全 文 ：·1004· 中草蔼 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月
功能不甚明了，可能参与吞噬过程中微粒摄取、吸
收、膜融合、DNA合成和转录等生理过程L4]。磷脂酶
A：活性的传统测定方法是滴定法(滴定脂肪酸)，药
品和试剂用量大，成本高，且特异性和敏感性不高，
已逐渐淘汰；采用高效液相色谱法直接测定脂肪酸
难度亦大(生成的脂肪酸需进行衍生化反应)。目前
主要采用合成底物测定PLA。的催化活性，通常是
在甘油磷脂的Sn一2位接上可显色的基团(如1一十六
酰基一2一花生四烯酰巯基一甘油一3～磷酸胆碱)、或荧光
基团(Sn一2位酰基的末端接上萘基团等)或同位素
基团(将磷脂用“C同位素标记)，或合成与磷脂结构
类似能被PLA。水解的非磷脂化合物(6-庚酸一7羟
基香豆素等)。上述底物被PLA。水解后通过紫外一
可见分光光度法测定显色的产物，或通过荧光分光
光度法测定荧光产物，或通过放射检测测定同位素
标记的产物。这些方法较为成熟，且灵敏度高，但需
要特殊标记物或专用仪器而难以推广应用西]。
本实验以磷脂酰胆碱和胆固醇等为主要材料，
采用薄膜分散法一超声一微滤膜挤出一葡聚糖凝胶柱
色谱分离一冷冻干燥联用技术制备包封羧基荧光素
的脂质体(固态脂质体便于保存)，利用PI。A：能水
解磷脂破坏脂质体造成羧基荧光素渗漏的原理，将
药物、PI。A：和复水后的液态荧光脂质体共同温孵，
采用荧光分光光度计检测从脂质体渗漏的羧基荧光
素的荧光强度，该强度反映药物对PI。A：的抑制强
度。采用本法氯丙嗪(PLA：公认抑制剂)对PLA。的
有效浓度为微摩尔级，且具有明显量效关系，与国外
报道[6]相近(国外学者以放射性标记法测定氯丙嗪
抑制猪胰腺sPLA：活性的IC。。为517ttmol／L，即
O．16mg／mL)，表明该方法是可行的。目前甘草酸
对PLA。的抑制作用已得到国内外学者的证实[7]。
本实验的研究结果表明芍药甘草汤、甘草和甘草酸
对PI，A：活性均具有较强的抑制作用，且量效关系
明显，但白芍抑制作用较弱，芍药苷几乎无抑制作
用。在相同剂量条件下芍药甘草汤抑制PI。A。活性
强于单味甘草和白芍，说明甘草和自芍具有协同效
果。甘草酸是芍药甘草汤抑制磷脂酶A。活性的重
要成分，其他活性成分有待进一步研究。
参考文献：
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大鼠灌胃棉花皮素一8一D一葡萄糖醛酸苷后血清中药物的分析
许彤彤，王 郡，郭 慧，赵玉英，张庆英。 ．
(北京大学医学部药学院天然药物学系天然药物与仿生药物国家重点实验室，北京 100083)
摘要：目的研究大鼠灌胃棉花皮素一8一O一葡萄糖醛酸苷后血清中药物的分析检测方法。方法 大鼠灌胃250
mg／kg棉花皮索一8一O一葡萄糖醛酸苷，收集血样，进行适当的前处理，采用HPI，c—DAD、LC—MS“法对血清样品进行
检测。结果HPI。C—DAD和LC—MS“丽种方法均能检测到血清中的棉花皮素一8一D一葡萄糖醛酸苷，但未能检测到其
代谢产物。血清样品前处理中的离心转速、pH值、纯化方法对血清中棉花皮素一8一O一葡萄糖醛酸苷的分析检测有明
显影响。结论 建立了大鼠灌胃棉花皮索一8一。一葡萄糖醛酸苷后血清中药物的快速灵敏的分析检测方法，为棉花皮
素一8一。一葡萄糖醛酸苷的进一步药动学研究提供参考依据。
关键词：棉花皮素一8一。一葡萄糖醛酸苷；高效液相色谱；高效液相色谱一质谱联用
中圈分类号：R285．61；R286．02文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)07—1004—04
收藕日期：2007—09—07
基金项目：国家自然科学基金重点资助项目(20432030)；长江学者和创新团队计划资助项目(985—2—063—112)
作者简介：许彤彤(1982～)，女，北京大学医学部生药学专业硕士研究生。E—mail：xuton9821124@163．com
