全 文 ：中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第10期2006年10月·1521·
xl、Bcl—w等；Bax类，为凋亡促进因子，包括Bax、
Bak、Box等。Bcl一2可阻断Ca2+从内质网释出，使依
赖于Ca2+的核酸内切酶活性降低，从而阻断DNA
消化和细胞凋亡[133；Bcl一2作用于线粒体与核孔复
合体上的信号分子，控制细胞信号传导来延长细胞
生存n41；Bcl一2蛋白还可以和Bax蛋白相结合，从而
抑制细胞凋亡。Bcl一2与Bax的比值决定了细胞接
受凋亡信号后细胞的存活与否，如果Bax占优势，
细胞死亡，而Bcl一2占优势时，细胞存活[1引。在应用
反义蛋白激酶ARIa(Rial—pha)对前列腺进行生长
抑制度诱导实验中，促进凋亡蛋白Bax、Bak表达增
多，提示Bax与肿瘤细胞的生长抑制与凋亡有关。
Bcl一2与Bax的比值是决定凋亡与否的主要因素，
一方面，Bcl一2不仅可能通过抑制细胞色素C等从
线粒体的释放调控着线粒体渗透性转换孔的开启，
从而抑制caspase一3的活化，还可能参与抑制
caspase一3的合成。另一方面，Bcl一2又是caspase一3
的直接底物，caspase一3是Bcl一2的生理性蛋白酶，
Bcl一2蛋白的环区可被caspase一3在Asp34处剪
切[1引。本研究结果首次表明，冬凌革甲素能够通过
诱导人肝癌BEL一7402细胞发生凋亡而发挥体外抗
肝癌作用；上调Bax蛋白水平和下调Bcl一2蛋白水
平以及活化caspase一3可能是冬凌草甲素体外诱导
人肝癌BEL一7402细胞发生凋亡的重要作用机制之
‘，冬凌草甲素可能是一种潜在的抗肝癌药物；这为
进一步的动物实验及其进一步的f临床应用提供了实
验依据。
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小檗碱体内外对人鼻咽癌细胞CNE一2生长的抑制作用
蔡于琛“2，冼励坚1’2。
(1．华南肿瘤生物学国家重点实验室，广东广州 510060；2．中山大学肿瘤防治中心实验研究部，广东广州510060)
摘 要：目的 观察小檗碱体内外对人鼻咽癌CNE一2细胞生长的影响，探讨小檗碱的抗肿瘤作用机制。方法
MTT法测定小檗碱对CNE一2细胞生长的抑制作用；流式细胞仪检测小檗碱对CNE一2细胞凋亡和周期的影响；透
射电镜观察CNE一2细胞经小檗碱处理后凋亡形态变化；Westernblotting法检测小檗碱对CNE一2细胞的细胞周
收稿日期：2006—02—25
作者简介：蔡于琛(1977一)，女，广东省潮州市人，助理研究员，硕士，在职博士生，研究方向为抗癌药物筛选、减毒增效及其机制研究。
Tel：(020)87343187Fax：(020)87343170 E—mail：edentry@163．com
*通讯作者冼励坚Tel：(020)87343187E—mail：LI—xian@yahoo．tom
万方数据
·1522· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第10期2006年10月
期相关蛋白(cyclin)B1、CDKl、cdc25c表达的影响；3H一胸腺嘧啶(3H—TdR)和3H一亮氨酸(3H—Leu)标记前体掺
入法检测小檗碱对CNE-2细胞DNA和蛋白质合成的影响；利用荷人鼻咽癌的裸鼠模型验证小檗碱的体内抗肿瘤
作用。结果小檗碱能抑制CNE一2细胞生长，48h的半数抑制浓度(IC5。)为(49．5土5．8)pmol／L，72h的IC。。为
(13．3士2．O)umol／L；小檗碱能抑制CNE一2细胞DNA和蛋白质合成；小檗碱能诱导CNE一2细胞凋亡，细胞经过
25．0umol／L小檗碱处理48h后的凋亡指数为(48．9士10．4)％；50．0urnol／L小檗碱能诱导CNE一2细胞G：／M
期阻滞，并且下凋细胞周期相关蛋白B1、CDKl、cdc25c表达；小檗碱能抑制人鼻咽癌CNE一2细胞在裸鼠体内的生
