全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月·405·
程度肿胀和空泡变，12周后主动脉内皮细胞病变程
度较8周时有较大改善。本实验结果表明Pue对糖
尿病大鼠主动脉内皮细胞结构和功能损伤均具有一
定的保护作用，该作用的产生可能与Pue降低糖尿
病大鼠血糖，调节ET—NO动态平衡，改善内皮功
能，提高血管自身保护机制有关。提示Pue对预防
或减轻DVC病变无疑是有利的。
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何首乌中二苯乙烯苷在大鼠体内的药动学
孙江浩，袁志芳，王春英，许慧君，张兰桐+
(河北医科大学药学院药物分析教研室，河北石家庄050017)
摘要：目的建立大鼠血浆及组织匀浆中二苯乙烯苷的RP—HPLC测定方法，研究何首乌中二苯乙烯苷在大鼠
体内的药动学及组织分布。方法色谱条件：用Diamonsil⋯C。。色谱柱(250mm×4．6mm，5ttm)，乙腈一甲醇一水
(15：18：67)为流动相，体积流量1．0mL／min，检测波长320nm。大鼠iv二苯乙烯苷20、10mg／kg及垃二苯乙
烯苷100、50mg／kg，于不同时间点取血浆及组织，HPLC法测二苯乙烯苷血药浓度及在组织中的浓度。数据用
3P97软件拟合，计算药动学参数。结果大鼠iv不同剂量二苯乙烯苷后药动学模型为二室开放模型；ig不同剂量
二苯乙烯苷后药动学模型符合一室模型；大鼠iv及ig二苯乙烯苷后，在体内分布广泛，大鼠iv二苯乙烯苷后以
肝、心、肺中分布较高；ig二苯乙烯苷后心、肾中分布较高。结论建立了大鼠血浆及组织匀浆中二苯乙烯苷的RP—
HPLC测定方法，阐明了二苯乙烯苷在大鼠体内的药动学特征及组织分布情况。方法简便快速，结果准确可靠。
关键词：反相高效液相色谱法；何首乌；二苯乙烯苷；药动学
中图分类号：R285．6 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)03—0405—04
PharmacokineticsofstilbeneglycosidefromPolygonummultifloruminratsinvivo
SUNJiang—hao，YUANZhi—fang，WANGChun—ying，XUHui—jun，ZHANGLan—tong
(DepartmentofPharmaceuticalAnalysis，SchoolofP armacy，HebeiMedicalUniversity，Shijiazhuang050017，China)
Keywords：RP—HPLC；PolygonummultiflorumThunb．；stilbeneg ycoside；pharmacokinetics
二苯乙烯苷(2，3，5，47一四羟基二苯乙烯2一。一
』3一D葡萄糖苷)是中药何首乌Po&gonummultiflo—
r甜，竹Thunb．中分离得到的羟芪类化合物，具有明
显降低大鼠血清中总胆固醇以及抗氧化、清除自由
基等药理作用”3|。何首乌原药材及多种含何首乌
的制剂均以二苯乙烯苷作为质量控制指标。笔者曾
采用HPLC法研究了二苯乙烯苷在小鼠体内的药
动学特征，并在研究过程中获得一体内代谢物，确定
其为二苯乙烯苷的葡萄糖醛酸结合物[4]。本实验自
何首乌中分离提取二苯乙烯苷单体成分，进一步研
究其在大鼠体内的药动学及组织分布情况。
1材料与方法
收稿日期：2004—05—10
作者简介：孙江浩(1980一)，男，河北医科大学药学院2001级硕士研究生，研究方向为中药有效成分的药动学研究。
*通讯作者Tel：(0311)6265625Fax：(0311)6052053E—mail：zhanglantong@263．net
万方数据
·406· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月
1．1仪器：美国Waters液相色谱仪；Waters2487
紫外检测器；浙江大学智能信息研究所N2000色谱
工作站；LGlo一2．4A型离心机(北京医用离心机
厂生产)；Xw一80C涡旋混合器(上海医科大学仪
器厂生产)。
1．2药品与试剂：二苯乙烯苷对照品(中国药品生
物制品检定所提供，供含量测定用，批号0844—
