全 文 ：·1014· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月
HPLC法测定柿叶浸膏中槲皮素和山柰酚
贝伟剑1’2，罗 杰2，吴爱銮2，彭文烈p
(1．中山大学生命科学学院，广东广州 510275；2．广州白云山和记黄埔中药有限公司，广东广州510515)
摘 要：目的建立柿叶浸膏中黄酮成分的HPLC测定。方法采用HPLC法HypersilC。s柱(250mm×4．6mm，
5“m)；流动相：甲醇一0．4％磷酸溶液(50；50)；检测波长：360nm；柱温：室温；体积流量：1．0mL／min。结果槲皮
素和山柰酚的线性范围均为2．o～30．0pg／mL，线性关系良好(r一0．9997)。槲皮素加样回收率为97．5％，RSD为
1．84％白一5)；山柰酚加样回收率为97．7％，RSD为1．II％(”一5)。结论该法操作简便、结果可靠，重现性好，
可用于柿叶浸膏的质量控制。
关键词：柿叶浸膏；槲皮素；山柰酚；高效液相色谱
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2005)07—1014—02
DeterminationofquercetinandkaempfetolinDiospyroskakileafextractbyHPLC
BEIWei—jianl“，LUOJie2，WUAi—luan2，PENGWen—liel
(1．SchoolofLifeScience，SunYat—senU iversity，Guangzhou510275，China；2．HutchisonWhampoa
GuangzhouBaiyunshanChineseMedicineCo．Ltd，Guangzhou510515，China)
Keywords：Diospyroskakileafextract；quercetin；kaempfetol；HPLC
脑心清片是广州白云山中药厂用单味柿叶提取
物(以下简称柿叶浸膏)制成的中成药，经10家大型
医院进行临床验证404例研究证实，对冠心病心绞
痛、脑动脉硬化疗效显著，对短暂脑缺血发作、脑栓
塞、脑血栓形成、脑血栓形成后遗症、心肌梗死后遗
症等伴有或不伴有高血压的多种心脑血管疾病有良
好的治疗效果，并具有一定的降血压、降血脂作用。
长期服用本品，未发现有明显不良反应[1]。脑心清片
中的黄酮类成分是其重要活性部位[z]，其质量控制
是确保脑心清片高效安全的手段，但目前对脑心清
片的黄酮成分质量控制尚未有很好的方法。HPLC
技术在柿叶浸膏中的应用尚未见报道，本实验将
HPLC法运用于柿叶浸膏的黄酮类成分测定中，并
建立了一套成熟的方法，为脑心清片原料柿叶浸膏
的质量控制提供了手段。
1仪器与试剂
Agilent1100系列高效液相色谱仪，DAD—
G1315B可见一紫外检测器。甲醇为色谱纯：芦丁(批
号0080—9705)、槲皮素(批号081—90003)、山柰酚
(批号0861—200002)对照品均为中国药品生物制品
检定所提供；柿叶浸膏由广州白云山中药厂提供。其
他试剂均为国产分析纯。
2方法与结果
2．1色谱条件：色谱柱：HypersilC18柱(250mm×
4．6mm，5肚m)；流动相：甲醇一0．4％磷酸溶液
(50：50)；检测波长：360nm；柱温：室温；体积流
量：1mL／min；进样量：10弘L。理论塔板数按槲皮素
和山柰酚峰计均大于5000。
2．2供试品溶液的制备：称取柿叶浸膏约0．1g，加
甲醇20mL使其完全溶解后、加入36％浓盐酸使盐
酸终浓度为2mol／L，摇匀、90℃回流2h，冷却，置
200mL量瓶中并加甲醇至刻度，配成约0．50rag／
mL的水解液，经Millipore滤器滤过，备用。
2．3 标准曲线的制备：精密称取槲皮素对照品
5．10mg、山柰酚对照品5．05mg，各加甲醇溶解定
容至25．0mL，作为贮存溶液。各取10．00mL按
1：1混合后，精密吸取0．20、0．60、1．00、1．60、，
2．00、3．00mL，用甲醇分别稀释成10．0mL，进样
测定，以进样质量浓度(C)为横坐标，平均峰面积
(A)为纵坐标进行回归，得标准曲线回归方程。槲皮
素：A一35．904C+12．474，r一0．9997，线性范围：
2．O～30．6pg／mL；山柰酚：A一38．209C+21．359，
r一0．9997，线性范围：2．O～30．3弘g／mL。
2．4精密度试验：取含槲皮素10．2弘g／mL及山柰
收稿日期：2004—10—16
基金项目：广州市科技局2002年度重点科技攻关项目：广州市名优中成药中药现代化研究专项资金资助(200222一E5081)
作者简介：贝伟剑(1963一)，广西昭平县人，高级工程师，副研究员，中山大学生命科学学院博士研究生，研究方向为中药现代化及中成
药二次研发。Tel：(020)87200301，87200331E—mail：bwj001@hotmail．corn
*通讯作者彭文烈Tel：(020)84113656E—mail：pengwenlie@21cn．corn
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月·1015·
酚lo．1肛g／mL的混合对照品溶液，重复进样5次，
测定，计算得槲皮素峰面积的RSD为1．26％，山柰
