全 文 ：·1056· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月
在心肌缺血再灌注损伤中活化的内皮细胞释放
ICAM一1、P选择素、E选择素，三者介导白细胞与内
皮细胞的黏附。缺血再灌注后白细胞黏附和聚集于
缺血组织的血管中，大量白细胞机械性阻塞微血管
限制再灌流，活化的中性粒细胞(PMN)释放大量
的毒性物质如超氧阴离子、H。O。及酶类物质，还释
放大量炎性介质和细胞因子，吸引更多的白细胞进
入组织，形成恶性循环，从而加剧缺血再灌注损伤。
因此有效地控制白细胞内皮细胞的黏附，可能成为
预防及治疗缺血再灌注损伤的有效方法。
本研究结果表明，心肌缺血再灌注后可引起血
清中CK、LDH显著升高(尸盐酸川芎嗪低剂蹙组，阿魏酸高低剂量组及盐酸川
芎嗪配伍阿魏酸组均可降低血清CK水平，其中盐
酸川芎嗪配伍阿魏酸作用最好。阿魏酸高、低剂量组
及盐酸川芎嗪配伍阿魏酸组均可降低血清LDH水
平，其中，盐酸川芎嗪配伍阿魏酸及阿魏酸低剂量作
用显著。以上结果表明在所选单体中除川芎嗪高剂
量组外各用药组均可减轻心肌缺血再灌注损伤。
进一步通过RT—PCR法检测缺血半暗带
ICAM一1、P选择素、E选择素mRNA的表达，来探
讨各用药组减轻心肌缺血再灌注损伤的机制。与假
手术组比较，模型组E选择素、P选择素、ICAM一1
mRNA表达均升高。各用药组与模型组比较，盐酸
川芎嗪配伍阿魏酸组可以显著降低E选择素、P选
择素、1CAM一1mRNA表达。
通过本实验，优选出川芎嗪和阿魏酸的配伍，可
减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤，其作用机制之一可
能为抑制内皮细胞黏附分子ICAM一1、E选择素、P
选择素mRNA表达。
参考文献：
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积雪草苷大鼠在体肠吸收动力学研究
黄怀鹏，刘彩霞
(河北平安健康集团，河北石家庄050021)
摘要：目的研究积雪草苷的在体肠吸收机制。方法采用大鼠在体肠灌流试验，利用HPI。C法测定积雪草苷的
量，分别研究药物浓度和吸收部位对积雪草苷吸收的影响。结果 在25～100t-g／mL，小肠吸收速率常数(疋)和
表观吸收系数(尸a。。)无显著性差异。各肠段的K。和P。，，有显著性差异，十二指肠、空肠、回肠、结肠的K。分别为
(0．0298±0．0043)、(O．0365±0．0076)、(O．0335士0．0081)、(O．0070--4-0．0015)min，P。pp分别为(3．42±0．63)×
10一、(4．02±1．07)×10～、(3．79±0．77)×10一、(1．72±0．43)×10_3em·min一。结论一定范围的药物浓度对
积雪草苷的K。和P。，，无影响，其吸收机制为被动扩散。
关键词：积雪草苷；液相色谱法；肠吸收动力学
中圈分类号：R285．61 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)07—1056—03
积雪草为伞形科植物积雪草Centellaasiatica
(L．)Urban的干燥全草，积雪草始载于《神农本草
经》，具有清热利湿、解毒消肿之功效。积雪草含有积
雪草苷、羟基积雪草苷、积雪草酸、羟基积雪草酸等
多种三萜类化合物，积雪草苷为积雪草中的主要活
性成分‘“。本研究采用大鼠在体肠灌流的方法建立
收稿日期：20080115
基金项目：河北省中小企业创新基金(C7C1303192001)
作者简介：黄怀鹏(1971一)．男，河北省ff家庄市人，博士．副研究员，硕上生导师。主要研究方向为中药新药研究与开发，发表论文40余
篇，参编专著3部，获省部级奖励3项，申请专利lo项。Tel：(0311)86109893E—mail：huan971526@163．eom
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月·1057·
了积雪草苷大鼠肠吸收模型，采用HPLC法测定积
雪草苷的量，并对其吸收特性进行研究，以期为积雪
草苷制剂的研究提供生物药剂学依据。
1材料与仪器
1．1 药品与试剂：积雪草苷对照品(质量分数≥
98％，购自中新药业公司)；积雪草苷样品(实验室
自制，含积雪草苷质量分数为90．3％)；乌拉坦(进
口分装)；Kreb—ringer
7
S营养液(简称K—R液，自
