全 文 ：·926· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月
土贝母的HPLC指纹图谱研究
李晓晶1，姜琳琳1，吴智南2，赵陆华¨
(1．中国药科大学分析测试中心，江苏南京210009；2．广州固志医药科技有限公司，广东广州510663)
摘 要：目的采用HPLC法研究并建立各产地土贝母药材的指纹图谱。方法用AlltechC，s柱(250mm×4．6
mm，5弘m)；流动相：乙腈一水，梯度洗脱；体积流量：1．0mL／min，在230和203nm波长处测定了15个不同产地的
土贝母药材，并用聚类分析和相似度计算进行数据分析。结果 建立了土贝母药材的HPLC指纹图谱，标定了18
个共有指纹峰，方法学考察结果符合指纹图谱技术要求，经相似度计算，各产地药材之间的相似性良好。结论方
法稳定、可靠、重现性好，可用来控制土贝母药材的质量。
关键词：土贝母；高效液相色谱法；指纹图谱；相似度；聚类
中图分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)06—0926—04
FingerprintsofRhizomaBolbostemmaebyHPLC
LIXiao—jin91，JIANGLin—linl，WUZhi—nan2，ZHAOLu—hual
(1．CenterforInstrumentalAnalysis，ChinaPharm ceuticalUn versity，Nanjing210009，China；
2．GuangzhouGuzhiPharmaceuticalTechnologyCo．，Ltd．，Guangzhou510663，China)
Keywords：RhizomaBolbostemmae；HPLC；fingerprints；similarity；clustering
土贝母为葫芦科植物土贝母Bolbostemmapani—
culatum(Maxim．)Franquet的干燥块茎，是一种传
统中药，也称土贝、大贝母、地苦胆、草贝等。主产于河
南、陕西、山东等地。临床具有清热解毒、消肿散结之
功效。土贝母所含的主要成分有脂肪酸、甾醇、三萜皂
苷等[1]，其中皂苷类成分主要为土贝母苷甲、乙、丙、
丁(tubeimosideI，Ⅱ，Ⅲ，IV)，土贝母苷甲量达
11．9％，具有抗肿瘤、抗病毒等多种药理活性[2]。由于
受产地、气候和生态环境等的影响，各产地土贝母的
化学成分存在一定的差异。长期以来，对土贝母的质
量控制多是通过对其性状和薄层进行鉴别。近年来，
虽对其中土贝母苷甲的量进行测定[3]，但是对于土贝
母成分多、组分复杂的中药材而言，仅测定某个成分
的量，难以客观、有效地评价或控制药材的质量。而指
纹图谱技术作为一种多组分复杂样品的有效质量控
制方法，能够反映出待测样品的整体性、特征性。本实
验采用HPLC法对土贝母药材的指纹图谱进行了研
究，对不同产地的土贝母药材指纹图谱进行了对比，
为该药材全面质量控制建立了有效的方法，并为土贝
母临床用药及选择种植基地提供参考。
1仪器、试剂与药材
日本岛津LC一10ADVP高效液相色谱仪，岛
津SPD一10AVP紫外检测器，浙江大学N2000型
色谱工作站。乙腈为色谱纯(美国天地公司)，水为纯
净水(经0．45弘m微孔滤膜滤过)。
土贝母苷甲对照品由中国药品生物制品检定所
提供，不同产地土贝母药材由笔者于各产地收集，来
源见表1，经中国药科大学宋学华教授鉴定。
表1土贝母样品来源
Table1 SourceofB．paniculatumsamples
编号 产地或来源 编号 产地或来源
1 陕西宝鸡 9 宁夏固原
2 河南 10 河北
3 四JII1 11 四川2
4 青海 12 湖北恩施
5 山东青岛 13 陕西
6 甘肃 14 宁夏
7 安徽毫州 15 云南
8 山西
2方法与结果
2．1色谱条件：色谱柱为AlltechC。8柱(250mm×
4．6mm，5pm)；流动相：乙腈(A)一水(B)，B相浓度
梯度：0～5min(95％)，5～25min(95％～75％)，
25～55min(75％～65％)，55----60min(65％)；体积
流量：1mL／min；检测波长：0～4min(230nm)，4～
6min(203nm)；柱温：30℃；进样量：20弘L。
收稿日期：2006—08—20
作者简介：李晓晶(1982一)，女，宁夏银川人，中国药科大学分析测试中心在读硕士研究生，主要从事中药分析研究。
*通讯作者赵陆华Tel：(025)83271185E—mail：zhaoluhua@hotmail．com
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月·927·
2．2对照品溶液的制备：取土贝母苷甲对照品适
量，精密称定，加甲醇溶解，制成1mg／mL的对照品
溶液。
2．3供试品溶液的制备：取土贝母药材粉末(过三
号筛)约1．0g，精密称定，置50mL圆底烧瓶中，精
密加入70％乙醇20mL，加热回流1h，滤过，水浴
蒸干，加水20mL溶解，移至分液漏斗中，先用15
mL醋酸乙酯萃取2次，弃去醋酸乙酯层，水层用20
mL水饱和正丁醇萃取4次，合并正丁醇液，蒸于，
残渣加甲醇溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇定
