全 文 ：·690· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月
制：(1)由于自身蛋白质结构决定的，如能提供活泼
氢质子，使其易于受到活性氧自由基的攻击，从而与
发光剂竞争活性氧自由基导致发光强度的降低；(2)
蛋白质的抗氧化活性多与巯基量或类似于酶的活性
有关，如保护蛋白(protectorprotein)是巯基特异性
抗氧化剂，能清除双氧水及羟自由基[161；而肌球蛋
白，血红蛋白及血红蛋白一蛋白质复合物(如肝球蛋
白)等具有类似于过氧化物酶的活性，可清除H：Oz
或有机氢过氧化物[1川。白果白蛋白的氨基酸组成分
析表明其含有2．5％左右的半胱氨酸，因此具有较
多的巯基，从而表现出类似于保护蛋白的抗氧化机
制。而其是否具有类似于酶的抗氧化活性则有待于
进一步的证实。
因此，本试验结果表明化学发光法能用于测定
白果白蛋白对活性氧的清除作用及对DNA损伤的
保护作用，但也具有一定的选择性。
References：
[1]HuangW，XieBJ．Studiesonantibiooxidationofginkgo
protein[J3．ActaNutrimentaSi ，2002，24(2)：192—194．
E2]HuangW，XieBJ，WangY，eta1．Studyonseparationand
purificationofproteinfromginkgoseedanditsantioxidant
activity口]．SciAgricS n，2004，37(10)：1537—1543．
E3]LingZQ，XieBJ．Effectsofprocyanidinsextractfromthe
Lotusseedpodonreactiveoxygenspeciesandlipidperoxida-
tion[J]．ActaNutrimentaSi ，2002，24(2)：121—125．
r4]ArcherSL，NelsonDP，WeirE．DetectionofactivatedOz
speciesnvitroandinratlungsbychemiluminescence[J]．J
ApplPhysiol，1989，67：1912-1921·
r5]DemiryurekAT，WainwrightCL，WadsworthRM，ela1．
Characterizationofamethodf rthedetectionofdrugswith
freeradicalscavengingactivityusingporcineleukocytesEJ]．
JPharmacol71DzzcolMethods，1994，32：35—40．
[6]GuoAG，WangZY．AntioxidationofPyrogallol—chemilu—
minescenceassayforsuperoxided smutaseactivity[J]．
PlantPhysiolC mmun，1989，3：54-57．
[7]HuTX．ProgressofFreeRadicalofLifeScience(Pa命科学
的自由基研究进展)[M]．Vol5．Beijing：AtomicEnergy
PublishingHouse。1997．
[8]ZhangEX．ProgressofFreeRadicalofLifeScience(Pa命
科学的自由基研究进展)[M]．Vol2．Beijing：AtomicEner—
gYPublishingHouse，1994．
[93YldzG，DemiryurekAT．FerrousIron—inducedL minol
chemiluminescence：amethodf rhydroxylradicalstudy[J]．
JPharmacolToxicolMethods，1998，39(3)：179—184．
[10]HuTX，ChenJW，XuJY，eta1．Effectsofpolysacchride—
peptideofCoriolusandpolysaccharideofGanodermaonscav一
engingactiveoxygenspecies[J]．ActaBio hemBiol￡，hSsSin，
1992，24(5)：465—470．
[113MaWJ，CaoEH，ZhangJ，eta1．Phenanthroline—Cueom—
plex—mediatedchemiluminescenceofDNAa ditspotential
useinantioxidationevaluation[J]．JPhotochemP 毗oMol
B：Biol，1998，44：63—68．
