全 文 ：大小顺序为氮> 磷≥钾, 进行氮、磷、钾 3 要素配合
施用能显著提高福田白菊产量、外观品质和内在品
质。因此, 在福田白菊的种植生产上要在合理施用氮
肥的基础上增施磷、钾肥, 以提高基地菊花的产量和
品质。但氮、磷、钾 3 要素在福田白菊上的合理施用
量与比例以及其对白菊药用品质合成代谢影响的机
制还有待进一步深入研究。
References:
[ 1 ]　H u C1 Research on ox idation2resist ing quality of flacono ids
viz1 study on the effect of b io logical an tiox idation and health
p ro tection of Ch ry san them um m orif olium [A ]1 D isserta tion
of D octor′s D eg ree of W ux i U n iversity of L ig h t Ind ustry (无
锡轻工大学博士学位论文) [D ]1 W uxi: W uxi U niversity of
L igh t Industry, 19941
[ 2 ]　L i P, Chen K L , Ye C J1 Study of quality on m edicinal
Ch ry san them um m orif olium of H ubei Fu tianhe [J ]1 J Ch in
M ed M ater (中药材) , 2004, 27 (2) : 10221031
[ 3 ]　Yang J , J iang H Z, Xu Z H 1 Study on ex traction techn iques
and variety trends of flavono ids in Ch ry san them um m orif o2
lium [J ]1 Ch in T rad it H erb D rug s (中草药) , 2002, 33 (11) : 98829991[ 4 ]　Bao S T 1 S oil and A g ricu ltu ra l Chem istry A na ly sis (土壤与农业化学分析) [M ]1 3rd ed1 Beijing: Ch inese A gricu ltu rePub lish ing House, 20001[ 5 ]　Ch P (中国药典) [S ]1 V o l Ê 1 20001[ 6 ]　Yu C, Yu S, Shen X H 1 Study on determ ination m ethod ofgeneral flavones in health foods [J ]1 Ch in J H ea lth L ab T ech(中国卫生检验杂志) , 2002, 12 (4) : 4251[ 7 ]　W u J S, Ying Y Q , Cao F L , et a l1 T he effects of pho spho2rus app lication on leaves ou tpu t and flavone con ten t in leavesof G inkg o [J ]1 J N orth F orest U n iv (东北林业大学学报) ,2003, 31 (1) : 172181[ 8 ]　W u J S, Ying Y Q , Cao F L , et a l1 Effects of n itrogen app li2cation on leaf ou tpu t and flavone con ten t in G inkg o leaves[J ]1 J Z hej iang F orest Coll (浙江林学院学报) , 2002, 19(4) : 37223751[ 9 ]　W u L J1 N atu ra l M ed ica tion Chem istry (天然药物化学)[M ]1 4th ed1 Beijing: Peop le′s M edical Pub lish ing House,20031[ 10 ]　Xu L C, Zhang Y Q , J iang X J , et a l1 Effect of fert ilizationon the grow th of Japanese Honeysuck le (L on icera jap on ica)and its con ten ts of chem ical compo sit ion [J ]1 Ch in T rad itH erb D rug s (中草药) , 1997, 28 (10) : 62026221
HPLC 法同时测定两面针中 5 种生物碱
施　瑶1, 李定祥1, 李光平2, 闵知大1Ξ
(11 中国药科大学 天然药物化学教研室, 江苏 南京　210009; 21 上海市饲料质量监督检测中心, 上海　201106)
　　芸香科花椒属 (Z an thoxy lum L. ) 植物含有多
种类型生物碱, 主要为苯并菲啶类、喹啉类和异喹啉
类生物碱。具有多种特殊而显著的生理作用, 主要有
抑制血小板凝集、细胞毒活性、抑制DNA 异构酶和
选择性抑菌作用[1 ]。为了更好地研究生物碱在花椒
属植物中的分布, 建立一个有效的生物碱定量的方
法非常必要。
两面针 Z an thoxy lum n itid um (Roxb. ) DC. 是