配，每1000mL内含NaCl7．8g，KCl0．35g，
NaHC031．37g，Nail2P040．32g，MgCl20．02g，葡
萄糖1．40g)；乙腈(色谱纯，天津康科德科技有限
公司)；水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
1．2 仪器：高效液相色谱系仪(大连依利特
EC2000液相色谱系统及其工作站)；蠕动泵(天津
协达电子有限公司)；2—16A高速台式离心机(上
海第六医疗器械厂)；AX205电子天平(瑞士
METTLERT()I。EDo公司)。
1．3实验动物：Wistar大鼠，雄性，体质量(250士
20)g，购自河北医科大学实验动物中心。
2方法
2．1 色谱条件：色谱柱为SinoChromODS—BP柱
(200mm×4．6mm，5肛m)；流动相：乙腈一水(29：
71)；体积流量：1．0mL／min；柱温：25℃；检测波
长：203nm。分别取空白肠灌流液(K—R液)、积雪
草苷对照品溶液，以及含有药物的供试液灌流后的
收集液，0．45／am的微孔滤膜滤过，HPLC测定，色
谱图见图1。结果表明，积雪草苷的保护时间为9．6
rain，供试液的主峰位置与对照品保留时间一致，空
白肠灌流液中内源性物质对积雪草苷无干扰。
2．2标准曲线的制备：精密称取积雪草苷对照品
10mg，置25mL棕色量瓶中，加K—R液溶解并定
容至刻度，摇匀，制成400pg／mL的对照品储备液。
分别精密吸取一定量的对照品储备液置10mL棕
色量瓶中，用K—R液定容至刻度，摇匀，制成质量浓
度为10、25、50、100、200、400弘g／mL积雪草苷对照
品溶液。在上述色谱条件下，分别进样20弘L，进行
HPLC测定，记录色谱图，以质量浓度(C)为横坐
标，积雪草苷的峰面积(A)为纵坐标绘制标准曲
线，得积雪草苷标准曲线：Y一6．5277X一1．67
(，-=0．9995)。结果表明，在10～400pg／mL积雪
草苷的峰面积与质量浓度具有良好线性关系。
2．3精密度试验：按照2．2项下方法，配制25、50、
100肛g／mL的积雪草苷对照品溶液，进行日内、日
间精密度测定。以1d内不同时间测定同一样品5
A
O
图1 空白肠液(A)、积雪草苷对照液(B)和灌流后
供试液(C)的色谱图
Fig．1HPLCChromatogramsfbl nkintestinaljuice
(A)，asiaticosidereferencesolution(B)，
andsamplesolution(C)
次计算日内精密度；以连续测定5d进行分析计算
日间精密度。根据标准曲线分别计算出积雪草苷的
质量浓度，结果日内精密度RSD为1．79％、
1．21％、0．63％，日间精密度RSD分别为1．82％、
0．64％、1．65％。
2．4 回收率试验：精密称取积雪草苷对照品溶液，
用K—R液溶解并稀释成含积雪草苷25、50、100
弘g／mI。的溶液，于上述色谱条件下测定。以标准曲
线计算质量浓度，结果3个质量浓度的方法回收率
分别为98．75％、99．26％、99．37％(咒=5)。
2．5积雪草苷在空白肠灌流液中的稳定性考察：分
别截取一段长约10～15cm的十二指肠、空肠、回
肠、结肠肠段，各肠段两端分别插入塑料管并结扎，
先用37℃生理盐水将各肠段内容物冲洗干净，后
用不含药物的K—R液快速充满肠段，再以0．2mE／
rain的速度持续泵入各肠段，在出口处收集流出液，
作为空白肠循环液。用此灌流液配制25、50、100
弘g／mL的积雪草苷供试液，置于(37±0．5)℃恒
温水浴中保温，分别于0、4h取样，测定此时供试液
中剩余的积雪草苷的浓度，根据药物减少的量来考
察其稳定性。结果表明，4h内积雪草苷的量未发生
明显变化，剩余量均大于99％。说明在实验过程中，
积雪草苷在空白肠循环液中保持足够稳定。
2．6大鼠在体肠吸收实验
2．6．1在体肠吸收试验瞳矗]：试验前用供试液将管
道冲洗至出液口药物浓度与供试液浓度相同，以消
除试验过程中管路对药物吸附的影响。取禁食12h
万方数据
·1058· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月
(可自由饮水)的大鼠，ip20％乌拉坦溶液麻醉
(1．3g／rag)。将大鼠固定于恒温手术台上以保持体
温，沿腹中线打开腹腔，分离待考察肠段，长度10一--
15am，于两端切口，用预热至37℃的生理盐水将
