全 文 ：中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月·1247·
的生根率达95％以上，户外移栽苗的成活率也比
已有方法显著提高，达90％以上。和已有方法相
比，本试验缩短了离体繁殖时间，建立了乌头的高效
快繁体系。
光照1500～2000lx、LH200mg／L与对照相
比对愈伤组织的诱导无明显差异，但前者对愈伤组
织的增殖和丛生芽的生长具有一定的促进作用，这
种作用可能是由于某些胚性愈伤组织中部分细胞具
有了叶绿体，从而能将部分光能转化成自身所需的
化学能，而LH由于具有多种氨基酸成分，能满足愈
伤组织生长中对营养的大量需求。培养基中附加3
g／L的PVP与3g／L的AC均有一定的抗褐化作
用，这种作用是由于它们吸附了外植体产生的酚类
物质经空气氧化后形成的醌类物质，但随着它们分
子吸附空间的饱和，吸附量减少，表现为抗褐化能力
亦随之减弱；在愈伤组织的形态及诱导率方面，前者
优于后者，这种差异可能是二者在吸附醌类物质的
同时也吸附了一定量的外源植物激素，而0．5％的
PVP作用后剩余的外源植物激素的量刚好适宜愈
伤组织的诱导和生长；在丛生芽诱导生根方面，后者
优于前者，可能是因为AC提供了植株习惯的类似
土壤中生长的黑暗环境[1]。
利用种子做外植体，具有不受季节影响，初代培
养污染率较低等优点。本试验以种子为外植体的诱
导率还不高，培养时间也较长，具体影响因子有待进
一步的研究。另外，国内外对乌头愈伤组织中次生代
谢物的研究也较少，若能直接从其愈伤组织中提取
次生代谢物，将具有巨大的商业价值。
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河北道地药材酸枣仁HPLC—ELSD指纹图谱研究
张志斐1’2，袁志芳1，张兰桐，范丽芳1，冯锐1
(1．河北医科大学药学院药物分析教研室，河北石家庄050017；2．华北煤炭医学院药学系，河北唐山063000)
摘 要：目的建立河北道地药材酸枣仁的HPLC—ELSD指纹图谱，为科学评价及有效控制酸枣仁药材质量提供
新方法。方法收集不同产地酸枣仁药材21批，采用HPLC—ELSD法测定其指纹图谱。色谱条件：c。。柱，乙腈一水
为流动相进行梯度洗脱，ELSD检测器，体积流量1．0mL／min，柱温35℃。结果建立了道地酸枣仁药材HPLC—
ELSD指纹图谱共有模式，并对不同产地酸枣仁药材进行了相似度比较。结论方法简便、可靠，可用于不同产地
酸枣仁药材的指纹图谱测定和质量评价，为有效控制酸枣仁药材的内在质量提供依据。
关键词：酸枣仁；酸枣仁皂苷；高效液相色谱法；指纹图谱
中图分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)08—1247—04
HPLC—ELSDFingerprintsofgenuineSemenZiziphiSp nosaefromHebeiProvince
ZHANGZhi—feil’2，YUANZhi—fan91，ZHANGLan—ton91，FANLi—fan91，FENGRuil
(1．DepartmentofPharmaceuticalAnalysis，SchoolofP armacy，HebeiMedicalUniversity，Shijiazhuang050017，China；
2．DepartmentofPharmacy，NorthChinaCoalMedicalCo lege，Tangshan063000，China)
收稿日期：2006—11-12
基金项目：河北省自然科学基金项目(303453)
作者简介：张志斐(1972一)，女，硕士研究生，副教授，主要从事中药指纹图谱研究。
*通讯作者张兰橱Tel：(0311)88268419E—mail：zhanglantong@263．net
万方数据
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Abstract：ObjectiveToestablishafingerprintanalysismethodf ridentificationandeffectivequality
contr01ofgenuineSemenZiziphiSp nosaefromHebeiProvince．MethodsTheHPLC—ELSDfingerprints
