全 文 ：钾通道 ( Ca2 + 2dependent K+ channels , KCa ) 、内向
整流钾通道 (inward rectifier K+ channels , KIR ) 和
A TP 敏感性钾通道 (A TP2sensitive K+ channels ,
KA TP) [8 ] 。本实验中分别采用非选择性钾通道阻断
剂 CsCl、Kv特异性阻断剂 42A P、KCa特异性阻断剂
TEA、KIR特异性阻断剂 BaCl2 以及 KA TP 特异性阻
断剂格列本脲作为工具药进行研究 , 结果发现
CsCl、TEA、格列本脲和 BaCl2可显著减弱丹参素异
丙酯的舒血管作用 ,但 42A P 对其作用无明显影响 ,
提示丹参素异丙酯的舒血管作用可能与 KCa 、KIR和
KA TP有关。
目前已知 ,几乎所有的血管平滑肌都分布有β
受体 ,激动时可引起血管舒张。本实验采用非选择
性β受体阻断剂普萘洛尔、特异性β1 受体阻断剂美
托洛尔、特异性β2 受体激动剂沙丁胺醇为工具药 ,
发现这 3 种药对丹参素异丙酯的舒张血管作用均无
明显影响 ,提示其舒血管机制可能与β受体无关。
但是由于绝大多数血管同时存在α受体和β受体 ,
而且大多数血管以α受体占主导地位 ,β受体在肺
部亦主要以β2 受体亚型分布于气道而发挥其生理
功能 ,在肺动脉分布较少 ;本实验中上述药物对丹参
素异丙酯舒血管作用无明显影响 ,是否也是因为β
受体作用被α受体所掩盖 ,尚待进一步证实。
综上所述 ,丹参素异丙酯对大鼠肺动脉具有显
著的舒张作用 ,该舒张作用具有一定内皮依赖性 ,与
内皮细胞 NO、P GI2 途径相关 ;此外 ,该药还可通过
调节血管平滑肌细胞钙通道和钾通道的活动 ,引起
血管舒张。
参考文献 :
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蛇床子素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用
何 　蔚 ,连其深 ,刘建新
①
(赣南医学院 药理学教研室 ,江西 赣州 　341000)
摘　要 :目的 　研究蛇床子素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 　利用大鼠大脑中动脉短暂阻塞
(MCAO) 造成局灶性脑缺血 (2 h) 再灌注 (24 h) 损伤模型 ,缺血后 1 h 舌下 iv 给予蛇床子素 5、10 mg/ kg ,再灌
注 24 h ,检测大鼠神经功能行为缺陷评分、脑水肿和脑梗死范围 ,测定脑组织中 Na + , K+ 2A TP 酶、Ca2 + 2A TP 酶
的活性和髓过氧化物酶 (MPO) 的活性及用放免法测定脑组织中白细胞介素28 ( IL28) 的量。结果 　蛇床子素能
改善大鼠脑缺血再灌注后神经功能行为缺陷评分 ,减轻脑水肿和降低脑梗死范围 ,增强 Na + , K+ 2A TP 酶和 Ca2 + 2
A TP 酶活性 ,降低脑组织中 MPO 的活性和 IL28 的量。结论 　蛇床子素对脑缺血再灌注损伤有保护作用 ,其机制
可能与蛇床子素抑制大鼠脑缺血再灌注后炎症反应和减轻脑水肿有关。
关键词 :蛇床子素 ; 局灶性脑缺血再灌注 ; A TP 酶 ; 髓过氧化物酶 (MPO)
中图分类号 :R286110 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0120086204
·68· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月
①收稿日期 :2008205226
基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (30560172)
作者简介 :何　蔚 (1968 —) ,男 ,江西大余人 ,博士 ,教授 ,主要研究方向为心脑血管药理学。
Tel : (0797) 8657601 　E2mail : hewei8286291 @yahoo. com. cn
Protective effects of osthole on focal cerebral ischemia2reperfusion injury in rats
H E Wei , L IAN Qi2shen , L IU Jian2xin
(Department of Pharmacology , Gannan Medical College , Ganzhou 341000 , China)