*通讯作者 张庆英Tel：(010)82801725Fax：(010)82801592E—mail：qyzhang@bimu．edu．ca
万方数据
中草115ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月·1005·
Analysisofratserumaftero allyadministratinggossypetin-8-O-glucuronide
XUTong-tong，WANGBin，GU0Hui，ZHAOYu—ying，ZHANGQing—ying
(DepartmentofNaturalMedicines，StateKeyL boratoryofNaturalandBiomimeticDrugs，SchoolofPharmaceutical
Sciences，PekingUniversityHealthScienceCenter，Beijing100083，China)
Abstract：ObjectiveTodevelopananalysismethodusedforratserumafterigadministration
ofgossypetin一8一O—glucuronide．MethodsRatswereigadministratedbygossypetin一8一O—glucuronideat
thedoseof250mg／kg，thenthbloodwascollected，pre—treatedappropriately，anddetectebyHPLC—
DADandLC—MS“．ResultsInrat erum，gossypetin一8一O—glucuronidewasdetectedbybothHPLC—DAD
andLC—MS“methods．butnoothermetaboliteswerdetectedbythebothmethods．Thepre—treatmentof
samples，suchascentrifugalspeed，pHvalue，purificationmethod，couldmarkedlyaffectthedetectionof
gossypetin一8一O—glucuronideinratserum．ConclusionArapidandsensitivemethodforanalysisofrat
serumafterigadministrationofgossypetin--8—-O—-glucuronideisestablishedanthisstudywillbeusefulfor
thefurtherstudyofgossypetin一8一O—glucuronide．
Keywords：gossypetin-8-O—glucuronide；HPLC；LC—MS。
棉花皮素一8—0一葡萄糖醛酸苷(gossypetin一8一O—
glucuronide，hibifolin)为锦葵科秋葵属植物黄蜀葵
Abelmoschusmanihot(Linn．)Medicus花中最高的
黄酮类化合物[1]，为黄蜀葵花的主要活性成分之一，
具有良好的抗炎活性[z剖和神经细胞保护作用[4]。研
究药物在生物体内的吸收、分布、代谢和排泄对于阐
述药物的药效作用机制、指导其临床合理用药具有
重要的意义。本实验对大鼠灌胃棉花皮素一8—0一葡萄
糖醛酸苷后含药血清的前处理、检测以及血清药物
浓度随时间的变化等进行了研究，为进一步进行棉
花皮素一8一O一葡萄糖醛酸苷体内代谢的研究提供了
参考依据。
1仪器与试剂
配有ESI源及LCQ数据处理系统的LCQ型
液相色谱一质谱联用仪(FinniganMAT．SanJose，
CA)；日本岛津高效液相色谱仪，岛津SPDMlOAvp
PDA检测器；1／100 0电子分析天平(美国
Denvor)；winchemTMC18固相萃取柱(北京蕴泉科
技有限公司)；HPD一600大孔吸附树脂(沧州宝恩化
工有限公司)。
棉花皮素一8一D一葡萄糖醛酸苷对照品由本研究
室从黄蜀葵花中分离得到，并经1H—NMR和13C—
NMR鉴定其化学结构，面积归一化法计算质量分