花椒属中我国民间常用药, 通常以氯化两面针碱的
量作为其质控指标, 如《中国药典》用薄层扫描法[2 ]
测定, 少量文献报道是用H PL C 法[3～ 5 ]测定, 然而还
未见对多种类型生物碱定量分析方法的报道。本实
验以两面针为例, 用 H PL C 法同时测定性质相差较
大的 5 种生物碱的量。这些生物碱是苯并菲啶类生物
碱: 氯化两面针碱 (n it id ine ch lo ride, É ) , 去2N 2甲基
白屈菜红碱 (N 2no rcheleryth rine, Ê ) ; 喹啉类生物
碱: 茵芋碱 (sk imm ian ine, Ë ) ; 异喹啉类生物碱: 鹅掌
楸碱 ( lirioden ine, Ì )和木兰碱(m agnoflo rine, Í )。 1　仪器和药品111　仪器: BS—211D 型电子天平 ( Sarto riu s) ;Perk in—E lm er L am bda 35 型紫外可见分光光度计; W aters 2690 高效液相色谱仪; W aters 2487 双通道紫外可见光检测器。112　药品: 两面针药材购自广西, 经广西中医药研究 所 赖 茂 祥 教 授 鉴 定 为 两 面 针 Z. n itid um(Roxb. ) DC. 的根和茎。凭证标本存放于中国药科大学天然药物化学教研室。生药样品经粉碎, 过 4 号筛, 60 ℃ 干燥 210 h, 置干燥器中放冷, 备用。对照品É、Ê、Ë、Ì、Í 均由本研究小组分离自两面针的根, 理化常数和波谱数据 (UV、IR、1H 2NM R、13C2NM R、M S) 与文献数据[6～ 10 ]一致, 并经 H PL C 法测定质量分数 (> 98% )。2　方法211　对照品溶液的制备: 分别精密称取上述 5 种对照品 (É～ Í ) 214、518、515、310、514 m g, 置 100mL 量瓶中, 加适量甲醇超声使溶解并定容至刻度,
·921·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 37 卷第 1 期 2006 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2005204212
摇匀, 作为对照品储备液 (É～ Í 分别为 2410、
5810、5510、3010、5410 ΛgömL )。
212　供试品溶液的制备: 分别精密称取两面针根和
茎粉末 (过 4 号筛, 60 ℃ 干燥 210 h) 015 g 于 100
mL 容量瓶中, 加甲醇 85 mL , 50 ℃ 超声 30 m in, 冷
却, 加甲醇定容, 用 0145 Λm 微孔滤膜滤过, 作为供
试品溶液。
213　色谱条件: 色谱柱为 W aters N ova2Pak C 18
(150 mm ×310 mm , 5 Λm ) ; 流动相A 为甲醇, 流动
相B 为水 (含三乙胺 0101% 和冰醋酸 01000 5% ,
pH 716～ 718) ; 梯度洗脱: 0 m in 88% B , 12 m in
84% B , 16 m in 58% B , 38 m in 28% B , 56 m in
15% B , 60 m in 0% B , 62 m in 0% B , 75 m in 88%
B; 体积流量 015 mL öm in; 检测波长为 254 nm (0～
40 m in) , 271 nm (40～ 75 m in) ; 柱温 37 ℃。在上述
色谱条件下对照品É～ Í 的保留时间分别为 62、
56、34、38、8 m in 左右, 色谱图见图 12A。É 2氯化两面针碱　Ê 2去2N 2甲基白屈菜红碱Ë 2茵芋碱　Ì 2鹅掌楸碱　Í 2木兰碱É 2n itid ine ch lo ride　Ê 2N 2no rcheleryth rine　Ë 2sk imm ian ineÌ 2lirioden ine　Í 2m agnoflo rine
图 1　对照品 (A)和样品 (B)的 HPLC 图谱
F ig. 1　HPLC Chromatogram s of reference
substances (A) and sample (B)
214　线性关系: 分别精密吸取上述 5 种对照品É～Í 储备液 2、1、1、1、5 mL 置同一量瓶中, 用甲醇定
容至 10 mL 得混合对照品溶液 (其中对照品É～Í 分别为 418、518、515、310、2710 ΛgömL ) , 再将混
合对照品溶液依次稀释 2、5、10、25 倍, 得不同浓度
的混合对照品溶液。用 0145 Λm 微孔滤膜滤过, 各
进样 20 ΛL , 记录各峰面积。以生物碱峰面积 (Y )的
均值对质量浓度 (X ) 回归, 计算各自的回归方程和
线性范围, 结果见表 1。
215　精密度试验: 精密吸取同一个混合对照品溶
液, 重复进样 6 次, 每次 20 ΛL , 分别以 5 个对照品
的峰面积计, 结果生物碱É～ Í 的 R SD 分别为
1160%、0180%、0170%、117%、013%。
216　重现性试验: 称取两面针根粉末 (过 4 号筛,
60 ℃ 干燥 210 h) 3 份, 每份 015 g, 分别按 212 项
下操作得样品供试液, 按上述色谱条件进样20ΛL
表 1　5 个生物碱的线性回归方程 (n= 3)
Table 1　L inear regression equation
for f ive a lka lo ids (n= 3)