Abstract : Objective 　To investigate t he p rotective effect of ost hole on focal cerebral ischemia2reperf u2
sion injury in rat s. Methods 　Focal cerebral ischemia2reperf usion model in rat was made by t ransient occlu2
sion of the middle cerebral artery for 2 h and followed by reperf usion for 24 h. Ost hole 5 and 10 mg/ kg
were iv injected t hrough sublingual vein at 1 h after t he onset of ischemia , respectively. After 24 h of
reperf usion , the influence of ost hole on neurological behaviour deficit score , brain edema , and infarct size
were evaluated. The activity of Na + , K+ 2A TPase , Ca2 + 2A TPase , and myeloperoxidase (MPO) in t he is2
chemic hemisp here cortex of the middle cerebral artery area was assayed by spect rop hotomet ry. The level
of IL28 was detected wit h radioimmunoassay. Results 　Ost hole significantly reduced t he neurological be2
haviour deficit score , brain edema , and infarct size , enhanced t he activity of Na + , K+ 2A TPase and Ca2 + 2
A TPase , inhibited t he activity of MPO , and decreased t he level of IL28 in t he brain tissue. Conclusion The
result s suggest t hat osthole could at tenuate the brain damage following focal cerebral ischemia2reperf usion
in rat s and it s mechanism may be partly related to t he inhibition of inflammation and brain edema induced
by ischemia2reperf usion.
Key words : o st hole ; focal cerebral ischemia2reperf usion ; A TPase ; myeloperoxidasse (MPO)
　　蛇床子素 (ost hole) 又名甲氧基欧芹酚或欧
芹酚甲醚 ,是伞形科蛇床属植物蛇床 Cni di um
monnier (L . ) Cusson 的果实中提取的一种香豆素 ,
具有抗炎、扩张血管、改善学习记忆、抗凝血、抑制血
栓形成和血小板聚集的作用[1～6 ] 。本研究利用大鼠
大脑中动脉短暂阻塞造成局灶性脑缺血 2 h 再灌注
24 h 模型 ,观察蛇床子素对大鼠局灶性脑缺血再灌
注损伤的保护作用。
1 　材料与方法
111 　药品与试剂 :蛇床子素由成都龙泉高科天然药
业有限公司提供 (质量分数 > 96 %) ,实验前用 N22
甲基甲酰胺溶解 ,聚山梨酯 - 80 助溶后用生理盐水
稀释至所需浓度 ;溶剂对照液含 N22 甲基甲酰胺2
聚山梨酯 - 802生理盐水 (1 ∶1 ∶8) ;髓过氧化物酶
(MPO) 、Ca2 + 2A TP 酶和 Na + , K+ 2A TP 酶测试盒
(南京建成生物技术有限公司) ;白细胞介素28 ( IL2
8) 放免试剂盒 (北京东亚生物技术所) ;其他试剂
为市售分析纯。
112 　实验动物 : SD 大鼠 ,雄性 ,体质量 220～260
