全 文 ：中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第2期2006年2,El·279·
养高产草珊瑚黄酮的细胞株。但是通过细胞克隆培
养的许多克隆系中，有些属于细胞突变产生的表型，
有些可能仅是细胞间生理状态差异的表型，在草珊
瑚细胞克隆系连续继代培养的早期，大部分处于生
长和黄酮质量分数不稳定的状态，经过10代左右的
连续继代培养并鉴定分析，才能确定真实的高产变
异细胞株，这和大多数利用细胞克隆技术筛选高产
系的报道是一致的。作为高产草珊瑚黄酮的细胞系
必须同时满足两个条件：其一是在一定时间内，细胞
相对增殖率高；其二是细胞代谢次生产物的有效成
分黄酮质量分数高，只有这样，两者的积才表现高
产。实验中SG一130符合这两个条件。因此，认为
SGl30确属高产草珊瑚黄酮细胞株系，对于其细胞
大量培养工艺研究有待进一步深入探索。
References：
[1]SataF，YanmdaY．Highberberine—producingculturesof
Coptisjaponicacells[J]．Phytochemistry，1984，23(2)：281—
285．
Ez]TabataM，HiaokaN．Variationofalkaloidproductionin
Nicotianarusticacalluscuhures口]．Physiollant，1976，
38：19-23．
E3]TuYS，JiangHR，WangBQ．Culturesofcallusandcell
suspensionofSarcandraglabrafortheproductionofmedici—
nalcomponentE3]．NatProdResDeve(天然产物研究与开
发)，1995，7(1)：35—41．
[4]TuYS，JiangHR，WangBQ，ela1．Studyondifferent
colourlightsemperaturesandpHvaluesoncallusgrowth
andsecondarymetaboliteaccumulationofSarcandraglabra
[J3．JiangxiSci(江西科学)，1994，12(2)：85—89．
[5]TuYS，JiangHR，WangBQ．studiesonthesupensioncell
culturesofSarcandraglabra口]．diangxiSci(江西科学)，
1994，12(3)：162165。
[6]TuYS，JiangHR．Plantcultureofsiglec llclonefrom
SarcandraglabraEJ]．JiangxiSci(江西科学)，1996，14
(2)：97—101．
E7]BarzW．PlantTissueC ltureandItsBiotechnologicalAppl —
cation[M]．Berlin：Springer—Verlag，1977．
RP—HPLC法测定黄柏中黄柏内酯
马学敏1’2，王力生1，赵巍1，郭亚健1，郭树仁2
(1．北京中医药大学，北京100102；2．北京大学，北京100083)
黄柏为常用中药，系芸香科植物黄皮树Phel—
lodendronchi enseSchneid．及黄柏树P．amurense
Rupr．除去栓皮的干燥树皮，前者习惯称“川黄柏”，后
者习惯称“关黄柏”。黄柏性味苦寒，具有清热燥湿、泻
火解毒、退虚热等功效。主要含有生物碱，如小檗碱、药
根碱、木兰花碱等。另含黄柏酮、白鲜交酯、黄柏内酯
等。其中，黄柏内酯具有降血糖Ⅲ、驱虫、抗溃疡‘21的作
用，可作为黄柏及其制剂的指标性成分之一。
一直以来，《中国药典》及各种文献中大多单独
以小檗碱作为黄柏药材及制剂定性定量的指标性成
分，然而，小檗碱存在于黄连、三颗针、功劳木多种植
物中，其专属性较差，黄柏内酯作为黄柏药材及其制
剂的指标性成分更加具有科学性。
本实验建立了黄柏药材中黄柏内酯的测定方
法，该方法操作简便、准确，重现性好，为改善黄柏中
的指标性成分的专属问题提供参考。
1仪器与试药
1．1 仪器：RE一52A薄膜旋转蒸发仪(上海亚荣生
化仪器厂)，BruckerAM一500型核磁共振仪，
APEXⅡFT—ICR型质谱仪，SHz～3型水循环真
空泵(河南巩义市英峪电子仪器厂)，KQ一100型超
收稿日期：2005—04—24
声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，惠普
HPl050高效液相色谱仪。
1．2试药：柱色谱硅胶和薄层色谱硅胶(青岛海洋
化工厂)；水为重蒸水，乙腈为色谱纯，其他试剂均为
分析纯；显色剂为对二甲基氨基苯甲醛；关黄柏1于
2003年采自吉林，经本校生药系阎玉凝教授鉴定为
黄柏树Phellodendronamu e seRupr．干燥树皮；
关黄柏2、川黄柏、山黄柏来自中药学院生药系标本
馆；黄柏内酯对照品为自制，质量分数>98％。
2方法与结果
2．1 黄柏内酯的提取分离与结构鉴定：将关黄柏1
依次用石油醚、醋酸乙酯提取。将醋酸乙酯提取物进
行硅胶柱色谱分离，以氯仿一醋酸乙酯(50：1～8；
1)进行梯度洗脱，将氯仿一醋酸乙酯(10：1)部分进
行反复柱色谱分离，得到白色针状结晶(CHCl。一
MeOH)。经结构鉴定为黄柏内酯(obaculactone)[3]。
2．2色谱条件：Diamonsil—C18分析柱(250mm×
4．6mm，5肚m)，流动相：乙腈一水一磷酸(50：50：
0．2)，体积流量：1．0mL／min，柱温：室温，检测波长
210nm。在此条件下，样品中黄柏内酯与相邻成分
达到良好基线分离，见图1。
万方数据
·280· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第2期2006年2月
0
L_c⋯⋯L—kL⋯ k—
A一黄柏内酯对照品 B一关黄柏1C一关黄柏2D一川黄柏E一山黄柏