数大于85％；色谱纯乙腈为美国Fisher公司产品；
HPLC用超纯水由本校实验中心制备；其他试剂均
为北京化工厂分析纯产品。
清洁级SD大鼠，体质量(200士10)g，合格证号
为：SCXK京2002—0001，雄性，购于北京大学医学部
实验动物科学部。
2方法与结果
2．1 给药药液的制备：取棉花皮素一8一O一葡萄糖醛
酸苷用蒸馏水或10％抗坏血酸水溶液配制成质量
浓度为12．5mg／mI。的药液。
2．2含药及空白血液的采集：取健康大鼠，随机分
为给药组和空白组，禁食24h后，给药组灌胃棉花
皮素一8—0一葡萄糖醛酸苷250mg／kg体质量，空白组
口服相同体积的空白对照溶液，30rain后腹主静脉
取血，收集相应的空白组和给药组血样，一20℃保
存备用。
2．3血清样品的检测：取空白组和给药组血样离心
制备空白血清和含药血清，并经适宜的前处理方法
后分别采用高效液相色谱一二极管阵列检测器
(HPLC—DAD)和高效液相色谱一质谱连用仪(LC—
MS“)进行检识。
2．3．1 HPLC—DAD分析条件：色谱柱为YMC—
PackODS—A(250mm×4．6mm，5肛m)；流动相为
乙腈(A)-pH4的醋酸／醋酸氨缓冲溶液(B)，梯度
洗脱(0min：10％A；20min：14％A；40min：20％
A；50rain：25％A)；体积流量为1mL／min；检测波
长为380nm；进样量为20pL；柱温为30℃。
2．3．2LC—MS“分析条件：色谱条件为YMC-Pack
ODS—A柱(250mm×4．6mm，5肛m)；乙腈(A)一
pH4的醋酸／醋酸氨缓冲溶液(B)梯度洗脱(omin：
10％A；20min：14％A；40min：20％A；50min：25％
A)；体积流量为1mL／min；分流人质谱体积流量为
0．25mL／min；检测波长为380nm；进样量20肛L；
柱温30℃。质谱检测条件：ESI离子源负离子扫描
模式下多级质谱全扫描进行测定；扫描范围m／z
150～800；离子源喷射电压4kV；毛细管电压30
V；管透镜补充电压20V；毛细管温度330℃；鞘气
万方数据
．1006． 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月_————————————————————————————————————————————————————一
(N2)流速：60ainu。
2．3．3血清样品的检测结果：通过与对照品对照的
方法对血清中棉花皮素一8一。一葡萄糖醛酸苷进行了
指认，结果两种方法在含药血清中都检测到了棉花
皮素一8一O一葡萄糖醛酸苷，但均未能明显检测到其代
谢产物(图1、2)，这初步说明棉花皮素一8—0一葡萄糖
醛酸苷主要以原型药的形式吸收入血。
古二二—疗——茹——茹——才矿一斌r—{o
i 、 ： 久 一
t／min
图1 空白血清(A)和含药血清(B)的HPLC色谱图
Fig．1HPLCChromatogramsofbl nkserum(A)
andserumafterigadministratiOn
ofgossypetin一8—0一glucuronide(B)
493
MS
l
317
MS
2
MS3
317
。 I h f
loo 150 200 250 300
，，l：
图2含药血清中棉花皮素一8一O一葡萄糖醛酸苷的
MS、MS2、MS3质谱图
Fig．2MS，MS2。andMS3Spectraofgossypetin一
8-0一glucuronideinratserum
2．4样品前处理方法的考察
2．4．1离心转速对血清中药物质量浓度的影响：取给
药组血样，平均分为2组，分别在8000、4500r／min
下离心10min，取上清液2．5mL，调pH值至2，加
入甲醇15mL，离心，取上清液，氮气吹干，200pL
50％乙腈复溶，所得样品分别进行HPLC检识。结
果表明8000r／rain所得样品中棉花皮素一8一。一葡萄
糖醛酸苷的峰面积明显大于4500r／min所得样品
中棉花皮素一8一O一葡萄糖醛酸苷的峰面积。
2．4．2pH值对血清中药物质量浓度的影响：取给