容至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0．45肛m)滤过，作为
供试品溶液。
2．4测定方法：分别精密吸取对照品溶液和供试品
溶液各20弘L，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，
见图1。
0 10 20 30 40 50 60
t／min
A一陕西土贝母药材B一土贝母苷甲对照品
A—RhizomaBol60stemmaefromShaanxi
BtubeimusideI ref rencesolution
图1 土贝母药材指纹图谱(A)及土贝母苷甲对照品(B)
Fig．1FingerprintofRhizomaBolbostemmae(A)and
tubeimusideI referencesubstance(B)
2．5方法学考察
2．5．1精密度试验：取供试品溶液(第13号样品)，
连续进样6次，测定，计算得各共有峰相对峰面积的
RSD<3％。
2．5．2重现性试验：取第13号样品6份，制备供试
品溶液，分别进样测定，计算得各共有峰相对峰面积
的RSD<3％。
2．5．3稳定性试验：取第13号样品供试品溶液，分
别在0、2、4、6、8、12h进样，测定，计算得各共有峰
相对峰面积的RSD<3％，表明样品溶液在12h内
稳定性较好。
2．6不同产地土贝母药材指纹图谱的比较及相关
技术参数：在上述条件下测定15个产地土贝母药
材，结果见图2。在陕西道地药材色谱指纹图谱中选
取量较高的18个峰为土贝母药材的共有峰，在共有
峰中，17号峰为土贝母苷甲，是土贝母中最主要的
活性成分，量较高且比较稳定，将其作为参照峰，分
别求出各组分与之的相对保留时间之比，结果见表
2。以17号峰的峰面积作为1，15号峰面积接近或大
于总峰面积的10％，计算该峰与17号峰峰面积比
值，结果见表3，其余各峰按其保留时间定性。
2．7相似度计算[4]：相似度是评价中药指纹图谱的
0 10 20 30 40 50 60
t／rain
图2不同产地土贝母样品的指纹图谱
Fig．2FingerprintsofB．paniculatumsamples
fromvarioushabitats
7¨¨●“
l
5
1k
A
“
万方数据
·928· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月
表3 15个产地土贝母药材共有指纹峰的峰面积比值
Table3 RelativepeaksareasofcommonofB．
paniculatumfrom15habitats
15号共有 非共有峰面 15号共有 非共有峰面
样品号 峰峰面积 积占总峰面 样品号 峰峰面积 积占总峰面
比值 积的百分数／％ 比值 积的百分数／％
1 0．363 6．60 9 0．379 7．96
2 0．412 7．91 10 0．439 6．82
3 O．513 8．62 11 0．476 7．40
4 0．392 5．91 12 0．526 7．03
5 0．355 5．92 13 0．344 6．26
6 0．345 7．52 14 0．368 6．52
7 O．347 8．43 15 O．316 8．81
8 0．389 6．23 平均值0．398
一个重要参数，是根据指纹图谱的整体相似程度来
计算重要化学组成的整体波动程度，据此分析中药
质量的稳定性。本实验将不同产地的土贝母药材指
纹图谱进行量化，利用Excel软件，运用公式计算，
采用夹角余弦和相关系数两个统计量为测试，对不
同产地土贝母药材的相似度进行了计算。15个产地
土贝母指纹图谱相关系数依次为：0．981、0．993、
0．984、0．990、0．994、0．948、0．990、0．961、0．987、
0．989、0．984、0．988、0．989、0．979、0．906；夹角余弦
依次为：0．986、0．994、0．988、0．992、0．996、0．964、
0．992，0．973，0．990，0．992，0．988，0．991，0．9921
0．985、0．935。结果表明，各产地相似度均在0．900
以上，各产地药材之间的相似性良好。其中只有15
号样品相似度小于0．95，在聚类分析中15号样品
也单独聚为一类，表明相似度计算与聚类分析结果
一致。
2．8 系统聚类分析：系统聚类分析是一种无管理、
无指导的模式识别法，可依据所测样品的数据，对样
品进行分类。本实验以15个不同产地的土贝母药材
为研究对象，进行指纹图谱研究，将各色谱峰相对于
参照物土贝母苷甲的峰面积量化，得到15×18阶原
始数据矩阵，运用Matlab7．0．1软件编写程序对其
进行系统聚类分析，采用离差平方和法(Ward7S
Method)，利用欧氏距离(Euclidean)作为样品的测
度，15个样品基本可以分为3大类，样品聚类结果
见图3。
j≤
l 甘 lJ 14 b 4 Z lU b ， 8 J ll12 lb
样品号
图3土贝母样品聚类谱系图
Fig．3Dendrogramofhierarchicalclusteringanalysis
forB．paniculatumsamples
3讨论
3．1 本实验分别考察了超声、加热回流的提取方
法，发现加热回流得到的峰数较多，另外又比较了不
同提取溶剂如水、甲醇、乙醇、70％乙醇、50％乙醇，
结果表明70％乙醇提取效果较好，由于土贝母主要