[12]HuTx．Freeradical，lipidperoxideandantioxidantdeterr
minedbychemiluminescencem thods[J]．PreclinicMed
Clin，1993，13(2)：81—85．
[13]XuSH．Anewchemiluminescencesy t mforeasureoH
radical[J]．JInstrumAnal，2000，19(2)：11—13．
[1 3ZhangJ，CaoEH，QinJF．Studyonmechanismofantioxi—
dantprotectionagainstDNAdamage[J]．ActaBiophysSin，
1997，13(1)：123—127．
[15]MaWJ，CaoEH，ZhangJ．Structureanalysisandtheory
calculationofprotectingeffectofovertenantioxidantson
damagedDNAI-J]．ActaBiophysSin，1998，14(1)：155—
160．
[163XieLT．Protectorproteina ewantioxidantiveproteinand
itsbiologicactivity口]．AcadJGuangzhouMedColl(广州
医学院学报)，1999，27(3)：80一83．
[173RenGP，YuB，“SL．Antioxidativeabil tyofproteinand
itsramification口]．ChinLipids，1997，22(4)：47—50．
灌胃养阴通脑颗粒大鼠血浆中川芎嗪的HPLC法测定
张国平1，郭 莹2，张 莉2，樊守艳2，韩 进2，余 勤2，潘远江1，万海同2+
(1．浙江大学医学院附属第二医院，浙江杭州310009；2．浙江中医药大学心脑血管病研究所，浙江杭州310053)
摘 要：目的建立HPLC测定大鼠灌胃养阴通脑颗粒有效部位组合后血浆中川I芎嗪质量浓度的方法。方法以
乙腈提取处理血浆，以安眠酮为内标，甲醇一水(55：45)为流动相，ODSC-s色谱柱(150mmX4．6mm，5pm)为固
定相，体积流量为1．0mL／min，以紫外检测器在279nm波长下测定m浆中川芎嗪。结果川芎嗪在0．11～22
Fg／mL线性关系良好，平均回收率为102．98％，RSD<10％，最低检测限为0．21ng，血浆中最低检测质量浓度为
0．042／xg／mL。结论此法灵敏、可靠，可较好地用于口服养阴通脑颗粒有效部位组合后血浆中的川芎嗪的测定，为
测定中药复方体内有效成分提供方法。
关键词：养阴通脑颗粒；川芎嗪；血药浓度；高效液相色谱
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2007)05—0690～03
收稿日期：2006—07—03
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30371789；30672652)；浙江省自然科学基金项目(Z204424)
作者简介：张国平(1967一)，男，浙江嵊州人，主治医师，硕士，主要从事脑血管病的中西医结合临床与实验研究。
Tel：(0571)87783511E—mail：zhangguoping@zj．eom
*通讯作者万海同E—mail：wanhaitong@zjtcm．net
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月·691·
Determinationoftetramethylpyrazineinplasmaofratsigadministered
withYangyinTo gnaoGranulabyHPLC
ZHANGGuo—pin91，GUoYin92，ZHANGLi2，FANShou—yan2，HANJin2，
YUQin2，PANYuan—jian91，WANHai—ton92
(1．SecondAffiliatedHospital，CollegeofMedicine，ZhejiangUniversity，Hangzhou310009，China；2．Institute
ofCardio—cerebralV sseDisease，ZhejiangUniversityofTraditionalChineseMedicine，Hangzhou310053，China)
Abstract：ObjectiveToes ablishanHPLCmethodforeterminingthetetramethylpyrazineinplas—
