨成匀浆, 提取总蛋白,加碱性铜
测吸光度,定量蛋白,统一调整样品蛋白质量浓度为
500 g/ mL, 取 20 L 样品液经 SDSPAGE 电泳后
转膜, 脱脂奶粉封闭过夜, 一抗 ( 1 ! 200)、二抗
( 1! 2 000) 各孵育 3 h;显色剂显色, act in 作为内
参进行检测。以条带的大小和深浅判定 MMP2、
MMP9蛋白的表达量, Chem Imager 5500 凝胶成
像图像分析系统测定各条带灰度值,各组产物灰度
值与 act in 灰度值比值作为各组产物的相对值[ 8] 。
2 3 统计分析:采用 SPSS 13 0 软件统计包, 样本
均数比较采用方差分析 ANOVA。
3 结果
3 1 苦参碱对 Lew is 荷瘤小鼠瘤质量及肺转移的
影响: 用药 21 d 后,苦参碱各剂量组瘤质量均显著
低于模型组 ( P< 0 01、0 05) ;高、中、低剂量组抑瘤
率分别为 39 44%、22 65%、11 45%。模型组肺转
移灶大而多,甚至形成融合灶;苦参碱各剂量组肺转
移灶小而少,差异非常显著 ( P< 0 01) ,见表 1。
表 1 苦参碱对 Lewis 荷瘤小鼠瘤质量及肺转移的影响
( x# s)
Table 1 Effect of matrine on weight of tumor and number
of lung metastasis focuses in Lewis tumor bearing
mice ( x# s)
组别 剂量/ ( mg kg- 1) 动物/只 瘤质量/ g 抑瘤率/ % 肺转移灶数
模型 - 9 3 93 # 0 57 - 13 68 # 1 96
苦参碱 150 10 2 38 # 0 51* * 39 44 5 45 # 2 56* *
100 10 3 04 # 0 49* * 22 65 7 80 # 2 93* *
50 9 3 48 # 0 56* 11 45 9 76 # 1 98* *
环磷酰胺 20 9 1 54 # 0 42* * 60 81 0 17 # 0 41* *
与模型组比较: * P < 0 05 * * P < 0 01
* P < 0 05 * * P< 0 01 v s m odel group
3 2 苦参碱对 Lew is 荷瘤小鼠瘤组织 MMP2、
MMP9 蛋白表达的影响:与模型组比较, 随着苦参
碱质量浓度的增加, Lew is 肺癌肿瘤组织 MMP2、
MMP9 蛋白条带逐渐变窄、颜色逐渐变淡,提示蛋
白表达逐渐变弱 (图1) ;与模型组比较,苦参碱各剂
量组 MMP2、MMP9 相对灰度值明显减少 ( P<
0 01) , 见表 2。结果表明, 苦参碱对 Lew is 肺癌瘤
组织 MMP2、MMP9 蛋白的表达具有抑制作用。
图 1 苦参碱对 Lewis 荷瘤小鼠瘤组织 MMP2 和 MMP9
蛋白表达的影响
Fig. 1 Effect of matrine on MMP2 and MMP9 protein
expression in Lewis tumor bearing mice
表 2 苦参碱对 Lewis 荷瘤小鼠瘤组织 MMP2
和 MMP9 蛋白表达的影响 (x # s, n= 8)
Table 2 Effect of matrine on MMP2 and MMP9
protein expressions of Lewis tumor
bearing mice (x # s, n= 8)
组 别 剂量/ ( mg kg - 1 ) MMP2 MMP9
模型 - 1 67 # 0 08 1 39 # 0 09
苦参碱 150 0 48 # 0 12* * 0 43 # 0 07* *
100 0 72 # 0 04* * 0 96 # 0 11* *
50 1 21 # 0 10* * 1 18 # 0 08* *
环磷酰胺 20 0 68 # 0 09* * 0 84 # 0 09* *
与模型组比较: * * P< 0 01
* * P < 0 01 v s model gr ou p