g , 由 本 校 实 验 动 物 中 心 提 供 , 动 物 合 格 证
号 :J XA2005318。
113 　大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的制备 : SD 大
鼠 ,用 10 % 水合氯醛溶液 (350 mg/ kg ,ip ) 麻醉 ,
参照 Longa 等[7 ] 的方法制备大脑中动脉阻断
(MCAO) 模型 ,将一尼龙线 (长 4 cm ,直径 0123
mm) 经颈外动脉 ( ECA) 主干切口缓慢向颈内动脉
( ICA) 入颅方向推进 ,以颈总动脉 ( CCA) 分叉处
为标记 ,推进 18～20 mm 感到轻微阻力时 ,即达到
较细大脑前动脉 (ACA) ,阻断大脑中动脉 ( MCA)
的所有血液供应。2 h 后 ,拨出尼龙线 ,扎紧动脉残
端 ,缝合皮下组织和皮肤 ,完成缺血再灌注损伤模
型。假手术组大鼠只暴露和分离出 CCA、ECA 和
ICA ,不闭塞 MCA。术中严格控制室温在 23～
25 ℃。
114 　实验分组与给药 :雄性 SD 大鼠 96 只 ,分 4 批
实验 (每批 24 只) 。第 1 批用于大鼠神经功能行为
缺陷评分和脑水肿检测 ,第 2 批用于检测脑梗死范
围 ,第 3 批检测脑组织中 A TP 酶的活性和 IL28 的
水平 ,剩余动物用于脑组织中 MPO 的活性测定。
每批动物随机分为 4 组 ,即假手术组、缺血再灌注模
型组、蛇床子素 (5、10 mg/ kg) 组 ,每组均为 6 只大
鼠。蛇床子素在 MCAO 后 1 h 舌下 iv 给予 ,假手
术组、模型组给予等体积的溶剂。
115 　大鼠神经功能行为缺陷评分 :再灌注 24 h ,按
Longa 法[7 ]对动物的神经功能行为进行评分 ,标准
如下 :0 分 ,未观察到神经功能缺陷症状 ;1 分 ,不能
完全伸展手术对侧前爪 (轻度局灶性神经功能缺
陷) ;2 分 ,向手术对侧转圈 (中度局灶性神经功能缺
陷) ;3 分 ,向手术对侧倾倒 (重度神经功能缺陷) ;4
分 ,不能自发行走 ,意识昏迷。
116 　干湿质量法测定大鼠脑水肿 :神经功能行为缺
陷评分后将大鼠断头处死 ,取出全脑 ,左右脑分开 ,
取缺血侧大脑 ,去除小脑、低位脑干和嗅球 ,立即称
湿质量。然后将脑组织烘干 (105 ℃,24 h) ,再称质
量 ,按干湿质量法[8 ] ,求出脑组织含水量。
·78·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月
脑组织含水量 = 脑湿质量 - 脑干质量脑湿质量 ×100 %
117 　脑梗死范围测定 :再灌注 24 h ,大鼠断头处死
取出全脑 ,然后将右前脑沿冠状面切成厚度基本相
同的 5 片 ,脑片置于 115 mL 2 % T TC 溶液中避光
孵育 30 min。再将脑片置 10 % 甲醛中固定。参照
文献方法[9 ] ,计算梗死百分比。
梗死百分比 = 苍白区质量/ (苍白区质量 + 非苍白区质
量) ×100 %
118 　缺血脑组织 A TP 酶活性和 IL28 水平测定 :
缺血 2 h、再灌注 24 h 后 ,将大鼠断头取脑。切取缺
血区大脑皮层约 100 mg ,用生理盐水在冰浴下制成
10 % 组织匀浆 ,4 ℃,3 000 r/ min 离心 10 min ,取
上清液用 722 N 光栅分光光度计 (上海精密科学仪
器有限公司) 测定 Na + , K+ 2A TP 酶和 Ca2 + 2A TP
酶活性。A TP 酶活性测定采用定磷法 ,以每克蛋白
每小时分解 A TP 产生的无机磷量表示酶活性。IL2
8 水平的测定采用放射免疫法 ,严格按试剂盒说明
书进行操作。蛋白定量采用考马斯亮蓝法 ,以牛血
清白蛋白为标准。
119 　缺血脑组织 MPO 活性的测定 :缺血 2 h ,再灌
注 24 h ,将大鼠断头取脑。取缺血区大脑皮层约
100 mg ,利用试剂盒提供的匀浆介质 ,将脑组织制
成 5 % 的组织匀浆 ,按照 MPO 试剂盒的要求操作 ,
用 722 N 光栅分光光度计 (上海精密科学仪器有限
公司) ,在λ= 460 nm 处测吸光度值。
1110 　统计方法 :各组数据均以 x ±s 表示 ,多组间
比较用单因素方差分析 ,两组之间比较用 q检验。
2 　结果
211 　蛇床子素对大鼠神经功能行为缺陷评分、脑水
肿和脑梗死范围的影响 :蛇床子素 10 mg/ kg 组大
鼠神经功能行为评分和脑组织含水量同模型组比较
明显减少 ( P < 0105) ,蛇床子素 5 mg/ kg 组有下降