各肠段内容物冲洗干净，插入塑料管，并结扎固定，
将伤口用浸有生理盐水的脱脂棉覆盖保湿。再取用
K—R液配制成的供试药液，先将药液快速泵入肠
段，使肠段内充满药液，后将流速降至0．2mL／
min，同时开始记时，约0．5h后，吸收达到稳定状
态。进口处用已知质量的装有供试液的小瓶进行灌
流，开始每隔15min在出口处用另一已知质量的小
瓶收集一次(同时迅速更换下一个供试液小瓶和收
集液小瓶)，称质量，计算灌入和收集的供试液的质
量。于出口处收集流出的灌流液直到105min，即分
别于记时后的45、60、75、90、105min取样。实验结
束时，将所灌流的肠段剪下，测量其长度和内径。所
取样品经0．45弘m的微孑L滤膜滤过，取续滤液20
弘L进行HPLC分析，测定积雪草苷的质量浓度。采
用质量法按下式计算药物吸收速率常数(K)和药
物表观吸收系数(P。，，)。
肛c·一番一鲁，等％。一掣
式中Qi。和Qo。。分别为肠道进出口灌流液的体积(mL)；C。。
和co。。分别为肠道进出口灌流液的质量浓度(pg／mL)}z和r
分别为被灌流肠段的长度(cm)和横截面半径(cm)；Q为
灌流速度(O．2mL／min)；y为灌流肠段的体积；K。和P。，p为
最后5个时间段(45～105min)样品的平均值
2．6．2大鼠肠道各区段吸收情况考察：用K—R液
配制积雪草苷浓度为50pg／mL供试品溶液。取大
鼠20只，随机分为4组，即十二指肠、空肠、回肠、结
肠组，依照2．6．1项下操作，考察大鼠各肠段的吸收
情况。各肠段区间划分如下：十二指肠段自幽门1
cm处开始；空肠段自幽门15cm处开始；回肠段自
盲肠上行20cm处开始；结肠段从盲肠后端开始。
不同肠段的K。值和尸。。，值结果见表1。结果表明，结
肠段的K。值和P。，，值与其他肠段比较显著减小
(P<0．05)，十二指肠、空肠和回肠的K。值和尸。。。值
之间无显著性差异(P>O．05)。说明积雪草苷的主
要吸收窗在小肠，且小肠内无明显的特定吸收部位。
2．6．3不同药物浓度对肠吸收的影响：用K—R液
配制积雪草苷浓度为25、50、100pg／mL的供试品
溶液。取大鼠5只，以空肠段为灌流部位，依照2．6．1
项下进行操作，考察药物浓度对肠吸收的影响，结果
见表2。结果表明，在25～100弘g／mL，不同药物浓
度下的K。值和尸。，，值差异无显著性(P>o．05)，说
明积雪草苷在空肠段的吸收不受自身浓度的影响，
主要以被动扩散机制进入体循环。
表1积冒草苷在大鼠不同肠段的噩和P．。值
(i±$，露一5)
Table1 K．andP”ofasiaticosideatvariousintestine
segmentsinrats(；士s，珂一5)
与对结肠肠段组比较：’P。P表2不同浓度积管草苷溶液在大鼠空肠段的瓦值
和P前值(x士s，n一5)
．Table2 K。and‰ofasiaticosideind fferent
concentrationinjejunumofrats
(；土s，n一5)
3讨论
3．1 据文献报道[4]，大鼠肠分泌液成分复杂，且随
时间延长其分泌液成分量有增高的趋势，本实验采
用HPLC法测定肠循环液中积雪草苷的量，且肠循
环液中的其他组分不干扰积雪草苷的测定。
3．2本研究采用重量法计算K。和P。仲，与加入非
吸收性标示物(nonabsorbedmarker)法相比，大大
降低了检测的工作量，且可避免标示物本身对某些
化合物的肠道转运或分析的干扰和放射性标示物对
人体安全性影响。
3．3积雪草苷在大鼠肠道内吸收较差，其原因可能
是积雪草苷为三萜类大分子物质，不易透过生物膜。
3．4 不同药物浓度条件下，小肠的K。值和P。。，
值无显著性差异，初步确定吸收机制为被动扩散。
参考文献：
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万方数据
积雪草苷大鼠在体肠吸收动力学研究
作者： 黄怀鹏， 刘彩霞
作者单位： 河北平安健康集团,河北,石家庄,050021
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(7)
被引用次数： 6次

参考文献(4条)
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引证文献(6条)
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