长，30mg／kg剂量组的肿瘤体积中位数为317．9mm3‘，明显低于对照组(P
关键词：小檗碱；人鼻咽癌细胞CNE一2；抗肿瘤作用
中图分类号：R286．91 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)10—1521～06
Inhibitionofberberineongrowthof umannasOpharyngeaIcarcinoma
cellsCNE一2invivoandinvitro
CAIYU—chenl’2，XIANLi—jianl’2
(1．StateK yLaboratoryofOncologyinSouthC ina，Guangzhou510060，China；
2．CancerC nter，SunYat—senU iversity，Guangzhou510060，China)
Abstract：ObjectiveTostudythinhibitoryeffectofberberineonhumannasopharyngealcanc rcell
lineCNE一2invivoandinvitro．MethodsCNE一2cellproliferationw smeasuredbvMTTassayndcell
cyclewasanalyzedbyflowcytometry．Cellmorphologywasobservedwithtransmissionelectron
microscopy．Thecellcyclr lativeproteinwasdetectedbyWesternblotting．DNAandproteinsy theses
wereassessedbythecellularincorporationOf3H—TdRand3H—Leu。respectively．Anti—tumoractivityof
berberineinthexperimentaltransDlantationtumorCNE一2wasevaluatedbyrelativetumorg owthratio．
ResultsBerberineinhibitedCEN一2ceilsgrowthina,time—anddose—dependentman er．MTTAssay
showedthatheIC50valuesof48and72hwere(49．5土5．8)and(13．3±2．O)umol／L，respectively．Cell
cycleanalysesOf50．0／1mol／Lberberine—treatedCNE一2c llsbyflowcytometryshowedtheaccumulation
ofcellsintheG2／Mphasewhile25．0umol／Lberberinetreatmentsfor48hinducedapoptosiswiththe
indexof(48．9±10．4)％．TheinhibitionofCNE一2cellgrowthbyberberinewasassociatedwith
suppressionofcyclinB1，CDKl，andcdc25cproteins．Afterthetr atmentofberberineatdoseof30mg／
kg，them diantumorvolumewas317．9mm3whichwasmuchlowerthanthatincontrolgroup(P<
0．05)innudemicebearinghumannasopharyngealcancer．ConclusionBerberinehasinhibitoryeffecton
thegrowthofCNE一2，whichm g tberelatedOitsinhibitionofcyclinB，cdc25c，andCDKlproteins．
Keywords：berberine；humannasopharyngealcarcinomacellsCNE一2；anti—tumoreffect
小檗碱又称黄连素，为从毛茛科黄连属植物黄