for21batchesofSemenZiziphiSp nosaefromdifferenthabitatswereobtainedbyWaters1525HPLC
instruments．TheHPLCseparationwasperformedonaC18analyticalcolumngradientlutionwitha
mixtureconsistingofacetonitrileandwaterata flowrateof1．0mL／minbyELSDdetector．The
temperatureofcolumnwas35℃．ResultsThemutualmodelofHPLC—ELSDfingerprintswasetupand
thesimilaritiestOthecruderugsfromdifferenthabitatswerecompared．ConclusionItiSsimplea d
quicktOidentifySemenZiziphiSp nosaefromdifferentsourceswiththeabove—mentionedmethodwhich
canbeusedasaqualitycontroliternforSemenZiziphiSp nosae．
Keywords：SemenZiziphiSp nosae；jujuboside；HPLC；fingerprints
酸枣仁为鼠李科植物酸枣Ziziphusjujube
Mill．var．spinosa(Bunge)HuexH．F．Chou的
干燥成熟种子口]，其味酸性平，补肝、宁心、敛汗、生
津，主要用于治疗虚烦不眠、惊悸多梦、体虚多汗、津
伤口渴等症，为中医首选安神药，是河北道地药材。
近年来，由于药材市场的开放，酸枣仁商品药材中不
断发现以它种植物种子混充，比较常见的有同科植
物滇刺枣Z．mauritianaLam．的成熟种子，以滇枣
仁、缅枣仁或理枣仁之名混充酸枣仁，也有同科植物
北枳荬HoveniadutcisThunb。种子掺入正品酸枣
仁中，导致酸枣仁药材及其制剂质量不稳定，从而影
响其疗效。现代药理研究表明，酸枣仁皂苷为其镇静
催眠有效成分之一。本文对酸枣仁皂苷类成分的指
纹图谱进行研究，获得对照指纹图谱，旨在建立河北
道地药材酸枣仁HPLC—ELSD指纹图谱的共有模
式，以此作为与混伪品区别的标准模式，以避免同科
属近缘种的伪充，同时对不同产地酸枣仁药材进行
了相似度比较，以期评价其质量的优劣，从而有效控
制酸枣仁药材的内在质量。
1材料
1．1 仪器与试剂：Waters1525高效液相色谱仪；
Waters2420检测器(ELSD)；Empower工作站；
SCQ一200超声波清洗器(上海声谱超声波设备厂)；
SZ～93自动双重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器
厂)；旋转薄膜蒸发仪(Heidolph2，Laboratory
4000)。乙腈为色谱纯(美国迪马公司)；水为二次重
蒸水；其他试剂均为分析纯。
1．2对照品与样品：酸枣仁皂苷A对照品(供鉴别
用，批号：734—9404)；酸枣仁皂苷B对照品(供鉴
别用，批号：814—9402)；酸枣仁对照药材(批号：
121517—200401)均由中国药品生物制品检定所提
供；不同产地酸枣仁药材样品经河北医科大学药学
院生药学教研室聂凤提教授和邯郸市药品检验所孔
增科主任药师鉴定，来源见表1。21个不同产地的酸
表1酸枣仁药材来源
Table1 OriginsofSemenZiziphiSp nosaesamples
枣仁药材样品(其中1～10号样品为道地酸枣仁)，
将样品置烘箱内，于40℃烘干8h，取出，粉碎，置
广口瓶中密塞，备用。
2方法与结果
2．1 色谱条件跚：色谱柱为DiamonsilTMC18柱
(250mm×4．6mm，5肛m)；乙腈(A)一水(B)为流
动相进行梯度洗脱；运行时间55rain，O～5min：A—
B(5：95)，5～30min从5：95变化到30：70；
30～50min从30：70变化到70：30；50～55rain
从70：30变化到5：95；体积流量为1．0mL／min；
柱温为35℃；ELSD检测器；氮气压力为172．4
