全 文 ：RP-HPLC法同时测定蛇床子中蛇床子素、
欧芹属素乙和异茴芹素的含量
叶晓平,宋纯清

(上海兴康医药研究开发有限公司, 上海　200032)
摘　要: 目的　建立蛇床子 Cnid ium monnier i 中蛇床子素 ( ostho le )、欧芹属素乙 ( imper ator in )和异茴芹素
( isopimpinellin)的高效液相色谱测定方法。方法　采用 Vercopark Inertsil N-5 ODS 柱, 1%醋酸-甲醇(梯度为 0～
30 min 1%醋酸 95%～5% )为流动相, 检测波长 254 nm。结果　该法回收率蛇床子素为 99. 1% , 欧芹属素乙为
95. 8% ,异茴芹素为 97. 3% ; RSD 蛇床子素为 1. 8% ,欧芹属素乙为 0. 8% ,异茴芹素为 3. 3% ( n= 5)。结论　本方
法为蛇床子药材、蛇床子提取物及含蛇床子药材的复方的质量评估提供了可靠的依据。
关键词: 蛇床子;蛇床子素; 欧芹属素乙;异茴芹素; 高效液相色谱
中图分类号: R284. 1　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2005) 01 0118 02
Determination of osthole, imperatorin, and isopimpinellin in seeds
of Cnidium monnieri by RP-HPLC
YE Xiao-ping , SONG Chun-qing
( Shanghai Xingkang Pha rmaceutical Resear ch and Development Co. , L td. , Shanghai 200032, China)
Key words : seed of Cnidium monnieri ( L . ) Cuss. ; o sthole; imperato rin; isopimpinellin; HPLC
　　蛇床子Cnid ium monnieri ( L . ) Cuss. 具有温肾
壮阳、调节免疫、增强免疫功能, 有延缓衰老和性激
素样作用,能增强骨密度,治疗骨质疏松作用[ 1, 2]。香
豆素类成分是蛇床子的主要活性成分,其中以蛇床
子素、欧芹属素乙和异茴芹素为代表。笔者采用
HPLC 测定其含的 3种成分含量。
1　仪器和试剂
　　Agilent 1100高效液相色谱仪:四元泵,在线脱
气机, 手动进样器, 柱温箱, 二极管阵列检测器
( DAD) , 色谱柱 Vercopark Inertsil N-5 ODS ( 4. 6
mm×250 mm , 5
m) , Agilent 1100化学工作站。对
照品自制, 经 mp、UV、IR、1H-NMR、13C-NMR、MS
鉴定核实,纯度经HPLC 检查达98%以上。水为双重
蒸馏水, 甲醇为 Fisher 光谱纯, 其他试剂均为分析
纯。蛇床子产地为山东, 由上海第二军医大学张汉明
教授鉴定为蛇床子 C. monnieri ( L . ) Cuss.。
2　方法和结果
2. 1　液相色谱条件:流动相为 1%醋酸-甲醇(梯度
为 0～30 min 1% 醋酸 95%～5% ) ; 检测波长: 254
nm; 体积流量: 1. 0 mL/ m in; 柱温: 30 ℃; 灵敏度:
1. 0 AU FS。对照品图谱见图 1。
2. 2　标准曲线制备
1-欧芹属素乙　2-异茴芹素　3-蛇床子素
1-imperatorin　2-is opimpinellin　3-os thole
图 1　蛇床子对照品(A)及样品( B)的 HPLC图谱
Fig. 1　HPLC chromatograms of C. monnieri reference
substance ( A) and its sample (B)
2. 2. 1　精密称取对照品蛇床子素 65. 50 mg ,置 25
mL 量瓶中, 加甲醇溶解制成 2. 66 mg / mL 的对照
品溶液,分别精密吸取 1、2、3、4、5 mL 加甲醇定容
至 10 mL,分别进 20
L 进行分析测定,以对照品的
质量浓度( mg/ mL)为横坐标,峰面积值为纵坐标得
回归方程为Y= 12 428 X+ 3 030. 2, r= 0. 996 4, 线
性范围 0. 26～1. 33 mg/ mL。
2. 2. 2　精密称取对照品欧芹属素乙 12. 20 mg , 置
20 mL 量瓶中,加甲醇溶解制成 0. 61 mg / mL 的对
·118· 中草药　Chinese T raditional and Herbal D rug s　第 36 卷第 1 期 2005年 1月