连、黄柏的根茎中提取的异喹啉类生物碱，常用其盐
酸盐。盐酸小檗碱的分子式为C：。H。。C1NO。·
2H：O，相对分子质量407．85。临床长期用于解热、
解毒、抗肠道细菌感染。近年来发现口服小檗碱能治
疗心律失常、心衰、糖尿病等[1~2]。此外，许多实验研
究证实小檗碱体外对多种肿瘤细胞株如白血病、肝
癌、食管癌等均有不同程度的抑制作用[3~5]。但是目
前小檗碱的抗肿瘤作用研究绝大多数限于离体细
胞，动物体内抑瘤实验很少，仍然没有明确定论。本
实验研究小檗碱对人鼻咽癌CNE一2细胞生长的抑
制作用，进一步从细胞周期调控的角度探讨其抗肿
瘤作用机制，并研究小檗碱对裸鼠人鼻咽癌移植瘤
的体内抗肿瘤作用。
1材料
1．1 药品与仪器：小檗碱对照品(质量分数
98．14％，中国药品生物制品检定所提供，批号
0713—9906)；RPMI一1640培养液、新生牛血清
(Gibco公司产品)；MTT(噻唑蓝，Sigma公司产
品)；CDKl、cyclinBl、cdc25c抗体(SantaCruz公司
产品)；Westernblotting试剂盒(CellSigna 公司
产品)。MultiskanMK3酶标仪(Thermo
Labsystems公司产品)，图像分析使用德国
KontronIBAS2．0全自动图像分析系统和日本
JVCKY—F30B3一CCD彩色图像摄录输入仪。
1．2 动物：SPF级BALB／C裸小鼠，雌雄兼用，6
周龄，体重为18～22g，由中山大学实验动物中心
提供并饲养。动物合格证：医动字第26～00A005
号。实验室合格证：医动字第26～00C016号。
2 方法
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第10期2006．年10月· 523·
2．1 细胞培养：人低分化鼻咽癌CNE一2细胞由本
实验室传代保种，用内含10％新生牛血清、200U／
mL青霉素、200肛g／mL链霉素的RPMI一1640培养
液，置50ACO：、37℃培养箱培养。
2．2细胞生长曲线的测定：取对数生长期的CNE一
2细胞，胰酶消化后制成细胞悬液，计数、调整细胞
浓度为2×104／mL，接种于10cm培养皿中，24h
后，实验组加入不同浓度的小檗碱，分别为10．0、
40．0、80．0弘mol／L，对照组加入等量培养液。培养
12、24、36、48、72h后各取出3瓶细胞；用台盼蓝拒
染法，在光镜下计活细胞数，取平均值，以时间为横
坐标，活细胞数为纵坐标，作图得细胞生长曲线。
2．3 小檗碱对CNE一2细胞的生长抑制作用：按
2．2项方法制成细胞悬液，调整细胞浓度为2×104／
mL，接种于96孑L板中，每孑L100肛L。24h后加入不
同浓度小檗碱(3．1、6．3、12．5、25．0、50．0、100．0、
200．0pmol／L)，另设细胞对照组(只加细胞不加
药)和空白对照组(只加培养基)。每组设4个平行
孔，每孔总体积为200肚L。加药44、68h后，每孔加
入MTT(5mg／mL)20肛L。继续培养4h后弃上
清液，每孔加入DMSO200“L，室温振荡15min，
用酶标仪(波长570nm)测定吸光度(A)值，计算
细胞生长抑制率，Bliss法计算半数抑制浓度(IC。。)
值。实验重复3次。
细胞生长抑制率一f1一挚lX100％
、 “对照组，
2．4流式细胞仪检测细胞周期分布：收集不同浓度
小檗碱(12．5、25．0、50．0弘mol／L)处理48h后的
CNE一2细胞，PBS洗涤2次，70％乙醇固定过夜。
2000r／min离心10min，弃去乙醇，再次悬浮于
PBS，细胞经溴化丙啶(PI，10弘g／mL)染色5in，
4℃避光30min后，上流式细胞仪，激发光波长为
488nm，吸收波长610nm，功率为15mw。检测细
胞DNA水平，根据DNA水平在流式细胞仪中得
出每份样品的G。、S和G：／m期细胞分布图。
LYSIS软件(BectonDi ki son公司产品)分析。
2．5 透射电镜观察细胞凋亡形态：取对数生长期的