200003)；乙腈、甲醇(色谱纯，均由美国Dikma公
司生产)；柱色谱用硅胶(青岛海洋化工厂生产)；重
蒸水自制；何首乌生药购于石家庄市药材公司，经河
北医科大学生药教研室聂凤提教授鉴定；其他试剂
均为国产分析纯。
1．3实验动物：SD大鼠，体重300g左右，雌雄不
限(合格证号为：Ⅱ级，04056，由河北医科大学实验
动物中心提供)。实验前禁食18h，饮水不限。
1．4二苯乙烯苷对照品溶液的配制：精密称取二苯
乙烯苷对照品适量，加甲醇溶解，配成193．2弘g／
mL标准储备液。按倍数稀释法配成96．6、48．3、
24．2、19．32、9．66、4．83、2．42、1．21、0．966、0．483、
0．242、0．121>g／mL系列标准甲醇溶液。
1．5何首乌中二苯乙烯苷单体成分的分离：何首乌
粉末(50目筛)以一定浓度的乙醇回流提取，回收
乙醇得何首乌醇浸膏；将稠膏加水分散，石油醚脱脂
后以醋酸乙酯萃取，回收即得醋酸乙酯提取部分；将
所得的醋酸乙酯提取部分上硅胶柱，石油醚一醋酸乙
酯(50：50、40：60、20：80、0：100)梯度洗脱，以
薄层色谱法进行监测[展开剂：氯仿一甲醇一水(20：
2：1)，360nm下检视蓝色斑点]，得二苯乙烯苷粗
提物；将二苯乙烯苷粗提物反复上柱，蒸干溶剂后得
二苯乙烯苷粗品，经HPLC外标法测定质量分数为
90．25％。
1．6生物样本的制备：大鼠用乙醚轻度麻醉后行颈
动脉插管术，待清醒后分别iv二苯乙烯苷20、10
mg／kg或ig二苯乙烯苷100、50mg／kg，于规定时
间点颈动脉取血，肝素抗凝，分离血浆备用。大鼠给
药后于规定时间处死后立即取出心、肝、脾、肺、肾、
胃、肠、睾丸、脑，用生理盐水洗净表面浮血，滤纸吸
干，用生理盐水制成组织匀浆备用。
1．7 色谱条件；色谱柱为DiamonsilTMC，。色谱柱
(250mm×4．6mm，5肛m)；流动相为乙腈一甲醇一水
(15：18：67)；体积流量为1．0mL／min；检测波长
320nm；灵敏度0．05AUFS。
1．8标准曲线的制备：取空白血浆或空白组织匀浆
0．2mL，精密加入不同质量浓度的二苯乙烯苷对照
品溶液0．4mL，涡流混旋30S，4000r／min离心5
min。取上清液，滤膜滤过(o．46肛m)，进样20弘L，
记录二苯乙烯苷的峰面积，以血浆药物质量浓度
(／-g／mL)为横坐标，峰面积(×105)为纵坐标，
经线性回归得回归方程为y一0．8763X一0．0976，
厂=0．998(咒一8)，二苯乙烯苷在0．121～193．2
t-g／mL线性关系良好，最低检测质量浓度为0．061
pg／mL。绘制标准曲线。
1．9精密度
1．9．1 日内精密度：取空白血浆0．2mL，加入不同
质量浓度的对照品溶液0．4mL，使血浆中二苯乙烯
苷质量浓度分别为96．6、4．83、0．242tLg／mL，每个
质量浓度平行5份，按1．8项下方法操作，每个样本
分别进样5次，在同日内同一条标准曲线进行测定，
计算日内精密度，3种不同质量浓度样品的日内精
密度分别为1．8％、2．7％和7．3％。
1．9．2 日问精密度：取空白血浆0．2mL，处理同
1．9．1项方法，按1．8项下方法操作，每个样本分别
进样5次，在一周内不同日用不同的标准曲线进样
分析，记录峰面积，计算日间精密度，日间精密度分
别为2．2％、3．2％和9．3％。
1．10稳定性考察：供试样品溶液分别放置0、2、4、
6、8、10、12、24h后进样测定，峰面积的RSD为
2．5％，表明样品在24h内较稳定。
1．11方法回收率：取空白血浆0．2mL，加入不同
浓度的标准甲醇稀释溶液0．4mL，处理同1．9．1项
方法，每个质量浓度平行5份。按1．12项下方法操
作，进样分析，测定峰面积，计算方法的回收率分别
为97．98％、100．8％、106．4％，RSD分别为6．1％、
2．4％、4．8％(咒一5)
1．12二苯乙烯苷检测方法：取血浆或组织匀浆
0．2mL，加甲醇0．4mL沉淀蛋白，涡流混旋30S，
4000r／min离心5min。取上清液，滤膜滤过(o．46
pm)，进样20pL，用峰面积进行定量分析，由标准
曲线求得血浆或组织匀浆中二苯乙烯苷浓度。
2结果
2．1 色谱行为：在上述色谱条件下，二苯乙烯苷分
离效果良好，无杂质峰干扰。理论塔板数不小于