kPa；漂移管温度为60℃；喷口温度35℃；进样量
20L。
2．2供试品溶液的制备：酸枣仁药材粉碎，取约2．0
g，精密称定，置索氏提取器中，加入石油醚100mL，
浸泡过夜(12h)，回流提取24h。药渣挥干溶剂后，
万方数据
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转移至50mL三角瓶中，精密加入甲醇20mL，称定
质量，超声处理1h，放冷至室温，再称定质量，补足
损失的甲醇，摇匀。滤过，滤液回收至于，残渣精密加
甲醇2mL使溶解，用微孔滤膜(o．45pm)滤过，
12000r／min离心10min，吸取上清液，即得。
2．3对照品溶液的制备：分别取酸枣仁皂苷A、B
对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成
1 mg／mL溶液，作为对照品溶液A、B。
2。4 系统适用性试验：取上述供试品溶液20pL，
注入液相色谱仪，记录色谱图，按酸枣仁皂苷A峰
计算理论板数约为4000，与其他色谱峰分离度大
于1．5。
2．5方法学考察口1
2．5．1 专属性试验：分别精密吸取空白溶剂、对照
品溶液A、B及供试品溶液各20“L，注入液相色谱
仪，记录60min内的色谱峰。在该色谱条件下，空白
溶剂甲醇对测定无干扰，对照品溶液A和B分别于
41．7min和43．9min出峰，与供试品溶液相对应。
色谱图见图1。
A
B
20 25 30 35 40 45
f／mm
A一酸枣仁皂苷AB一酸枣仁皂苷B
A—jujubosideA B-jujubosideB
图1 空白(1)、对照品(3、4)及供试品溶液(2)的色谱图
Fig．1HPLC—ELSDChromatogramsfbl nk(1)，
referencesubstance(3and4)，andSemen
ZiziphiSp nosaesamplesolution(2)
2．5．2精密度试验：取5号酸枣仁样品粉末，精密
称定，制备供试品溶液，重复进样6次，记录指纹图
谱。将指纹图谱信号数据导人中药色谱指纹图谱相
似度评价系统(2004A)，计算6次进样指纹图谱的
相似度。结果表明，6次进样指纹图谱的相似度均高
于0．99，符合指纹图谱测定要求，精密度良好。
2．5．3重现性试验：取5号酸枣仁样品粉末6份，
精密称定，制备供试品溶液，分别进样，记录指纹图
谱。计算6份样品所得指纹图谱的相似度。结果表
明，6份样品指纹图谱的相似度均高于0．98，符合
指纹图谱测定要求，重现性良好。
2．5．4稳定性试验：取5号酸枣仁样品液，分别于
0、2、4、6、8、10、12、24、36、48h检测指纹图谱，计算
48h内所得指纹图谱的相似度。结果表明，48h内
指纹图谱的相似度均高于o．98，符合指纹图谱测定
要求，稳定性良好。
2．6道地酸枣仁药材指纹图谱的建立及对照指纹
图谱的生成[4]：取1～11号酸枣仁药材供试品溶液，
分别进样20弘L，得到10批河北道地酸枣仁药材和
1批对照药材的指纹图谱，同时生成对照指纹图谱。
见图2。
0 10 20 30 40 50 60
t／min
SI～S10一样品1～10s 1一对照药材
R一对照指纹图谱5(s)一酸枣仁皂苷A
S1一S10-samples1—10S11-referencesampl s
R—referencefingerprint5(S)一jujubosideA
图2河北道地酸枣仁药材HPLC—ELSD指纹图谱
Fig．2HPLC—ELSDFingerprintsofgenuineSemen
ZiziphiSp nosaesamplesfromHebeiProvince
2．7不同产地酸枣仁药材指纹图谱的建立：取不同
来源的酸枣仁药材(12～21号样品)，制备供试品
溶液，分别取20肛L进样，得10批不同来源酸枣仁
药材的指纹图谱，见图3。
0 10 20 30 40 50 60
t，rain
S1～slo一样品12～21S1 -对照指纹图谱5(S)一酸枣仁皂苷A
S1--S10一samples12—21S11一referencefi g rprint5(S)一
jujubosideA
图3不同产地酸枣仁药材HPLC—ELSD指纹图谱
Fig．3HPLC—ELSDFingerprintsofSemenZiziphi