CNE一2细胞，设对照组(加RPMI一1640培养液)和
小檗碱用药组(25．0弘mol／L)，48h后收集细胞。先
吸去培养液，PBS洗涤1次，加入固定液固定15～
30min，将细胞刮下，2000r／min离心10min。送检
前于4℃保存。按常规电镜样品制备程序脱水、渗
透、LRwhite树脂包埋、超薄切片，醋酸铀枸橼酸铅
双重染色，JEM--1200透射电镜观察并摄片。
2．6 Westernblotting检测CDKl、cyclinBl、
cdc25c表达：不同浓度的小檗碱(12．5、25．0、50．0
tLmol／L)处理CNE一2细胞48h后，按常规方法裂
解细胞，考马斯亮蓝法测定蛋白浓度。用12％十二
烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分
离蛋白，电转移至PVDF膜。用含5％脱脂奶Tris
缓冲液封闭膜上的非蛋白结合点，4℃过夜。加1：
200稀释的鼠抗人cyclinB1／CDKl／cdc25c抗体，
室温作用4h。漂洗3次后加第二抗体(辣根过氧化
物酶标记的兔抗鼠IgG抗体)室温作用2h，漂洗3
次。加发光剂(LumiGLO)，置感光盒中感光，显影，
定影。实验重复3次。
2．7 3H一胸腺嘧啶(3H—TdR)和3H一亮氨酸(3H—
Leu)标记前体掺入法检测细胞DNA和蛋白质合
成：取对数生长期CNE一2细胞，细胞浓度调整为
2×104／mL，接种于96孔板中，每孔100肛I。。24h
后加入不同浓度小檗碱(15．0、30．0、60．0、120．0
tzmol／L)，另设细胞对照组(不加药)和空白对照组
(只加培养基)。每组设3个平行孑L，每孔总体积200
肛L。在37℃、5％C02培养箱中培养20h后，每孔
加入18．5kBq3H—TdR或3H—Leu，4h后终止反
应，将培养液吸去，每孔加50弘L胰酶消化细胞，15
min后加150肛LRPMI一1640培养液终止消化。用
自动细胞收集器将每孔内细胞分别收集于玻璃纤维
素膜上，蒸馏水冲洗3次，取下滤膜，置80℃烘烤
60min，对号剪下各滤膜，加闪烁剂(0．4％PPO，
0．1％POPOP的二甲苯溶液)5mL，暗处放置15
min后，用液体闪烁计数仪测定cpm值。实验结果
以掺入抑制率表示。
掺人抑制率=(1一给药组cpm值／对照组cpm值)×
100％
2．8小檗碱对CNE一2裸鼠移植瘤的抑制作用：选
择肿瘤生长旺盛且无溃破、健康情况良好的荷瘤小
鼠，颈椎脱臼处死，固定于手术板上，用酒精消毒动
物皮肤，无菌条件下在超净台上剥离肿瘤组织，所用
器械全部经高压消毒。肿瘤组织用加了青霉素、链霉
素的平衡盐溶液冲洗，将其剪成直径0．2cm左右
的小块，接种于裸鼠右侧背部皮下。7d后根据肿瘤
体积将其随机分组，设对照组(H。O)、环磷酰胺组
(CTX，10mg／kg)、小檗碱各剂量组(10、30、50
mg／kg)，接种24h后开始用药。每天ig给药1次，
连续用药10d。每3天用游标尺测量肿瘤大小及称
体重，按公式计算肿瘤体积(y)，V一52×L／2(5为
肿瘤短径，L为肿瘤长径)绘制生长曲线。肿瘤接种
万方数据
·1524· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第10期2006年10月
后第30天处死小鼠。CTX组及小檗碱处理组肿瘤
体积与对照组肿瘤体积之间采用统计软件SPSS
10．0进行秩和法检验。
2．9统计处理：数据用z土S表示，采用统计软件
SPSS10．0进行数据处理，组间数据采用t检验或
秩和检验。
3 结果
3．1小檗碱抑制CNE一2细胞生长：由生长曲线可
见，CNE一2细胞经不同浓度的小檗碱处理72h后，
CNE一2细胞数明显减少，10．0vmol／L小檗碱对细
胞的抑制率为(34．6±17．O)％，40．0弘mol／L组的
抑制率为(85．94-2．9)％，80．0vmol／L的抑制率为
(91．9±1．1)％。结果表明CNE一2细胞经不同浓度
的小檗碱处理72h后，生长受到明显抑制，见图1。
100
80
，
茭60V
羹40
