全 文 ：十革毒ChlnHeTraditionMandHerr№lDrugs第37卷第9期2007年9胃
肿瘤机制与獯亡有密切关系。本研究显示赤芍总苷
具有明显的抑瘤作用，有效诱导肿瘤细胞凋亡。
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蝙蝠葛酚性碱对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用
张晓娟，罗宇芬，扬敏
(广东省人民医院药学部，广东广州510080)
摘要z目的研究螭蝠葛酚性碱对太鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法线栓法制备大鼠大脑中动
脉阻断局灶性脑缺血模型，缺血2h后再蔼注24h，观察蝙蝠葛酚性碱(5、10、20mg／kg，再灌开始时ip给药)对
神经功能评分、脑梗死范围、脑水肿和血噙屏障通透性的影响，测定瞄组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛
(MDA)水平和谷胱甘肚过氧化物酶(GSH—Px)活性。结果蝙蝠葛酚性碱能明显减轻大鼠的神经功能缺陷、缩小
脑梗死体积、减轻脑水肿和血脑屏障通透性，显著增加SOD和GSH-Px活性，降低MDA水平。结论蝙蝠葛酚性
碱对脑缺血再灌注损伤有保护作用，其机制可能与降低血脑屏障通透性、抗脂质过氧化有关。
关键词：蝙蝠葛酚性碱；脑缺血再灌注损伤i血脑屏障}脂质过氧化
中田分类号tR286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)09—1367—03
ProtectionofphenolicalkaloidsfromMenispermumdauricumonfocalcerebral
ischemia—reperfusIoninjuryinrats
ZHANGXiao+juan，LUOYU—fen，YANGMin
(DepartmentofPharmacy，GuansdongProvincialPeople’sHo pital，Guanszhou510080·China)
Keywords：phenolicalkaloidsfromMenispermumdauricum(PAMD)；cerebralischemia—reperfusion
injury；bloodrainbarrier(BBB)；lipidperoxidation
蝙蝠葛酚性碱(phenolica kaloidsfrom
Menis，，eTTaumd Hcum，PAMD)是从防己科植物
蝙蝠葛MenispermumdauricumDC．根茎中提取的
多种脂溶性生物碱的混合物。其主要成分为蝙蝠葛
碱(dauricine)和蝙蝠葛苏林碱(daurisoline)，两者
均为双苄基异喹啉类生物碱，脂溶性高，易通过血脑
屏障(BBB)，在脑组织中有较高的浓度分布。经研
究证明PAMD对大鼠脑缺血再灌注继发的炎性损
伤具有抑制作用[1]，本实验进一步研究PAMD对大
鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。
1材料与方法
1．1药品与试剂；PAMD(含蝙蝠葛碱约83％，含
蝙蝠葛苏林碱约15％)，本实验室自制，用1mol／L
Hcl溶解后，再用1mol／LNaOH调pH值6．4。水
合氯醛、红四氮唑(TTc)，国药集团化学试剂有限
公司；伊文思蓝(EB)，Fluka进口分装；超氧化物歧
化酶(SOD)，丙二醛(MDA)、答胱甘肽过氧化物酶
(GSH—Px)试剂盒及考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒均
购自南京建成生物工程研究所。
1．2动物、分组及给药方法：SD大鼠(中山大学医
学院实验动物中心提供)，雄性，体重200250g，随
机分为5组：假手术组(除了不插尼龙线外，其余操
器霎品羿：絮嚣晶：荀5一)。女，山东文登人．主管药师．硬士．主要从事临床药学厦脑血管药理学研究．
TelI(020)83827812Emaillxiaojuanzhang@yahoo．coin,cⅡ
万方数据
·1368· 中草焉cMn怖eTradltlon柚andHerbalDrugs第37卷第9期2007年9月
