全 文 ：·1402· 中草荡 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第9期2006年9月
[63
[7]
[8]
24(4)：205—208．
LeiL。SongZH，TuPF．Advancesinr searchof emical
constituentsinplantsofCistancheHoffing．etLink[J]．Chin
Tr口ditHerbDrugs(中草药)，2003，34(5)：473—476．
ZhouZJ．Advancesinr earchofCistancheHoffing．etLink
[J]．ChinTraditHerbDrugs(中草药)，1995，5：28—30．
XuWH，QiuSX，ShenLZ．ComparingthechemicaIcons—
tituentsandpharmacologicactionsfCistanchedes dicolaand
C．salsa(C．A．Mey．)l-J1．ChinTraditHerbDrugs(中草
药)，1995，26(3)：143—146．
[9]LaemmliUK．Cleavageofstructuralp oteinsduringthe
assemblyoftheheadofthebacteriophageT4[J]．Nature，
1970，227：685—690．
[10]LanHY，LiLH．Applicationofproteinsgelelectrophoresis
intheidentificationofcropvarieties[J]．AgricSciChina(中
国农业科学)，2002，35(8)：916—920．
天麻液相色谱指纹图谱研究
王莉，程孟春，肖红斌’，梁鑫淼。
(中国科学院大连化学物理研究所，辽宁大连116012)
摘要：目的建立天麻的液相色谱指纹图谱，为科学评价及有效控制天麻质量提供新方法。方法采用HPLC法
分析不同产地的18个天麻样品，确定指纹峰并进行对照药材相似度、共有模式相似度的计算，用纯品随行对照结
合LC—MS对主要指纹峰进行定性鉴定。结果建立了由27个指纹峰和17个共有峰组成的天麻液相色谱指纹图
谱，指纹峰具有特征性，鉴定了其中12个主要的指纹峰。用对照药材相似度，可将天麻样品分为3类：安徽河南产
天麻、陕西四川产天麻和云南产天麻。两个相关系数分界点为0．80和0．58，夹角余弦分界点为0．88和0．73。结论
所选指纹峰有特征性，建立的指纹谱可用来区别3个产地的天麻药材，并为进一步控制天麻质量提供依据。
关键词：天麻；高效液相色谱法，指纹图谱；相似度
中图分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)09—1402一04
HPLCFingerprintofGas rodiaelata
WANGLi，CHENGMeng—chun，XIAOHong—bin，LIANGXin—miao
(DalianInstituteofChemieophysics，TheChineseAcademyofSciences，Dalian116012，China)
Abstract：ObjectiveToestablishHPLCfingerprintforevaluatingandcontrollingthequalityof
Gastrodiaelata．MethodsHPLCAnalysisandsimilaritycalculationwereusedforestablishingfingerprint
chromatogramandcl ssifying18differentoriginals mples；LC—MSandpurecompoundcomparisonswere
employedforthefingerprinteaksidentification．ResultsHPLCFingerprintchromatogramwascons-
tructedwith27fingerprinteaks，17ofwhichwerecommonfi gerpringeaksand12maincompounds
wereidentified．Accordingtothesim laritytos andardizeherbalmedicine，18samplescouldbeclassified
threegroups，Anhui—Henan，Shanxi—Sichuan，andYunnanh bitats．Thetwocriticalpointswere0．80and
