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HPLC法测定杯苋甾酮的血药浓度



全 文 :中国疗养医学 2010 年 7 月第 19 卷第 7 期
川牛膝为苋科植物川牛膝(Cyathula officinalis Kuan)的
干燥根,主产于四川、云南、贵州等地,具有逐瘀通经,通
利关节,利尿通淋之功,用于胞衣不下、关节痹痛等 [1]。其
所含化合物类型主要有脂肪酸类、甾酮类、异黄酮类、齐
墩果酸皂苷类化合物。根据近年来的文献报道,蜕皮甾酮
有促进蛋白质同化作用、抗血小板聚集、降低血糖等明显
的生理活性 [2- 3],与川牛膝补肝益肾、强筋健骨功效相符。
杯苋甾酮 (Cyasterone)(图1)[4- 5]在川牛膝中含量较大 [6 ],可
作为代表性药物进行药物代谢动力学研究。因此本文建
立高效液相色谱法测定杯苋甾酮的血药浓度为其进一步
研究提供依据。
1 材料、仪器和动物
实验动物:大耳兔,体重2.0 kg,由湖州市药检所提
供。实验前禁食24 h,自由饮水,室温饲养。仪器:Waters高
效液相色谱仪 (515泵、2487紫外检测器 ),7725 i手动进样
阀,针筒式微孔过滤器(0.45 μm,天津市腾达过滤器厂),
GR- 202 AND分析天平,UV- 754型紫外可见分光光度计,
80- 2台式离心机,XW- 80 A涡流混旋器,BDS 160电热恒
温水温箱。杭州英谱工作站,AS 3120 A超声仪。药品和试
剂:对照品,自制,TLC及HPLC检测均为单峰。经过UV、
IR、MS、1H- NMR、13C- NMR、CD等测试鉴定为杯苋甾酮,纯
度为99.6%(HPLC- ELSD归一化法测定)。乙腈、甲醇为色
谱纯;实验用水为重蒸去离子水。
2 方法
2.1 给药 采用灌胃法 [7]给药,家兔称重2.0 kg,按家兔
体重25 mg/kg给药。精密称取杯苋甾酮对照品50.0 mg,溶
于10 mL蒸馏水中,超声成混悬液,吸于注射器中给药。用
5 mL蒸馏水清洗注射器。给药前取血做空白血,给药后不
同时间取血,HPLC法测定兔血浆中杯苋甾酮的含量。
2.2 血样处理 取兔耳缘静脉血,每次0.5 mL置于2 mL
的真空采血管中 (内含枸椽酸钠 ),加入乙腈2 mL,涡流混
旋10 min,4 000 r/min离心10 min,取上清液水浴蒸干,残
渣加入0.1 mL流动相超声溶解,分别过膜,HPLC测定杯
苋甾酮的峰面积,从标准曲线上获得杯苋甾酮的浓度。
2.3 对照品溶液制备 精密称取杯苋甾酮11.30 mg,置
200 mL量瓶中,加50%甲醇水溶解并稀释至刻度,摇匀,
得56.5 μg/mL。取上述对照品溶液5 mL于50 mL量瓶中,
用50%甲醇水定容,摇匀,即得 (每1 mL中含杯苋甾酮
5.65 μg)。
2.4 杯苋甾酮的紫外可见吸收光谱 取5.65 μg/mL的
对照品溶液,以50%甲醇水作空白,在200~600 nm范围
图1 杯苋甾酮的结构式
文章编号:1005- 619X(2010 )07- 0657- 03
HPLC法测定杯苋甾酮的血药浓度
266071 济南军区青岛第一疗养院第一疗养区 潘靖
【摘要】 目的 建立反相高效液相色谱法测定杯苋甾酮在家兔血浆中的药物浓度。方法 血浆样品用乙腈提取,流动相为
乙腈20 g、水80 g、磷酸二氢钠1.20 g,流速1 mL/min,检测波长243 nm。结果 家兔口服给药后血浆中可检出杯苋甾酮,杯
苋甾酮在0.565~9.040 μg/mL范围内线性关系良好,r=0.999 0(n=5),日内RSD为±3.9%,日间RSD为±7.3%;血浆最低检
测浓度为0.28 μg/mL。结论 本法快速、准确、重现性好,为该药物的药代动力学研究提供依据。
【关键词】 川牛膝;杯苋甾酮;HPLC;血药浓度
【Abstract】 Objective To establish a RP-HPLC(reversed-phase high-performance liquid chromatography) method for the determi-
nation of cyasterone in rabbit plasma.Methods The plasma samples were extracted with Methyl Cyanides.RP-HPLC conditions were
set as follows:Mobile phase:CH3CN 20 g、H2O 80 g、NaH2PO4 1.20 g;Flow rate:1 mL/min,Detection wave length:243 nm.Re-
sults Cyasterone was found in rabbit plasma after oral drug administration.The calibration curve of cyasterone showed good linearity
over the range of 0.565~9.040 μg/mL,r=0.999 0(n=5).RSD were ±3.9% and ±7.3%within-day and between-day respectively.