酚峰面积的RSD为1．03％。
2．5重现性试验：精密称取同一批柿叶浸膏5份，
制备供试品溶液，进样测定，计算得槲皮素峰面积的
RSD为1．81％，山柰酚峰面积的RSD为1．42％。
2．6稳定性试验：取柿叶浸膏供试品溶液，分别在
0、1、2、4、6、8、12、24h测定，结果槲皮素峰面积的
RSD为1．45％，山柰酚峰面积的RSD为1．24％。
表明溶液中槲皮素和山柰酚在24h内稳定性良好。
2．7 回收率试验：精密称取已知含量的柿叶浸膏5
份，每份约50mg(含槲皮素约2．0mg)，分别精密
加入0．10mg／mL槲皮素对照品溶液20．0mL；另
精密称取已知含量的柿叶浸膏5份，每份约50mg
(含山柰酚约3．0mg)，分别精密加入0．153rag／
mL山柰酚对照品溶液20．0mL，制备供试品溶液，
进样测定，计算加样回收率，结果槲皮素平均回收率
为97．5％，RSD为1．84％，山柰酚平均回收率为
97．7％，RSD为1．11％。
2．8样品测定：取样品，制备供试品溶液，进样测
定，根据标准曲线计算柿叶浸膏中槲皮素和山柰酚
的质量分数，并按下式计算黄酮的量，结果见表1，
色谱图见图1。
黄酮一槲皮素×2．55+山柰酚×2．59
表1柿叶浸膏中槲皮素、山奈酚和
黄酮的测定结果白一5)
Table1 Quercetin，kaempfetol，andflavonoids
inD．kakileafextract(n=5)
3讨论
目前已发现的柿叶中黄酮类化合物有槲皮素、
异槲皮苷、槲皮素3—0一[2，，_O一(3，3，5一三羟基苯甲
酰)]一葡萄糖苷、芦丁、金丝桃苷、山柰酚、山柰酚3一
O—p—D一葡萄糖苷、山柰酚3一O—a—L一鼠李糖苷、山柰
酚3一O一口一D木糖苷(黄芪苷)、山柰酚3一O—a—L一阿拉
伯糖苷等[34]。HPLC测定结果表明：柿叶浸膏中主
要含有槲皮素和山柰酚两种苷元及其苷类黄酮成
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8．，1．0
12 14 16
r，mm
1一槲皮素2一山柰酚
1-quercetin2-kaempfetol
图1 混合对照品溶液(A)和柿时浸膏
水解产物(B)的HPLC图谱
Fig．1HPLCchromatogramsofmixedreference
substances(A)andD．kakileafextract
hydrolysate(B)
分。以槲皮素和山柰酚为指标，基本反映了柿叶浸膏
中的黄酮成分的定量概貌，是一个可行的质量标准
控制手段。
槲皮素和山柰酚对照品甲醇溶液在室温下放
置，时间稍长(大于24h)峰面积会有所降低，但在
10℃下冷藏、则较稳定。因此对照品和样品溶液应
冷藏保存，尽量在24h内测定。
在检测样品的制备方法上，比较了加热回流
1．5、2．0、2．5h，结果2h以上，黄酮苷水解基本完
全。比较了水解时盐酸浓度为1．5、2．0、2．5mol／L，
结果2．0mol／L以上浓度时黄酮苷水解基本完全，
因此选择盐酸浓度为2mol／L、回流2h，以便操作。
致谢：广州军区药检所陈桂明药师为本研究提
供技术帮助。
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万方数据
HPLC法测定柿叶浸膏中槲皮素和山柰酚
作者： 贝伟剑， 罗杰， 吴爱銮， 彭文烈， BEI Wei-jian， LUO Jie， WU Ai-luan， PENG
Wen-lie
作者单位： 贝伟剑,BEI Wei-jian(中山大学生命科学学院,广东,广州,510275;广州白云山和记黄埔中药
有限公司,广东,广州,510515)， 罗杰,吴爱銮,LUO Jie,WU Ai-luan(广州白云山和记黄埔中
药有限公司,广东,广州,510515)， 彭文烈,PENG Wen-lie(中山大学生命科学学院,广东,广
州,510275)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(7)
被引用次数： 11次

参考文献(4条)
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2.唐竞 高效液相色谱法测定柿叶中槲皮素和山柰酚的研究[期刊论文]-山西医药杂志（下半月版） 2008(6)
3.杨文.沙东旭.段立爽 HPLC法测定脑心清颗粒中山柰素的含量[期刊论文]-中国药事 2011(5)
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文]-环境与健康杂志 2010(2)
8.严蕾.石骁昵.孙莲 液相色谱法测定植物样品中槲皮素和山萘酚[期刊论文]-中国卫生检验杂志 2008(6)
9.刘军.郎爱东.李翠翠 不同产地和采收期柿叶的槲皮素和山柰酚含量比较[期刊论文]-中药材 2007(2)
10.覃冬杰.梁永红.黄瑞松.刘华钢.张鹏 壮药柿叶槲皮素和山柰素含量测定方法的建立[期刊论文]-广西医学
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11.邓书端 黄酮类活性成分的分离分析研究[学位论文]硕士 2006


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