0．58forcorrelationcoefficientand0．88and0．73forcosinevalues．ConclusionTheselectedfingerprint
peaksarediagnosticforG．elataandtheconstitutedHPLCfingerprintchromatogramcouldbeusedfor
identifyingdifferenthabitatsandservedasapowerfultooforfurtherqualitycontrolofG．elata．
Keywords：GastrodiaelataBI．；HPLC；fingerprint；similarity
天麻为兰科植物天麻GastrodiaelatBI．的干
燥块茎，主治头痛眩晕、肢体麻木、癫痫抽搐等症。其
质量控制多用高效液相法测定天麻素的量或用毛细
管电泳测定其他几个活性成分的量‘卜3|。指纹图谱
是控制天然药物质量的有效方式之一，已日益成为
国内外广泛接受的中药质量评价模式‘4’5]。本实验通
过收集天麻主产地的18个样品进行指纹图谱研究，
最终建立了由27个指纹峰和17个共有峰组成的天
麻液相色谱指纹图谱；由对照药材相似度及共有模
式相似度的计算，可以较好地区分不同产地的天麻
收稿日期：2005—10—12
基金项目：中科院知识创新工程重要方向项目(KGCX2一SW一213)；国家自然科学基金重点项目“中药药效组分的指纹图谱分析的方法研
究”(20235020)
作者简介：王莉(1975一)，女，博士在读，主要从事中药的分离分析工作。E—mail：wlhws@dicp．ac．ca
*通讯作者肖红斌梁鑫淼
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第9期2006年9月
样品；同时通过制备纯化合物鉴定结构及结合液质
联用的质谱规律，鉴定了天麻中12个主要指纹峰的
结构。天麻的指纹图谱研究为进一步深入研究天麻
的药理活性及科学评价其质量打下了良好基础。
1仪器与试药
美国Waters公司2690高效液相色谱仪(包括
四元梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱恒温系
统)；Waters996二极管阵列检测器；Waters
Millennium32色谱工作站；Millipore超纯水；色谱
纯甲醇，色谱纯醋酸。天麻对照药材(中国药品生物
制品检定所，120944—200006)，18个天麻样品来源
于不同产地，详见表1，由河南中医学陈随清教授鉴
定为兰科植物天麻。表内半野生药材为人工放的菌
种，但天麻的生长条件为自然环境。
表I天麻样品来源
Table1 SourcesofG．elatas mples
样品号 药材产地 样品号 药材产地
l 安徽(同仁堂药房) 12 陕西(郑州本草国药馆)
4 四川(成都中医药大学) 13 陕西(安国药材市场)
5 安徽(戚运生药房) 14 四川半野生
6 安徽(海王星辰西安路店) 15 四川半野生
7 安徽(海王星辰民政店) 16 河南伏牛山
8 云南昭通二级家种 17 河南大别山
9 云南昭通一级家种 18 秦岭山区
10 云南昭通一级野生 19 河南(禹州药材市场)
11 云南昭通特级野生 20 安徽(对照药材)
2方法与结果
2．1供试品溶液的制备：天麻药材碎成小块，用粉
碎机粉碎，过60目筛。精密称取天麻粉末8g，加入
80mL甲醇超声提取30min，放置过夜(约14h)，
再次超声提取30min。合并两次提取液，滤过，浓缩
至干，用超纯水定容至10mL即得(相当于原药材
0．8g／mL)。
2．2天麻指纹图谱的建立
2．2．1 色谱条件：HypersilC18色谱柱(5pm，250
mm×4．6mm，大连依利特公司)；流动相：0．5％醋
酸甲醇(A)一0．5％醋酸水溶液(B)，0～10min2％A
等度，10～60min2％A一40％A线性梯度，60---75
min40％A等度；柱温35℃；体积流量1mL／min。
2．2．2测定方法：取供试品溶液过0．45肛m滤膜，
取10弘L注入液相色谱仪，270nm检测，记录75
min内的色谱峰及其保留时间和峰面积，色谱图见
图1。
2．2．3稳定性试验：取4号天麻样品的供试品溶液
10弘L，分别于0、5、10、15、20h检测指纹图谱。结果
O 5 lO 15 20 2530354045 50555065 7075
t／min
图1天麻对照药材的HPLC图谱
Fig．1HPLCChromatogramofRhizomaGastrodiae
referencesubs；tances
表明，各主要共有指纹峰的相对保留时间及相对峰