The lowest detectable concentration was 0.28 μg/mL.Conclusion The method is rapid,accurate and reproducible,which can pro-
vide bases for the study of its pharmacokinetics.
【Key words】 Cyathula officinalis Kuan;Cyasterone;HPLC;Plasma drug concentration
对不合理用药、滥用药等情况进行纠正,用药时要做到明
确诊断,正确选用药物品种,保证有效剂量,选择恰当的
用药途径,特别注意的是不能盲目联合用药或随意增加
剂量。在未确定病因前,应尽量不使用药物。
对老年人常用药的合理性应用问题越来越引起人们
的关注,老年人的机体日趋老化,各系统功能逐渐减退,
使得药物在体内代谢和排泄发生了改变,因此疗养院医
生给老年人在用药时间、药名、剂量方面提供准确用药指
导,提高患者服药依从性,保证药物疗效。
参考文献
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(收稿日期:2010- 02- 01 )
657· ·
DOI:10.13517/j.cnki.ccm.2010.07.080
Chin J Convalescent Med , Jul . 2010 , Vol . 19 , No . 7
图 3 杯苋甾酮的血药浓度 - 时间曲线
A 血浆样品色谱图 B 空白血浆色谱图
C 杯苋甾酮对照品色谱图 D 校正曲线方程 ( n=5 )
图 2 色谱图和线性图
内扫描,得杯苋甾酮紫外可见吸收光谱,可知其在243 nm
处有最大吸收。
2.5 数据处理 血药浓度和时间数据由3P87软件处理。
3 血液中杯苋甾酮的含量测定
3.1 测试条件 色谱柱为Symmetry- C18 (5 μm,3.9 mm×
150 mm),流动相为乙腈20 g、水80 g、磷酸二氢钾1.36 g,流
速1 mL/min,检测波长243 nm,进样量10 μL。柱温室温。
3.2 方法学考察
3.2.1 方法专属性考察 空白血液、含药血液样品和对
照品按3.1项方法各进样10 μL,HPLC图谱(图2 A、B、C)。
3.2.2 稳定性考察 取处理好的血液样品,分别于 0 h、
2 h、4 h、8 h、12 h 按项方法进样10 μL,计算杯苋甾酮的
峰面积,RSD为2.32%,即样品在12 h内稳定性好。
3.2.3 线性关系考察 分别取空白血浆0.5 mL于5个试管
中,分别加入杯苋甾酮对照品溶液,制成浓度分别为:
0.565 μg/mL、1.130 μg/mL、2.260 μg/mL、4.520 μg/mL、
9.040 μg/mL。按2.1项下血样处理过程处理后分别进样
10 μL,3针 /次,记录其峰面积。以杯苋甾酮峰面积(Y)为
纵坐标,杯苋甾酮的进样浓度 (X)为横坐标,由HS色谱数
据工作站计算得杯苋甾酮回归方程为 Y=17 715X+
759.517,r=0.999 0,在 0.565~9.040 μg/mL范围内,线性
关系良好(图2 D)。
3.2.4 回收率和精密度试验 于空白血液中加入高、
中、低3个不同浓度的杯苋甾酮对照品液,制备得到分别
含杯苋甾酮浓度为 9.040、2.260、0.565 μg/mL血液样品,
测定3个浓度血液中杯苋甾酮的回收率分别为:89.7%、
90.2%、93.5%,平均回收率为91.1%,RSD=2.25%(n=5),
日内精密度RSD=±3.9%,日间精密度RSD=±7.3%。
4 结果与结论
家兔经口服给药后,杯苋甾酮在家兔体内吸收很快,
20 min血液中可检出杯苋甾酮 (图3);HPLC法测定家兔血
液中杯苋甾酮的浓度,分离度好,方法简便、灵敏,可用于
杯苋甾酮的血药浓度测定和进一步进行药物代谢动力学
研究。
5 讨论
1)血样的处理:作者先后采用多种蛋白沉淀方法,和
多种萃取方法,包括甲醇、乙腈、丙酮、高氯酸、硫酸铵等
方法。结果表明,杯苋甾酮提取率在乙腈、甲醇中较高,且
在乙腈中提取较干净、无干扰。因此采用乙腈沉淀蛋白并
提取,方法简单,提取率又高。
2)本文采用乙腈20 g、水80 g、磷酸二氢钠1.20 g作为
流动相测定兔血浆中杯苋甾酮的浓度,杯苋甾酮的保留
时间为14.4 min,平均回收率为85.5%。本方法操作省时、简
便,精密度及重现性均较好 [8- 11]。
参考文献