2038 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
4 讨论
本实验结合动物模型, 研究苦参碱对小鼠
Lew is 肺癌的抑瘤作用, 并初步探讨其抗肿瘤作用
机制,为苦参碱治疗肺癌的临床应用提供实验基础
及理论依据。结果表明,苦参碱可抑制荷 Lew is 肺
癌的 C57BL/ 6J 小鼠原发瘤生长, 使肿瘤肺转移灶
减少,且具有剂量依赖性。
癌细胞从原发灶脱落后, 必须突破细胞外基质
( ext racellular matrix , ECM ) 和基膜组成的结构屏
障,才能向周围组织侵袭或进入血液循环及淋巴系
统,进一步向远处转移 [ 9]。许多研究表明, MMPs
在正常组织没有或仅有较弱的表达,恶性肿瘤细胞
中 MMP 的表达明显高于良性肿瘤和正常组织。一
般认为与肿瘤浸润和转移关系最密切的是 MMP2
和 MMP9[ 10]。此两种酶以酶原形式合成, 在分泌
出细胞的过程中被激活, 能够降低、破坏靠近肿瘤表
面的细胞外基质中的∃型、%型胶原和明胶, 然后肿
瘤细胞沿着缺失的基底膜向周围组织浸润, 最终导
致肿瘤的侵袭和转移[ 11] 。应用 Western blot ting
技术检测苦参碱对 Lew is 肺癌 MMP2、MMP9 蛋
白表达的实验结果表明, 苦参碱能够显著抑制
C57BL/ 6J小鼠 Lew is 肺癌原发瘤组织 MMP2 和
MMP9蛋白表达, 并有明确的量效关系, 可能是苦
参碱抑制 C57BL/ 6J小鼠 Lew is肺癌增长和转移的
机制之一。
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胃肠安丸对腹泻型肠易激综合征大鼠的止泻作用及其机制研究
胡 瑞1 ,张桐茂2 , 唐 方1
收稿日期: 20100227
基金项目:天津市科技创新专项基金项目 ( 06FZZDSH 00405)
作者简介:胡 瑞( 1970 ) ,女,天津市人,副主任医师,医学硕士,从事消化系统、心血管系统疾病医疗、教学及科研工作。
T el : 18602612998 Emai l: h ur0219@ 126. com
( 1 天津医科大学总医院 中医科, 天津 300052; 2 天津医科大学第二医院 中医科, 天津 300211)
摘 要:目的 探讨胃肠安丸对腹泻型肠易激综合征 ( IBSD) 大鼠止泻作用及其机制。方法 采用高乳糖饲料喂
饲与束缚应激相结合的方法制备 IBSD 大鼠模型,通过比较各组大鼠体质量增长率、腹泻指数, 确定最佳用药周
期;硝酸还原酶法检测血清 NO 水平, 紫外分光光度计检测小肠黏膜 LDH、MDH 活性 ,从而确定最佳剂量; 胃肠安
丸以最佳剂量、最佳用药周期作用于 IBSD 大鼠,利用高效液相色谱法检测大鼠尿液中乳果糖、甘露醇水平,并计
算两者比值 ( L / M ) ,利用生理信号采集处理系统采集在体空肠平滑肌运动波, 比较各组平滑肌运动振幅。结果
胃肠安丸组与模型组体质量增长率均低于对照组, 但胃肠安丸组体质量下降幅度小于模型组,用药后 4 d 两组间
差值最大,且腹泻指数差异显著 ( P < 0 05) , 确定最佳用药周期为 4 d; 模型组血清 NO 水平、小肠黏膜 LDH、
MDH 活性降低,尿液 L / M 值、平滑肌运动振幅增大, 与对照组比较有统计学意义,中剂量胃肠安丸组血清 NO 升
高、小肠黏膜 LDH、MDH 活力增强, 与模型组比较差异显著 ( P< 0 01、0 05) , 确定中剂量为最佳剂量; 中剂量胃
肠安丸组尿液 L/ M 值下降、空肠平滑肌运动振幅减小,与模型组比较差异显著 ( P< 0 05)。结论 胃肠安丸具有
止泻作用,通过增加 NO 水平、提高 LDH 和 MDH 活性、降低尿液 L / M 值及降低空肠平滑肌运动幅度,从而发挥
对 IBSD 的整体性调节作用。
2039 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月