面积无明显变化，RSD分别为0．oH～1．0％和
0．8％～8．7％。说明样品制备液在20h内稳定。
2．2．4精密度试验：取4号天麻样品的供试品溶液
10弘L，重复进样5次，记录指纹图谱。结果表明，各
主要共有指纹峰的相对保留时间及相对峰面积无明
显变化，RSD分别为0．0％～0．8％和0．8％～
7．1％。
2．2．5重现性试验：取4号天麻样品粉末5份，分
别按2．1项下方法制备供试品溶液，各取10肛L进
样记录指纹图谱。结果表明，各主要共有指纹峰的相
对保留时间及相对峰面积无明显变化，RSD分别为
0．0％～0．8％和1．1％～6．5％。
2．2．6指纹峰及共有峰的选择：在当前色谱条件
下，首先选择归一化峰面积大于0．5％的色谱峰作
为指纹峰；对于未分离的共有小峰(单个峰峰面积在
0．5％以下)，若指纹性较特征，也将其保留为指纹
峰。其方法是选择其中最易辨认峰的保留时间作为
此峰群的保留时间，其总面积作为此峰群的峰面积。
本指纹谱中的12、17、18号峰即为合并的指纹峰(有
2～4个小峰组成)。最终共选择了27个指纹峰，其
中17个为共有峰。
2．2．7相对指纹图谱的建立：以23号峰巴利森苷
为参照峰，其保留时间和峰面积均记为1，计算其余
指纹峰相对于巴利森苷的相对保留时间和相对峰面
积。具有相同相对保留时间的指纹峰被认为是同一
个指纹峰，并以每个峰的紫外光谱作为辅助验证。
2．3数据处理
2．3．1天麻药材相似度的计算：以选择的27个指
纹峰的峰面积为变量用Excel2000按照相关系数
公式和夹角余弦公式[63计算17个天麻样品与对照
药材样品(20号)的相关系数和夹角余弦相似度，结
果见表2。从表2可知，安徽产天麻和河南产天麻的
相似度范围为0．97～0．80(相关系数)和0．98～
0．88(夹角余弦)；四川和陕西产天麻的相似度范围
为0．79^_0．59(相关系数)和0．88～0．73(夹角余
万方数据
·1404· 中草115ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第9期2006年9月
弦)；云南产天麻的相似度范围为0．56～o．29(相关
系数)和0．72～o．44(夹角余弦)。其中秦岭山区产
天麻和云南野生天麻的相似度较低，相关系数和夹
角余弦范围分别为0．20～o．31和0．44～0．47。因
此对照药材相似度可清楚地把天麻的产地归为以上
3类，两个分界点分别为0．80、0．58(相关系数)和
0．88、0．73(夹角余弦)，同时可初步判别野生药材。
2．3．2共有模式相似度的计算：用中南大学指纹谱
相似度评价软件拟合共有模式并以5～72min的全
谱图计算共有模式相似度。
模式I以安徽产天麻5、6、7、20号样品的均值
作为共有模式，计算各个样品与此共有模式的相关
系数相似度(夹角余弦相似度结果类似，为了描述方
便在此只讨论相关系数相似度)。从I的结果(表3)
可以看出所有安徽药材和共有模式的相关系数相似
度在0．92以上；河南药材(19号样品除外)和安徽
药材不可分相似度在0．93以上；而其他产地药材相
关系数相似度均在0．85以下容易区分。19号样品
相似度较低，和陕西四川产药材有交叉，为了把19
号样品也融进母体，模式11以所有安徽产天麻和河
南产天麻的均值作为共有模式(19号也参与平均)。
结果显示19号样品还是与主体河南、安徽药材不
同。仔细观察其相对峰面积可知19号样品中的峰7
质量分数比主体河南、安徽药材高4～12倍，因此判
断，19号样品的产地和其他安徽、河南样品应有较
大差别。
表2天麻样品相似度计算结果
Table2 SimilarityforRhizomaGastrodiaesubstances
样品编号 相关系数 夹角余弦 产地 样品编号 相关系数 夹角余弦 产地
20 1 1 对照药材 14 0．6063 0．7379 四川
1 0．9738 0．9828 安徽 15 0．6628 0．7854 四川
5 0．9122 0．9479 安徽 1Z 0．7959 0．8805 陕西
6 0．8394 0．9063 安徽 13 0．5978 0．7432 陕西
7 0．8901 0．9342 安徽 8 0．5663 0．7206 云南
16 0．8985 0．9347 河南 9 0．4886 0．6230 云南
17 0．9697 0．9818 河南 10 0。2956 0．4469 云南野生
19 0．8901 0．8810 河南 11 0．318 0．4451 云南野生
4 0．7641 0．8503 四川 18 0．2091 0．479‘8 秦岭山区
表3共有模式相关系数相似度计算结果
Table3 Correlationcoefficients milarityforcommonpattern