生物碱 回归方程 r
线性范围ö
(Λg·mL - 1) 检测限ö(Λg·g- 1)É Y = 1112×105 X - 1131×104 01998 0119～ 2410 01016 8Ê Y = 1136×105 X + 6112×104 01999 0123～ 5180 01064 5Ë Y = 3124×105 X + 2128×103 01999 0122～ 5150 01000 127Ì Y = 2115×105 X - 3147×103 01999 0112～ 3100 01061Í Y = 1183×105 X + 2120×103 01998 1108～ 27100 01005
测定, 结果生物碱É～ Í 质量分数的 R SD 分别为
0108%、5158%、0139%、3126%、6149%。
217　稳定性试验: 混合对照品溶液, 室温保存, 每隔
10 h 进样一次, 进样 5 次, 并于 6 d 后进样一次, 每
次 20 ΛL , 分别以 5 个对照品峰面积计, 生物碱É～Í 的 R SD 分别为 312%、215%、314%、514% 和
410% (n= 6)。
218　加样回收率试验: 精密称取已知量的两面针根
粉末 015 g, 按 212 项下操作制备得样品供试液, 吸
取 1 200 ΛL 样品供试液加入 200 ΛL 混合对照品溶
液, 进样 20 ΛL , 计算平均加样回收率, É 为
9813% , Ê 为 8318% , Ë 为 9515% , Ì 为 9713% , Í
为 10610% , R SD 值 依 次 为 1120%、0150%、
0170%、3120%、0120% (n= 3)。
219　最低检测限: 精密吸取对照品储备液配制成系
列浓度的甲醇溶液, 基线平稳后进样 20 ΛL , 取信噪
比为 3 的样品量为检测限, 结果见表 1。
2110　样品测定: 按 212 项方法制备样品供试液, 进
样 20 ΛL。按外标法以峰面积计算生物碱É～ Í 的
量, 结果两面针根和茎中 5 个化合物的量分别为É
01149%、 01107% , Ê 01069%、 0098% , Ë
01011%、 01022% , Ì 01003%、 01006% , Í
01243%、01281% (n= 3)。
3　讨论
　　生物碱在反相 H PL C 分析分离中, 普遍存在色
谱峰展宽拖尾、保留时间漂移和分离效果下降等现
象, 这主要源于生物碱中氮原子与固定相未键合的硅
醇基的相互作用, 所以在选择流动相缓冲盐时, 可选
择添加烷基磺酸钠等离子对试剂或有机胺改性剂。
本方法选用的色谱柱W aters N ova2Pak C 18适
宜的 pH 值范围是 210～ 810, 流动相若加入较高浓
度三乙胺, pH 值高, 梯度洗脱中水相比例大, 淋洗
时间长, 会影响 C 18柱的稳定性, 所以应避免使用较
高浓度三乙胺或二乙胺。可添加少量的冰醋酸调
pH 值, 如添加 01000 5% 冰醋酸时 pH 约为 717,
·031· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 37 卷第 1 期 2006 年 1 月
这样也可延长 C18柱的使用寿命。当流动相加入一
定浓度三乙胺和离子对试剂 (如己烷磺酸钠) 时,
基线无明显变化, 说明所测定的 5 个生物碱在 pH
值大于 710 时对离子对试剂己烷磺酸钠或辛烷磺
酸钠不敏感, 可以在流动相中不加或低浓度添加离
子对试剂。氯化两面针碱在不同 pH 值流动相中保
留时间有很大差异, 比如在保证分离的情况下, 稍微
提高流动相酸性可使其提前出峰。通过优化选择试
验, 选择流动相为甲醇2水 (含三乙胺 0101% 和冰
醋酸 01000 5% , pH 716～ 718) , 梯度洗脱。
通过对样品在 190～ 400 nm 的三维色谱图和 5
个对照品最大吸收波长的分析, 先选择 4 个不同波
长进行检测, 分别是 294、284、271 和 254 nm , 再对
4 个波长下的色谱图进行比较, 发现 271 nm 下检测
氯化两面针碱和去2N 2甲基白屈菜红碱吸收最大,
选作检测波长, 其余 3 种生物碱选择 254 nm 作为
检测波长。
本实验应用反相高效液相色谱法成功建立了两
面针中 5 种生物碱的测定方法。与以往文献报道的
方法[3～ 5 ]相比, 本研究的特点在于可同时对两面针
中多种生物碱进行定量分析, 方法简单、灵敏度高。
此方法可应用于两面针药材及提取物的质量控制,
并为其量效关系的研究提供依据。此法还可进一步
用来测定花椒属其他植物中这 5 种生物碱的量。
References:
[ 1 ]　W ang Y, Ju Y, W ang Z1 Recen t p rogress in b ioactive con2
stituen ts from p lan ts of Z an thoxy lum L. [J ]1 Ch in T rad it
H erb D rug s (中草药) , 2002, 33 (7) : 66626701
[ 2 ]　Ch P (中国药典) [S ]1 V o l É . 20001
[ 3 ]　Chen J , D uan G L , H uang J M. D eterm ination of n it id ine
ch lo ride in Z an thoxy lum n itid um by RP2H PL C [J ]1 J F ud an