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中国疗养医学 2010 年 7 月第 19 卷第 7 期
文章编号:1005- 619X(2010 )07- 0659- 02
浅谈我院药房零散药品管理
361000 南京军区鼓浪屿疗养院 朱彤
根据卫生部新颁布的《处方管理办法》对药品处方
限量使用的规定,普通处方用量不得超过7 d常用量,急
诊处方不得超过3 d常用量。药剂师在调配处方时必然出
现拆散的零散药品,零散药品没有正规的包装,因此会出
现药品的名称、规格、用法、用量、有效期等内容的缺失。
《药品经营质量管理规范》 中规定拆零药品应集中存放
于拆零专柜,并保留原包装标签,而疗养院药房调剂室拆
散药品现象频繁,在监管以及规范上往往出现漏洞。现就
我院药房零散药品的管理、储存现状作出分析。
1 存在的问题
1)我院药房现存零散药品主要有片剂、胶囊、注射剂
等,有效期都在两年左右。大部分药品拆零后,如口服片
剂,多是直接倒入深色广口瓶中,在使用中频繁打开瓶盖
或是使用完后没有及时盖上瓶盖,使得药品长期暴露
文章编号:1005- 619X(2010 )07- 0659- 01
浅谈疗养院临床药师如何开展药学服务工作
541005 广州军区桂林疗养院 蒋薇
【摘要】 目的 探讨疗养院药师怎样开展药学服务工作。方法 对疗养院临床药师现状进行分析。结果 提高药师自身素
质,为临床服务。结论 药师应积极主动地开展药学服务,体现药师价值。
【关键词】 疗养院;临床药师;药学服务
临床药学是一门以患者为对象,研究合理用药、提高
医疗质量的学科。我国在20世纪80年代就开始开展临床
药学工作,但由于各种原因,我国临床药学工作进展缓
慢。随着人们生活水平的提高,对高质量医药服务的要求
也越来越高,药学服务已逐渐成为医院药学的工作模式。
而如何开展临床药学工作,体现药师的价值,成为疗养院
药师需要思考的问题。
1 疗养院临床药师的现状
我国临床药学的教育起步较晚,很多医院缺乏临床
药学专业药师,至今在实际工作中的临床药师多是经过
学习培训而来。我国现有的药学教育是以化学为主,很多
临床药师虽经过学习培训,但对医学知识尤其是临床医
学知识掌握较少,与医务人员交流有障碍。由于缺乏临床
经验,药师用药多从药物的药理学角度出发,难以将合理
用药的理论和临床实践相结合,这就限制了临床药师发
挥作用,使临床药师处在一种“听医生的”尴尬处境。而
疗养院由于基础设施落后、药师较少等原因,临床药学的
开展更为落后。临床治疗药物不断推陈出新,而药师合理
用药的观点有的已经落伍,导致无法提供合理的用药参
考方案。
2 疗养院药师怎样开展药学服务工作
2.1 加强药学专业知识学习 药学知识是药师工作的
基础,药师参与临床药学服务工作的优势也在于扎实的
药学专业基础。但在新时期,临床治疗不断推出新的药物
及治疗方案,如果药师所学仅限于以前的课本知识,是跟
不上临床的。因此药师要不断更新药学知识来提高自己
的专业水平,才能在临床证明自己的价值。
2.2 加强临床知识的学习 药师缺乏临床知识是难以
参与到临床合理用药中去的,也因此得不到医护人员的
认同。药师在学习培训中要把临床知识的补充作为重点,
在工作中也要抱着谦虚的态度来学习临床知识。通过长
期的工作,不断积累临床用药经验,将药学知识与临床治
疗相结合,这样才能安全合理地使用药物。也只有这样才
能与医护人员沟通,体现药师在临床工作中的作用。
2.3 从宣传合理用药入手,开展药学服务 随着经济的
发展,人们对高质量医疗服务的要求也不断提高,如何安
全、有效地用药已受到人们的密切关注。现在存在一些患
者自行购药 (如抗生素等 )、用药不当和滥用现象,药师要
以宣传合理用药为切入点,向患者提供药学服务,这样既
提高了患者的用药依从性,促进合理用药,也提高了患者
对药师的认知度。在提供用药咨询时,药师要根据患者的
个体特点及经济能力主动替患者着想,使患者对药师产
生充分的信任,从而树立药师提供药学服务的良好形象。
3 结语
随着医疗水平的发展,药师作为医疗体系中的重要
组成部分,应该加强学习,不断提高自身素质,充分发挥
主观能动性,利用自己的专业知识,帮助人们安全、有效、
合理地用药,为患者提供优质的药学服务。
(收稿日期:2010- 01- 14)
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(收稿日期:2010- 01- 14)
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