样品编号 安徽共有模式 安徽、河南共有模式 样品编号 安徽共有模式 安徽、河南共有模式
20 0．9293 0．9551 14 0．6356 0．6805
1 0．9338 0．9629 15 0．6746 0．7252
5 0．9816 0．9712 12 0．8225 0．8539
6 0．9564 0．9169 13 0．6498 0．6891
7 0．9691 0．9550 18 0．4374 0．4441
16 0．9358 0．9526 8 0．7765 0，7505
17 0．9591 0．9785 9 0．6624 0．6557
19 0．8254 0．8496 10 0．4966 0．4837
4 0．8490 0．8361 1l 0。5060 0．4939
2．3．3主要指纹峰的定性鉴别：以分离纯化的单一
化合物为对照品及结合LC—MS鉴定结果，初步鉴
定了12个指纹峰。1、5、6、7、8、10、14、17、19、20、23、
25号峰分别为尿苷(uridine)、天麻素(gastrodin)、
鸟苷(guanosine)、棕榈酸(palmiticacid)、对羟基苯
甲醇(户一hydroxybenzylalcoh01)、腺苷(adenosine)、
对羟基苯甲醛(户一hydroxybenzaldehyde)、硫一(对羟
苯基)谷光甘肽[S一(4-hydroxy—benzyl)一
glutathione]、帕氏万带兰素B(parishinB)、帕氏万
带兰素C(parishinC)、帕氏万带兰素(parishin)和
4，47一二羟基苄醚(4，47一dihydroxydibenzylether)。
3讨论
3．1 提取方法及供试品溶液的制备：本实验参照
《中国药典》方法采用超声提取并对其进行了适当改
进，如天麻药材不宜久烘，本实验采用平行取少量样
品80℃烘干测定含水量，用含水量测定结果将实验
用样品折算成净称样量以消除称样误差。本实验中
所列峰面积即为折算后的数据，所有样品的最终质
量浓度均相当于原药材0．8g／mL；采用水来定容，
因为考虑到天麻中的多数成分为水溶成分。
3．2色谱条件的选择：考虑到要用液质联用对指纹
峰定性，实验中选用挥发性的醋酸作为改性剂并选
万方数据
中草115ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第9期2006年9月·1405·
用了不同酸度的流动相，结果表明所选条件峰形较
好、较稳定。对于检测波长的选择，天麻中多数成分
的吸收在220、270nm，但220nm醋酸有吸收，因此
最终选择检测波长为270nm。
3．3参照峰的选择：天麻素、对羟基苯甲醇和巴利
森苷均为天麻中高质量分数的活性组分，但天麻素
和对羟基苯甲醇的质量分数不稳定，有共轭互变关
系且保留时间也不如巴利森苷稳定，因此选择巴利
森苷作为参照峰。
3．4 指纹峰的选择：本实验没有考虑保留时间在5
min之前的峰，因为实验选择了尽可能低的有机相起
始体积分数2％，并在两相流动相中添加了酸抑制
剂，所以5min之前的峰为在反相柱上未分离的峰。
3．5指纹峰的特征性：已鉴定的12个指纹峰中有
7个为天麻活性成分，它们是天麻素、对羟基苯甲
醇、对羟基苯甲醛、巴利森苷、巴利森苷B、巴利森苷
C和4，47一二羟基苄醚。3个核苷类成分尿苷、鸟苷
和腺苷为天麻中首次鉴定，文献报道其有增强免疫
作用，推测它们可能为天麻的潜在活性成分。这些成
分均为天麻特征成分，因此本实验所选择的指纹峰
具有较强的特征性可以用来控制天麻质量。
References：
[13Ch|P(中国药典)[J]．VolI．2005．
[2]ZhaoYK，CaoQE，XiangYQ，eta1．Identificationand
determinationofactivecompoundinGastrodiaclaraBI．by
ca—pillaryelectrophoresis[J]．JChromatogrA，1999，849
(1)：277—283．
[33LiHX，DingMY，YuJY．Simultaneousdeterminationof
P—hydroxybenzaldehyde，P—hydroxybenzylalco ol，4一(一。D—
glucopyranosyIoxy)-benzyIalcohol，andsugarsinGastrodia
claraBlumeasuredastheiracetylatedderivativesbyGC—
MS．EJ]．JChroraatogrSci，2001，39(6)：251—254．
[43LuoGA，WangYM，CaoJ，eta1．Astudyonestablishing