趋势 ,但与模型组比较无统计学差异 ;蛇床子素 5、
10 mg/ kg 组的脑梗死范围与模型组比较差异显著
( P < 0105、0101) 。表明蛇床子素对大鼠脑缺血再
灌注损伤有一定的保护作用。结果见表 1。
212 　蛇床子素对大鼠缺血区脑组织中 Na + , K+ 2
A TP 酶和 Ca2 + 2A TP 酶活性的影响 :脑缺血再灌注
损伤模型组 Na + , K+ 2A TP 酶和 Ca2 + 2A TP 酶活
性明显降低 ,同假手术组比较差异显著 ( P < 0105) ;
蛇床子素 10 mg/ kg 组 Na + , K+ 2A TP 酶和 Ca2 + 2
A TP 酶活性比脑缺血再灌注损伤模型组明显增强
( P < 0105) ,表明蛇床子素能抑制脑缺血再灌注损
伤后 Na + , K+ 2A TP 酶和 Ca2 + 2A TP 酶活性的降
低 ,保护缺血脑组织。结果见表 2。
表 1 　蛇床子素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经
功能行为缺陷评分、脑水肿和脑梗死范围的
影响 ( x ±s , n = 6)
Table 1 　Effect of osthole on neurological behaviour
def icit score , brain edema , and infarct size
after focal cerebral ischemia2reperfusion
injury in rats ( x ±s , n = 6)
组别 剂量/ (mg ·kg - 1 ) 神经功能评分 脑含水量/ % 脑梗死范围/ %
假手术 - 　　- 771 8 ±115 　　-
模型 - 21 00 ±0189 801 8 ±213 # # 201 07 ±3168
蛇床子素 5 11 33 ±0152 791 8 ±118 151 33 ±3143 3
10 01 83 ±0175 3 781 6 ±019 3 121 84 ±2174 3 3
　　与假手术组比较 : # # P < 0101
　　与模型组比较 : 3 P < 0105 　3 3 P < 0101
　　# # P < 0101 vs Sham group
　　3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 vs model group
表 2 　蛇床子素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后
脑组织中 ATP 酶活性、IL28 水平和 MPO
活性的影响 ( x ±s , n = 6)
Table 2 　Effect of osthole on activity of ATPase ,
level of IL28 , and MPO activity in cortex
after focal cerebral ischemia2reperfusion
injury in rats ( x ±s , n = 6)
组别
剂量/
(mg·kg - 1 )
Na + , K+ 2A TP 酶/
(mmol ·g - 1 ·h - 1 )
Ca + 2ATP 酶/
(mmol ·g - 1 ·h - 1 )
MPO/
(U ·g - 1 )
IL28/
(ng·g - 1 )
假手术 - 5123 ±0175 6117 ±1152 0131 ±0108 15193 ± 3176
模型 - 3127 ±0144 # 4120 ±0179 # 0157 ±0114 # #36199 ±10183 # #
蛇床子素 5 3180 ±0165 4184 ±1191 0145 ±0111 22173 ± 7198 3
10 4127 ±0185 3 5157 ±1104 3 0140 ±0110 3 20111 ± 5103 3 3
　　与假手术组比较 : # P < 01 05 　# # P < 01 01
　　与模型组比较 : 3 P < 0105 　3 3 P < 0101
　　# P < 01 05 　# # P < 01 01 vs Sham group
　　3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 vs model group
213 　蛇床子素对缺血脑组织 MPO 活性和 IL28 水
平的影响 : 缺血再灌注模型组缺血区大脑皮层