4000，保留时间约10min，分离度大于2．0。色谱图
见图1。
2．2药动学参数：大鼠iv及ig不同剂量二苯乙烯
苷后，不同时间血药浓度见图2，3。采用3P97药动
学处理软件进行自动拟合。以理论血药浓度值与实
验测定值的相关系数最大和AIC最小作为判断标
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月·407·
2 1
／
B C
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1011121314 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1011 121314 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10il
时间r／rain
1213
1一二苯乙烯苷2一代谢物
1-stilbeneglycoside2-metabolite
图1血浆样品(iv给药)(A)、空白血浆+二苯乙烯苷对照品(B)、空白血浆(C)HPLC色谱图
Fig．1HPLCchromatogramsfpl smasample(iv)(A)，blankplasma+stilbeneglycoside(B)，andblankplasma(C)
准。曲线经拟合后发现大鼠iv20、10mg／kg二苯乙
烯苷后药动学均符合二室模型；大鼠ig100、50mg／
kg二苯乙烯苷后药动学均符合一室模型，主要药动
学参数见表1，2。
2．3组织分布：取雄性大鼠24只，随机分成iv和
ig组，分别iv10mg／kg或ig50mg／kg二苯乙烯
苷，于给药后10、30、60rnin将动物处死，取出各组
织并测定血药浓度；按血浆中二苯乙烯苷标准曲
0 20 40 60 80 100 120
时间r／min
l一20mg／kg2-10mg／kg
圈2大鼠iv二苯乙烯苷后血浆药物
浓度一时间曲线(j±s，n一6)
Fig．2Plasmadrugconcentration—timecurveofrats
afterivstilbeneglycosideo±S，n一6)
0 204060 80100120140160180
时间t／rain
1—100mg／kg2-50mg／kg
图3大鼠ig二苯乙烯苷后血浆药物
浓度一时间曲线(；士s，n一6)
Fig．3Plasmadrugconcentration—timecurveofrats
afterigstilbeneglycoside(J±S，n一6)
线制备方法得二苯乙烯苷在各组织匀浆中的标准曲
线，其回归方程分别为心：Y一0．9275x+
0．7615，r一0．9982(n一7)；脾脏：Y一0．9673x+
0．1294，r一0．9998(咒一6)；胃：Y一1．1995X一
0．3880，r一0．9997(咒一6)；肺：Y一0．7482X-t-
0．2158，r一0．9985(咒一6)；肠：Y一0．7363X一
0．2072，r一0．9993(卵一6)；肝脏：y一0．7120X一
0．0051，r一0．9990(行一6)；睾丸：Y一0．9398X一
0．2662，r一0．9979(挖一6)；肾脏：Y一0．8382X+
0．3826，r一0．9962(，z一9)；脑：Y一0．6806X+
0．1350，r一0．9971(胛一5)。根据回归方程计算出
表1大鼠iv二苯乙烯苷后药动学参数(x±s，n一6)
Table1 Pharmacokineticparametersofrats
afterivstilbeneglycoside(工±s，n一6)
表2大鼠ig二苯乙烯苷后药动学参数(J±s，n一6)
Table2 Pharmacokineticparametersofratsafter
igstilbeneglycoside(J±s，疗一6)
∞∞∞如∞∞如m
0
_【o—m．∞三＼杠蠼r2*㈠
∞笛加垮m；O_【。1m矗3＼柱鼗心将¨
万方数据
·408· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月
各组织单位质量的含药量。结果表明，大鼠iv二苯
乙烯苷后，组织分布迅速，10min各组织中二苯乙