收稿日期: 2004-04-12作者简介:叶晓平( 1978—) , 女,安徽省繁昌县人,技术员, 2002年毕业于中国药科大学药学专业,从事中药质量分析和新药开发研究。
T el: ( 021) 64188420
照品溶液, 分别精密吸取 0. 1、1、2、3、4、5 mL 加甲
醇定容至 10 mL,分别进 20
L 进行分析测定, 以对
照品的质量浓度(
g / mL)为横坐标, 峰面积值为纵
坐标得回归方程 Y = 58. 539 X - 113. 65, r =
0. 999 7,线性范围 6. 10～305. 00
g/ mL。
2. 2. 3　精密称取对照品异茴芹素 17. 40 mg, 置 20
mL 量瓶中,加甲醇溶解制成 0. 87 mg / mL 的对照
品溶液, 分别精密吸取 0. 1、1、2、3、4 mL 加甲醇定
容至 10 mL,分别进 20
L 进行分析测定, 以对照品
的质量浓度(
g/ mL)为横坐标, 峰面积值为纵坐标
得回归方程为Y= 68. 808 X + 194. 55, r= 0. 999 7,
线性范围 8. 70～174. 00
g/ mL。
2. 3　精密度试验: 蛇床子素进样 5次, 每次进样 20

L, RSD 为 2. 30%; 欧芹属素乙进样 5 次, 每次进
样 20
L, RSD 为 1. 11%; 异茴芹素进样 5次, 每次
进样 20
L, RSD 为 1. 60%。
2. 4　稳定性试验: 取同批样品溶液分别于 0、5、9、
24、36、48 h 注入液相色谱仪, 测定蛇床子素、欧芹
属素乙、异茴芹素的峰面积, RSD 依次为 0. 61%、
0. 87%、0. 78%。
2. 5　重现性试验: 精密称取同一样品 5 份, 分别制
备成样品溶液, 测定蛇床子素、欧芹属素乙、异茴芹
素的含量,以 3成分总量计算, RSD 为 1. 68%。
2. 6　加样回收试验:精密称取药材粉末 5份,分别
加入一定量对照品, 依样品测定项下操作, 测定含
量,计算回收率,蛇床子素为 99. 1%, 欧芹属素乙为
95. 8% , 异茴芹素为 97. 3%, RSD 依次为 1. 8%、
0. 8%、3. 3% ( n= 5)。
2. 7　样品测定: 精密称取 40 目蛇床子粗粉约 0. 5
g ,加 90 mL 甲醇回流提取 2 h, 提取液置 10 mL 量
瓶中,加甲醇至刻度。进样前用微孔滤膜滤过。样品
图谱见图 1。测定结果见表 1。
表 1　样品测定结果 ( n= 3)
Table 1　Results of samples ( n= 3)
批次 蛇床子素/ % 欧芹属素乙/ % 异茴芹素/ %
1 1. 57 0. 12 0. 11
2 1. 58 0. 12 0. 12
3 1. 57 0. 13 0. 13
3　讨论
蛇床子是常用中药, 富含香豆素类化合物,现代
药理研究显示香豆素类为主要的活性成分,其中蛇
床子素( osthole)、欧芹属素乙( imper ato rin)和异茴
芹素( isopimpinellin)含量较高, 蛇床子素的含量测
定已有报道[ 3～5] ,为更全面地反应这类成分的量, 笔
者建立了 RP-HPLC 法同时测这 3种成分的含量,
为减少峰拖尾加入少量醋酸, 达到了比较满意的基
线分离条件,为蛇床子药材、提取物及其制剂的质量
控制提供了比较精确的方法和依据。
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学院学报) , 2002, 22( 1) : 36-37.
不同肥料对秦艽根的产量和龙胆苦苷含量的影响
李福安1, 李建民2* , 王祖训3, 李向阳1 , 张　华1, 魏全嘉1 ,旦　巴4

( 1. 青海医学院 中医系,青海 西宁　810001; 2. 青海师范大学 生命科学系,青海 西宁　810008;
3. 青海省农业技术推广总站, 青海 西宁　810000; 4. 青海省同仁县原种场,青海 同仁　811300)
　　肥料对秦艽根产量和龙胆苦苷含量的影响,国 内外鲜见研究报道。本实验是施用草木灰、麻渣、过
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收稿日期: 2004-03-15基金项目:科技部“创新药物和中药现代化”专项资助( 2001-BA701A60-06) ; 青海省科学技术厅重大科技攻关资助项目( 2001-N-107-
03) ;教育部科技重点资助项目( 02156)作者简介:李福安( 1954—) ,男,副教授,现从事中医药学及中藏药研究,发表论文 20余篇。
T el: ( 0971) 6104054　E-m ail : li fan 1954@ 163. com
* 通讯作者　Tel: ( 0971) 6104054　E-m ail : Beyond 3862740@ 163. com