聂
20
O
0 12 24 36 48 60 72
t|h
图l 小檗碱对人鼻咽碱CNE一2细胞生长的抑制作用
(；士s，甩=3)
Fig．1Inhibitionofberberineongrowthof uman
nasOpharyngealcarcinomaCNE-2celline
(；士S，阼=3)
3．2小檗碱对CNE一2细胞的细胞毒作用：CNE一2
细胞经小檗碱处理48、72h后，经MTT法检测，
48h小檗碱的IC50为(49．5±5．8)umol／L，72h
的IC50值为(13．3±2．O)urnol／L．。
3．3 小檗碱诱导CNE一2细胞凋亡和G。／M期阻
滞：不同浓度的小檗碱作用CNE一2细胞48h后，细
胞出现不同程度的亚G。峰(凋亡峰)，小檗碱在浓度
为12．5、25．0、50．0umol／L时诱导细胞凋亡，50．0
urnol／L处理组细胞出现G：／M期阻滞，见表1。
3．4 透射电镜观察细胞凋亡形态：CNE一2细胞经
25．0／-mol／L小檗碱处理48h，细胞呈现明显的凋
亡形态，电镜下可见：细胞固缩，体积变小，密度增加；
质膜起泡，染色质浓缩，聚集于核膜下，呈境界分明的
块状或新月形小体；细胞核碎裂，染色质片断化，细胞
浆浓缩裂解成质膜包绕的碎片，凋亡小体形成。未处
理的CNE一2细胞核染色质均匀，核膜完整，胞质内
有丰富的线粒体、粗面内质网、核糖体、高尔基体。见
图2。
3．5 小檗碱对cyclinBl、CDKl、cdc25c表达的影
响：CNE一2细胞经过不同浓度小檗碱处理48h后，
吸光度分析表明，25．0、50．0／-mol／L小檗碱组的
cyclinBl、CDKl和cdc25c表达均下调(P
表1小檗碱处理48h后对CNE一2细胞的细胞周期
分布及凋亡率的影响(i士s，n=3)
Table1 Effectsofberberineoncellcycledistribution
andapoptosisrateofCNE-2cellsfor48h
(；土s，n=3)
C／ 凋亡率／ 细胞周期／％组别(vm01．L一。)％。—百■—r可
对照 一
小檗碱 12．5
25．0
50．0
与对照组比较：‘P<0．05。’P<0．01
。P<0．05。。P
A—controlB—berberine25．0umol／Ltreatmentfor48h C—
apoptosisbody
图2透射电镜观察小檗碱诱导CNE一2
细胞凋亡形态
Fig．2ApoptosismorphologyofCNE一2cellsinduced
byberberineobs rvedbytransmission
electronmicroscopy
表2小檗碱对CNE一2细胞cyclinBl、CDKI和cdc25c
蛋白表达的影响(工±s，n一---3)
Table2 EffectsofberberineoncyclinBI，CDKI，
andcdc25cproteinxpressioninCNE一2
cells(；±s，n=3)
与对照组比较：～P<0．01
。’P
nv
1
3土土士士
；Z
8
i
nv
1
4
2
5
O
2；l士士士士
5^v
7
2；li3i9ll士士士士
9^v
2
0
1
8
i
2
■；7inv士士士士i21Oi
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第10期2006年10月·1525·
3．6小檗碱抑制CNE一2细胞DNA和蛋白质合
成：小檗碱浓度为15．0、30．0、60．0、120．0pmol／L
作用CNE一2细胞24h，3H—TdR及3H—Leu标记前
体掺入均受明显抑制，表明小檗碱抑制CNE一2细
胞DNA和蛋白质的合成。见图3。
董
褂
善
最
一<
辍
0 20 40 60 80 10012U
小檗碱C／(umol·■)
图3小檗碱对CNE一2细胞DNA和蛋白质合成的影响
(；±s，n=3)
Fig．3EffectofberberineonDNAandprotein
synthesisinCNE一2cells(；士s，n一3)