药组血样，8000r／min离心取上清液，平均分为5
份，每份2．5mI。，分别调pH值至2、2·5、3、3·5、4，
然后加入甲醇15mL，离心，取上清液，氮气吹干，
200肛L50％乙腈复溶，所得样品分别进行HPLC检
识。结果表明pH值为2、2．5时样品中棉花皮素一8一
O一葡萄糖醛酸苷的蜂面积明显大于pH值为3、
3．5、4时，而且pH值为2时样品中棉花皮素一8一。一
葡萄糖醛酸苷的峰面积稍大于pH值为25。
2．4．3纯化方法对血清中药物质量浓度的影响：取
给药组血样，离心取上清液，调pH值至2，然后取3
份，每份2．5mL，分别按以下方法进行处理：(1)甲
醇沉淀法：血清中加入甲醇15mL，离心，取上清液，
氮气吹干，200pL50％乙腈复溶。(2)反相Cte固相
萃取柱萃取法：以10mL甲醇和10mL水活化固相
萃取柱，然后将2．5mL含药血清经固相萃取小柱，
先用5mL水洗脱，继之以2mL60oA甲醇洗脱，收
集60％甲醇洗脱液，氮气吹干，200pL50％乙腈复
溶。(3)大孔吸附树脂法：将2．5mL含药血清经
HPD一600大孔吸附树脂小柱，分别用水，30％、80％
甲醇洗脱，收集80％甲醇洗脱液，氮气吹干，200弘L
50％乙腈复溶。所得样品分别进行HPLC检识，结
果表明甲醇沉淀法所得棉花皮素一8一O一葡萄糖醛酸
苷的峰面积最大；固相萃取柱萃取法所得样品中棉
花皮素一8一O一葡萄糖醛酸苷的峰面积较小，约为甲醇
沉淀法中峰面积的1／10；而大孔吸附树脂法所得样
品中几乎未能检测到棉花皮素一8—0一葡萄糖醛酸苷。
2．5药物溶解度对血清中药物质量浓度的影响：将
棉花皮素一8一O一葡萄糖醛酸苷分别用纯净水和10％
抗坏血酸溶解，大鼠灌胃后30min收集血样，离心，
分别取上清液2．5mL，调pH值至2，按甲醇沉淀法
处理血清样品，所得样品分别进行HPLC检识。结
果表明用10％抗坏血酸溶解后的棉花皮素一8一。一葡
萄糖醛酸苷灌胃大鼠所得血清样品中棉花皮素一8一
。一葡萄糖醛酸苷的峰面积明显大于大鼠灌胃以纯
净水溶解的棉花皮素一8—0一葡萄糖醛酸苷所得血清
样品中棉花皮素一8一。一葡萄糖醛酸苷的峰面积。
2．6血中药物质量浓度随时间的变化：大鼠灌胃棉
花皮素一8—0一葡萄糖醛酸苷后，分别在20、30、45、60
min由腹主静脉取血收集血样，8000r／rain离心，
每份取上清液2．5mL，调pH值至2，按甲醇沉淀法
处理血清样品，所得样品分别进行HPLC检识。结
果表明棉花皮素一8一O一葡萄糖醛酸苷在灌胃给药后
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月·1007·
迅速吸收，于30min左右达到最大血药浓度，之后
逐渐降低，至60min后趋于平缓。
3讨论
HPLC—DAD的分离度好，灵敏度高，而且可以
提供每个成分的全波长扫描紫外谱图，这对于血中
药物及其代谢产物结构类型的初步确认具有重要指
导意义。LC—MS。法将HPLC的高分离效能与MS
的强大结构测定功能组合起来，对被测物不需复杂
的分离富集即可获得被测物的分子结构信息，从而
能够在没有对照品的情况下对未知物进行定性分
析，为中药化学成分尤其是代谢产物的快速分析提
供了一个重要的新技术。
血清样品前处理方法对血清中棉花皮素一8一O一
葡萄糖醛酸苷的分析检测有明显影响。如高速离心
以及酸性条件有助于棉花皮素一8一O一葡萄糖醛酸苷
的解离；加入助溶剂如抗坏血酸改善棉花皮素一8一O一
葡萄糖醛酸苷溶解性后，可导致其吸收率提高，血药
浓度增加。
本实验建立了快速灵敏的棉花皮素一8一。一葡萄
糖醛酸苷含药血清的前处理与检测方法，阐明了大
鼠灌胃后血药浓度随时问的变化趋势，该研究结果
为进一步进行棉花皮素一8一。一葡萄糖醛酸苷吸收、分
布、代谢和排泄研究提供了参考依据。
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穿龙薯蓣淀粉的理化性质研究
袁毅。，张黎明r，王书军2，高文远2
(1．天津科技大学生物工程学院天津工业微生物重点实验室，天津300457，