作与模型组相同)，模型组(缺血2h再灌24h，再灌
后立即ipNs1mL)，PAMD组(缺血2h再灌
24h，再灌后立即分别ipPAMD5、10、20mg／kg)。
1．3大鼠局灶性脑缺血模型的制备：参照Longa
法[21制备右侧大脑中动脉栓塞(McAO)模型，并
加以改进。大鼠ip10％水台氯醛溶液(300rag／
kg)麻醉，仰卧固定于恒温手术台上[温度(37土
0．5)℃]。颈部正中皮肤切口，分离右侧颈总动脉、
颈外动脉、颈内动脉和翼腭动脉，穿线备用。结扎翼
腭动脉，在颈外动脉距颈总动脉分叉约3rnm处剪
一切口，将一尼龙线(长5cm，直径0．23mm)经颈
外动脉切口缓慢向颈内动脉人颅方向推进，以颈总
动脉分叉处为标记，推进t7～20mm感到轻微阻力
时即止，固定线栓。缺血2h后，拔出尼龙线，扎紧动
脉残端，缝合皮下组织和皮肤，完成缺血再灌注损伤
模型。
1．4神经功能评分：大鼠再灌24h，接Longa法口]
5分制标准进行评分：0分，无明显神经功能缺陷症
状}1分，不能完全伸展左前肢；2分。向左侧旋转i3
分，行走时向左侧倾倒；4分，不能自行行走。
1．5脑梗死体积测定：大鼠再灌24h后，断头取
脑，剔除嗅球、小脑和低位脑干，一20℃冷冻lO
rain，沿冠状面切成厚度基本相同的5片，37℃、2％
TTC液中温育20rain，10“甲醛固定。正常脑组织
呈玫瑰红色，脑梗死区呈白色。称取脑片的总质量及
脑梗死组织的质量，计算后者占前者的百分比，即为
梗死率。
1．6脑组织含水量测定：大鼠再灌24h后，断头取
膻，立即称取缺血侧即右侧大脑半球的湿质量。然后
将右侧大脑半球置120℃的烤箱中烘烤24h后称
取干质量，计算脑组织含水量。
脑组织含水量=(脑湿质量一脑干质量)／脑湿质量×
100％
1．7血脑屏障通透性检测：参照Matsuo等03的方
法，采用EB染料检测BBB通透性。大鼠脑缺血2h
再灌注22h后，经股静脉iv2％EB生理盐水3
mL／kg。2h后，大鼠用10％水合氯醛溶液ip麻
醉，由左心室用生理盐水灌流至右心耳流出清亮液
体，然后断头取脑，称湿质量后置入装有0．5mL1
mol／LKoH溶液的离心管中，37℃过夜，用0．75
mL0．33mol／LH，PO．溶液中和碱性溶液，然后加
入2．25mL丙酮。振摇数秒，3500r／rain离心15
rain，重复3次。取上清液，用751型分光光度计在
波长620nm处测定吸光度值。根据EB液的标准曲
线，计算脑组织中的EB水平。
1．8 脑组织中sOD、GSH—Px活性和MDA水平
的测定；大鼠再灌24h后断头取脑，剔除嗅球、小脑
和低位脑干，在冰上分离左右两侧大脑半球，用冰生
理盐水漂洗，除去血液，滤纸拭千。称质量，制成
10％脑组织匀浆，离心取上清液，按试剂盒操作说
明分别测定SOD、GSH—Px活性和MDA水平。脑
组织中的蛋白质采用考马斯亮蓝G一250法定量。
1．9统计学处理：采用SPSS11．0统计软件对实
验数据进行处理，实验数据以z士s表示。组间比较
用单因素方差分析，当方差分析有显著性时，进一步
用g检验进行两两比较。
2结果
2．1 PAMD对神经功能评分和脑梗死体积的影
响：大鼠缺血2h后再灌24h，模型组出现明显的神
经功能障碍和脑组织梗死。PAMD组神经功能评分
与模型组相比显著降低，脑梗死体积明显缩小。见
表1。
寰1 PAMD对脑缺血再囊注大置神经功能评分和脑梗死
体积的影响(；士j，^=6)
Table1 EffectofPAMDo neurologlc蚰Score
and[1lfarctsizeincerebrmchemla-
reperfusionnb(x士j，^=6)
与模型组比较：‘Pd0．05。’尸<仉01
’P<0．05一P<0．Ol协modelgroup
2．2 PAMD对脑组织含水量和BBB通透性的影
响：大鼠脑缺血再灌注后，缺血侧脑组织中的含水量
和EB水平明显增加，BBB通透性增加。PAMD组
大鼠脑组织中的含水量和EB水平与模型组比较显
著降低。见表z。
2．3 PAMD对脑组织中SOD、GSH—Px活性和
MDA水平的影响：大鼠缺血2h后再灌24h，模型
组与假手术组相比，脑组织中的soD和GSH—Px
活性显著降低，MDA水平显著增加。PAMD呈剂量
依赖性提高脑组织中sOD和GSH—Px活性，降低
MDA水平。结果见表3。
3讨论