3．7小檗碱对人鼻咽癌裸鼠移植瘤的抑制作用：肿
瘤接种后第30天，对照组肿瘤体积的中位数为2
178．4mm3，阳性对照CTX组肿瘤体积的中位数为
582．1mm3(P
O．05)、317．9mm3(P<0．05)、524．4mm3
(P>0．05)。见表3。小檗碱用药组裸鼠活动状态良
好，无明显毒性反应。肿瘤接种后第30天，对照组裸
鼠体重为(26．3土3．1)g，CTX组裸鼠体重为
(27．8土2．4)g。小檗碱10、30、50mg／kg组的裸鼠
体重分别为(24．4±2．4)、(26．1土3．4)、(24．9±
1．9)g。
表3小檗碱对人鼻咽癌荷瘤小鼠的体内抑瘤作用
Table3 Anti—tumoreffectofberberineonCNE一2
xenograftedintumor—bearingmiceinv vo
剂量／ 动物／ 肿瘤体积／mm3
组别(mg．kg一-)只—面-—面■—1石一
对照 一
CTX 10
小檗碱 10
337．5
0．0
0．0
0．0
0．0
3594．0
1946．3
1703．5
1998．1
2239．6
与对照组比较：。P<0．05
。P<0．05口scontrolgroup
4讨论
小檗碱是一种高效低毒的常用的广谱抗菌药
物，已经成功获得结构明确的化学单体。近年来，小
檗碱的抗肿瘤作用受到许多学者的关注。本实验结
果表明，小檗碱能明显抑制人鼻咽癌CNE一2细胞
的增殖，其抑制率与药物浓度呈剂量依赖关系。
诱导肿瘤细胞凋亡是抗癌药物作用机制之一。
透射电镜观察结果表明，小檗碱25．0umol／L作用
CNE一2细胞48h后，细胞出现凋亡的特征形态学
改变。流式细胞仪检测结果显示，细胞出现不同程度
的亚G。峰(凋亡峰)。12．5gmol／L小檗碱诱导细胞
凋亡的比例为(31．4±4．2)％，25．0ttmol／L时达
到最大，为(48．9±10．4)％，但是最高浓度50．0
umol／L的凋亡率反而下降，只有(10．2±0．7)％。
有文献报道小檗碱对Balb／c3T3细胞的凋亡诱导
呈明显的剂量依赖性[6]。小檗碱高剂量(200ug／
mL，即490tzmol／L)作用下，细胞大量凋亡，这时
候小檗碱主要存在于细胞核中。而当小檗碱在较低
剂量(100ttg／mL)的情况下，可以观察到大量的细
胞被阻滞在G。／M期，而这时候的小檗碱主要存在
细胞浆中。提示小檗碱引起的Balb／c3T3细胞凋亡
和对细胞周期的调节中存在着一个重要的“极限
点”。有关小檗碱对肿瘤细胞凋亡的诱导作用与其作
用浓度和小檗碱在细胞内的定位的关系还有待进一
步探讨。
细胞周期是一个连续的过程，细胞在进入下一
期之前都要经过检测点(checkpoint)，其中G，／S
和G：／M检测点最为重要。在真核细胞内，cyclinBl
与CDKl的激酶活性是细胞由G。期进入M期的关
键。研究表明，CDKl激酶活性需要cyclinBl的蓄
积及CDKl的去磷酸化。而CDKl的去磷酸化依赖
于磷酸酶cdc25c的作用口]。流式细胞仪分析结果表
明，50．0／．tmol／L小檗碱能诱导CNE一2细胞发生明
显的G2／M期阻滞。进一步用Westernblotting分
析上述3种蛋白表达水平。结果可见小檗碱处理细
胞后，cyclinBl、CDKl和cdc25c表达随小檗碱剂量
升高而逐渐下降，这可能是小檗碱导致细胞增殖阻
滞在G：／M期的原因之一。有文献报道含有小檗碱
的黄连提取物能抑制cyclinBl的表达，从而降低
CDKl酶活性，使细胞停留在G：期[8]。本研究结果
提示，小檗碱单体同样能抑制cyclinBl的表达，并
且也下调cdc25c，从而抑制CDKl酶活性，使细胞
周期阻滞在G。／M期。
虽然xCd,檗碱体外抑制肿瘤细胞增殖的报道较
多，但是关于小檗碱体内抑瘤效果的研究却很少。以
前人们普遍认为，小檗碱口服不易被吸收。然而，在
∞
∞
∞
加
加
0
万方数据
·1526· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第10期2006年10月