MPO 活性明显高于假手术组 ( P < 0101) ,而蛇床
子素 10 mg/ kg 组大鼠脑缺血区皮层中 MPO 活性
显著低于模型组 ( P < 0105) ,蛇床子素 5 mg/ kg 组
有下降趋势 ,但与模型组比较无统计学差异。模型
组 IL28 水平较假手术组明显提高 ( P < 0101) ,蛇床
子素 5 和 10 mg/ kg 组与模型组比较明显降低 ,差
异显著 ( P < 0105、0101) ,表明蛇床子素能抑制大鼠
脑缺血再灌注损伤后脑组织中 IL28 的产生 ,抑制
MPO 活性 ,抑制中性粒细胞的激活、趋化和浸润 ,
保护缺血脑组织。结果见表 2。
3 　讨论
·88· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月
　　Na + , K+ 2A TP 酶的主要功能是将细胞内的
Na + 泵出和将胞外的 K+ 泵入 ,平衡细胞内外 Na + ,
K+ 浓度 ; Ca2 + 2A TP 酶的主要功能是将细胞内
Ca2 + 泵出 ,它同 Na + 2Ca2 + 交换共同维持细胞内
Ca2 + 稳态。Na + , K+ 2A TP 酶和 Ca2 + 2A TP 酶活性
下降 ,导致细胞内 Ca2 + 、Na + 增多。胞内 Na + 增多
引起 Na + 、Ca2 + 交换增加 ,进一步加剧细胞内 Ca2 +
超载。因此 ,Na + , K+ 2A TP 酶和 Ca2 + 2A TP 酶对
维持细胞内离子浓度、维持细胞的正常结构和功能
起着十分重要的作用。脑缺血再灌注时 ,Na + , K+ 2
A TP 酶和 Ca2 + 2A TP 酶活性下降 ,导致 K+ 大量流
向细胞外液 , Na + 及 Ca2 + 大量流入细胞内 ,伴随
H2 O 的进入而导致细胞急速肿胀 ,产生脑水肿。本
研究结果表明 ,蛇床子素通过增强 Na + , K+ 2A TP
酶和 Ca2 + 2A TP 酶活性 ,降低脑缺血再灌注后脑组
织含水量 ,从而保护缺血脑组织。
IL28 是免疫性炎症反应过程中的炎性趋化细
胞因子 ,在脑缺血和缺血再灌注损伤中起着重要作
用。IL28 主要由中性粒细胞、单核巨噬细胞、内皮
细胞等在缺血、缺氧、IL21、内毒素 (L PS) 、内皮素21
( ET21) 和肿瘤坏死因子 ( TN F) 等诱导下合成。
IL28 使中性粒细胞激活 ,促使其趋化、聚集、黏附于
血管内皮和产生大量自由基及蛋白水解酶等炎症介
质 ,损害局部血管 ,导致血管通透性增加 ,造成组织
水肿坏死。脑缺血和缺血再灌注损伤后 ,缺血区脑
组织中 IL28 生成增加 ,使大量中性粒细胞激活 ,促
进其趋化和浸润 ,并释放毒性氧自由基、细胞因子和
一些炎症介质 ,导致局部脑水肿和脑组织坏死。中
性粒细胞中含有 MPO ,每个细胞所含的酶量是一
定的 ,利用这一特点 ,可以通过测量 MPO 活性定量
分析中性粒细胞的数目和组织的浸润情况[10 ,11 ] 。
本研究发现 ,蛇床子素可抑制 IL28 产生 ,阻断中性
粒细胞激活 ,抑制 MPO 活性 ,降低脑缺血再灌注后
中性粒细胞在脑组织中的浸润和聚集 ,抑制局部脑
组织炎症反应 ,减轻脑水肿 ,保护缺血脑组织。
本研究结果表明 ,蛇床子素对大鼠局灶性脑缺
血再灌注损伤有保护作用。通过抑制 IL28 产生 ,抑
制 MPO 活性 ,降低脑缺血再灌注后中性粒细胞在
脑组织中的浸润 ,抑制局部脑组织炎症反应 ,增强
Na + , K+ 2A TP 酶和 Ca2 + 2A TP 酶活性 ,降低脑缺
血再灌注后脑组织含水量 ,减轻脑水肿 ,是其治疗脑
缺血损伤的机制之一。
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①
(11 哈尔滨商业大学 生命科学与环境科学研究中心 ,黑龙江 哈尔滨 　150076 ; 21 哈尔滨商业大学 药物研究所博士后
科研工作站 ,黑龙江 哈尔滨 　150076 ; 31 抗肿瘤天然药物教育部工程研究中心 ,黑龙江 哈尔滨 　150076)
摘 　要 :目的 　研究野西瓜挥发油的抗肿瘤作用。方法 　采用 M TT 实验和 SRB 实验观察野西瓜挥发油对 SGC2
·98·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月
①收稿日期 :2008205222
基金项目 :黑龙江省自然科学基金资助项目 (D200610)
作者简介 :季宇彬 (1956 —) ,男 ,博士 ,博士后 ,教授 ,博士生导师 ,研究方向为抗肿瘤药物研究。