A—obaculactoneB—P．amurense1 C—P．amurense2 D—P．chinenseSE—P．amurenseproductedinH beiandHenan
图1对照品和样品HPLC色谱
Fig．1HPLCChromatogramsfreferenceubstancedsamples
2．3对照品溶液的制备：取黄柏内酯对照品适量， 液，在前述色谱条件下，每次进样20弘L，样品获得
精密称定，加乙腈溶液制成0．206mg／mL的对照品 良好分离，测得各样品中黄柏内酯，结果见表1。
溶液。 表1样品的测定结果Q一5)
2．4供试品溶液的制备：取关黄柏l粗粉(过40目
筛)1g，精密称定，置索氏提取器中，以石油醚加热
回流提取3h，弃去石油醚提取液；残渣加氯仿加热
回流提取5h，提取液回收氯仿，用乙腈转溶至10
mL量瓶中，定容，摇匀，用微孔滤膜(0．45肛m)滤
过，即得。
2．5线性关系考察：分别取上述对照品溶液3、6、
9、12、15pL，注入液相色谱仪，以黄柏内酯的峰面积
为纵坐标、进样量为横坐标，得到回归方程：y=
719．83X+80．5，，．一0．9994，结果表明黄柏内酯进
样量在0．618～3．090pig时线性关系良好。
2．6精密度试验：精密吸取黄柏内酯对照品溶液
(0．206mg／mL)12／zL，连续进样5次，计算得峰面
积的RSD为0．82％。
2．7稳定性试验：取同一关黄柏1供试品溶液，分
别于0、2、4、6、8h进样，每次20pL，计算得峰面积
的RSD为0．75％。结果表明，供试品溶液中的黄柏
内酯至少在8h内稳定。
2．8重现性试验：按照前述供试品溶液制备方法，
精密称取同一批关黄柏1，分别制备5份供试品溶
液，每次进样20肛L，按上述色谱条件测定黄柏内酯
的质量分数，结果平均为0．112％，RSD=1．26％。
2．9加样回收率试验：称取0．5g样品5份，分别
加入黄柏内酯对照品0．618mg，依供试品溶液制备
方法操作，结果平均回收率为96．43％，RSD=
1．15％。
2．10样品测定：按照关黄柏l的供试品溶液制备
方法，分别制备关黄柏2、川黄柏和山黄柏样品溶
Table1 Determinationofsamples(一一5)
样品 黄柏内酯／％
关黄柏2
川黄柏
山黄柏
3讨论
3．1 流动相系统的选择：黄柏内酯与黄柏酮均属于
柠檬苦素类化合物，参考柑桔中黄柏酮的测定方
法[4]：流动相条件为乙腈一水一三氟乙酸(20：80：
0．03)，在本试验的色谱条件下样品分离度不好，经
过筛选最终确定了流动相为乙腈一水一磷酸(50；
50：0．2)，该条件能够保障黄柏内酯在反相柱上达
到良好的分离。
3．2供试品溶液制备的条件：选择比较了甲醇、氯
仿、醋酸乙酯3种提取溶剂，并考察了回流提取时
间，最终确定以氯仿回流提取5h。
3．3 由于样品来源有限，测定份数较少，如果确定
将黄柏内酯作为黄柏的指标性成分之一，还需要进
一步的积累数据。
References：
[1]EditorialOff ceofNationalChineseHerbalMedicineCollec—
tion．CollectionofNationalChineseHerbalMedicine(全国中
草药汇编)[M]．Beijing：People
7
SMedicalPublishing
House．1975．
Ez]InformationCen erofChineseHerbalMedicine，StatePhar—
maceuticalAdministrationofChi a．HandbookofActive
ConstituentsinPhytomedicine(植物有效成分手册)EM]．
Beijing：People
7
SMedicalPublishingHouse，1986．
E33YuDQ，YangJS，XieJX．HandbookofAnalysisChemistry
(分析化学手册)EM]．Beijing：ChemicalIndustryPress，
1999．
[4]TianQC，DaiJ，DingXL．Screeningforlimonoidgluco-
sidesinCitrusgrandisL．OsbeckbyHPLC—El／MSI-J]．
ChindChromatogr(色谱)，2000，18(4)：291．
万方数据
RP-HPLC法测定黄柏中黄柏内酯
作者： 马学敏， 王力生， 赵巍， 郭亚健， 郭树仁
作者单位： 马学敏(北京中医药大学,北京,100102北京大学,北京,100083)， 王力生,赵巍,郭亚健(北京
中医药大学,北京,100102)， 郭树仁(北京大学,北京,100083)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(2)
被引用次数： 4次

参考文献(4条)
1.Editorial Office of National Chinese Herbal Medicine Collection 全国中草药汇编 1975
2.Information Center of Chinese Herbal Medicine,State Pharmaceutical Administration of China 植物有
效成分手册 1986
3.u DQ;YangJS;XieJX 分析化学手册 1999
4.Tian Q C;Dai J;Ding X L Screening for limonoid glucosides in Citrus grandis L.Osbeck by HPLC-EI/MS
2000(04)

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5. 苑冬敏.刘扬.栾晓静.康廷国.YUAN Dong-min.LIU Yang.LUAN Xiao-jing.KANG Ting-guo 黄柏的显微定量研究
[期刊论文]-中华中医药学刊2007,25(5)
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