家兔体内对小檗碱的药动学研究表明，小檗碱口服
能获得有效血药浓度并维持较长时间(AUC为
211．94tlg／mL，C。。。为25．2t』g／mL)[9’10。。本研究应
用裸鼠荷人鼻咽癌模型，ig给予小檗碱10、30和50
mg／kg，连续用药10d，其中30mg／kg剂量组的肿
瘤体积中位数明显低于对照组(P<0．05)。本结果
提示小檗碱口服可以达到有效抑瘤的血药浓度。
由于小檗碱的安全性较高，至今在临床上仍然
作为常用抗菌药物广泛应用。小檗碱的体内外抗肿
瘤活性研究为其单独或者联合其他抗肿瘤药物应用
到临床肿瘤化疗方案中提供可能性和理论依据。
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人参多糖对K562细胞人粒一巨噬细胞集落刺激因子和
促红细胞生成素及其受体表达的影响
陈地龙，李静，刘永刚，王亚平+，陈婷梅，郑敏，姜 蓉
(重庆医科大学基础医学院重庆市生物化学与分子药理学重点实验室，重庆400016)
摘要：目的研究人参多糖(GPS)对人红白血病细胞株(K562)表达人粒一巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)、
促红细胞生成素(EPO)及其受体的影响。方法采用细胞体外培养技术，RT—PCR检测GPS诱导后K562细胞中
GM—CSF、EPOmRNA的表达、免疫细胞化学方法检测K562细胞经GPS作用后GM—CSF、EPO及其受体蛋白表
达的变化、Westernblotting检测GPS诱导后K562细胞GM—CSF、EPO受体蛋白的表达。结果经GPS诱导后，
RT-PCR检测显示K562细胞GM—CSFmRNA的表达有所增强，但与对照组相比无统计学意义，EPOmRNA的表
达有明显的降低；免疫细胞化学方法检测EPO与GM—CSF蛋白的表达明显减弱，EPO与GM—CSF受体蛋白的表
达明显增强；Westernblotting检测GM—CSF、EPO受体蛋白的表达增强。结论GPS既能抑制K562细胞分泌
GM—CSF、EPO，又能明显促进GM—CSF、EPO受体的合成和分泌。
关键词：人参多糖；K562；造血生长因子
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)10—1526—04
Effectofginsengpolysaccharideonexpr ssionofGM-CSF，EPO，
andtheirreceptorsinK562cells
CHENDi—long，LIJing，LIUYong—gang，WANGYa—ping，CHENTing—mei，
ZHENGMin，JIANGRung
(KeyLaboratoryofBiochemistryandMolecularPh macology，CollegeofBasicMedicine，
ChongqingMedicalUniversity，Chongqing400016，China)
收稿日期：2006—01—27
基金项目：国家自然科学基金资助项目(39670880)；重庆市教委资助课题[渝教科(2001)12号]
作者简介：陈地龙(197l一)，男，重庆万州人，博士，副研究员，研究方向为造血调控机制。
．．Tel：(023)68485614E—mail：chendilong@21cn．conl
*通讯作者 王亚平Tel：(023)68485968
万方数据
小檗碱体内外对人鼻咽癌细胞CNE-2生长的抑制作用
作者： 蔡于琛， 冼励坚， CAI Yu-chen， XIAN Li-jian
作者单位： 华南肿瘤生物学国家重点实验室,广东,广州,510060;中山大学肿瘤防治中心实验研究部,广
东,广州,510060
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(10)
被引用次数： 7次
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