用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉建立局灶性脑缺
血模型，勿需开颅，清醒状态下即可再灌，其模拟的
病理过程与临床卒中相似啪，是目前最常用的脑缺
万方数据
中草焉ChineseTrtdiliona]andHerbalDrugs第37卷第9期2007年’月
寰2 PAMD对脑缺血再囊注大■脑组织含水■和EB
水平的影响(；士l。^=6)
1■bIe2 EffectofPAMD0Ⅱwatercontenta dEBlevel
ofbraintissueIn erebralIschemht—reperfusion
nts(j士t．■一6)
与假手术组比较‘46P
活性和MDA水平的影响(；土，．^一6)
TaMe3 EfleetofPAMDoRSODandGSH-Pxactivlty
andMI)Alevelofbr_jⅡtissueincerebral
ischemla—reperfusionrlts(z士J，_=6)
躺。0警¨。=。，。，群。，誉=
僵手术
模量
PAMD
30．2l士0．B55．39士0．13蚰．56士2．Z0
16．0Z士0．50zxa7．42士0．18△626．51士1．83△△
23．07：i：0．43‘‘9．92士0．24。‘35．48士1．57‘。
26．16士0．18。’5．64±0．16—40．∞士1．“一
28．54士m47’’5．31士0．14’。45．04士1．86’。
与假手术组比鞍：64P
个剂量能不同程度减轻脑缺血再灌注大鼠的神经功
能缺陷，缩小脑梗死体积，表明PAMD对脑缺血再
灌注损伤有一定的保护作用。
脑缺血再灌注时，各种损伤机制会导致BBB的
破坏n]，从而使一些平时不能通过的大分子物质得
以通过。EB是一种经典的RBB受损示踪剂，注射入
血后能与血浆蛋白稳定结合，该复合物不能通过完
整的BBB。当BBB受损通透性增加时，结合有EB
的血浆蛋白外渗进入脑组织，使脑组织中的EB增
加，用分光光度计检测脑组织中的EB水平可反映
出BBB通透性的变化情况[5]。本研究发现，PAMD
能显著降低脑缺血再灌注大鼠脑组织中的EB水
平，具有维持BBB完整性、减轻脑水肿的作用。
目前认为，脑缺血再灌注损伤是多种致病机制
共同作用的结果，其中氧自由基在脑缺血再灌注损
伤中起着重要作用。脑缺血再灌注后，脑组织中产生
大量活性氧，正常情况下这些氧自由基会被抗氧化
酶如SOD、GSH—Px等清除，而在缺血再灌注时，抗
氧化酶大量消耗，不能有效清除而导致自由基堆积。
急剧增加的氧自由基可与细胞膜不饱和脂肪酸发生
反应，形成过氧化脂质，损伤膜成分，导致细胞损伤
破裂，BBB破坏，脑水肿形成“]，MDA作为氧自由
基与生物膜不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应的代
谢产物，其水平变化间接反映了组织中氧自由基的
变化。本研究发现，PAMD呈剂量依赖性的提高脑
缺血再灌注大鼠脑组织的SOD，GSH—Px的活性，
减少MDA的产生，具有良好的抗自由基损伤作用。
综上所述，PAMD能够改善脑缺血再灌注大鼠
的神经功能缺陷，缩小脑梗死体积，减轻脑水肿，维
持BBB正常通透性，对脑缺血再灌注损伤具有庭好
的保护作用。PAMD的保护作用可能与减轻自由基
损伤有关，其相关机制有待进一步研究。
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万方数据
蝙蝠葛酚性碱对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用
作者： 张晓娟， 罗宇芬， 杨敏， ZHANG Xiao-juan， LUO Yu-fen， YANG Min
作者单位： 广东省人民医院,药学部,广东,广州,510080
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(9)
被引用次数： 2次
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2.王志国.王丹巧.苏云明 蝙蝠葛酚性碱的药理研究进展[期刊论文]-国际中医中药杂志 2009(6)
本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200709030.aspx