modernstandardsystemtocontrolthequalityo traditional
Chinesemedicineinournation．[J]．WorldSciTech：Mod
TraditChinMed(世界科学技术一中药现代化)，2002，4
(4)：5—11．
[5]XiaoR，YuanzF，WangCY，eta1．Fingerprintsof
Scutellariab icalensisfromdifferenthabitatsbyHPLC．[J]．
ChinTraditHerbDrugs(co草药)，2005，36(5)：743—747．
[6]MiaoAD，SunDJ．Applicationofmicrosoft2000o
calculatethesimilarityinfingerprintsinChineseherbs．[J]．
ProgPharmSci(药学进展)，2003，27(1)：51—54．
施磷量和AM真菌对柴胡生长的交互效应
赵丽莉1，滕华容2，贺学礼1’2
(1．河北大学生命科学学院，河北保定071002；2．西北农林科技大学生命科学学院，陕西杨凌712100)
摘 要：目的 研究不同施磷水平下接种AM真菌摩西球囊霉Glomusmos eae、苏格兰球囊霉G．caledonium和两
者的混合菌剂对柴胡Bupleurumchinense生长的影响。方法采用盆栽试验与室内分析相结合的方法。结果接
种AM真菌提高了柴胡根系菌根侵染率，增加了植株磷的量和根于质量I叶片叶绿素、类胡萝卜素和可溶性糖的量
明显高于对照株，而接种混合菌种的柴胡根可溶性糖的量低于对照株；AM真菌接种效应因菌种和施磷量不同而
变化，施磷量为0．1～0．3g／kg时接种效果最好。结论接种AM真菌有利于柴胡生长，提高磷肥利用率。
关键词：AM真菌；施磷量}生长量；柴胡
中圈分类号：R282．2 文献标识码；A 文章编号：0253—2670(2006)09—1405—05
EffectsofAMfungiongrowthofBupleurumchinenseunderdifferentphosphoruslevels
ZHAOLi—lil，TENGHua—ron92，HEXue—lil’2
(1．CollegeofLifeScience，HebeiUniversity，Baoding071002，China；2．Northwest
Agriculture&ForestryUniver it ，Yangling712100，China)
Abstract：ObjectiveTheffectsofAMfungionthegrowthofBupleurumchinensewereinvestigated
byinoculationGlomusmosseae，G．caledonium，andthetWOfungalmixturenderdifferentphosphorus
levels．MethodsPotcultureandxperimentalanalyseswerecarriedout．ResultsMycorrhizalinfection
ratecouldbepromotedbyinoculationndncreasedphosphoruscontentofplantandrootdryweight；the
contentofchlorophyll，carotenoids，andsolublesugarofleafwashigherthanthatofcontrolledplant，and
thesolublesugarcontentofplantrootbyinoculationthetwofungalmixtureswerelowerthanthatof
收稿日期：2005—10—12
基金项目：国家自然科学基金项目(40471637)；河北大学自然科学基金重点项目(Z200405)
作者筒介：赵丽莉(1964一)，女，陕西省富平县人，副教授，主要从事植物生理生化和分子生物学方面的教学和研究工作，在该领域已发
表论文15篇。Tel；(0312)4101908E—mail：zha03615@tom．com
万方数据
天麻液相色谱指纹图谱研究
作者： 王莉， 程孟春， 肖红斌， 梁鑫淼， WANG Li， CHENG Meng-chun， XIAO Hong-bin，
LIANG Xin-miao
作者单位： 中国科学院大连化学物理研究所,辽宁,大连,116012
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(9)
被引用次数： 6次