烯苷浓度即达高峰，单位组织中以肝、心、肺中分布
较高；脾、肾、胃次之；肠、脑、睾丸组织中分布较少。
见图4。大鼠ig二苯乙烯苷后30min，各组织二苯
乙烯苷浓度即达高峰，单位组织中以心、肾、肝分布
较高；肺、胃、脾、肠次之；睾丸、脑组织中分布较少。
见图5。
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门
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： I
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：睡． 砀．k。L九儿k．瞳．k
图4大鼠iv=苯乙烯苷(10mg／kg)后
组织分布(j±s，席一4)
Fig．4Tissuedistributioninratsafterivstilbene
glycoside(10mg／kg)Cx_+s，以一4)
f
学
舶
j
一＼
逝
嫂
门
±恃
000
900
800
700
600
500
400
300
200
100
0
心 肝睾丸肺肠 脾 胃 肾
图5大鼠ig二苯乙烯苷(50mg／kg)后
组织分布(j±s，万一4)
Fig．5Tissuedistributioninratafterigstilbene
glycoside(50mg／kg)(；士s，n一4)
3讨论
本实验采用醇提一石油醚脱脂一醋酸乙酯萃
取一硅胶柱色谱分离的路线，成功地从何首乌药材中
分离得到二苯乙烯苷单体成分，比较传统的低压或中
压柱色谱法，该法操作简便，在实验室中容易实现。
本实验对二苯乙烯苷单体成分iv和ig给药在
大鼠体内的药动学进行研究，消除了何首乌中其他
成分的干扰，如蒽醌类成分对实验动物具有泻下作
用，影响药物的吸收。采用RP—HPLC法测定大鼠血
浆及组织匀浆中二苯乙烯苷的浓度，样品前处理方
法简便快速，从色谱图可见血浆及组织匀浆中内源
性物质不干扰样品测定，方法专属性强，结果准确。
本实验采用大鼠颈动脉取血，因需要多次采血，
所以每次采血后都给大鼠补以同体积生理盐水，大
鼠血液被稀释，故可能对个别浓度低的点影响较大。
大鼠iv不同剂量二苯乙烯苷，大鼠体内药动学
过程均符合二室开放模型，分布相tl／za为(3．67±
0．19)、(3．02±0．36)rnin，说明二苯乙烯苷自中央
室向周边室分布迅速；消除相t1／28为(54．61±
14．40)及(63．28±21．17)min，说明二苯乙烯苷在
体内消除很快；大鼠iv二苯乙烯苷后，表观分布容
积分别为(o．2194±0．0186)、(o．2868±0．0356)
L，约为大鼠血容量的15倍，说明二苯乙烯苷在大
鼠体内分布于广泛组织中，分布实验结果也证明了
这一点。
在组织分布实验研究中发现，大鼠iv和ig二
苯乙烯苷，均以心脏、肝脏中二苯乙烯苷含量最高，
这可能与心脏与肝脏中血管丰富，血流量大有关。何
首乌在中医理论中归心、肝、肾经，现代药理学研究
证明二苯乙烯苷有保肝、提高心脏SOD的活性，可
降低乳过氧化物酶(LPO)和脂褐素含量，具有明
显的抗氧化、抗自由基、拮抗过氧化损伤的作用，被
认定是何首乌中保肝的主要有效成分，本实验研究
结果验证了中医归经的传统理论。二苯乙烯苷在脑
组织及睾丸组织中分布较少可能与其水溶性较大，
难以通过血脑屏障及血睾屏障有关。
在本实验中也发现大鼠体内存在一明显的代谢
物峰，其保留时间与小鼠体内的代谢物峰保留时间
一致，推测其为二苯乙烯苷的葡萄糖醛酸结合物。组
织中的其他代谢产物有待于进一步研究。
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万方数据
何首乌中二苯乙烯苷在大鼠体内的药动学
作者： 孙江浩， 袁志芳， 王春英， 许慧君， 张兰桐， SUN Jiang-hao， YUAN Zhi-fang，
WANG Chun-ying， XU Hui-jun， ZHANG Lan-tong
作者单位： 河北医科大学药学院,药物分析教研室,河北,石家庄,050017
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(3)
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