2．天津大学药物科学与技术学院，天津300072)
摘要：目的为了充分了解穿龙薯蓣，通过多种分析方法对穿龙薯蓣淀粉物理化学性质进行研究。方法采用扫
描电子显微镜(SEM)、粒度分析仪、X一射线衍射、差示扫描量热仪(DSC)和布拉班德粘度仪。结果通过与木薯、马
铃薯淀粉的物理化学性质的比较，穿龙薯蓣淀粉显示了相对较小、椭圆形，大小不均匀的颗粒。晶体类型显示为C
型。含直链淀粉为26．3％。凝胶化温度最高，其焓值介于马铃薯与木薯。根据布拉班德图谱得知穿龙薯蓣淀粉具有
较低的黏度峰值、较高的回生值和较低的衰退值。结论穿龙薯蓣淀粉与其他相关植物的块茎类淀粉来源不同，物
理化学性质也存在明显不同。
关键词：穿龙薯蓣；淀粉；直链淀粉
中图分类号：R284．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)07—1007—04
PhysicochemicalpropertiesofstarchobtainedfromDioscoreanipponica
YUANYil，ZHANGLi—min91，WANGShu—jun2，GAOWen—yuan2
(1．TianjinKeyLaboratoryofIndustrialM crobiology，CollegeofBi technology，TianjinUniversityofScience&
Technology，Tianjin300457，China；2．CollegeofPharmac uticalsandBiotechnology，
TianjinUniversity，Tianjin300072，China)
Abstract：ObjectiveTostudythemedicinalpl ntsofDioscoreanipponica，thephysieochemicalpro—
pertiesofstarchinD．nipponicawereinvestigatedbymeansofvariousanalyticalmethods．MethodsD．
nipponicastarchwascharacterizedbyscanningelectronmicroscope(SEM)，X—raydiffraction，granulesize
analysis，DSC，andBrabenderViscographsystem．ResultsComparedwithtapiocaandpotatostarch，the
morphologyofD．nipponicastarchs owedsmallerpa ticles，ovalhaped，anddissimilargr nulesinsize．
收稿日期：2007—09—14
基金项目：天津市应用基础及前沿技术研究计划重点项目(08JCZDJCl5300)
作者简介：袁毅(198l一)，江苏大丰人，硕上生，从事天然药物开发与研究。E—mail：gavinyuen81@yahoo．corn．an
*通讯作者张黎明Tel：(022)60601274E—mail：zhanglmd@yahoo．corn．ca
万方数据
大鼠灌胃棉花皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷后血清中药物的分析
作者： 许彤彤， 王邠， 郭慧， 赵玉英， 张庆英， XU Tong-tong， WANG Bin， GUO Hui，
ZHAO Yu-ying， ZHANG Qing-ying
作者单位： 北京大学医学部药学院天然药物学系,天然药物与仿生药物国家重点实验室,北京,100083
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(7)
被引用次数： 1次

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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200807015.aspx