U niv: M ed S ci (复旦学报: 医学科学版) , 2001, 28 (5) : 4362
4371
[ 4 ]　Zhang S Y, W ang G F, Zou H Q 1 D eterm ination of n it id ine
ch lo ride in Z an thoxy lum n itid um [J ]1 Ch in T rad it H erb
D rug s (中草药) , 1998, 29 (7) : 44524461
[ 5 ]　Zhang S Y, Yao X F, L iu C F1 D eterm ination of n it id ine in
differen t parts of Z an thoxy lum n itid um [J ]1 J Ch in M ed
M ater (中药材) , 2001, 24 (9) : 64926501
[ 6 ]　L iao L , L i G S, L i J B1 Chem ical constituen ts of Z. my ria2
can thum and chemo taxonom y of Z an thoxy lum [J ]1 A cta S ci
N a t U n iv P ek (云南植物研究) , 1988, 10 (4) : 44524561
[ 7 ]　L u Y C, J in S, X ing Q Y1 T he chem ical constituen ts of Z an2
thoxy lum austrosinense H uang [J ]1 A cta U n iv P ek: N at S ci
(北京大学学报: 自然科学版) , 1988, 24 (2) : 24522471
[ 8 ]　Chak ravarty A K, Sarkar T , M asuda K, et a l. Carbazo le al2
kalo ids from roo ts of G ly cosm is arborea [J ]1 P hy tochem istry ,
1999 (50) : 1263212661
[ 9 ]　W ueratne E M K, H atanaka Y, Kikuch i T , et a l. A dioxoa2
po rph ine and o ther alkalo ids of two annonaceous p lan ts of Sri
L anka [J ]1 P hy tochem istry , 1996, 42: 17031
[ 10 ]　Suess T R , Sterm itz F B1 A lkalo ids of M ahon ia repens w ith
a brief review of p revious wo rk in the genus M ahon ia [J ]1 J
N a t P rod , 1981, 44 (6) : 68026871
HPLC 法测定丹参中丹酚酸 B
赵洪芝1, 卢　滨2, 高　钧2Ξ , 祝国光2, 元英进1
(11 天津大学化工学院 制药工程系, 天津　300072; 21 天士力集团有限公司, 天津　300402)
　　丹参是唇形科植物 S a lv ia m iltiorrh iz a Bunge
的根, 为常用中药, 性微寒、味苦, 归心、肝经; 具有祛
瘀止痛、活血通经、清心除烦等功能[1 ]。我国应用丹
参已有近 2000 年的悠久历史, 始载于东汉《神农本
草经》, 列为上品[2 ]。丹参有效成分主要有水溶性的
酚酸类, 包括丹参素、丹酚酸B 等; 脂溶性的二萜醌
类, 包括丹参酮Ê A 等。其中, 主要水溶性成分丹酚
酸B (salviano lic acid B ) 为三分子丹参素与一分子
咖啡酸缩合而成[3 ] , 对其的测定方法已有文献探
讨[4 ] , 但对丹参药材中丹酚酸B 量的集中范围进行
大规模考察还未见报道。本实验对 80 个丹参样品进
行测定, 并对数据进行归纳总结。
1　仪器、试剂和药材
　　A glien t 1100 series 高效液相色谱仪, 配置自动
进样器、二级管阵列检测器、柱温箱。乙腈 (色谱纯,
美国M erck) ; 甲醇 (色谱纯, 美国M erck) ; 甲酸 (分
析纯, 中国医药集团上海化学试剂公司) ; 超纯水。丹
酚酸B 对照品 (中国药品生物制品检定所, 批号为
1115622200302)。
本实验所使用丹参药材经天津天士力集团研究
院现代中药研究所魏峰博士鉴定。其中, 安徽亳州药
材市场购 9 份, 标为亳州药市 1～ 9 号; 成都荷花池
药材市场购 19 份, 标为荷花池药市 1～ 19 号; 安徽
广德药材公司购 3 份, 标为广德药材公司 1～ 3 号;
·131·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 37 卷第 1 期 2006 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2005203210
作者简介: 赵洪芝 (1981—) , 女, 2003 级硕士研究生。E2m ail: zhao hong zh i@126. com3 通讯作者　高　钧　Tel: (022) 26736533　Fax: (022) 26736053　E2m ail: gao jun1969@ho tm ail. com