含有皂苷类成分，并且皂苷类成分在正丁醇中溶解
度最大，所以综合考虑最终确定提取条件为70％乙
醇加热回流，正丁醇萃取。
3．2本实验分别考察了甲醇一水、乙腈一水体系进行
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月·929·
洗脱，由于检测波长较低，甲醇有末端吸收，用甲醇一
水为流动相基线波动较大，选用乙腈一水系统可以消
除溶剂的干扰，基线较平稳且色谱峰有较好的分离。
使用等度洗脱时，有效成分出峰时间长且分离效果
不够理想，梯度洗脱在60min内可使色谱峰全部洗
出，且多数峰达到基线分离。
3．3本实验采用二级管阵列检测器对指纹图谱的
检测波长进行了选择，从200～400nm进行了紫外
扫描，200、203am处所包含的信息量最大，同时各
峰的响应较大，但是由于200nm波长较短，基线波
动较大，影响色谱峰型和分离度，所以选择203nm
为测定波长。另外在o～4min时由于溶剂的影响以
及色谱峰在203nm的响应太大使色谱峰很难达到
分离，所以选择波长为230nm，可以改善各峰的分
离度和峰形。
3．4土贝母为单品种来源，主要考察产地的影响。
不同产地土贝母药材所含各有效成分基本相同，但
是各成分的量差别较大。由聚类结果可以看出，15
个样品大致可以分为3大类，从地理分布考虑：第A
类样品的产地是陕西、宁夏、甘肃、青海，这些地区都
属于西北地区气温较低且比较干燥；第B类样品的
产地是河南、河北、山东、安徽、山西、四川、湖北，这
些地区气温比较适中，并且此类又可分为两类，四
川、湖北为一类与其他产地分开，说明四川、湖北的
气候与其他产地有所不同，从而影响了土贝母药材
的质量；第C类样品的产地是云南，气温较高且潮
湿。由于药材的生长受到温度、光照和湿度的影响，
所以不同产地的土贝母之间的内在质量存在一定的
差异。由此可见如果要保证药材的一致性，应注意药
材的产地。
References：
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tubeimusideI inBolbostemmapaniculatumEJ]．Northwest
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ProgPharmSci(药学进展)，2003，27(1)：51—54．
白术药材的指纹图谱研究
黎琼红，马兴田，谢晨，龚秀琦
(广东康美药业股份有限公司，广东普宁515300)
摘 要：目的 建立白术药材的高效液相指纹图谱分析方法。方法 采用DikmaKromasilC。。(250mmX4．6mm，
5牡m)色谱柱，以乙腈一水梯度洗脱(45％～100％乙腈)，体积流量为1．0mL／min，柱温25℃，检测波长242nm。结
果 通过对13批不同产地的白术样品的测定，标定了24个共有峰，并通过“中药指纹图谱计算机辅助相似度软
件”和聚类分析等辅助手段，计算相似度等相关参数。结论该方法准确可靠，重现性好，为更好地控制白术内在质
量提供了科学依据。
关键词：白术；指纹图谱；高效液相色谱
中图分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)06—0929—03
FingerprintsofRhizomaAtr ctylodisMacrocephalae
L1Qiong—hong，MAXing-tian，XIEChen，GONGXiu—qi
(GuangdongKangmeiPharmaceuticalCo．，Ltd．，Puning515300，China)
Keywords：RhizomaAtractylodisMacrocephalae；fingerprint；HPLC
白术为菊科植物白术Atractylodesmacrocepha—
laKoidz．的干燥根，主产于浙江、安徽、湖北、湖南
等省。其味甘、苦性温，具有健脾益气、燥湿利水、止
汗、安胎的功效叫。主要含有挥发油成分和内酯类成
分。为控制和保证产品质量的稳定性，本实验依据国
家药品监督管理局颁布的《中药注射剂指纹图谱研
收稿日期：2006—08一12
作者简介：黎琼红(1979一)，女，硕士研究生。Tel：(0663)2920370E—mail：kj6868kli@163．eom
万方数据
土贝母的HPLC指纹图谱研究
作者： 李晓晶， 姜琳琳， 吴智南， 赵陆华， LI Xiao-jing， JIANG Lin-lin， WU Zhi-nan，
ZHAO Lu-hua
作者单位： 李晓晶,姜琳琳,赵陆华,LI Xiao-jing,JIANG Lin-lin,ZHAO Lu-hua(中国药科大学分析测试
中心,江苏,南京,210009)， 吴智南,WU Zhi-nan(广州固志医药科技有限公司,广东,广州
,510663)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(6)
被引用次数： 2次

参考文献(4条)
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2.肖玉燕.翁金月.樊建霜 土贝母与丽江山慈姑的鉴别[期刊论文]-中医药临床杂志 2008(2)

本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200706051.aspx