maofratsafterigadministeredbythmainactivefractionsofYangyinTo gnaoGranula．MethodsThe
plasmaw sextractedandtreatedbyacetonitrile．Usingm thaqualoneasinternalstandard，tetram—
ethylpyrazinew sdetectedbyODSC18chromatographycolumn(150mm×4．6mm，5肛m)asstationary
phase，mobilephaswasmethanol—water(55：45)，withtheflowrateat1．0mL／min，andthedetective
wavelengthat279nm．ResultsTherewasagoodlinearrelationshipfortetramethylpyrazineinthe nge
of0．11—22弘g／mL，andthe veragerecoveryratewas102．98％，RSD<10％．Minimumdetect onl it
was0．21ngandtheminimumconcentratoninplasmawas0．042弘g／mL．ConclusionThemethodissen—
sitiveandreliable．ItcanbewellappliedtothequalitycontrolofYangyinTo gnaoGranulaandprovidea
wayforthedeterminationofactivecomponentsinChinesemateriamedicapreparationinvitro．
Keywords：YangyinTong aoGranula；tetramethylpyrazine；bloodconcentration；HPLC
复方养阴通脑颗粒主要由川芎、葛根、生地等药
味组成，主要用于缺血性脑血管病的治疗。其中川芎
为其主要药物，川芎嗪为川芎的主要有效成分，可扩
张小动脉，改善微循环和脑血流[1]。本实验建立脑缺
血大鼠灌胃养阴通脑颗粒有效部位组合(生物碱、黄
酮等)后血浆中川芎嗪的HPLC测定方法，为进一
步开展养阴通脑颗粒有效部位组合在脑缺血大鼠体
内的药动学研究提供参考。
1仪器与材料
日本岛津LC一10AD液相色谱仪：手动进样
器、LC一10ADVP泵、SPD一10AVP检测器。Milli—
pore超纯水仪，MettlerTo doAGl35电子天平，
HettiehUniversal32高速离心机。
盐酸川芎嗪对照品(中国药品生物制品检定所，
批号110817-200305)；甲醇为市售色谱纯，乙腈等
均为市售分析纯，安眠酮由上海集成制药厂提供，水
为超纯水。养阴通脑颗粒有效部位组合含生物碱
53％，其是川芎嗪占76％，由浙江大学化学系提取。
老年清洁级SD大鼠，雄性，体重320360g，
由浙江省医学科学院动物中心提供。
2方法与结果
2．1对照品溶液的配制：精密称取川芎嗪对照品
57．2mg，用甲醇一水(1：1)溶解，定容于10mL量
瓶中，得到质量浓度为5．72mg／mL川芎嗪对照品
溶液，精密移取1mL，定容至10mL量瓶，得到质
量浓度为0．572mg／mL川芎嗪对照品溶液。
2．2 内标溶液的配制：精密称取安眠酮120mg，用
甲醇一5％醋酸(1：1)溶解，定容于100mL量瓶中，
即得质量浓度为0．12mg／mL内标溶液。
2．3脑缺血模型大鼠的制备：用改良的Pulsinelli
四血管法造模。以10％水合氯醛0．4mL／100gip
麻醉，大鼠仰卧位固定于手术台上，在第一颈椎水平
做一正中切口，找到两侧翼小孑L，直视下电凝，永久
性闭塞双侧椎动脉。颈部皮肤侧切口，分离颈总动
脉，用微动脉夹夹闭双侧颈总动脉30min，造成全
脑缺血，即为模型组。假手术组为进行以上手术，暴
露椎动脉而不进行电凝，暴露双侧颈总动脉而不
夹闭。
2．4脑缺血大鼠血浆样品的制备：将养阴通脑颗粒
有效部位组合用水溶解，6mg／100gip给药，从颈动
脉取血，以肝素抗凝，离心后吸取上清液获得血浆，
同法以水灌胃得到空白血浆。
2．5血浆样本预处理：用微量加样器吸取血浆0．5
mL，置于5mL离心试管中，以微量加样针准确加
入内标液20pL，电动涡旋器充分混匀15S，准确加
入1．5mL乙腈，涡旋混匀2min，100 0r／min离
心，取上清液待测。
2．6色谱条件：流动相为甲醇一水(55：45)，固定相
为PhenomenexGeminiODSC18柱(150mm×4．6
mm，5弘m)，体积流量为1．0mL／min，检测波长为
279nm。
2．7标准曲线的制作及最低检测限：取空白血浆
0．5mL于5mL离心管中，分别定量加入川芎嗪对