Spinosaesamplesfromdifferenthabitats
圣～
万方数据
·1250· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月
2．8相似度分析口]：将实验数据导人中药色谱指纹
图谱相似度评价系统2004A版软件，设定参照图
谱，将谱峰自动匹配，然后生成对照图谱，进行相似
度评价。由10批道地酸枣仁药材和对照药材生成酸
枣仁药材指纹图谱的共有模式(即对照图谱)，各样
品与该共有模式比较，其相似度结果见表2。
表2与共有模式比较的酸枣仁样品的相似度评价
Table2 Evaluationofsimilaritiesamongsamples
ofSemenZiziphiSp nosaecompared
withmutualmodel
样品号 相似度 样品号 相似度
1 O．963 12 0．970
2 0．989 13 0．985
3 0．937 14 0．970
4 O．993 15 0．927
5 0．987 16 0．976
6 0．988 17 0．986
7 0．996 18 0．966
8 0．968 19 0．830
9 0．967 20 0．966
10 0．987 21 0．919
11 0．985
3讨论
3．1 根据酸枣仁药材中化学成分的类别，一类是以
皂苷类和黄酮类成分为主的高效液相指纹图谱，另
一类是以脂肪油成分为主的气相指纹图谱，酸枣仁
脂肪油成分的GC—MS指纹图谱研究另文发表。本
实验主要研究了河北道地药材酸枣仁皂苷类成分的
HPLC—ELSD指纹图谱，建立其共有模式，同时与不
同产地酸枣仁药材进行了相似度比较，为河北道地
药材酸枣仁的分析鉴定提供了新的科学方法和依
据，为中药标准指纹谱库的建立和酸枣仁药材规范
化种植提供研究基础。
3．2 根据指纹图谱相似度评价软件得出的结果表
明，相似度在0．90～1．00为正品酸枣仁，药材品质
较优，包括10批河北道地酸枣仁药材，而伪品云南
理枣仁的相似度为0．830。
3。3 比较4批生药材及其炒制品的指纹图谱发现，
河北涉县(炒)和山西左权县(炒)均比其生药材多一
个45．8rain的峰，说明炒制以后药材的化学成分有
所变化。文献报道，酸枣仁生品和炒制品的药效不尽
相同，可能与其化学成分发生变化有关。3号(早期
采)和4号(成熟期采)样品均产自河北承德宽城青
龙，3号相似度为0．937，4号为0．993，有一定差距。
同时早期采收药材的指纹图谱中各色谱峰峰高大大
低于其他样品，说明不同的采收期的酸枣仁药材所
含化学成分及其量有所变化，所以选用药材应固定
产地和采收期，以确保药材的质量和疗效。
3．4本试验选用蒸发光散射检测器(ELSD)进行
色谱分析，ELSD检测器对皂苷类成分的响应值较
大，克服了皂苷类成分在203nm有最大吸收但基
线不稳、噪音较大的缺点。
3．5在方法学研究中，直接应用中药色谱指纹图谱
相似度评价系统(2004A版)软件，通过计算相似度
来比较精密度、稳定性和重现性，结果良好，比计算
共有峰相对峰面积的RSD值更加方便快捷，更加
客观地考察方法的各项效能指标，因为指纹图谱反
映的是药材的“整体面貌”，而不单单是其中的几个
色谱峰。
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万方数据
河北道地药材酸枣仁HPLC-ELSD指纹图谱研究
作者： 张志斐， 袁志芳， 张兰桐， 范丽芳， 冯锐， ZHANG Zhi-fei， YUAN Zhi-fang，
ZHANG Lan-tong， FAN Li-fang， FENG Rui
作者单位： 张志斐,ZHANG Zhi-fei(河北医科大学药学院,药物分析教研室,河北,石家庄,050017;华北煤
炭医学院,药学系,河北,唐山,063000)， 袁志芳,张兰桐,范丽芳,冯锐,YUAN Zhi-
fang,ZHANG Lan-tong,FAN Li-fang,FENG Rui(河北医科大学药学院,药物分析教研室,河北
,石家庄,050017)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(8)
被引用次数： 8次

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