参考文献(6条)
1.中华人民共和国药典(一部) 2005
2.Zhao Y K;Cao Q E;Xiang Y Q Identification and determination of active compound in Gastrodia elata
Bl.by ca-pillary electrophoresis[外文期刊] 1999(01)
3.Li H X;Ding M Y;Yu J Y Simultaneous determination of p-hydroxybenzaldehyde,p-hydroxybenzyl
alcohol,4-(-D-glucopyranosyloxy)-benzyl alcohol,and sugars in Gastrodia elata Blume measured as
their acetylated derivatives by GC-MS[外文期刊] 2001(06)
4.Luo G A;Wang Y M;Cao J A study on establishing modern standard system to control the quality of
traditional Chinese medicine in our nation[期刊论文]-世界科学技术-中医药现代化 2002(04)
5.Xiao R;Yuan Z F;Wang C Y Fingerprints of Scutellaria baicalensis from different habitats by HPLC
[期刊论文]-中草药 2005(05)
6.Miao A D;Sun D J Application of microsoft 2000 to calculate the similarity in fingerprints in
Chinese herbs[期刊论文]-药学进展 2003(01)

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3. 石上梅.孙婕.杜庆鹏.田金改.林瑞超.SHI Shang-mei.SUN Jie.DU Qing-peng.TIAN Jin-gai.LIN Rui-chao 天
麻药材HPLC指纹图谱的研究[期刊论文]-中国药学杂志2005,40(10)
4. 米健芳.李西林.周秀佳 HPLC法对天麻主流商品的质量研究[会议论文]-2008
5. 石荣.王少云.侯准.桑立红.SHI Rong.WANG Shaoyun.HOU Zhun.SANG Lihong 大豆异黄酮指纹图谱中保留时间漂
移的校正研究[期刊论文]-色谱2006,24(1)
6. 梁纪军.田大丰.王中彦.王晶.郭玉民.LIANG Ji-jun.TIAN Da-feng.WANG Zhong-yan.WANG Jing.GUO Yu-min
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7. 朱洁.闵勇.羊晓东.张洪彬 不同炮制方法处理的天麻药材指纹图谱的研究[期刊论文]-中药材2005,28(11)
8. 张芙蓉.唐延林.辛荣.王志平.贾秀丽.ZHANG Fu-Rong.TANG Yan-Lin.XIN Rong.WANG Zhi-Ping.JIA Xiu-Li 紫
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9. 王莉.王龙星.肖红斌.梁鑫淼 天麻指纹图谱模式识别研究[期刊论文]-中国中药杂志2007,32(6)
10. 王龙星.肖红斌.梁鑫淼 一种提高色谱指纹谱保留时间重现性的新方法[期刊论文]-分析化学2003,31(10)

引证文献(6条)
1.麻印莲.肖永庆.耿立冬.张村.李丽.于定荣.顾雪竹 天麻饮片的HPLC指纹图谱鉴别[期刊论文]-中国实验方剂学杂
志 2011(19)
2.王莉.王龙星.肖红斌.梁鑫淼 天麻指纹图谱模式识别研究[期刊论文]-中国中药杂志 2007(6)
3.陈振华.刘守金.方成武.程旺兴 天麻的电化学指纹图谱研究[期刊论文]-中国现代中药 2012(5)
4.田静.许亚玲.舒娟.王元辉 梵净山仿野生天麻高效液相指纹图谱研究[期刊论文]-中成药 2011(9)
5.刘智.王爱民.许祖超.迟明艳.王永林 全天麻胶囊特征指纹图谱研究[期刊论文]-中国实验方剂学杂志 2012(15)
6.杜伟锋.陈琳.丛晓东.张云.蔡宝昌 天麻化学成分及质量控制研究进展[期刊论文]-中成药 2011(10)


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