照品溶液使其含川芎嗪质量浓度分别为0．11、
0．22、0．55、1．10、2．75、5．50、11．00、22．00／19／mL，
在每管中分别加入内标液20肛L，进行处理。将川芎
万方数据
·692· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs笫38卷第5期2007年5月
、嗪和内标物的峰面积比值与其相对应的质量浓度值
作线性回归，得到该色谱条件下的川I芎嗪的线性回
归方程为Y=3．8374X一0．045，r一0．99995。结
果表明川芎嗪在0．11～22弘g／mL呈良好的线性关
系。以信噪比为3时测得的最低检测限为0．21ng，
血浆中的最低检测质量浓度为0．042btg／mL。
2．8专属性试验：在此色谱条件下，分别吸取空白
血浆、空白血浆加对照品和供试品预处理后的上清
液20肛L，注入色谱系统，测定。结果脑缺血大鼠血
浆中川芎嗪和内标物分离完全，空白血浆无干扰，样
品中无其他物质的干扰。见图1。
l一川芎嗪2一簧眠酮
1一tetramethylpyrazine2-methaqualone
图1 空白血浆(A)、空白血浆+对照晶+内标(B)
和含药血浆(C)的HPLC色谱图
Fig．1HPLCChromatogramsofbl nkplasma(A)、
blankplasma+referencesubstance+internal
standard(B)，anddrug-containingplasma(C)
2．9方法回收率和精密度试验：取空白血浆作底
物，选择1d内不同时间和不同天检测同一已知样
品，将其理论值与测定值相比得其回收率，并计算13
内和日间精密度，见表1和2。结果川芎嗪的平均回
收率为102．98％，RSD小于10％，各质量浓度回收
率基本符合要求。
表1大鼠血浆中川芎嗪测定的回收率考察(一一5)
Table1 Recoveryrateoftetramethylpyrazine
inplasmaofratso一5)
2．10测定结果：取不同时间点给药大鼠血浆，处
理，进样测定，结果见表3。
3讨论
中药复方El服给药后，其体内过程极其复杂，除
表2血浆中川芎嗪测定的精密度考察瓴一5)
Table2 Precisionoftetramethylpyrazine
inplasmaofrats(弗一5)
表3川芎嗪血药浓度的测定结果(i士s，弹一5)
Table3 Determinationoftetramethylpyrazine
bloodconcentration(i士s，露一5)
取血时间 血药浓度 取血时间 血药浓度
／min ／(pg·mL一1)／min ／(腿·mL一1)
5 0．153士0．0593 60 0．121士0．0781
10 0．219土0．142 90 0．139士0．0504
15 0．258士0．154 120 0．149土0．0775
30 0．391士0．183 240 0．147土0．0691
45 0．155士0．0897 360 0．128土0．0586’
肝肠效应外，药物间的相互作用也不可忽视，血药浓
度经常出现双峰或多峰现象。
采用内标法测定脑缺血大鼠血浆中的川芎嗪，
可以相对减少误差，提高实验的准确度。在内标物的
选择上，根据文献分别对尼群地平跚和安眠酮‘33进
行了试验。结果表明，在本实验条件下，尼群地平的
保留时间较大，且对酸不敏感，流动相的选择不太理
想；安眠酮在甲醇中微溶，但可溶解于甲醇一5％醋酸
(1：1)中，对酸敏感，在色谱条件的选择上可以加以
考虑。
游离川芎嗪易升华，在样品的处理过程中，应尽
量减少加热、蒸发等高温操作，或在萃取液中加入盐
酸，使川芎嗪成盐，避免川芎嗪蒸发损失[3]。
本实验主要以治疗缺血性中风的养阴通脑颗粒
为对象，对其主要有效部位优化组合，建立大鼠灌胃
后血浆中川芎嗪浓度的HPLC测定方法，为进一步
开展其主要有效部位组合在动物体内的药动学研究
提供参考。
References：
E13LiangCC，HongCY，ChenCF，eta1．Measurementand
pharmacokineticstudyoftetramethylpyrazineinratblood
anditsbraintissuebyhighperformanceliquidchromatogra—
phyEJ3．JChromatogrB，1999，724：303．
1-23ZhangJC，DongWL．Determinationofligustrazinephos—
phatebyHPLCinserumEJ3．JTianjinMedUniv(天津医科
大学学报)，2000，6(1)：34—36．
[3]CaiW，DongSN，LouYQ．Studyonpharmacokineticsof
ligustrazineinnormalpeopleorallyadministered[J]．Acta
PharmSin(药学学报)，1989，24(12)：881—886．
万方数据
灌胃养阴通脑颗粒大鼠血浆中川芎嗪的HPLC法测定
作者： 张国平， 郭莹， 张莉， 樊守艳， 韩进， 余勤， 潘远江， 万海同， ZHANG Guo-ping
， GUO Ying， ZHANG Li， FAN Shou-yan， HAN Jin， YU Qin， PAN Yuan-jiang， WAN
Hai-tong
作者单位： 张国平,潘远江,ZHANG Guo-ping,PAN Yuan-jiang(浙江大学医学院附属第二医院,浙江,杭州
,310009)， 郭莹,张莉,樊守艳,韩进,余勤,万海同,GUO Ying,ZHANG Li,FAN Shou-yan,HAN
Jin,YU Qin,WAN Hai-tong(浙江中医药大学心脑血管病研究所,浙江,杭州,310053)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(5)
被引用次数： 1次

参考文献(3条)
1.Liang C C;Hong C Y;Chen C F Measurement and pharmacokinetic study of tetramethylpyrazine in rat
blood and its brain tissue by high performance liquid chromatography[外文期刊] 1999
2.Zhang J C;Dong W L Determination of ligustrazine phosphate by HPLC in serum[期刊论文]-天津医科大学
学报 2000(01)
3.Cai W;Dong S N;Lou Y Q Study on pharmacokinetics of ligustrazine in normal people orally
administered 1989(12)

本文读者也读过(10条)
1. 李保良.赵晓山.孙晓敏.罗仁.李俊.刘强.李慧.翁立冬.LI Biao-liang.ZHAO Xiao-shan.SUN Xiao-min.LUO Ren
.LI Jun.LIU Qiang.LI Hui.WANG Li-dong 补肾健脾颗粒血清中马钱素含量测定[期刊论文]-中成药2008,30(3)
2. 陈欢.姚遥.乔莉.周玉枝.华会明.裴月湖.CHEN Huan.YAO Yao.QIAO Li.ZHOU Yu-zhi.HUA Hui-ming.PEI Yue-hu
合掌消的化学成分[期刊论文]-沈阳药科大学学报2008,25(4)
3. 郭莹.王云来.万海同.张莉.樊守艳.韩进.余勤.刘文洪.潘远江 口服中药复方有效部位后血浆中葛根素的测定
[期刊论文]-中医药通报2006,5(5)
4. 吴斌.陈坚波.何山.潘远江.WU Bin.CHEN Jian-Bo.HE Shan.PAN Yuan-Jiang 广东石豆兰中的噁庚英和联苄类化
合物[期刊论文]-高等学校化学学报2008,29(2)
5. 张芳 血塞通及川芎嗪对细胞色素P450不同亚型代谢酶影响的研究[学位论文]2008
6. 郭莹.万海同.张莉.王玉.韩进.余勤.潘远江.GUO Ying.WAN Hai-tong.ZHANG Li.WANG Yu.HAN Jin.YU Qin.PAN
Yuan-jiang 不同中药复方有效部位组合对脑缺血大鼠血浆中葛根素代谢变化的研究[期刊论文]-中国中药杂志
2007,32(23)
7. 陈漪.金米聪.Chen Yi.Jin Micong 液相色谱-串联质谱法测定血清中硫酸头孢噻利浓度[期刊论文]-中国药师
2010,13(1)
8. 吴芳.张志荣 RP-HPLC测定犬血浆中磷酸川芎嗪的浓度[期刊论文]-华西药学杂志2003,18(1)
9. 石万贞.姚金成.梁玉格.SHI Wan-zhen.YAO Jin-cheng.liang yu-ge 银黄颗粒剂中黄芩苷在大鼠体内的药代动
力学研究[期刊论文]-中医药导报2005,11(11)
10. 孙世仁.黄熙.张莉.任平.常子军 人血清中阿魏酸和川芎嗪同时测定的HPLC法[期刊论文]-南京中医药大学学报
(自然科学版)2001,17(6)

引证文献(1条)
1.何梅凤.邓新国.吴伟.高杨 盐酸川芎嗪滴眼液在兔眼房水中的药动学研究[期刊论文]-中成药 2011(10)

本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200705019.aspx